專利名稱：以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體及其培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體及其培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
蝶花(Cordyceps sobolifera ；C. cicadae)也稱!i#蛹草，是一種具有動(dòng)物和植物特征的奇妙生物復(fù)合體，其生物根是蟬蛹或山蟬的幼蟲體，花是從單個(gè)或是2-3個(gè)蟬幼蟲頭部生長(zhǎng)出來的，約一寸多長(zhǎng)，從頂端開花、分枝。蟬花屬于生物病態(tài)現(xiàn)象，是ー種蟲菌相依的組合體。秋季來臨，蟬鉆入土中，逐漸變成蟬蛹，在羽化前被蟲草菌類寄生，當(dāng)生活備件適宜時(shí)，就開始在蟲體內(nèi)萌發(fā)成菌絲體，吸收蟲體的營養(yǎng)，最終蟲體被菌絲體完全占有而只剩下ー個(gè)軀売。萬物復(fù)蘇時(shí)節(jié)，菌絲體又從營養(yǎng)階段轉(zhuǎn)化為有性階段，漸漸從頂端開花分枝， 故而得名蟬花，主要分布于安徽、浙江、福建、廣東、四川、云南、江蘇等地。南北朝時(shí)期雷斅寫的《雷公炮灸論》中記載道“蟬花，凡使，要白花全者。收得后于屋下東角懸干，去甲、土后，用漿水煮一日，至夜焙干，研細(xì)用之?！边@是迄今為止發(fā)現(xiàn)的，關(guān)于蟬花最早的文字記載。同時(shí)也是關(guān)于蟲生真菌最早的文字記載。而《雷公炮灸論》則為我國最早的中藥炮灸學(xué)專著。書中記載了 300多味中草藥的加工方法，距今1500年，比冬蟲夏草的記載整整提早了 800年。專家們據(jù)此推測(cè)，在3000年前，我們的祖先就認(rèn)識(shí)蟬花，并對(duì)其藥用價(jià)值有所了解。此后，專家們又從《本草綱目》上查到了有關(guān)蟬花用途的記載。從北宋中葉蘇頌撰寫的《圖經(jīng)本草》中看到了有關(guān)蟬花的記載“今蜀中有ー種蟬，其蛻殼頭上有一角，如花冠狀，謂之蟬花。醫(yī)エ云人藥最奇?！睆乃未粕魑⒌摹墩黝惐静荨?，以及明朝李時(shí)珍的《本草綱目》也都找到了有關(guān)蟬花記載。金蝶，又名知了猴，隸屬于同翅目蟬科中型到大型昆蟲，營養(yǎng)價(jià)值高，還具有良好的藥用價(jià)值，金蟬含蛋白質(zhì)，為牛肉的2. 5倍，雞肉的2倍，又由于含有人體必需的多種營養(yǎng)素，對(duì)促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，體虛患者康復(fù)等，都有極佳的輔助治療作用，是天然無公害高效營養(yǎng)食品，特別是金蟬能進(jìn)行大規(guī)模人工飼養(yǎng)，為生產(chǎn)蟬花提供穩(wěn)定安全的原料來源，因此，用金蟬幼蟲進(jìn)行人工培養(yǎng)研究蟬花具有廣闊的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用前景。在自然界蟬幼蟲寄主蟲草菌完成ー個(gè)世代需3年以上時(shí)間，這表明形成蟬花有性型的時(shí)間長(zhǎng)，而且在自然界菌蟲感染率低。中國發(fā)明專利CN200810068632公開了ー種蟬花的人工培養(yǎng)方法，(I)分離原始菌株，(2)培養(yǎng)蟬花擬青霉，及用蟬擬青霉孢子感染家蠶老熟幼蟲。以上采用老熟家蠶幼蟲。此外，ー些生物學(xué)專家采用液體深層發(fā)酵的方法解決對(duì)蟬花市場(chǎng)的需求，由于液體發(fā)酵生產(chǎn)只有菌絲體，沒有蟲體。另外用大米、小麥等作培養(yǎng)基生產(chǎn)的蟬花子實(shí)體也沒有蟬蟲體，無法獲得和天然同樣外形的蟬花，而用蟬幼蟲生產(chǎn)蟬花目前尚無相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種感染率高、出草率高的蟬花子實(shí)體及其培育方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法，其特征在于，包括以下步驟第一歩將蛹蟲草子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上經(jīng)孢子分離提純復(fù)壯，得到蛹蟲草菌絲體，培養(yǎng)溫度為20°C，培養(yǎng)時(shí)間12天，淘汰絨毛多不轉(zhuǎn)色的菌絲體，挑選轉(zhuǎn)色好，轉(zhuǎn)色快，貼著培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)快的菌絲體留種；第二步在20°C -22°C，120r/m的條件下，將第一歩得到的留種菌絲體經(jīng)用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)4-5天，并且有小菌球充滿液體培養(yǎng)基，制成液體菌種；第三步用消毒劑對(duì)金蟬幼蟲進(jìn)行浸泡消毒10分鐘，然后用無菌水洗三次，用紫外燈照2小時(shí)，最后在蟬幼蟲身體上用無菌針扎多個(gè)小洞，用無菌注射器吸入第二步得到的液體菌種注入蟬幼蟲體后背；第四歩將第三步得到的已注射感染的蟬幼蟲置于無菌的組培瓶?jī)?nèi)，用注射器將0. Iml液體菌種注入蟬幼蟲外體，蓋上瓶蓋，黑暗保濕培養(yǎng)3天，溫度為18°C -23°c，濕度為80-100% ;然后在20°C下培養(yǎng)20天，光照為12h/d，光照強(qiáng)度為在150_2501x，打開瓶蓋，注入2ml無菌水，繼續(xù)培養(yǎng)30-40天，至蟬花子實(shí)體長(zhǎng)至3cm及以上長(zhǎng)，即收獲。

優(yōu)選地，所述第一歩中的固體培養(yǎng)基的成份為以重量百分比計(jì)的蔗糖1.5%，馬鈴薯 2%,KH2PO4O. 25%,MgSO4 *7H20 0. 15%，維生素 B1O. 01%，瓊脂 I. 6%和蛋白胨 0. 8% 0優(yōu)選地，所述第二步中的液體培養(yǎng)基的成份為以重量百分比計(jì)的蔗糖3%，馬鈴薯 2%, KH2PO4 0. 3%, MgSO4 7H20 0. 15%，維生素 B1 0. 01%，瓊脂 0. 05%和蛋白胨 IV0o優(yōu)選地，所述的第三步中多個(gè)小洞的具體數(shù)量為8個(gè)，分別為前胸4個(gè)，后胸或后背4個(gè)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是I)本發(fā)明采用了蟬幼、無毒、營養(yǎng)成分高，人們長(zhǎng)期食用的大型昆蟲，食用安全可靠。2)蛹蟲草菌是被衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品，具有與冬蟲夏草同樣的藥食用菌的營養(yǎng)，用蟬幼蟲與蛹蟲菌培養(yǎng)的蟬花具有與野生蟲草相似，營養(yǎng)成分相近，是可安全食用的南方“冬蟲夏草”。用蛹蟲草菌稼接蟬幼蟲，14天蟬幼蟲體內(nèi)布滿菌絲體并僵化，30天后蟲體上長(zhǎng)出粗壯子實(shí)體，粗0. 5cm,高2. 5cm以上，子實(shí)體上長(zhǎng)滿有性孢子，金紅色，外觀美，營養(yǎng)好，味道鮮美，用蟬花幼蟲接種蛹蟲草菌技木，感染率達(dá)85%以上，出草率70%以上。


圖I為采用本發(fā)明提供的方法制備的以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體樣本I;圖2為采用本發(fā)明提供的方法制備的以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體樣本2。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明更明顯易懂，茲以優(yōu)選實(shí)施例，并配合附圖作詳細(xì)說明如下。實(shí)施例第一歩取樣采蛹蟲草cordyeepsmilitaris (La. :Fr)樣本,在蛹蟲草子實(shí)體前端切l(wèi)_2cm長(zhǎng)小塊放入培養(yǎng)皿培養(yǎng)；第二步菌種分離將蛹蟲草子實(shí)體(上海農(nóng)業(yè)科學(xué)院蟲草課題組提供)在固體培養(yǎng)基上經(jīng)孢子分離提純復(fù)壯，得到蛹蟲草菌，培養(yǎng)溫度為20°C，培養(yǎng)時(shí)間為12天，淘汰絨毛多不轉(zhuǎn)色的菌絲體，挑選轉(zhuǎn)色好，轉(zhuǎn)色快，貼著培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)快的菌絲體留種；第三歩將第二步得到的留種菌絲體經(jīng)用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)4-5天，培養(yǎng)溫度為20°C -22°C，轉(zhuǎn)速為120r/m，有小菌球充滿液體培養(yǎng)基即可，制成液體菌種；第四步用消毒劑(56°燒酒，北京ニ鍋頭股份有限公司生產(chǎn))對(duì)金蟬幼蟲進(jìn)行浸泡消毒10分鐘，然后用無菌水洗三次，用紫外燈照2小時(shí)，最后在蟬幼蟲(河南金地農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn))的身體上用無菌針扎小洞8個(gè)，前胸4個(gè)，后背4個(gè)，用無菌注射器吸入第二步得到的液體菌種注入蟬幼蟲體后背；第五歩將第三步得到的已注射感染的蟬幼蟲置于無菌的組培瓶?jī)?nèi)，用注射器將0. Iml第二步得到的液體菌種注入蟬幼蟲外體，蓋上瓶蓋，黑暗保濕培養(yǎng)3天，溫度為20°C，濕度為90% ;然后對(duì)其進(jìn)行光照，光照強(qiáng)度為1501x，每天光照12小時(shí)，培養(yǎng)20天后，打開瓶蓋，注入2ml無菌水，繼續(xù)培養(yǎng)30天，至蟬花子實(shí)體3cm長(zhǎng)即可。第二步中的固體培養(yǎng)基的配方為以重量百分比計(jì)的蔗糖1.5%，馬鈴薯2%， KH2PO4 0. 25%, MgSO4 7H20 0.15%，維生素 B1 0. 01 %，瓊脂 I. 6%和蛋白胨 0. 8%。第三步中的液體培養(yǎng)基的配方為以重量百分比計(jì)的蔗糖3%，馬鈴薯2% ,KH2PO40. 3%, MgSO4 7H20 0. 15%，維生素 B1 0. 01 %，瓊脂 0. 05% 和蛋白胨 1% 采用本發(fā)明提供的以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法，14天蟬幼蟲體內(nèi)布滿菌絲體并僵化，30天后蟲體上長(zhǎng)出粗壯子實(shí)體，粗0. 5cm,高2. 5cm以上，子實(shí)體上長(zhǎng)滿有性孢子，金紅色，子實(shí)體棒形狀不分枝，橙紅色，單個(gè)或多個(gè)，粗約0. 5cm,長(zhǎng)3cm以上，帶有孢子頭，外觀美，營養(yǎng)好，味道鮮美，感染率達(dá)85%以上，出草率70%以上。如圖1-2所示，為采用本發(fā)明提供的方法制備的以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體樣本。通過多糖檢測(cè)依據(jù)(NY/T1676-2008)、腺苷(WS-10001-(HD-1280)-2002)檢測(cè)及高效液相色譜分析上述培育方法制備的蟬花蟲草及天然冬蟲夏草，對(duì)比如下表I
權(quán)利要求
1.一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法，其特征在于，包括以下步驟 第一步將蛹蟲草子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上經(jīng)孢子分離提純復(fù)壯，得到蛹蟲草菌絲體，培養(yǎng)溫度為20°C，培養(yǎng)時(shí)間12天，淘汰絨毛多不轉(zhuǎn)色的菌絲體，挑選轉(zhuǎn)色好，轉(zhuǎn)色快，貼著培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)快的菌絲體留種； 第二步在20°C -22°C,120r/m的條件下，將第一步得到的留種菌絲體經(jīng)用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)4-5天，并且有小菌球充滿液體培養(yǎng)基，制成液體菌種； 第三步用消毒劑對(duì)金蟬幼蟲進(jìn)行浸泡消毒10分鐘，然后用無菌水洗三次，用紫外燈照2小時(shí)，最后在蟬幼蟲身體上用無菌針扎小洞8個(gè)，前胸4個(gè)，后胸4個(gè)，用無菌注射器吸入第二步得到的液體菌種注入蟬幼蟲體后背； 第四步將第三步得到的已注射感染的蟬幼蟲置于無菌的組培瓶?jī)?nèi)，用注射器將0.Iml液體菌種注入蟬幼蟲外體，蓋上瓶蓋，黑暗保濕培養(yǎng)3天，溫度為18°C -23°C，濕度為80-100% ;然后在20°C下培養(yǎng)20天，光照為12h/d，光照強(qiáng)度為在150_2501x，打開瓶蓋，注A 2ml無菌水，繼續(xù)培養(yǎng)30-40天，至蟬花子實(shí)體長(zhǎng)至3cm及以上長(zhǎng)，即收獲。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法，其特征在于，所述第一步中的固體培養(yǎng)基的成份為以重量百分比計(jì)的蔗糖1.5%，馬鈴薯2%，KH2PO4O. 25%, MgSO4 7H20 0. 15%，維生素 B1O. 01%，瓊脂 I. 6%和蛋白胨 0. 8% 0
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法，其特征在于，所述第二步中的液體培養(yǎng)基的成份為以重量百分比計(jì)的蔗糖3%，馬鈴薯2%，KH2PO40. 3%, MgSO4 7H20 0. 15%，維生素 B1 0. 01 %，瓊脂 0. 05% 和蛋白胨 1%
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法，其特征在于，所述的第三步中多個(gè)小洞的具體數(shù)量為8個(gè)，分別為前胸4個(gè)，后胸或后背4個(gè)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以蟬幼蟲為寄主的蟬花子實(shí)體的培育方法。所述的培育方法為將蛹蟲草子實(shí)體在固體培養(yǎng)基上經(jīng)孢子分離提純復(fù)壯，得到蛹蟲草菌絲體，挑選轉(zhuǎn)色好，轉(zhuǎn)色快，貼著培養(yǎng)基長(zhǎng)勢(shì)快的菌絲體留種；將留種菌絲體經(jīng)用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，制成液體菌種；對(duì)金蟬幼蟲進(jìn)行處理，在蟬幼蟲身體上用無菌針扎小洞，用無菌注射器吸入液體菌種注入蟬幼蟲體后背；將已注射感染的蟬幼蟲置于無菌的組培瓶?jī)?nèi)，用注射器將0.1ml液體菌種注入蟬幼蟲外體，蓋上瓶蓋，黑暗保濕培養(yǎng)，再光照20天，注入無菌水，繼續(xù)培養(yǎng)，至蟬花子實(shí)體長(zhǎng)至3cm長(zhǎng)。本發(fā)明方法與天然蟬花相比，營養(yǎng)與藥用成分相當(dāng)，質(zhì)量好，感染成功率高，出草率高，時(shí)間短，成本低。
文檔編號(hào)A01G1/04GK102763560SQ20121027176
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月19日
發(fā)明者徐正華, 徐窕, 沈娟麗, 沈金德 申請(qǐng)人:桐鄉(xiāng)市中泰蟲草專業(yè)合作社