專利名稱：羅漢果多倍體的誘導方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物遺傳育種領域，涉及誘導植物多倍體的方法，尤其是一種羅漢果多倍體的誘導方法。
背景技術：
多倍體(polyploid)是指體細胞具有2個以上染色體組的植物。自1937年發(fā)現(xiàn)秋水仙素(colchicine)可誘導染色體加倍后，人們開始植物多倍體誘導的研究。目前，采用秋水仙素離體誘導同源四倍體是獲得多倍體植株的主要途徑。羅漢果(葫蘆科(Cucurbitaceae)羅漢果屬(Siraitia)植物羅漢果(Siraitia grosvenorii))選育中，蔣水元等也主要采用一定濃度的秋水仙素處理離體組培苗獲得 多倍體(無籽羅漢果選育的初步研究[J].廣西植物，2009，29 (4) :506-509)。然而，采用秋水仙素處理毒性大；在離體條件進行處理，需要具備較高的組織培養(yǎng)條件；組培苗處理后普遍存在嵌合體，需要多代鑒定和倍性純化，操作程序復雜，工作量大。微管抑制劑Oryzalin (氨磺靈)是誘導四倍體的新型化學誘導劑，誘導機理與秋水仙素相似，具有植物多倍體誘導效率高、毒性小的特點，是替代秋水仙素的新產(chǎn)品，現(xiàn)已用于百合、西瓜等植物多倍體誘導中。然而，不同植物特性不同，采用Oryzalin處理的方式和效果也存在很大差異。未見Oryzalin在誘導羅漢果多倍體方面的研究和報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種操作程序簡便、誘導效率高、不產(chǎn)生嵌合體的羅漢果多倍體的誘導方法。為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案羅漢果多倍體的誘導方法，采用Oryzalin浸泡處理授粉后的羅漢果雌花，然后用清水清洗解除。授粉是羅漢果雌花開放的第I天，采用新鮮開放雄花花粉進行。授粉后是羅漢果雌花授粉后24h 48h。Oryzalin浸泡處理使用30 U M的Oryzalin水溶液。Oryzalin浸泡處理持續(xù)24h。該方法還包括收獲處理果實、播種育苗及染色體鑒定步驟。收獲處理果實是待雌花膨大形成果實且果實顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時采摘果實。播種育苗及染色體鑒定是剝?nèi)」麑嵵械姆N子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。羅漢果生殖生物研究表明，受精后48小時內(nèi)，花粉管伸長通過花柱進入胚囊(薛妙男，楊小華.羅漢果雙受精過程的細胞學觀察[J].廣西植物，1995，15 (4) :358-362)。由此，發(fā)明人通過采用微管抑制劑Oryzalin田間浸泡處理授粉后一定時間的羅漢果雌花，再用清水清洗解除及收獲處理果實、播種育苗、染色體鑒定等步驟，誘導合子染色體加倍，從而獲得多倍體。本發(fā)明解決了羅漢果多倍體的嵌合體問題，簡化了誘導的操作程序，提高了羅漢果多倍體誘導效率，便于實際應用。
具體實施例方式以下實施例中30iiM Oryzalin水溶液按照如下方法事先配制首先采用少量DMSO(二甲基亞砜)溶解所需質(zhì)量的Oryzalin藥劑，然后將DMSO溶液滴加入蒸餾水中，滴加過程中不斷搖勻蒸餾水，保證無藥劑析出，液體為黃色，DMSO用量為最終配制水溶液的1%。實施例I<1>田間選擇羅漢果品種類型“青皮果”無病蟲害發(fā)生、生長健壯的雌株為誘導植 株。<2>進入開花期，雌花開放的第I天，采用開放雄花花粉進行授粉。<3>羅漢果雌花授粉后24h，將雌花放入裝有30 ii M Oryzalin水溶液的離心管中進行浸泡處理24h。<4>處理結(jié)束后,取出雌花,用清水清洗,去除Oryzalin。<5>收獲處理果實待雌花膨大形成果實且果實顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時，采摘果實。與對照相比，處理后，雌花正常膨大，形成果實的比率明顯下降，授粉后24h處理，果實成熟率下降41. 11%。〈6>播種育苗及染色體鑒定剝?nèi)」麑嵵械姆N子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。授粉后24h處理獲得的122個后代植株中，四倍體比率為10. 66%,無嵌合體發(fā)生。實施例2<1>田間選擇羅漢果品種類型“青皮果”無病蟲害發(fā)生、生長健壯的雌株為誘導植株。<2>進入開花期，雌花開放的第I天，采用開放雄花花粉進行授粉?！?>羅漢果雌花授粉后48h，將雌花放入裝有30iiM Oryzalin水溶液的離心管中進行浸泡處理24h。<4>處理結(jié)束后,取出雌花,用清水清洗,去除Oryzalin。<5>收獲處理果實待雌花膨大形成果實且果實顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時，采摘果實。與對照相比，處理后，雌花正常膨大，形成果實的比率明顯下降，授粉后48h處理，果實成熟率下降9. 17%?！?>播種育苗及染色體鑒定剝?nèi)」麑嵵械姆N子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。授粉后48h處理獲得的490個后代植株中，四倍體比率為2. 45%,無嵌合體發(fā)生。
權(quán)利要求
1.一種羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于采用Oryzalin浸泡處理授粉后的羅漢果雌花，然后用清水清洗解除。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于所述授粉是羅漢果雌花開放的第I天，采用新鮮開放雄花花粉進行。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于所述授粉后是羅漢果雌花授粉后24h 48h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于所述Oryzalin浸泡處理使用30 u M的Oryzalin水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于所述Oryzalin浸泡處理持續(xù)24h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于該方法還包括收獲處理果實、播種育苗及染色體鑒定步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于所述收獲處理果實是待雌花膨大形成果實且果實顏色由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色時采摘果實。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的羅漢果多倍體的誘導方法，其特征在于所述播種育苗及染色體鑒定是剝?nèi)」麑嵵械姆N子，人工去除種殼，播種出苗后鑒定植株染色體倍性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羅漢果多倍體的誘導方法，采用Oryzalin浸泡處理授粉后的羅漢果雌花，然后用清水清洗解除，通過新型化學誘導劑Oryzalin誘導合子染色體加倍，從而獲得多倍體。本發(fā)明解決了羅漢果多倍體的嵌合體問題，簡化了誘導的操作程序，提高了羅漢果多倍體誘導效率，便于實際應用。
文檔編號A01H1/08GK102668978SQ20121017870
公開日2012年9月19日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者馮世鑫, 潘麗梅, 白隆華, 繆劍華, 莫長明, 董志淵, 馬小軍 申請人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園