專利名稱：一種水生植物蓮花的快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種水 生植物蓮花的快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
蓮花(Nelumbo nucifera)為睡蓮科蓮屬多年生水生宿根草本植物，又稱作荷花，是中國十大傳統(tǒng)名花之一。蓮花品種約包括3種系、6群、14類、38型，含278個品種，而現(xiàn)有觀賞類荷花已超過600個品種之多。蓮花一般分布在中亞、西亞、北美、印度、中國、日本等亞熱帶和溫帯地區(qū)。我國栽培荷花歷史悠久，早在三千多年前即有栽培。北起黑龍江，南至海南，東起江蘇、浙江、臺灣，西至新疆天山以南，除西藏、內(nèi)蒙古無發(fā)現(xiàn)以外，在全國沼澤、濕地、湖泊、池塘均有蓮花分布。蓮花按用途可以分為藕蓮、子蓮和花蓮3大類。蓮花的生物學(xué)特性為根狀莖橫生，粗壯，肥厚，中有孔道；葉漂浮或伸出水面，近圓形，盾狀著生，直徑25 90cm，全緣，邊緣有時為波狀，上面光滑，具自粉；葉脈從中央散射伸出，有I 2次叉狀分支的脈序；葉柄粗長，圓柱形，外被小皮刺；花大，直徑10 20cm，花萼4 5片，卵形，長4 IOcm ;花瓣不定數(shù)，粉紅色，雄蕊多數(shù)，花柱短；雌蕊多數(shù)，心皮離生；花托結(jié)實時增大、海綿質(zhì)，直徑達5 10cm，鐘形；子房上位，堅果嵌生于花托上蜂窩狀的孔中；種子無胚乳；花期6 7月，果期8 9月。蓮花喜光、喜溫暖，耐寒性強，宜在多水、空氣濕潤和富含腐殖質(zhì)的泥土中生長。蓮具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值，所含物質(zhì)既豐富又滋補，蓮子含有蓮子油和天冬氨酸、蘇氨酸等17種氨基酸。蓮葉含有蓮堿、原荷葉堿、亞美罌粟堿、荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、D-N-甲基烏藥堿、番荔枝堿、鵝掌楸堿、槲皮素、異槲皮素、蓮茸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸、葡萄糖酸、草酸、琥珀酸，葉蒂含有蓮堿、原荷葉堿和荷葉堿。葉梗含有蓮堿、原荷葉堿、樹脂和多種生物堿，花含槲皮素、木犀草素、異槲皮昔、山萘酚等多種黃酮素。雄蕊含槲皮素、異斛皮昔、生物堿等。蓮蓬含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、核黃素、尼克酸、維生素C和少量蓮子堿。蓮花的花、葉、荷梗(莖)、荷蒂、蓮蓬、蓮子、蓮須(花蕊)、蓮心、蓮衣、藕、藕粉、藕節(jié)均可入藥。蓮花能活血止血、祛濕消風(fēng)、清心涼血、解熱解毒。蓮子能養(yǎng)心、益腎、補脾、澀腸。荷葉能清暑剩濕、減肥瘦身。藕節(jié)能止血散瘀、解熱毒。荷梗能清熱解暑、瀉火清心。近年來，植物組織培養(yǎng)技術(shù)在花卉上的應(yīng)用越來越廣泛，尤其是在自然繁育率低的植物上備受人們重視。前人在蓮花的組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)已進行了相關(guān)的研究，但其組培過程中諸如外植體污染嚴重、褐化等問題還沒有得到有效的解決。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題為克服現(xiàn)有技術(shù)蓮花外植體易污染及易褐化的不足，提供一種改進的蓮花的快速繁殖方法。為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案ー種水生植物蓮花的快速繁殖方法，其首先采取離體組織培養(yǎng)獲得組培苗，然后煉苗、移載即得蓮花，所述離體組織培養(yǎng)包括如下步驟
(I)、以蓮花種子為起始原料，將蓮花種子消毒滅菌處理后，在無菌條件下取出胚芽，接種于基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2 3周，獲得無菌實生苗，所述基本培養(yǎng)基為在1/2MS培養(yǎng)基中添加活性炭O. 6 O. 9g/L、蔗糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l，并調(diào)節(jié)pH至5. 5
6.O所得的培養(yǎng)基；(2)、將無菌實生苗的含生長點部分的胚軸上部及子葉切下，接種于增殖培養(yǎng)基，光照培養(yǎng)3 4周，獲得組培叢芽，其中，所述增殖培養(yǎng)基為在MS改良培養(yǎng)基中添加有玉米素(ZT) 4. 5 5. 5mg/L、活性炭O. 6 O. 9g/L、鹿糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l,并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基；(3)、將步驟(2)所得組培叢芽中2 3cm長的芽切下，接種于壯苗培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，其中所述壯苗培養(yǎng)基為在MS改良培養(yǎng)基中添加玉米素2. 5 3. 5mg/L、活性炭O. 6 O. 9g/L、蔗糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l，并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基；(4)、待步驟(3)中苗長至4 6cm吋，將苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲 得組培苗，其中所述生根培養(yǎng)基為在1/2MS培養(yǎng)基中添加活性炭O. 6 O. 9g/L、吲哚丁酸(IBA)O. 4 O. 6mg/L、鹿糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l,并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基，上述步驟⑵至(4)中所述的MS改良培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基中硝酸銨用量減少1/4
的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的ー個具體和優(yōu)選方面，步驟(I)中，所述蓮花種子為蓮花當(dāng)年生蓮子。步驟(I)中，將所述蓮花種子在體積比濃度為70% 75%的こ醇水溶液中進行20 40秒的表面處理，然后在重量體積比濃度為O. 05% O. 15%的HgCl2溶液中進行5 10分鐘的殺菌處理，再用無菌水沖洗3 5次，完成對所述蓮花種子的消毒滅菌處理。優(yōu)選地，步驟(I)中所述的培養(yǎng)在每天光照12 14h，光照強度為1500 2000LX以及溫度為25°C ±2°C的條件下進行。根據(jù)本發(fā)明的ー個方面，所述的基本培養(yǎng)基、増殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基中分別含有活性炭O. 75 O. 85g/L。在ー個具體實施方式
中，各培養(yǎng)基中活性炭含量為
O.8g/L。所述的基本培養(yǎng)基、増殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基的pH均被調(diào)節(jié)至5. 8。在ー個特別優(yōu)選的實施方式中，所述的增殖培養(yǎng)基中含有玉米素5. Omg/L;所述的壯苗培養(yǎng)基中含有玉米素3. Omg/L ;所述生根培養(yǎng)基中含有吲哚丁酸IBA O. 5mg/L。根據(jù)本發(fā)明的進ー步實施方案在步驟(4)生根培養(yǎng)結(jié)束后，敞瓶煉苗3 4天，然后取出苗，洗浄根上的培養(yǎng)基，將苗栽至基質(zhì)中，并用塑料薄膜遮陰，以保持空氣濕度在85% 90%，至新根長出(約3周)，將苗移栽至土中，保持2 3cm水深，進行養(yǎng)護。根據(jù)本發(fā)明方法，移栽成活率可達80 % 85 %。由于采取以上技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點本發(fā)明通過對蓮花組織培養(yǎng)過程中的外植體種類選擇、増殖培養(yǎng)方法、壯苗培養(yǎng)方法、生根方法及其培養(yǎng)基成分進行了改進，解決了蓮花外植體易污染及易褐化的難題，為其快速繁殖提供有效的技術(shù)支持。采用本發(fā)明方法，能快速獲得大量的蓮花組培苗，這些組培苗可作為很好的水生植物栽培品種，具有很高的經(jīng)濟價值，同時在園林緑化中具有更好的觀賞價值。此外，本發(fā)明提供的方法簡便易行、可操作性強、重現(xiàn)性好。
具體實施例方式下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進ー步詳細的說明，但本發(fā)明不限于以下實施例。實施例I按照本實施例的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其首先采取離體組織培養(yǎng)獲得組培苗，然后煉苗、移載即得蓮花，其中離體組織培養(yǎng)包括如下步驟(I)、采用蓮花當(dāng)年生蓮子為起始材料，將材料洗凈后晾干，用作組織培養(yǎng)繁殖的外植體。將該外植體在體積比濃度為75%的こ醇水溶液中進行30秒鐘的表面處理，然后在重量體積比濃度為O. I %的HgCl2溶液中進行5 10分鐘的殺菌處理，再用無菌水沖洗3 5次，置濾紙上吸干多余水分，完成對外植體的消毒滅菌處理。在超凈工作臺上將胚芽取出，接種于基本培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)在每天光照12 14h，光照強度為1500 2000LX以及溫度為25V ±2°C的條件下進行，培養(yǎng)2 3周，獲得無菌實生苗，其中基本培養(yǎng)基的成分為1/2MS+ 活性炭 O. 8g/L+ 蔗糖 30g/L+ 卡拉膠 7g/L，pH 為 5. 8。(2)、將無菌實生苗的含生長點部分的胚軸上部及子葉切下，接種于增殖培養(yǎng)基，光照培養(yǎng)3 4周，獲得組培叢芽，其中，増殖培養(yǎng)基的成分組成為MS改良培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基中硝酸銨用量減少1/4的培養(yǎng)基)+ZT 5mg/L+活性炭O. 8g/L+蔗糖30g/L以及卡拉膠7g/L, pH 為 5. 8。(3)、將步驟(2)所得組培叢芽中長2 3cm的芽轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)基的成分組成為MS改良培養(yǎng)基+ZT 3mg/L+活性炭O. 8g/L+蔗糖30g/L以及卡拉膠 7g/L，pH 為 5.8。(4)、待步驟(3)苗長到4 6cm吋，將苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得組培苗，生根培養(yǎng)基的成分組成為1/2MS培養(yǎng)基+活性炭O. 6 O. 9g/L+IBA O. 5mg/L+蔗糖 30g/L+ 卡拉膠 7g/L, pH 為 5. 8。實施例2按照本實施例的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其離體組織培養(yǎng)基本步驟同實施例1，不同的是，步驟(2)中，采取的增殖培養(yǎng)基的成分組成為MS改良培養(yǎng)基+ZT 7mg/L+活性炭O. 8g/L+鹿糖30g/L以及卡拉膠7g/L。實施例3按照本實施例的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其離體組織培養(yǎng)基本步驟同實施例1，不同的是，步驟(3)中，采取的壯苗培養(yǎng)基的成分組成為MS改良培養(yǎng)基+ZT 5mg/L+活性炭O. 8g/L+鹿糖30g/L以及卡拉膠7g/L。對比例I按照本實施例的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其離體組織培養(yǎng)基本步驟同實施例1，不同的是，所有培養(yǎng)基中均沒有添加活性炭。對比上述實施例I 3及對比例I的培養(yǎng)結(jié)果如下外植體經(jīng)過消毒后，取出胚芽組織培養(yǎng)，由于胚芽組織較干凈，無菌率均控制在98% 100%。實施例I和2中，増殖培養(yǎng)誘導(dǎo)率分別達到80%和86. 7%，但在實施例2中發(fā)現(xiàn)有的外植體有玻璃化現(xiàn)象。實施例I 3及對比例I的壯苗培養(yǎng)中，實施例I的外植體的長勢最好，沒有玻璃化現(xiàn)象。此外，實施例I 3的褐化率明顯低于對比例1，生長發(fā)育良好，說明在培養(yǎng)基中添加O. 8g/L的活性炭對外植體具有較好的抗褐化效果，且對離體培養(yǎng)的生長發(fā)育幾乎無影響。此外，實施例I 3的移栽成活率可達85%，對比例I的移栽成活率可達80%。綜上可見，本發(fā)明通過對蓮花組織培養(yǎng)過程中的外植體種類選擇、増殖培養(yǎng)方法、壯苗培養(yǎng)方法、生根方法及其培養(yǎng)基成分進行了改進，有效解決了蓮花外植體易污染及易褐化等難題，為其快速繁殖提供有效的技術(shù)支持，解決了目前蓮藕資源少，繁殖周期長的問題，為滿足市場需求提供一條新的途徑。 以上對本發(fā)明做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并加以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據(jù)本發(fā)明的精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.ー種水生植物蓮花的快速繁殖方法，其首先采取離體組織培養(yǎng)獲得組培苗，然后煉苗、移載即得蓮花，其特征在于所述離體組織培養(yǎng)包括如下步驟 (1)、以蓮花種子為起始原料，將蓮花種子消毒滅菌處理后，在無菌條件下取出胚芽，接種于基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2 3周，獲得無菌實生苗，所述基本培養(yǎng)基為在1/2MS培養(yǎng)基中添加活性炭O. 6 O. 9g/L、鹿糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l,并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基； (2)、將無菌實生苗的含生長點部分的胚軸上部及子葉切下，接種于增殖培養(yǎng)基，光照培養(yǎng)3 4周，獲得組培叢芽，其中，所述增殖培養(yǎng)基為在MS改良培養(yǎng)基中添加有玉米素4. 5 5. 5mg/L、活性炭O. 6 O. 9g/L、鹿糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l,并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基； (3)、將步驟(2)所得組培叢芽中2 3cm長的芽切下，接種于壯苗培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，其中所述壯苗培養(yǎng)基為在MS改良培養(yǎng)基中添加玉米素2. 5 3. 5mg/L、活性炭O. 6 O. 9g/L、蔗糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l，并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基； (4)、待步驟(3)中苗長至4 6cm吋，將苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得組培苗，其中所述生根培養(yǎng)基為在1/2MS培養(yǎng)基中添加活性炭O. 6 O. 9g/L、吲哚丁酸O. 4 O. 6mg/L、鹿糖25 30g/l以及卡拉膠7 8g/l,并調(diào)節(jié)pH至5. 5 6. O所得的培養(yǎng)基， 上述步驟(2)至(4)中所述的MS改良培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基中硝酸銨用量減少1/4的培養(yǎng)基。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于步驟(I)中，所述蓮花種子為蓮花當(dāng)年生蓮子。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于步驟(I)中，將所述蓮花種子在體積比濃度為70% 75%的こ醇水溶液中進行20 40秒的表面處理，然后在重量體積比濃度為O. 05% O. 15%的HgCl2溶液中進行5 10分鐘的殺菌處理，再用無菌水沖洗3 5次，完成對所述蓮花種子的消毒滅菌處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于步驟(I)中所述的培養(yǎng)在每天光照12 14h，光照強度為1500 2000LX以及溫度為25°C ±2°C的條件下進行。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于所述的基本培養(yǎng)基、増殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基中分別含有活性炭O. 75 O. 85g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于所述的基本培養(yǎng)基、増殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基的pH均被調(diào)節(jié)至5. 8。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于所述的増殖培養(yǎng)基中含有玉米素5. Omg/Lo
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于所述的壯苗培養(yǎng)基中含有玉米素3. Omg/Lo
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水生植物蓮花的快速繁殖方法，其特征在于在步驟(4)生根培養(yǎng)結(jié)束后，敞瓶煉苗3 4天，然后取出苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，將苗栽至基質(zhì)中，并用塑料薄膜遮陰，以保持空氣濕度在85 % 90 %，至新根長出，將苗移栽至土中，保持2 3cm水深，進行養(yǎng)護。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種水生植物蓮花的快速繁殖方法，其首先采取離體組織培養(yǎng)獲得組培苗，該離體組織培養(yǎng)包括如下步驟(1)以蓮花種子為起始原料，將蓮花種子消毒滅菌處理后，在無菌條件下取出胚芽，接種于基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2～3周，獲得無菌實生苗；(2)將無菌實生苗的含生長點部分的胚軸上部及子葉切下，接種于增殖培養(yǎng)基，光照培養(yǎng)3～4周，獲得組培叢芽；(3)將步驟(2)所得組培叢芽中2～3cm長的芽切下，接種于壯苗培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；(4)待步驟(3)中苗長至4～6cm時，將苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得組培苗。本發(fā)明解決了目前蓮藕資源少，繁殖周期長的問題，為滿足市場需求提供了一條新的途徑。
文檔編號A01H4/00GK102640705SQ201210106788
公開日2012年8月22日 申請日期2012年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月12日
發(fā)明者劉士輝, 周志疆, 張承妹, 肖建梅, 陳敏敏, 陳權(quán) 申請人:上海孫橋現(xiàn)代農(nóng)業(yè)聯(lián)合發(fā)展有限公司, 上海孫橋現(xiàn)代溫室種子種苗有限公司