專利名稱：一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)和離體快速繁殖，尤其涉及一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
蕪;活是傘形科(UmbelIiferae)憲活屬iNotopterygium)多年生植物,為我國特有的重要瀕危植物，是中、藏、羌藥中最常用的藥材之一，也是市場缺口較大的中藏藥材。羌活以根狀莖及根入藥，味辛、性溫，有散表寒、祛風(fēng)濕利關(guān)節(jié)等功效，主治感冒風(fēng)濕、發(fā)熱頭痛、、皮膚瘙癢、風(fēng)水浮腫等癥。我國歷版藥典對羌活均有收載，據(jù)《中華人民共和國藥典》2005年版一部，為傘形科(Umbelliferae)多年生草本植物蕪;活incisum Tingex H. T. Chang)和寬葉憲活(A forbesii Boissieu)的干燥根莖及根,用藥開發(fā)歷史悠久。依據(jù)藥材性狀一般劃分為蠶羌、竹節(jié)羌、大頭羌和條羌4個商品等級。按產(chǎn)地不同分為川羌(四川)和西羌(青海、甘肅等)。青海是羌活藥材的道地產(chǎn)區(qū)，暢銷全國并出口，主產(chǎn)果洛、玉樹、黃南、海東等地2800米以上的高海拔山區(qū)。羌活藥材長期依賴野生采挖來滿足國內(nèi)外市場需求，種質(zhì)資源破壞嚴重、蘊藏量急劇減少，羌活種群遭到了毀滅性破壞，致使其資源已無法滿足市場需要。尤其是近年來隨著國內(nèi)外對羌活需求量的增加，供需矛盾日益突出，加之利益驅(qū)使，大量掠奪性采挖，使羌活逐漸成為瀕危植物，面臨物種喪失，資源枯竭的危險，進行種質(zhì)資源保護和擴大羌活繁育勢在必行。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用細胞的全能性(即個體的某個器官或組織已經(jīng)分化的細胞再生成完整個體的遺傳潛力。)，取植物個體上的細胞團或組織，通過人工配制的培養(yǎng)基，使這些細胞團或組織形成成千上萬個植株。利用組織培養(yǎng)進行離體快速繁殖有以下幾方面重要意義⑴繁殖速度快，不受外界氣候因素影響，一年四季在室內(nèi)均可快速大量繁殖；(2)便于保持優(yōu)良生物學(xué)特性；⑶在保存和繁育優(yōu)良突變體或優(yōu)良雜種一代方面有非常重要的意義，一株具有明顯優(yōu)勢的羌活突變體或一個具明顯優(yōu)勢的后代經(jīng)組織培養(yǎng)后可大面積推
I 寸寸。文獻報道了眾多高山野生藥材的組織培養(yǎng)，如雪蓮、紅景天等，但以野生羌活幼葉為外植體的組織培養(yǎng)尚未見報道。從野外采集的外植體，其表面滋生大量細菌和真菌等微生物，有的甚至長到組織內(nèi)部；加之羌活所含醌類、酚類物質(zhì)較多，很容易氧化褐變，因此對外植體材料的選擇和消毒處理方法都是非常關(guān)鍵。本發(fā)明首次采用幼葉外植體組織培養(yǎng)方法，開展野生羌活種質(zhì)離體繁殖研究工作，這為挽救珍稀瀕危羌活種質(zhì)資源，開展遺傳改良、促進羌活的工廠化育苗提供了一條新途徑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種易于操作、可進行大規(guī)模工廠化生產(chǎn)的羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法。
為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟
⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗1(T20分鐘，再用體積濃度為75%的 酒精浸泡滅菌15 30秒，然后以無菌去離子水沖洗2 3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 19T0. 2%的升汞中，浸泡滅菌51分鐘，并用無菌去離子水沖洗3飛次，即得消毒后的外植體；
⑵外植體接種將所述消毒后的外植體切成0. ro. 5cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊所述消毒后的外植體；在溫度為20V ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)10 25天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織；
⑶愈傷組織增殖將所述愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，其中每25ml所述愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30^60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下愈傷組織增殖20 35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織；
⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將所述步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml所述誘芽培養(yǎng)基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)30 35天，形成叢生羌活苗；
(5)生根誘導(dǎo)將所述叢生羌活苗分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml所述生根培養(yǎng)基中接種I棵所述叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol .m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗；
(6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15 20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)；所述育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)；
(7)植株移栽將所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株；所述一棵完整再生小苗種植在所述消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。所述步驟⑴中的羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物羌活。所述步驟⑵中的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液IOml,有機成分母液IOml,鐵鹽母液5ml,朽1檬酸母液4ml, Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液5 20ml，濃度為
0.lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液2 10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 0^8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。所述步驟⑶中的愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液IOml,有機成分母液IOml,鐵鹽母液5ml,朽1檬酸母液4ml, Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液l(Tl5ml，濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5 10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 0^8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。所述步驟⑷中的誘芽培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)母液l(T20ml，濃度為0. Img/ml的萘乙酸(NAA)母液2 10ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. (T8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。
所述步驟(5)中的生根培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml，微量元素母液IOml，有機成分母液IOml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的吲哚丁酸(IBA)母液5 15ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 0 8.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。所述步驟(6)中的育苗基質(zhì)的總孔隙度為70% 75%，有機質(zhì)含量為20%。所述大量元素母液是指含有硝酸銨(NH4NO3) 1650mg/L,硝酸鉀(KNO3) 1900mg/L,硫酸鎂(MgSO4) 370mg/L，磷酸二氫鉀(KH2PO4) 170mg/L,氯化鈣(CaCl2_ 2H20)440mg/L 的混合液。所述微量元素母液是指含有硫酸錳(MnSO4 4H20) 22. 3mg/L，硫酸鋅(ZnSO4 7H20)8. 6mg/L，硼酸(H3BO3) 6. 2mg/L，碘化鉀(KI) 0. 83mg/L，鑰酸鈉(NaMoO4 2H20)0. 25mg/L，硫酸銅(CuSO4 5H20) 0. 025mg/L,氯化鈷(CoCl2'6H20) 0. 025mg/L 的混合液。所述有機成分母液是指含有甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0. lmg/L,鹽酸吡哆醇0. 5mg/L,煙酸0. 5mg/L,肌醇100mg/L的混合液。所述鐵鹽母液是指含有硫酸亞鐵(FeSO47H20) 27. 8mg/L, Na2 EDTA- 2H20 37. 3 mg/L的混合液。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點
I、本發(fā)明首次采用幼葉外植體通過生物工程技術(shù)一組織培養(yǎng)技術(shù)進行組織培養(yǎng)，克服了羌活育苗周期過長(2年)、繁殖系數(shù)低的問題；同時開展野生羌活種質(zhì)資源離體繁殖研究工作，為挽救珍稀瀕危羌活種質(zhì)資源，開展遺傳改良、促進羌活的工廠化育苗提供了一條新途徑，提供了一種能進行羌活的人工繁殖、種質(zhì)資源離體保存、利用及選育藥用成分含量高的突變系的組織培養(yǎng)離體繁殖方法。2、由于本發(fā)明所用培養(yǎng)基中含有植物激素2，4-D和6-BA，2，4_D激素屬細胞生長素類，此生長素的生理作用主要是促進細胞伸長生長和細胞分裂，具有誘導(dǎo)受傷的組織表面一至數(shù)層細胞恢復(fù)分裂能力的特點；6-BA激素屬細胞分裂素類，具有誘導(dǎo)芽分化的主導(dǎo)作用，因此誘發(fā)時間短、出苗快、增殖頻率高，尤其出苗齊，煉苗后可直接成活，易于操作，可進行大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。3、本發(fā)明利用組織培養(yǎng)進行離體快速繁殖有以下幾方面重要意義⑴繁殖速度快，不受外界氣候因素影響，一年四季在室內(nèi)均可快速大量繁殖，即啟動快；⑵便于保持優(yōu)良生物學(xué)特性，即同步性好；(3)在保存和繁育優(yōu)良突變體或優(yōu)良雜種一代方面有非常重要的意義，一株具有明顯優(yōu)勢的羌活突變體或一個具明顯優(yōu)勢的后代經(jīng)組織培養(yǎng)后可大面積推廣等等。
具體實施方式
實施例I 一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟
⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗10分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌15秒，然后以無菌去離子水沖洗2 3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 1%的升汞中，浸泡滅菌8分鐘，并用無菌去離子水沖洗3次，最后用無菌濾紙吸干水分即得消毒后的外植體。⑵外植體接種將消毒后的外植體切成0. 3^0. 5cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊消毒后的外植體；在溫度為200C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)1(T15天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微 量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液5ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液2ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑶愈傷組織增殖將愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上,其中每25ml愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60umol . m_2. s'光照時間為12 h . cf1的條件下愈傷組織增殖2(T25天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織。愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液IOml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml誘芽培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30飛0umol . m_2. s'光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)3(T35天，形成叢生羌活苗。誘芽培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)母液10ml，濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液2ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(5)生根誘導(dǎo)將叢生羌活苗分株，即在無菌超凈工作臺內(nèi)，打開瓶口封口膜，用消過毒的鑷子將生長旺盛的苗從叢生苗中分剝下來，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml生根培養(yǎng)基中接種I棵叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol.m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗，該完整再生小苗是指完成了芽和根的分化，并已長出了小葉片，可以獨立進行自養(yǎng)生長的幼小植株。
生根培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的卩引哚丁酸(IBA)母液5ml,后加雙蒸懼水至IOOOml刻度處,攪勻后,加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 5克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15^20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其中育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)，該育苗基質(zhì)的總孔隙度為709^75%，有機質(zhì)含量為20%。(7)植株移栽將完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株，一般成活率在70%以上；一棵完整再生小苗種植在消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。 實施例2 —種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟
⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗15分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌20秒，然后以無菌去離子水沖洗2次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 2%的升汞中，浸泡滅菌6分鐘，并用無菌去離子水沖洗5次，最后用無菌濾紙吸干水分即得消毒后的外植體。⑵外植體接種將消毒后的外植體切成0. 3^0. 5cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊消毒后的外植體；在溫度為200C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)15 20天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液IOml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 5克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑶愈傷組織增殖將愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上,其中每25ml愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60umol . m_2. s'光照時間為12 h . cf1的條件下愈傷組織增殖3(T35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織。愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液12ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液10ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 5克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml誘芽培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30飛0umol . m_2. s'光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)3(T35天，形成叢生羌活苗。誘芽培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)母液15ml，濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 5克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(5)生根誘導(dǎo)將叢生羌活苗分株，即在無菌超凈工作臺內(nèi)，打開瓶口封口膜，用消過毒的鑷子將生長旺盛的苗從叢生苗中分剝下來，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml生根培養(yǎng)基中接種I棵叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol.m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗，該完整再生小苗是指完成了芽和根的分化，并已長出了小葉片，可以獨立進行自養(yǎng)生長的幼小植株。生根培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml,微量元素母液 10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的卩引哚丁酸(IBA)母液IOml,后加雙蒸懼水至IOOOml刻度處,攪勻后，加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 5克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15^20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其中育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)，該育苗基質(zhì)的總孔隙度為709^75%，有機質(zhì)含量為20%。(7)植株移栽將完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株，一般成活率在70%以上；一棵完整再生小苗種植在消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。實施例3 —種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟
⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗15分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌30秒，然后以無菌去離子水沖洗3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 15%的升汞中，浸泡滅菌7分鐘，并用無菌去離子水沖洗4次，最后用無菌濾紙吸干水分即得消毒后的外植體。⑵外植體接種將消毒后的外植體切成0. ro. 3cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊消毒后的外植體；在溫度為200C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)2(T25天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液15ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液10ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉7. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。
⑶愈傷組織增殖將愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上,其中每25ml愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60umol . m_2. s'光照時間為12 h . cf1的條件下愈傷組織增殖25 35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織。愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液15ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液8ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉7. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml誘芽培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30飛0umol . m_2. s'光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)3(T35天，形成叢生羌活苗。誘芽培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)母液15ml，濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液IOml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉7. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(5)生根誘導(dǎo)將叢生羌活苗分株，即在無菌超凈工作臺內(nèi)，打開瓶口封口膜，用消過毒的鑷子將生長旺盛的苗從叢生苗中分剝下來，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml生根培養(yǎng)基中接種I棵叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol.m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗，該完整再生小苗是指完成了芽和根的分化，并已長出了小葉片，可以獨立進行自養(yǎng)生長的幼小植株。生根培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的卩引哚丁酸(IBA)母液15ml,后加雙蒸懼水至IOOOml刻度處,攪勻后，加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 5克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15^20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其中育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)，該育苗基質(zhì)的總孔隙度為709^75%，有機質(zhì)含量為20%。(7)植株移栽將完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株，一般成活率在70%以上；一棵完整再生小苗種植在消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。實施例4 一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟 ⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗13分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌30秒，然后以無菌去離子水沖洗3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 15%的升汞中，浸泡滅菌8分鐘，并用無菌去離子水沖洗5次，最后用無菌濾紙吸干水分即得消毒后的外植體。⑵外植體接種將消毒后的外植體切成0. ro. 3cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊消毒后的外植體；在溫度為200C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)2(T25天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液20ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉8.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即 得。⑶愈傷組織增殖將愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上,其中每25ml愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60umol . m_2. s'光照時間為12 h . cf1的條件下愈傷組織增殖25 30天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織。愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液15ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液10ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉8.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml誘芽培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30飛0umol . m_2. s'光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)3(T35天，形成叢生羌活苗。誘芽培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)母液20ml，濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液2ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(5)生根誘導(dǎo)將叢生羌活苗分株，即在無菌超凈工作臺內(nèi)，打開瓶口封口膜，用消過毒的鑷子將生長旺盛的苗從叢生苗中分剝下來，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml生根培養(yǎng)基中接種I棵叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol.m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗，該完整再生小苗是指完成了芽和根的分化，并已長出了小葉片，可以獨立進行自養(yǎng)生長的幼小植株。生根培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的卩引哚丁酸(IBA)母液8ml,后加雙蒸懼水至1000ml刻度處,攪勻后,加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15^20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其中育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)，該育苗基質(zhì)的總孔隙度為709^75%，有機質(zhì)含量為20%。(7)植株移栽將完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株，一般成活率在70%以上；一棵完整再生小苗種植在消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。實施例5 —種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟
⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗20分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌25秒，然后以無菌去離子水沖洗2 3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 2%的升汞中，浸泡滅菌5分鐘，并用無菌去離子水沖洗6次，最后用無菌濾紙吸干水分即得消毒后的外植體。⑵外植體接種將消毒后的外植體切成0. ro. 3cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊消毒后的外植體；在溫度為200C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . nT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)2(T25天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液15ml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉7.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑶愈傷組織增殖將愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上,其中每25ml愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60umol . m_2. s'光照時間為12 h . cf1的條件下愈傷組織增殖25 35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織。愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- 二氯苯氧乙酸(2，4-D)母液IOml,濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉7.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml誘芽培養(yǎng)基中接種2塊愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30飛0umol . m_2. s'光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)3(T35天，形成叢生羌活苗。誘芽培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0. lmg/ml的6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)母液10ml，濃度為0. lmg/ml的萘乙酸(NAA)母液5ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉7. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(5)生根誘導(dǎo)將叢生羌活苗分株，即在無菌超凈工作臺內(nèi)，打開瓶口封口膜，用消過毒的鑷子將生長旺盛的苗從叢生苗中分剝下來，然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml生根培養(yǎng)基中接種I棵叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol.m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗，該完整再生小苗是指完成了芽和根的分化，并已長出了小葉片，可以獨立進行自養(yǎng)生長的幼小植株。生根培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml,微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為
0. lmg/ml的吲哚丁酸(IBA)母液12ml，后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImMNaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。(6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15^20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其中育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)，該育苗基質(zhì)的總孔隙度為709^75%，有機質(zhì)含量為20%。(7)植株移栽將完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株，一般成活率在70%以上；一棵完整再生小苗種植在消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。上述實施例1飛中的羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物羌活(.Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang);超凈工作臺，型號為 BCM-1000A,由蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、愈傷組織增殖培養(yǎng)基、誘芽培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基中大量元素母液是指含有硝酸銨(NH4NO3) 1650mg/L，硝酸鉀(KNO3) 1900mg/L，硫酸鎂(MgSO4) 370mg/L，磷酸二氫鉀(KH2PO4) 170mg/L，氯化鈣(CaCl2_2H20) 440mg/L的混合液；微量元素母液是指含有硫酸錳(MnSO4 4H20) 22. 3mg/L，硫酸鋅(ZnSO4 7H20) 8. 6mg/L,硼酸(H3BO3) 6. 2mg/L,碘化鉀(KI) 0. 83mg/L,鑰酸鈉(NaMoO4 2H20) 0. 25mg/L,硫酸銅(CuSO4 5H20) 0. 025mg/L,氯化鈷(CoC12_6H20) 0. 025mg/L的混合液；有機成分母液是指含有甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素
0.lmg/L,鹽酸卩比卩多醇0. 5mg/L,煙酸0. 5mg/L,肌醇100mg/L的混合液；鐵鹽母液是指含有硫酸亞鐵(FeSO4 7H20) 27. 8mg/L，Na2 EDTA.2H20 37. 3 mg/L 的混合液。
權(quán)利要求
1.一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟 ⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗1(T20分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌15 30秒，然后以無菌去離子水沖洗2 3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0. 19T0. 2%的升汞中，浸泡滅菌51分鐘，并用無菌去離子水沖洗3飛次，即得消毒后的外植體； ⑵外植體接種將所述消毒后的外植體切成0. ro. 5cm2的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，其中每25ml所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中接種3小塊所述消毒后的外植體；在溫度為20V ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . m—2. s—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)10 25天，在幼葉切ロ處膨大形成愈傷組織； ⑶愈傷組織増殖將所述愈傷組織接種到愈傷組織増殖培養(yǎng)基上，其中每25ml所述愈傷組織増殖培養(yǎng)基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30^60 umol . HT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下愈傷組織増殖20 35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織； ⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將所述步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，其中每25ml所述誘芽培養(yǎng)基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為30 60 umol . HT2. S—1、光照時間為12 h cf1的條件下培養(yǎng)30 35天，形成叢生羌活苗； (5)生根誘導(dǎo)將所述叢生羌活苗分株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，其中每25ml所述生根培養(yǎng)基中接種I棵所述叢生羌活苗；在溫度為20°C ±2°C、光源為日光燈、光強為3(T60 umol .m_2. s'光照時間為12 h .cf1的條件下培養(yǎng)2(T30天后，小苗基部出現(xiàn)白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗； (6)育苗基質(zhì)消毒將育苗基質(zhì)在115 121°C溫度下進行高溫消毒，15 20min后即得消毒后的育苗基質(zhì)；所述育苗基質(zhì)是指腐殖質(zhì)與珍珠巖按2 1重量比混合而成的混合基質(zhì)； (7)植株移栽將所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株；所述ー棵完整再生小苗種植在所述消毒后的育苗基質(zhì)IOcm2的范圍內(nèi)。
2.如權(quán)利要求I所述的ー種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于所述步驟⑴中的羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物羌活。
3.如權(quán)利要求I所述的ー種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于所述步驟⑵中的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液IOml,有機成分母液IOml,鐵鹽母液5ml,朽1檬酸母液4ml, Vc母液2ml,鹿糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4- ニ氯苯氧こ酸母液5 20ml,濃度為0. lmg/ml的萘こ酸母液2 10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. (T8.0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為ー瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。
4.如權(quán)利要求I所述的ー種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于所述步驟⑶中的愈傷組織增殖培養(yǎng)基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液IOml,有機成分母液IOml,鐵鹽母液5ml,朽1檬酸母液4ml, Vc母液2ml,鹿糖30克，濃度為0. lmg/ml的2，4-ニ氯苯氧こ酸母液l(Tl5ml,濃度為0. lmg/ml的萘こ酸母液5 10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. (T8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為ー瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。
5.如權(quán)利要求I所述的ー種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于所述步驟⑷中的誘芽培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液IOml，有機成分母液IOml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為.0. lmg/ml的6-節(jié)氨基腺嘌呤母液l(T20ml,濃度為0. lmg/ml的萘こ酸母液2 IOml,后加雙蒸餾水至IOOOml刻度處，攪勻后，加入ImM NaOH溶液調(diào)整pH值至5. 8，最后加入瓊脂粉.6.(T8. 0克，在I OOml三角瓶中每25ml分裝為ー瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。
6.如權(quán)利要求I所述的ー種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于所述步驟(5)中的生根培養(yǎng)基是指在IOOOml的燒杯中，依次加入大量元素母液50ml，微量元素母液.1Oml，有機成分母液IOml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為.0. lmg/ml的卩引哚丁酸母液5 15ml,后加雙蒸懼水至IOOOml刻度處,攪勻后,加入ImM NaOH溶液調(diào)整PH值至5. 8，最后加入瓊脂粉6. (T8. 0克，在IOOml三角瓶中每25ml分裝為ー瓶，經(jīng)121°C高溫消毒即得。
7.如權(quán)利要求I所述的ー種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，其特征在于所述步驟(6)中的育苗基質(zhì)的總孔隙度為709^75%，有機質(zhì)含量為20%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，該方法包括以下步驟⑴外植體的選擇和消毒處理以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)浸泡滅菌、沖洗，即得消毒后的外植體；⑵外植體接種將消毒后的外植體切塊，接種在形成愈傷組織；⑶愈傷組織增殖將愈傷組織接種進行增殖，形成致密的愈傷組織；⑷愈傷組織的芽誘導(dǎo)將致密的愈傷組織接種形成叢生羌活苗；⑸生根誘導(dǎo)將叢生羌活苗分株后接種培養(yǎng)，得完整再生小苗；⑹育苗基質(zhì)消毒；⑺植株移栽將完整再生小苗直接移栽到消毒后的育苗基質(zhì)中，煉苗后即長成正常羌活植株。本發(fā)明克服羌活育苗周期過長、繁殖系數(shù)低的問題，易于操作、可進行工廠化快速育苗。
文檔編號A01H4/00GK102657087SQ20121014378
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月10日
發(fā)明者劉衛(wèi)根, 周國英, 徐文華, 李春麗, 楊路存, 賀麗華 申請人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所