專利名稱：百合試管小鱗莖誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種百合的快速繁育方法，具體涉及一種百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
長期以來，百合一直以傳統(tǒng)的分球、分珠芽、鱗片扦插、鱗片包埋等方式進(jìn)行繁殖，存在繁殖系數(shù)小、種性退化、病毒積累等不足。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的就是要提供一種縮短組培苗生產(chǎn)時間，降低成本，有效地脫去植株體內(nèi)病毒，防止種性退化，培育成本低的百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟
1)鱗片低溫處理選擇生長健壯百合鱗莖球，洗凈后冷藏7-10天；
2)外植體殺菌將經(jīng)低溫貯藏的百合鱗莖球剝?nèi)ネ饷娴?-2層鱗片，選取內(nèi)部鱗片為外植體，將外植體洗凈后在超凈工作臺上先用酒精浸泡、再用氯化汞液消毒，并用無菌水沖洗后將鱗片置于無菌濾紙上，切成方塊接種于分化培養(yǎng)基上啟動培養(yǎng)；
3)啟動培養(yǎng)將接種有的外植體的分化培養(yǎng)基置于環(huán)境條件為溫度25±1°C、濕度75±2%、光照14h、光照強(qiáng)度1800-20001x的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)15天后從百合切口處及腹部邊沿脫分化產(chǎn)生白色團(tuán)狀愈傷組織，繼續(xù)通過20天的培養(yǎng)，白色團(tuán)狀愈傷組織上再分化叢生芽；
4)鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)當(dāng)叢生芽長到3-5cm時，將叢生芽分割成小單芽后進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，將健壯幼苗置于10°C光照培養(yǎng)箱內(nèi)處理14d，再轉(zhuǎn)接到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，將轉(zhuǎn)接有健壯幼苗的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行試管內(nèi)百合小鱗莖誘導(dǎo)，通過45天培養(yǎng)誘導(dǎo)出鱗莖。步驟2)和3)所述的分化培養(yǎng)基配方是
Ms+6-BAl. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉 5g/L。步驟4)中所述的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方是
Ms+6-BAO. 5 mg/L +NAAO. I mg/L + 鹿糖 30 g/L+ 瓊脂粉 5 mg/L。步驟I)選用外植體鱗莖球低溫處理時冰箱的冷藏溫度為5°C，時間7-10天。步驟4)中將轉(zhuǎn)接有健壯幼苗的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行試管內(nèi)百合小鱗莖誘導(dǎo)時，恒溫培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為10± I °C、濕度75±2%、光照14h、光照強(qiáng)度1800-20001x.。本發(fā)明提供的百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，具有以下有益效果
I、百合用經(jīng)低溫貯藏的百合鱗莖為外植體，接種在培養(yǎng)基啟動誘導(dǎo)叢生苗；再將叢生苗以10°C低溫處理14d后，轉(zhuǎn)接到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)試管小鱗莖，比直接誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，試管內(nèi)不形成健壯小鱗莖移栽成活高，成本費用低。2、百合直接從試管誘導(dǎo)小鱗莖，可將小鱗莖直接煉苗移栽，大大縮短組培苗生產(chǎn)時間，降低成本。3、百合通過不斷試管繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生小鱗莖，能有效地脫去植株體內(nèi)病毒，防止種性退化。
具體實施例方式分化培養(yǎng)基制備以Ms為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基內(nèi)添加蔗糖30g/L和瓊脂粉5g/L，培養(yǎng)基內(nèi)的添加的激素組合是6-BAl. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L ；
鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備以Ms為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基內(nèi)添加蔗糖30g/L和瓊脂粉5g/L，培養(yǎng)基內(nèi)的添加的激素組合是6_BA0. 5 mg/L +NAAO. I mg/L。其中6_BA是6-芐基腺嘌呤、NAA是奈乙酸、IBA是吲哚丁酸。
誘導(dǎo)過程實例
1)鱗片低溫處理選擇生長健壯百合鱗莖球，洗凈后置于5°C冰箱進(jìn)行冷藏7-10天左
右；
2)外植體殺菌將經(jīng)低溫貯藏的鱗莖剝?nèi)ネ饷娴?-2層鱗片，選取內(nèi)部鱗片為外植體，將外植體置于5%洗衣粉溶液中浸泡IOmin并清洗，再置于流水沖洗lh，沖洗后在超凈工作臺上先用75%酒精浸泡30s,經(jīng)0. 1%升氯化萊液(單位lg/L)消毒15min,再用無菌水沖洗5次，沖洗后的外植體鱗片置于無菌濾紙上，切成Icm2方塊接種于分化培養(yǎng)基上啟動培養(yǎng)；
3)啟動培養(yǎng)將接種有外植體的分化培養(yǎng)基置于環(huán)境條件為溫度25±1°C、濕度75±2%、光照14h、光照強(qiáng)度1800-20001x的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)15天后從百合切口處及腹部邊沿脫分化產(chǎn)生白色愈傷組織，繼續(xù)通過20天的培養(yǎng)白色團(tuán)狀愈傷組織上再分化叢生芽；
4)鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)當(dāng)叢生芽長到3-5cm時，分割成小單芽后進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，將健壯幼苗置于10°C光照培養(yǎng)箱內(nèi)處理14d，再轉(zhuǎn)接到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基后，再置于入恒溫培養(yǎng)室進(jìn)行試管內(nèi)小鱗莖誘導(dǎo)，恒溫培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為10±1°C、濕度75±2%、光照14h、光照強(qiáng)度1800-20001x.。通過45天培養(yǎng)誘導(dǎo)出鱗莖的平均鮮重達(dá)到I. 4g/個，鱗莖顏色呈乳白色，叢生苗煉苗移栽成活率達(dá)到90%以上，小苗生長健壯。
權(quán)利要求
1.一種百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，其特征在于包括以下步驟 1)鱗片低溫處理選擇生長健壯百合鱗莖球，洗凈后冷藏7-10天； 2)外植體殺菌將經(jīng)低溫貯藏的百合鱗莖球剝?nèi)ネ饷娴?-2層鱗片，選取內(nèi)部鱗片為外植體，將外植體洗凈后在超凈工作臺上先用酒精浸泡、再用氯化汞液消毒，并用無菌水沖洗后將鱗片置于無菌濾紙上，切成方塊接種于分化培養(yǎng)基上啟動培養(yǎng)； 3)啟動培養(yǎng)將接種有的外植體的分化培養(yǎng)基置于環(huán)境條件為溫度25±1°C、濕度75±2%、光照14h、光照強(qiáng)度1800-20001x的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)15天后從百合切口處及腹部邊沿脫分化產(chǎn)生白色團(tuán)狀愈傷組織，繼續(xù)通過20天的培養(yǎng)，白色團(tuán)狀愈傷組織上再分化叢生芽； 4)鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)當(dāng)叢生芽長到3-5cm時，將叢生芽分割成小單芽后進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，將健壯幼苗置于10°C光照培養(yǎng)箱內(nèi)處理14d，再轉(zhuǎn)接到鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，將轉(zhuǎn)接有健壯幼苗的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行試管內(nèi)百合小鱗莖誘導(dǎo)，通過45天培養(yǎng)誘導(dǎo)出鱗莖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，其特征在于步驟2)和3)所述的分化培養(yǎng)基配方是Ms+6-BAl. 5mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA0. lmg/L+ 鹿糖 30g/L+ 瓊脂粉 5g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，其特征在于步驟4)中所述的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方是鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ms+6-BAO. 5 mg/L +NAA0. I mg/L +蔗糖30 g/L+瓊脂粉5 mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，其特征在于步驟I)選用外植體鱗莖球低溫處理時冰箱的冷藏溫度為5°C，時間7-10天。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法，其特征在于步驟4)中將轉(zhuǎn)接有健壯幼苗的鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行試管內(nèi)百合小鱗莖誘導(dǎo)時，恒溫培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為10±1°C、濕度75±2%、光照14h、光照強(qiáng)度1800-20001x。
全文摘要
一種百合小鱗莖的誘導(dǎo)方法以百合鱗莖為外植體，接種于分化培養(yǎng)基中，先誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生苗，再將叢生苗經(jīng)低溫處理后，接種于鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)試管小鱗莖，經(jīng)10℃低溫處理14d，再置入恒溫培養(yǎng)室培養(yǎng)非常有利于試管小鱗莖的膨大。在試管內(nèi)誘導(dǎo)出健壯百合小鱗莖，有利于縮短組培苗生長的時間，降低生產(chǎn)成本。
文檔編號A01H4/00GK102754598SQ20121023726
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月10日
發(fā)明者吳笛, 張國禹, 張海波, 胡梅香, 邱利文, 馬曉波, 黃桂云 申請人:中國長江三峽集團(tuán)公司, 長江三峽生態(tài)園林有限公司