專利名稱：一株綠色木霉及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物防治植物病害領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種能夠高效防治植物土傳病害的綠色木霉及其用途，以及采用該綠色木霉制備的生物防治制劑。
背景技術(shù)：
植物土傳病害是一類重要的植物病害，包括根腐病、立枯病、猝倒病、枯萎病等等。真菌、細(xì)菌、線蟲、病毒都是引起土傳病害的土傳病原物，它們通常侵染植物根部，引起作物根部乃至全株的病害，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。對于植物土傳病害的防治，常規(guī)采用的方法包括傳統(tǒng)的化學(xué)防治、培育抗病品種以及生物防治?；瘜W(xué)防治和抗病品種目前只對少數(shù)土傳病害有效，對大多數(shù)病害防效甚微，且使用化學(xué)農(nóng)藥還會(huì)造成農(nóng)藥殘留，造成環(huán)境污染；同時(shí)，化學(xué)農(nóng)藥的長期使用，使得病原·菌對其產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致防效下降甚至失敗。生物防治由于克服了化學(xué)防治的上述弊病，且研究和實(shí)踐已證明其對部分土傳病害經(jīng)濟(jì)有效，因而成為防治土傳病害研究的熱點(diǎn)，越來越受到人們的重視。木霉(Trichoderma spp.)屬于半知菌類的絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科,是一類廣泛分布于土壤、空氣、枯枝落葉及各種發(fā)酵物上的真菌，從植物根圈、葉片及種子、球莖表面均可以分離到。木霉通過產(chǎn)生抗生素、營養(yǎng)競爭、重寄生、細(xì)胞壁降解酶以及誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性等機(jī)制，對于多種植物病原菌具有拮抗作用，可抑制多種植物病害，是目前生防菌株中研究最為廣泛的菌株之一。木霉對植物病原菌的生物防治機(jī)制是多樣而復(fù)雜的，常常是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果，不同的菌株生防機(jī)制的側(cè)重點(diǎn)不同，其生防作用效果與菌株類型、病原真菌的類型、作物類型和環(huán)境條件密切相關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于高效防治植物土傳病害的新的木霉菌株——綠色木霉。本發(fā)明的綠色木霉菌株具有生長速度快、產(chǎn)孢量大、作用譜廣、抗逆性強(qiáng)，在植物根際能夠快速大量定殖等特點(diǎn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種采用該新的綠色木霉制備的能夠高效防治植物土傳病害的生物防治制劑。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供一種綠色木霉，所述綠色木霉的保藏編號為CGMCC No. 5044。本發(fā)明所提供的菌株為綠色木霉(Trichoderma viride) LLM-001,是從五蓮縣蘑菇上分離獲得的，已于2011年7月8日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱CGMCCJia :北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏號為CGMCC No. 5044。其具有以下生物學(xué)特性在PDA瓊脂培養(yǎng)基上生長快，30°C黑暗條件下培養(yǎng)3d，菌落直徑70_。菌落初期白色稀疏，后期形成黃綠色產(chǎn)孢區(qū)。反面無色。菌絲聚隔，分枝。分生孢子梗形成松柏式的分枝輪廓，分枝末端的小梗束生、對生、互生或單生，瓶形，4. 5-10 X 2. 5-3. 5 Pm。分生孢子橢球形、單個(gè)，近無色，聚集時(shí)呈淡綠色，壁稍粗糙，
3.5-5 X 3-4 u mD 該菌株的rRNA基因序列測定 結(jié)果(ITS-5. 8S-ITS2區(qū))如下 GGGCCCGGGATCTACTGATCGAGGTCACATTTCAGAAGTTTGGGGTGTTTTACGGCTGTGGCCGCGCCGCGCTCCCGGTGCGAGTGTGCAMCTACTGCGCAGGAGAGGCTGCGGCGAGACCGCCACTGTATTTCGGGGGCGGCCCGGTGAGGGGCCGATCCCCAACGCCGACCCCCCGGAGGGGTTCGAGGGTTGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCGCCAGMTACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAMGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAMGTTTTGATTCATTTTCGAGACGCCCGCTAGGGTCGCCGAGAMGGCTCAGAGCAAAAATAAMCAGAGCCGCGACGGGAGCCGCGACGGAGAGAAAAMGAGTTTGGAGTTGGTCCTCCGGCGGGCGCCATGGGATCCGGGGCTGCGACGCGCCCGGGGCMGAGAATCCCGCCGAGGCAACAGATTGGTAACGTTCACATTGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCTGGTTCACCAACGGAGACCTTGTTACGTT本發(fā)明綠色木霉菌(Trichodermaviride)LLM_001 (CGMCC No. 5044)的培養(yǎng)方法或繁殖方法包括 (I)普通培養(yǎng)保存采用PDA培養(yǎng)基，配方為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水 1000mL。(2)實(shí)驗(yàn)室液體培養(yǎng)采用PDB培養(yǎng)基，配方為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水IOOOmLo(3)固體培養(yǎng)基配方固料和無機(jī)鹽溶液，按質(zhì)量比I : I. 8的比例配制。其中所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包括
3.5%磷酸二氫鉀，0. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水。(4 )大量發(fā)酵培養(yǎng)基配方同(3 )中固體培養(yǎng)基配方。本發(fā)明還提供一種用于防治植物土傳病害的生物防治制劑，所述生物防治制劑包括所述的綠色木霉；優(yōu)選地，所述生物防治制劑包括所述的綠色木霉發(fā)酵原粉。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述綠色木霉發(fā)酵原粉由包括以下步驟的方法進(jìn)行制備(I)制備所述綠色木霉的種子液；(2)將步驟(I)制備的種子液接種到固體培養(yǎng)基中，28°C下恒溫培養(yǎng)；(3)將步驟(2)培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按質(zhì)量比I : 15的比例混合，過濾，將濾液接種至大量發(fā)酵培養(yǎng)基，在室溫28°C、相對濕度85%以上的條件下(例如在室溫28°C、相對濕度85%以上的發(fā)酵室中)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。 其中，步驟(2 )中的固體培養(yǎng)基由固料和無機(jī)鹽溶液組成，所述固料和無機(jī)鹽溶液的比例為質(zhì)量比I : I. 8 ;所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包含3. 5%磷酸二氫鉀，0. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水。并且，步驟(3)中的大量發(fā)酵培養(yǎng)基同固體培養(yǎng)基。并且，本發(fā)明還提供了一種用于防治植物土傳病害的生物防治方法，所述生物防治方法包括向具有土傳病害的植物施用上述綠色木霉或者上述生物防治制劑。本發(fā)明也提供了上述綠色木霉或者上述生物防治制劑在防治植物土傳病害中的用途。
就上述生物防治制劑、生物防治方法以及用途而言，所述植物土傳病害可以選自灰霉病、猝倒病、疫病、根腐病、立枯病、枯萎病、黃萎病、蔓枯病、青枯病、菌核病、白粉病、褐紋病、綿腐病和綿疫病中的一種或多種；優(yōu)選地，所述植物土傳病害為灰霉病和/或猝倒病。本發(fā)明所述的生物防治制劑的制備方法包括以下步驟( I)制備所述綠色木霉的種子液；(2)將步驟(I)制備的種子液接種到固體培養(yǎng)基中，28°C下恒溫培養(yǎng)；(3)將步驟(2)培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按質(zhì)量比I : 15的比例混合，過濾，將濾液接種至大量發(fā)酵培養(yǎng)基，在室溫28°C、相對濕度85%以上的條件下(例如在室溫28°C、相對濕度85%以上的發(fā)酵室中)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。其中，步驟(2 )中的固體培養(yǎng)基由固料和無機(jī)鹽溶液組成，所述固料和無機(jī)鹽溶液·的比例為質(zhì)量比I : I. 8 ;所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包含3. 5%磷酸二氫鉀，0. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水。并且，步驟(3)中的大量發(fā)酵培養(yǎng)基同固體培養(yǎng)基。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述制備方法包括以下步驟(I)將所述綠色木霉的孢子移到PDB液體培養(yǎng)基中，28°C搖床振蕩培養(yǎng)3飛天得到種子液；(2)將步驟(I)制備的種子液按質(zhì)量比10%的比例接種到固體培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)3 5天；(3)將步驟(I)培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按質(zhì)量比I : 15的比例混合，過濾，將濾液按體積比I : 6的比例接種至大量發(fā)酵培養(yǎng)基，在室溫28°C、相對濕度85%以上的條件下(例如在室溫28°C、相對濕度85%以上的發(fā)酵室中)發(fā)酵培養(yǎng)8、天。其中，步驟(I)中的所述PDB液體培養(yǎng)基包含去皮馬鈴薯0. 2g/mL,葡萄糖0. 02g/mL，剩余為蒸懼水；步驟(2)中的固體培養(yǎng)基由固料和無機(jī)鹽溶液組成，所述固料和無機(jī)鹽溶液的比例為質(zhì)量比I : I. 8;所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包含3. 5%磷酸二氫鉀，0. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水；步驟(3)中的大量發(fā)酵培養(yǎng)基同步驟(2)的固體培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的綠色木霉菌株具有生長速度快、產(chǎn)孢量大、作用譜廣、抗逆性強(qiáng)，在植物根際能夠快速大量定殖等特點(diǎn)，因此具有良好的應(yīng)用前景。由該綠色木霉制備的生物防治制劑，不僅能夠高效的防治植物土傳病害，還能有效提高作物產(chǎn)量，是一種極具應(yīng)用前景的生物防治制劑。該微生物制劑可以作為生物農(nóng)藥或生物肥料，防治多種土傳植物病害，包括灰霉病、猝倒病、疫病、根腐病、立枯病、枯萎病、黃萎病、蔓枯病、青枯病、菌核病、白粉病、褐紋病、綿腐病、綿疫病等。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是示例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例II、綠色木霉菌(Trichoderma viride) LLM-001 (CGMCC No. 5044)的分離與純化本發(fā)明的綠色木霉(Trichodermaviride)LLM_001 (CGMCC No. 5044)是從五蓮縣蘑菇上采用平板劃線法分離獲得的，分離方法為⑴木霉菌株的分離取受害嚴(yán)重的蘑菇菌包，先用75%的酒精局部處理lmin，再在超凈工作臺上用紫外燈處理20min后，用滅菌刀片切開處理部位，用接種針挑取少量木霉菌孢子，在PDA平板上劃線，定時(shí)觀察菌落生長情況。然后采用平板劃線法，純化木霉菌株，轉(zhuǎn)至PDA試管斜面保存?zhèn)溆?。⑵黃瓜灰霉病高效拮抗木霉菌株的篩選
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①初篩采用對峙培養(yǎng)法，制備PDA平板，用打孔器在木霉菌和黃瓜灰霉病菌邊緣打取直徑為5_的菌餅，分別移植在平板相對的兩側(cè)中央，25°C恒溫培養(yǎng)，逐日觀察木霉菌對病原菌的抑制作用。②復(fù)篩將篩選到的具有高效拮抗活性的木霉菌株進(jìn)行復(fù)篩，主要是經(jīng)過耐溫性、耐酸堿性、耐藥性試驗(yàn)，篩選到耐性較好的木霉菌株，進(jìn)行盆栽防治試驗(yàn)和田間試驗(yàn)。本發(fā)明人通過大量篩選工作得到一株能夠高效防治植物土傳病害的綠色木霉(Trichoderma viride)LLM_001 (CGMCC No. 5044)。實(shí)驗(yàn)證明，該綠色木霉發(fā)酵原粉在防治土傳病害的代表性大棚種植試驗(yàn)中，對辣椒猝倒病和黃瓜灰霉病都顯示出非常高效的防治效果，使得農(nóng)作物顯著增產(chǎn)。因而，本發(fā)明的綠色木霉是具有廣泛應(yīng)用前景的綠色木霉新菌株，可以用于制備防治植物土傳病害的生物防治制劑。2、菌株鑒定(I)微生物學(xué)特性在PDA瓊脂培養(yǎng)基上生長快，30°C黑暗條件下培養(yǎng)3d，菌落直徑70mm。菌落初期白色稀疏，后期形成黃綠色產(chǎn)孢區(qū)。反面無色。菌絲聚隔，分枝。分生孢子梗形成松柏式的分枝輪廓，分枝末端的小梗束生、對生、互生或單生，瓶形，4. 5-10X 2. 5-3. 5 Pm。分生孢子橢球形、單個(gè)，近無色，聚集時(shí)呈淡綠色，壁稍粗糙，
3.5-5 X 3-4 u mD(2)分子生物學(xué)特性該菌株的rRNA基因序列測定結(jié)果(ITS-5. 8S-ITS2區(qū))如下GGGCCCGGGATCTACTGATCGAGGTCACATTTCAGAAGTTTGGGGTGTTTTACGGCTGTGGCCGCGCCGCGCTCCCGGTGCGAGTGTGCAMCTACTGCGCAGGAGAGGCTGCGGCGAGACCGCCACTGTATTTCGGGGGCGGCCCGGTGAGGGGCCGATCCCCAACGCCGACCCCCCGGAGGGGTTCGAGGGTTGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCGCCAGMTACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAMGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAMGTTTTGATTCATTTTCGAGACGCCCGCTAGGGTCGCCGAGAMGGCTCAGAGCAAAAATAAMCAGAGCCGCGACGGGAGCCGCGACGGAGAGAAAAMGAGTTTGGAGTTGGTCCTCCGGCGGGCGCCATGGGATCCGGGGCTGCGACGCGCCCGGGGCMGAGAATCCCGCCGAGGCAACAGATTGGTAACGTTCACATTGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCTGGTTCACCAACGGAGACCTTGTTACGTT其中，PDA培養(yǎng)基配方馬鈴薯200g(去皮)，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL。實(shí)施例2
I、綠色木霉菌發(fā)酵過程PDB培養(yǎng)基配方馬鈴薯200g (去皮)，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL。大量固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分含量)固料玉米芯60%，麩皮40%無機(jī)鹽溶液磷酸二氫鉀3. 5%，硫酸鎂O. 04%,硫酸銨4%，剩余為水。固液比為I : 1.8 (質(zhì)量比)綠色木霉(Trichodermaviride) LLM-001 (CGMCC No. 5044)大量固體發(fā)酵過程①菌種種子液培養(yǎng)將綠色木霉菌(Trichoderma viride) (LLM-001) CGMCC·No. 5044從試管斜面中挑取少量孢子，移至PDB液體培養(yǎng)基中，28°C搖床振蕩培養(yǎng)3 5d，此為種子液。②固體生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)將種子液按10%的比例接種到固體培養(yǎng)基(500mL三角瓶)中，28°C恒溫培養(yǎng)3飛d，中間多次振蕩。③大量固體發(fā)酵將②中固體培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按I : 15比例稀釋，并用滅菌紗布過濾，出去粗渣，即為生產(chǎn)菌液，接種比例按I : 6接種于大量發(fā)酵培養(yǎng)基。將接種的原料置于發(fā)酵室(28°C和相對濕度85%以上)中發(fā)酵培養(yǎng)8、d，將發(fā)酵室中的發(fā)酵物粉碎即可得到綠色木霉發(fā)酵原粉。實(shí)施例3本實(shí)施例提供了綠色木霉(Trichodermaviride)LLM_001 (CGMCCNo. 5044)(以下簡稱為綠色木霉LLM-001)原粉對黃瓜灰霉病防病增產(chǎn)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。I、供試藥劑綠色木霉LLM-001原粉(實(shí)施例2中制備)40%咪霉胺可濕性粉劑(山東壽光雙星農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)，市售)。2、供試作物與防治對象供試作物為黃瓜，品種為長春密刺；防治對象為灰霉病。3、試驗(yàn)地情況試驗(yàn)地設(shè)在山東省壽光黃瓜大棚種植基地,該基地大棚黃瓜灰霉病近幾年發(fā)生嚴(yán)重，且防治困難，試驗(yàn)在600平方米(0. 9畝)黃瓜大棚內(nèi)，土質(zhì)為輕壤土，有機(jī)質(zhì)含量為I. 09%，pH值為6. 7，所有試驗(yàn)小區(qū)栽培條件及管理措施一致，施藥時(shí)黃瓜灰霉病處于發(fā)病初期。4、試驗(yàn)設(shè)計(jì)及安排本試驗(yàn)設(shè)綠色木霉LLM-001原粉10倍，40%咪霉胺可濕性粉劑600倍液及不施藥清水作對照共3個(gè)處理，重復(fù)4次，共12個(gè)小區(qū)，各小區(qū)隨機(jī)排列，小區(qū)面積為20m2。于2011年2月6日、2月13日和20日各噴藥一次，將植株葉片上下噴灑均勻、周到，噴藥時(shí)用塑料布遮擋，畝用藥液60kg，噴藥器械為工農(nóng)-16型噴霧器。5、試驗(yàn)調(diào)查及計(jì)算方法(I)氣象條件第I次施藥(2011年2月6日)當(dāng)日晴，風(fēng)力3級，最高氣溫為12°C，最低氣溫為5°C，相對濕度為75%。第2次施藥(2011年2月13日)，當(dāng)日晴漸多云，風(fēng)力4級，最高氣溫為13°C，最低氣溫為2°C，相對濕度為70%;第3次施藥(2011年2月20日)當(dāng)日多云，風(fēng)力3級，最高氣溫為10°C，最低氣溫為IV，相對濕度為80%。因塑料大棚環(huán)境條件相對穩(wěn)定，所以該氣候?qū)λ幮]有影響。(2)藥效及安全性調(diào)查藥效調(diào)查第I次施藥后第7d和最后一次施藥后14d進(jìn)行調(diào)查。每小區(qū)采用4點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)查2株，調(diào)查全部葉片，調(diào)查發(fā)病率，記錄病情級數(shù)并計(jì)算病情指數(shù)。安全性調(diào)查于第一次施藥后7d和14d觀察黃瓜的安全性，如有藥害發(fā)生，詳細(xì)描述藥害癥狀并按藥害程度分級標(biāo)準(zhǔn)確定藥害程度。分級方法(以葉片為單位)O級無病斑I級病斑面積占整個(gè)葉面積的5%以下；3級病斑面積占整個(gè)葉面積的6%_10% ；5級病斑面積占整個(gè)葉面積的11%_25% ；7級病斑面積占整個(gè)葉面積的26%_30% ；9級病斑面積占整個(gè)葉面積的50%以上；(3)調(diào)查時(shí)間和次數(shù)施藥前調(diào)查病情基數(shù)，下次施藥前及末次施藥后IOd調(diào)查防治結(jié)果。(4)藥效計(jì)算方法藥效按式(I)、(2)計(jì)算
權(quán)利要求
1.一種綠色木霉，其特征在于，所述綠色木霉的保藏編號為CGMCCNo. 5044。
2.一種用于防治植物土傳病害的生物防治制劑，其特征在于，所述生物防治制劑包括根據(jù)權(quán)利要求I所述的綠色木霉； 優(yōu)選地，所述生物防治制劑包括根據(jù)權(quán)利要求I所述的綠色木霉發(fā)酵原粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生物防治制劑，其特征在于，所述綠色木霉發(fā)酵原粉由包括以下步驟的方法進(jìn)行制備 (1)制備所述綠色木霉的種子液； (2)將步驟(I)制備的種子液接種到固體培養(yǎng)基中，28°C下恒溫培養(yǎng)； (3)將步驟(2)培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按質(zhì)量比I: 15的比例混合，過濾，將濾液接種至大量發(fā)酵培養(yǎng)基，在室溫28°C、相對濕度85%以上的條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)； 其中，步驟(2 )中的固體培養(yǎng)基由固料和無機(jī)鹽溶液組成，所述固料和無機(jī)鹽溶液的比例為質(zhì)量比I : I. 8;所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包含3. 5%磷酸二氫鉀，O. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水；并且，步驟(3)中的大量發(fā)酵培養(yǎng)基同步驟(2)中的固體培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物防治制劑，其特征在于，所述植物土傳病害選自灰霉病、猝倒病、疫病、根腐病、立枯病、枯萎病、黃萎病、蔓枯病、青枯病、菌核病、白粉病、褐紋病、綿腐病和綿疫病中的一種或多種；優(yōu)選地，所述植物土傳病害為灰霉病和/或猝倒病。
5.一種用于防治植物土傳病害的生物防治方法，其特征在于，所述生物防治方法包括向具有植物土傳病害的植物施用根據(jù)權(quán)利要求I所述的綠色木霉或者根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的生物防治制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物防治方法，其特征在于，所述植物土傳病害選自灰霉病、猝倒病、疫病、根腐病、立枯病、枯萎病、黃萎病、蔓枯病、青枯病、菌核病、白粉病、褐紋病、綿腐病和綿疫病中的一種或多種；優(yōu)選地，所述植物土傳病害為灰霉病和/或猝倒病。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的綠色木霉或者根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的生物防治制劑在防治植物土傳病害中的用途； 優(yōu)選地,所述植物土傳病害選自灰霉病、猝倒病、疫病、根腐病、立枯病、枯萎病、黃萎病、蔓枯病、青枯病、菌核病、白粉病、褐紋病、綿腐病和綿疫病中的一種或多種；優(yōu)選地，所述植物土傳病害為灰霉病和/或猝倒病。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)所述的生物防治制劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟 (O制備根據(jù)權(quán)利要求I所述的綠色木霉的種子液； (2)將步驟(I)制備的種子液接種到固體培養(yǎng)基中，28°C下恒溫培養(yǎng)； (3)將步驟(2)培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按質(zhì)量比I: 15的比例混合，過濾，將濾液接種至大量發(fā)酵培養(yǎng)基，在室溫28°C、相對濕度85%以上的條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)； 其中，所述步驟(2 )中的固體培養(yǎng)基由固料和無機(jī)鹽溶液組成，所述固料和無機(jī)鹽溶液的比例為質(zhì)量比I : I. 8，所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包括3. 5%磷酸二氫鉀，O. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水； 步驟(3)中的大量發(fā)酵培養(yǎng)基同步驟(2)中的固體培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟(1)將根據(jù)權(quán)利要求I所述的綠色木霉的孢子移至PDB液體培養(yǎng)基中，28°C搖床振蕩培養(yǎng)3飛天得到種子液； (2)將步驟(I)制備的種子液按質(zhì)量比10%的比例接種到固體培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)3 5天; (3)將步驟(I)培養(yǎng)的培養(yǎng)物用無菌水按質(zhì)量比I: 15的比例混合，過濾，將濾液按體積比I : 6的比例接種至大量發(fā)酵培養(yǎng)基，在室溫28°C、相對濕度85%以上的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8、天。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中的PDB液體培養(yǎng)基包含去皮馬鈴薯O. 2g/mL，葡萄糖O. 02g/mL，剩余為蒸餾水； 所述步驟(2)中的固體培養(yǎng)基由固料和無機(jī)鹽溶液組成，所述固料和無機(jī)鹽溶液的比例為質(zhì)量比I : I. 8;所述固料由質(zhì)量比為60 40的玉米芯和麩皮組成；按質(zhì)量百分比計(jì)，所述無機(jī)鹽溶液包含3. 5%磷酸二氫鉀，O. 04%硫酸鎂，4%硫酸銨，剩余為水； 所述步驟(3)中的大量發(fā)酵培養(yǎng)基同步驟(2)中的固體培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明提供一種綠色木霉及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的綠色木霉的保藏編號為CGMCC No.5044，具有生長速度快、產(chǎn)孢量大、作用譜廣、抗逆性強(qiáng)，在植物根際能夠快速大量定殖等特點(diǎn)，可以用于防治植物土傳病害。由該綠色木霉制備的生防制劑，不僅能夠高效的防治植物土傳病害，還能有效提高作物產(chǎn)量，是一種極具應(yīng)用前景的生防制劑。
文檔編號A01N63/04GK102787075SQ20121017766
公開日2012年11月21日 申請日期2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月31日
發(fā)明者湯潔 申請人:北京雷力農(nóng)用化學(xué)有限公司