專利名稱：一種花生組培苗移栽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種花生組培苗移栽的方法，更特別的涉及一種提高花生組培苗移栽成活率的方法。
背景技術(shù)：
花生(Arachis bypogaea L.)是世界四大油料作物之一,是我國主要的油料作物和經(jīng)濟作物，在國家油脂安全和農(nóng)產(chǎn)品國際貿(mào)易中占有舉足輕重的地位。我國花生種植面積占世界種植總面積的19%，居世界第二位，出口貿(mào)易占世界總量的50%，居世界主要花生出口國之首，年均總產(chǎn)占世界總產(chǎn)的41 %。在國內(nèi)油料作物中，花生單產(chǎn)、總產(chǎn)和出口量均居首位。隨著我國油脂需求量迅猛增長，花生在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的地位顯得尤為重要。但花生遺傳基礎(chǔ)狹窄，抗逆性差，易感多種病蟲害。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以將外源有益基因資源引入花生，以及利用離體誘變可創(chuàng)造花生新種質(zhì)，拓寬花生遺傳基礎(chǔ)，提高栽培種花生的抗逆性及獲得其他優(yōu)良性狀。遺傳轉(zhuǎn)化及離體誘變的成功與否依賴于花生組織培養(yǎng)高效植株再生體系的建立。研究者們利用花生不同基因型、不同外植體，通過器官發(fā)生和胚胎發(fā)生途徑得到了再生植株。建立了花生高效植株再生體系，但花生再生苗的生根后，移栽成活率低，尤其是通過轉(zhuǎn)基因和突變體篩選等技術(shù)得到的具有優(yōu)良性狀的花生再生苗，不能保證以高成活率移栽，這就嚴重影響了這些工作的順利進行。目前鮮見提高花生移栽成活率的相關(guān)報道，本試驗在移栽過程的各個環(huán)節(jié)，包括組培苗生根壯苗，培養(yǎng)基質(zhì)的配制，移栽操作以及移栽后的馴化出苗，都進行了系統(tǒng)試驗，旨在為花生轉(zhuǎn)基因苗及抗性突變體植株的高成活率移栽提供有效方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面涉及一種花生組培苗移栽方法，本發(fā)明另外一方面涉及提高花生移栽的成活率的組培苗移栽方法，為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案一種花生組培苗移栽方法，其特征在于包括如下步驟I、組培苗生根壯苗先配制固體生根培養(yǎng)基1/2MSQ(MSQ是不加激素的基本培養(yǎng)基)+130_160mg/LΝΑΑ(α-萘乙酸)+蔗糖15-25g/L+瓊脂粉6-10g/L，pH5. 6_6，高溫高壓滅菌，將生芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)的花生組培苗在超凈工作臺上轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，用透氣塑料封口膜封口，放回人工氣候室，光照強度1000-2000LX，每天光照培養(yǎng)12-16h，培養(yǎng)6-8天，在超凈工作臺上將組培瓶的封口膜換成羊皮紙封口，放回人工氣候室培養(yǎng)6-8天，然后去掉羊皮紙，敞開瓶口，培養(yǎng)2. 5-3. 5天，準備移栽；2、配制移栽后的營養(yǎng)液培養(yǎng)基質(zhì)選用細膩的沙子，用高壓滅菌袋分裝后經(jīng)高溫高壓滅菌，或者用搪瓷盤分裝后經(jīng)烘箱高溫滅菌，采用滅菌的沙子作為基質(zhì)，配制Hoagland’ s營養(yǎng)液，營養(yǎng)液中加多菌靈，力口入量為O. 4-0. 6g/L，配制的營養(yǎng)液用于混合潤濕沙子和沙土地中的土 ；
3、移栽將培養(yǎng)好的組培苗從MS培養(yǎng)基上取出，用無菌自來水洗凈花生苗根部的培養(yǎng)基，任選的用軟毛刷輕刷一下，將根部的MS培養(yǎng)基洗凈，將花生苗移栽至沙子培養(yǎng)基質(zhì)中，統(tǒng)一噴施營養(yǎng)液至葉面微濕，放在人工氣候室，室溫，光照強度1000-2000LX，每天光照培養(yǎng)12-16h ；4、馴化出苗花生苗每隔兩天噴施一次營養(yǎng)液，保濕，20-40天后將花生苗轉(zhuǎn)移入裝有沙土的盆，噴施自來水，保濕，壯苗之后轉(zhuǎn)入大田，常規(guī)管理。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中，所述的固體生根培養(yǎng)基通過如下步驟配制 大量元素濃縮液=KNO335-4 Og/L，NH4NO3 30_36g/L，KH2PO4 3. 0-3. 8g/L,MgSO4 · 7H20 7-8g/L, CaCl2 8. 5-9. 5g/L ；微量元素濃縮液MnS04· 4H20 2000_2400mg/L，ZnSO4 · 7H20 800_1000mg/L，H3BO3250-400mg/L, KI 70_90mg/L， NaMoO4 · 2H20 3_7mg/L， CuSO4 · 5H20 2_3mg/L， CoCl2 · 6H202-3mg/L ；維生素濃縮液甘氨酸150-250mg/L,鹽酸硫胺素BI 35_45mg/L,鹽酸批卩多素B645_55mg/L,煙酸 45_55mg/L,肌醇 8_12g/L ；鐵鹽濃縮液=FeSO4· 7H20 2. 6-2. 9g/L, Na-EDTA 3. 5_4g/L ；取大量元素濃縮液40-60mL/L，微量元素濃縮液4_6mL/L，維生素濃縮液4_6mL/L，鐵鹽濃縮液4-+mL/L，NAA 120-180mg/L,蔗糖15_25g/L，瓊脂粉6-10g/L混合，然后調(diào)pH值。本發(fā)明另外一方面還涉及所配制的固體生根培養(yǎng)基，以及該培養(yǎng)基在提高花生移栽的成活率方面的應(yīng)用。在本發(fā)明的方法中，還可以包括任意在實施例中所提到的步驟。
具體實施例方式實施例I :組培苗生根壯苗實驗花生品種材料代表花育22號,豐花3號,?；↖號MS 母液的配制20 倍的大量元素=KNO3 38g/L，NH4NO3 33g/L，ΚΗ2Ρ043· 4g/L，MgSO4 · 7H20 7. 4g/L, CaCl2 8. 8g/L100 倍的微量元素MnS04 · 4H20 2230mg/L, ZnSO4 · 7H20 860mg/L, H3B03310mg/L,KI 83mg/L, NaMoO4 · 2H20 5mg/L, CuSO4 · 5H20 2. 5mg/L, CoCl2 · 6H20 2. 5mg/L ；100倍的維生素甘氨酸200mg/L,鹽酸硫胺素BI 40mg/L,鹽酸批卩多素B6 50mg/L,煙酸 50mg/L,肌醇 lOg/L ；100 倍的鐵鹽=FeSO4 · 7H20 2. 78g/L, Na-EDTA 3. 74g/L ；固體生根培養(yǎng)基的配制大量元素50mL/L，微量元素5mL/L，維生素5mL/L，鐵鹽5mL/L，NAA 150mg/L,蔗糖20g/L，瓊脂粉8g/L，調(diào)PH 5. 80，混勻后分裝至150mL的三角瓶16個/L，用透氣塑料封口膜封口后，高溫高壓滅菌。同時用密封滅菌袋包裝羊皮紙封口膜數(shù)量不少于分裝培養(yǎng)基三角瓶的數(shù)量，高溫聞壓滅菌。
將生芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)的花生組培苗在超凈工作臺上轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，用透氣塑料封口膜封口，放回人工氣候室25°C，光照強度1500LX，每天光照培養(yǎng)14h，培養(yǎng)7d。在超凈工作臺上將組培瓶的封口膜換成羊皮紙封口，放回人工氣候室培養(yǎng)7d，然后去掉羊皮紙，敞開瓶口，培養(yǎng)3d，準備移栽。實施例2 :配制移栽后的營養(yǎng)液培養(yǎng)基質(zhì)選用細膩的沙子，用高壓滅菌袋分裝后經(jīng)高溫高壓滅菌，或者用搪瓷盤分裝后經(jīng)200°C烘箱高溫滅菌，作為基質(zhì)。Hoagland’ s (霍格蘭氏)營養(yǎng)液的配制Ca (N03) 2 472. 3mg/L, K2S04130. 695mg/L，MgS04 160. 2055mg/L，KCl 7. 455mg/L KH2P04 34. 0225mg/L ；H3B03 0. 06183mg/L,MnS040.16901mg/L, CuS04 0.024968mg/L, ZnS04 0.28754mg/L, (NH4)6Mo7024 0.0061793mg/L,Fe-EDTA 36. 7lmg/L,pH = 5.8。配制花生移栽營養(yǎng)液Hoagland’ s營養(yǎng)液，加多菌靈O. 5g/L。準備200mL紙杯若干個，底部打一個口徑Icm的孔。營養(yǎng)液混合沙子潤濕后，分裝至紙杯，備用。選擇沙土地中的土，用營養(yǎng)液潤濕后分裝至盆，備用。實施例3 :移栽將培養(yǎng)好的組培苗從MS培養(yǎng)基上取出，用無菌自來水洗凈花生苗根部的培養(yǎng)基，必要的時候需用軟毛刷輕刷一下，將根部的MS培養(yǎng)基徹底洗凈，又不能傷害根。將花生苗移栽至沙子培養(yǎng)基質(zhì)中，每個紙杯移栽I株，提前準備好若干個網(wǎng)孔塑料筐，每20株放在一個網(wǎng)孔塑料筐中，用噴壺統(tǒng)一噴施營養(yǎng)液至葉面微濕，然后用塑料薄膜將整個塑料筐封起來，薄膜上打三四個Icm的孔透氣，放在人工氣候室培養(yǎng)，室溫20°C，光照強度1500LX，每天光照培養(yǎng)14h。實施例4:馴化出苗花生苗每隔2d噴施一次營養(yǎng)液，保濕，以后每隔3d把塑料薄膜多打幾個孔，30d后把塑料薄膜敞開。
用剪刀把栽有花生苗的紙杯子側(cè)面剪開兩條縫，轉(zhuǎn)移入裝有沙土的盆(5kg)，噴施自來水，保濕。壯苗之后轉(zhuǎn)入大田，常規(guī)管理。本發(fā)明移栽成活率比普通方法有很大的提高，例表I所示。表I普通移栽和發(fā)明內(nèi)容移栽不同花生成活率對比試驗結(jié)果
不同花生品種的成活率(％)
移栽方法
花育22豐花3海花I
普通移栽 34 土 I30±131±1
實施例99±196±198±1當(dāng)理解的是，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種花生組培苗移栽方法，其特征在于包括如下步驟 (1)、組培苗生根壯苗 先配制固體生根培養(yǎng)基l/2MSQ+130-160mg/L NAA+蔗糖15_25g/L+瓊脂粉6-lOg/L，PH5. 6-6，高溫高壓滅菌，將生芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)的花生組培苗在超凈工作臺上轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，用透氣塑料封口膜封口，放回人工氣候室，光照強度1000-2000LX，每天光照培養(yǎng)12-16h，培養(yǎng)6-8天，在超凈工作臺上將組培瓶的封口膜換成羊皮紙封口，放回人工氣候室培養(yǎng)6-8天，然后去掉羊皮紙，敞開瓶口，培養(yǎng)2. 5-3. 5天，準備移栽； (2)、配制移栽后的營養(yǎng)液培養(yǎng)基質(zhì) 選用細膩的沙子，用高壓滅菌袋分裝后經(jīng)高溫高壓滅菌，或者用搪瓷盤分裝后經(jīng)烘箱高溫滅菌，采用滅菌的沙子作為基質(zhì)，配制Hoagland’ s營養(yǎng)液，營養(yǎng)液中加多菌靈，加入量為0. 4-0. 6g/L,配制的營養(yǎng)液用于混合潤濕沙子和沙土地中的土 ； ⑶、移栽 將培養(yǎng)好的組培苗從MS培養(yǎng)基上取出，用無菌自來水洗凈花生苗根部的培養(yǎng)基，任選的用軟毛刷輕刷一下，將根部的MS培養(yǎng)基洗凈，將花生苗移栽至沙子培養(yǎng)基質(zhì)中，統(tǒng)一噴施營養(yǎng)液至葉面微濕，放在人工氣候室，室溫，光照強度1000-2000LX，每天光照培養(yǎng)12-16h ； (4)、馴化出苗 花生苗每隔兩天噴施一次營養(yǎng)液，保濕，20-40天后將花生苗轉(zhuǎn)移入裝有沙土的盆，噴施自來水，保濕，壯苗之后轉(zhuǎn)入大田，常規(guī)管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的花生組培苗移栽方法，所述的固體生根培養(yǎng)基通過如下步驟配制大量元素濃縮液KN03 3 5-40g/L, NH4NO3 30_36g/L，KH2PO4 3. 0-3. 8g/L, MgSO4 7H207-8g/L, CaCl2 8. 5-9. 5g/L ； 微量元素濃縮液MnSO4 4H20 2000-2400mg/L, ZnSO4 7H20 800_1000mg/L，H3BO3250-400mg/L, KI 70_90mg/L， NaMoO4 2H20 3_7mg/L， CuSO4 5H20 2_3mg/L， CoCl2 6H202-3mg/L ； 維生素濃縮液甘氨酸150-250mg/L,鹽酸硫胺素BI 35_45mg/L,鹽酸批卩多素B645_55mg/L,煙酸 45_55mg/L,肌醇 8_12g/L ；鐵鹽濃縮液=FeSO4 7H20 2. 6-2. 9g/L, Na-EDTA 3. 5_4g/L ； 取大量元素濃縮液40-60mL/L，微量元素濃縮液4_6mL/L，維生素濃縮液4_6mL/L，鐵鹽濃縮液 4-+mL/L，NAA 120-180mg/L,蔗糖 15_25g/L，瓊脂粉 6-lOg/L 混合，然后調(diào) pH 值。
3.權(quán)利要求2所配制的固體生根培養(yǎng)基。
4.權(quán)利要求2所配制的培養(yǎng)基在提高花生移栽的成活率方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種花生組培苗移栽的方法，其包括組培苗生根壯苗、配制移栽后的營養(yǎng)液培養(yǎng)基質(zhì)、移栽、馴化出苗等步驟。通過本發(fā)明的方法，能夠提高花生組培苗移栽成活率的方法，成活率在90％以上。
文檔編號A01H4/00GK102630561SQ20121007695
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月22日
發(fā)明者單世華, 張廷婷, 李春娟, 許婷婷, 閆彩霞 申請人:山東省花生研究所