專利名稱：一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作物病害防治技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法。
背景技術(shù)：
煙草青枯病又稱“煙瘟”，是一種典型的煙草維管束病害，近年來在我國主要產(chǎn)煙區(qū)呈加重發(fā)生趨勢，發(fā)病率一般在10% 25%，部分煙區(qū)高達50% 80%，甚至絕收，對煙葉產(chǎn)量和質(zhì)量造成無法挽回的巨大損失，是制約我國煙草生產(chǎn)最具威脅的毀滅性病害之一。
煙草青枯病是一種細菌性病害，遇高溫多雨天氣易暴發(fā)流行。該病由青枯勞爾氏菌iRalstonia ■so/aflacea/ )侵染煙株維管束引起全株性系統(tǒng)癥狀,從苗期到成株期均可侵染發(fā)病。煙草青枯病發(fā)病早期，在晴天中午可見煙株一側(cè)I片葉凋萎下垂，萎蔫一側(cè)的莖上常有褪綠條斑，因萎蔫迅速葉片仍表現(xiàn)為綠色，故稱之為“青枯”。而煙草黑脛病的發(fā)病條件及為害癥狀與煙草青枯病十分相似，黑脛病作為一種真菌性的高溫高濕病害，同樣呈現(xiàn)為系統(tǒng)性萎蔫，特別是黑脛病田間早期癥狀也表現(xiàn)為煙株一側(cè)I片葉首先萎蔫、同側(cè)莖桿隱約可見褪綠條斑，這使得青枯病與黑脛病在田間早期檢測上極易造成混淆、引起誤診，以至于錯過最佳防治時期，為病害準(zhǔn)確、及時、有效地防治造成很大困難，這也是煙草青枯病很難防治的原因之一。對于煙草青枯病的檢測，傳統(tǒng)上采取組織分離法，通過柯赫氏法則進行致病力測定加以明確，也可利用血清學(xué)方法如酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、間接免疫熒光染色法(WAS)，以及應(yīng)用分子生物學(xué)方法如核酸分子雜交、PCR擴增等技術(shù)進行特異性檢測等。但是這些方法均不同程度需要借助實驗室條件和專業(yè)技術(shù)人員才能完成，而且其操作流程較為復(fù)雜、易遭受外界因素的干擾、運行成本也極高。鑒于此，在生產(chǎn)中有必要建立簡便有效、操作性強的煙草青枯病田間早期檢測方法，以滿足基層技術(shù)人員及田間工作實際的需要，為煙草青枯病防治工作提供準(zhǔn)確及時的依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，該方法基于煙草青枯病是一種細菌性病害，對早期出現(xiàn)的一側(cè)萎蔫葉片葉脈或發(fā)生變黑的側(cè)根維管束，通過解剖可觀察到煙草黑脛病所沒有的、特征性的菌溢現(xiàn)象，從而早期快速準(zhǔn)確地檢測青枯病。本發(fā)明所提供的一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，通過如下步驟實現(xiàn)
(1)選取煙田田間具有早期癥狀的疑似病株，表現(xiàn)為煙株一側(cè)I 2片葉片萎蔫，萎蔫葉片的葉脈橫斷面變成褐色或黑色，根系一側(cè)1-2條側(cè)根有變黑現(xiàn)象；
(2)沿病健交界處剪下萎蔫葉片，保持病健交界處剪刀切口不變，將萎蔫葉片主葉脈剪成長100mm、寬15mm的條狀，或沿黑變側(cè)根病健交界處剪取長IOOmm變黑的側(cè)根；
(3)取常規(guī)玻璃試管，加水至4/5試管體積，將剪取的條狀主葉脈或變黑的側(cè)根放入盛水玻璃試管中，靜置3_5min ；(4)觀察主葉脈或側(cè)根維管束的剪刀切口處，是否有乳白色渾濁的液體溢出，即是否有細菌性病害典型的菌溢現(xiàn)象，若出現(xiàn)此現(xiàn)象，則為煙草青枯病。上述方法步驟(3)的常規(guī)玻璃試管，長度150mm、管口直徑25mm。
本發(fā)明的優(yōu)點是應(yīng)用該方法田間煙草青枯病早期檢測率明顯提高，準(zhǔn)確率可達95%以上，可及時有效地指導(dǎo)田間病害防治，方法簡便明了，易掌握，具有廣泛的推廣應(yīng)用價值。
具體實施例方式在重慶主要產(chǎn)煙區(qū)6-7月生產(chǎn)季節(jié)，疑似青枯病、黑脛病癥狀陸續(xù)開始出現(xiàn)，煙株表現(xiàn)為一側(cè)葉片萎蔫或一側(cè)根系變黑，而且此早期癥狀集中在田間顯現(xiàn)，極易引起混淆和誤檢，為有的放矢開展病害防治帶來巨大困難。從2008-2011年，經(jīng)過四年的多點試驗和實踐測試，按照本發(fā)明方法進行操作，同時將所取對應(yīng)樣本通過實驗室分離檢測加以印證，結(jié)果表明，選取一側(cè)萎蔫葉片主葉脈作診斷材料和依據(jù)，其準(zhǔn)確率平均在95%以上，選取一側(cè)變黑根系作診斷材料和依據(jù)，其準(zhǔn)確率平均在97%以上。在田間早期準(zhǔn)確檢測的基礎(chǔ)上，迅速采取措施，對癥下藥使用72%農(nóng)用鏈霉素開展煙草青枯病防治工作，及時有效地阻止了青枯病在田間的擴散蔓延，病害發(fā)生率與煙農(nóng)常規(guī)對照相比下降了 85%，病情指數(shù)下降了 80%，單位面積煙葉產(chǎn)量接近健康無病煙田，其產(chǎn)量水平達到健康煙田的90%以上，煙田其經(jīng)濟效益顯著提高。
權(quán)利要求
1.一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，其特征在于通過如下步驟實現(xiàn) (1)選取煙田田間具有早期癥狀的疑似病株，表現(xiàn)為煙株ー側(cè)I 2片葉片萎蔫，萎蔫葉片的葉脈橫斷面變成褐色或黒色，根系ー側(cè)1-2條側(cè)根有變黑現(xiàn)象； (2)沿病健交界處剪下萎蔫葉片，保持病健交界處剪刀切ロ不變，將萎蔫葉片主葉脈剪成長100mm、寬15mm的條狀，或沿黑變側(cè)根病健交界處剪取長IOOmm變黑的側(cè)根； (3)取常規(guī)玻璃試管，加水至4/5試管體積，將剪取的條狀主葉脈或變黑的側(cè)根放入盛水玻璃試管中，靜置3_5min ； (4)觀察主葉脈或側(cè)根維管束的剪刀切ロ處，是否有乳白色渾濁的液體溢出，即是否有細菌性病害典型的菌溢現(xiàn)象，若出現(xiàn)此現(xiàn)象，則為煙草青枯病。
全文摘要
一種煙草青枯病田間早期快速檢測方法，基于煙草青枯病是一種細菌性病害，對早期出現(xiàn)的一側(cè)萎蔫葉片葉脈或發(fā)生變黑的側(cè)根維管束，通過解剖可觀察到煙草黑脛病所沒有的、特征性的菌溢現(xiàn)象，從而早期快速準(zhǔn)確地檢測青枯病。應(yīng)用該方法田間煙草青枯病早期檢測率明顯提高，準(zhǔn)確率可達95%以上，可及時有效地指導(dǎo)田間病害防治，方法簡便明了，易掌握，具有廣泛的推廣應(yīng)用價值。
文檔編號A01G7/00GK102668901SQ20121017828
公開日2012年9月19日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者肖崇剛, 陳國康, 馬冠華 申請人:西南大學(xué)