專利名稱：一種蟲草飼料添加劑的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種飼料添加劑的制備方法，具體地說是涉及一種蟲草飼料添加劑的制備方法，采用冬蟲夏草無性型菌株-蝙蝠蛾擬青霉進行斜面培養(yǎng)、液體發(fā)酵、固體發(fā)酵和后期熟化工藝生產的蟲草飼料添加劑，屬飼料添加劑加工技術領域。
背景技術：
目前飼料中所采用的添加劑多為抗生素、化學合成藥物、激素等，它們容易在動物體內殘留，長期使用，會使養(yǎng)殖動物產生抗藥性或殘留在養(yǎng)殖動物的終產品(肉、蛋、奶等)中，對食品安全構成威脅，直接或間接對人類健康造成危害，造成機體受損。綠色飼料添加劑代表了未來發(fā)展方向，從廣義上將是指無污染、無殘留、抗病性、促生長的天然添加劑，目前已經開發(fā)了中草藥制劑、酶制劑、微生物制劑、酸化劑、防霉劑、低聚糖等不同類型的添加·劑。應用有益微生物進行飼料添加劑的開發(fā)和生產，提供了一條發(fā)展飼料產品的新路。微生物飼料添加劑為飼料工業(yè)和畜禽飼養(yǎng)提供了一種健康、無毒、無污染的選擇。由于經過嚴格研究、篩選所得的菌種能通過微生物發(fā)酵方法進行生產，不僅產量高，營養(yǎng)價值高，且質量易控。在嚴格選擇和限制了原料后，加上嚴格消毒培養(yǎng)的環(huán)境條件，其產品亦無污染。飼用微生物添加劑作為一種優(yōu)質無公害新型飼用添加劑，由于它的生物活性，具有提高飼料轉化率、促進動物生長發(fā)育、提高日增重和生產性能、增強抗病力、改善飼養(yǎng)環(huán)境污染等獨特作用。飼用微生物添加劑帶給我們的不僅是巨大的經濟效益、生態(tài)效益和綠色畜產品，還必將給整個飼料行業(yè)帶來一場新的變革?，F代的一些研究表明，蟲草人工發(fā)酵的菌絲體的主要藥理藥化成分基本類似于蟲草生藥。蟲草菌絲體中除含有蟲草多糖外，還有氨基酸、微量元素、D-甘露醇和麥角留醇、核苷類、維生素類、蕈糖、硬脂酸等物質?？傊?，蟲草及代謝產物的保健作用獨特，效果顯著，社會需求量與日俱增，有較樂觀的市場開發(fā)前景。以往的生產和研究中都是將蟲草及其代謝物作為藥品和保健品，并已有多種產品問世。利用蟲草類產品做飼料添加劑，在國外尚無報道，國內與本專利相近的僅有中國專利CN97107712. 6和蛹擬青霉、蟬擬青霉、古尼擬青霉為材料的飼料添加劑專利申請，但不同之處非常明顯。前者主要在于該專利涉及面廣，涉及已知未知菌種達數百種，但是不同種蟲草、發(fā)酵工藝不同、功效成分也不同、效果也不相同，甚至某些產品會有毒性，如蝽蟲草，目前確切知道蟲草及無性型的活性成分和保健功能的種類較少。該專利的實施用了擬青霉，該問題在于這里提到的擬青霉是一個很大的屬，意味著包含所有的擬青霉，但是擬青霉不同培養(yǎng)基配方、不同發(fā)酵工藝生產的產品，功效不同，有些能用于動物保健，有些不能甚至有害。后幾者專利所用菌種為不同種擬青霉，但發(fā)酵工藝均較為傳統(tǒng)工藝、條件控制復雜。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為克服上述現有技術的不足之處，提供一種蟲草飼料添加劑的制備方法，采用冬蟲夏草無性型菌株-蝙蝠蛾擬青霉進行斜面培養(yǎng)、液體發(fā)酵、固體發(fā)酵和后期熟化工藝生產的蟲草飼料添加劑，它不同于微生物活菌制劑，也不同于常規(guī)的蟲草類產品，它克服了以往產品的缺點，最大限度的保留了蟲草的功效成分，另外，產品生產原料中的谷糠粉，經特定高溫滅菌過程中的降解工藝后，通過微生物轉化成雙歧因子，能更好的促進動物生長、提高飼料的轉化率而降低成本，而且可以在不用藥或少用藥的前提下因提高動物免疫力和抗病性，提高成活率而降低成本。本發(fā)明是以如下技術方案實現的一種蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是制備方法包括菌種擴培、菌種發(fā)酵、后期熟化；所述菌種為蝙蝠蛾擬青霉菌種(Paecilomyces hepiali Chen et Dai),菌種擴培包括原種擴大培養(yǎng)、斜面試管菌種培養(yǎng)和液體搖瓶種子培養(yǎng)三步；所述菌種的發(fā)酵包括液體種子罐發(fā)酵、液體發(fā)酵罐發(fā)酵和固體發(fā)酵罐發(fā)酵；所述后期熟化為將固體發(fā)酵罐發(fā)酵后的物料，置入網盤，放入25°C無菌車間，進行后期熟化；具體制備方法按如下步驟進行(I)原種擴大培養(yǎng)將分離純化的菌種接入小麥粒培養(yǎng)基,放入22°C培養(yǎng)箱,培養(yǎng)時間為15天，待菌絲長滿三角瓶并開始產孢即可；斜面試管菌種培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的原菌種·接種于斜面試管，放入22°C培養(yǎng)箱,培養(yǎng)7d,待菌絲長滿試管即可；液體搖瓶種子培養(yǎng),在IOOOml三角瓶中裝入400ml培養(yǎng)基，121°C濕熱滅菌30min，待冷卻至室溫，將培養(yǎng)好的斜面菌種接入三角瓶中培養(yǎng)基內，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱，溫度22土TC，180r/m條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為96h 120h ；(2)液體菌種發(fā)酵和固體發(fā)酵液體種子罐發(fā)酵,在100L機械攪拌發(fā)酵罐中裝A 50L液體培養(yǎng)基，pH值為6. 0 7. 2，通入濕熱蒸汽，使罐內培養(yǎng)基溫度維持在121°C 123°C進行滅菌，滅菌時間為30min。滅菌后冷卻至22°C，將4瓶培養(yǎng)好的液體搖瓶種子接入培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22± 1°C，攪拌機轉速為30r/m 50r/m，通無菌空氣量為1:0. 6V/V. min,罐壓0. 03mpa 0. 05mpa，培養(yǎng)72h，達到生長指數期；液體發(fā)酵罐生產，在2000L發(fā)酵罐中裝A 1000L液體培養(yǎng)基，pH值為6. 0 7. 2，通入濕熱蒸汽，使罐內培養(yǎng)基溫度維持在121 °C 123°C進行滅菌，滅菌時間為30min，滅菌后冷卻至22°C，將種子罐的50L液體種子全部接入液體發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)時間培養(yǎng)溫度22±1°C，攪拌機轉速為30r/m 50r/m，通無菌空氣量為1:0. 6V/V.min，罐壓0. 03mpa 0. 05mpa，培養(yǎng)48h，達到生長指數期；固體發(fā)酵，將固體物料置入固體發(fā)酵罐，加入適量水，其重量為物料水=9:1，攪拌均勻后，通入濕熱蒸汽滅菌，攪拌機轉速為6r/m 15r/m，使罐內培養(yǎng)基溫度維持在121°C 123°C進行滅菌，滅菌時間為lh，滅菌后冷卻至22°C，將液體發(fā)酵罐的液體種子接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，接種量為每kg干物料接入IOOml液體種子，培養(yǎng)溫度22±1°C，通無菌空氣量為1:0. 8V/V. min,罐壓0. 03mpa 0. 06mpa,每隔12h攪拌一次,攪拌機轉速為3r/m 5r/m,每次攪拌5min，培養(yǎng) 72h ；(3)后期熟化將固體發(fā)酵罐發(fā)酵72h的固體物料放于潔凈的網盤內，放置于24°C無菌通風室內進行后期熟化，料層厚度為5cm，熟化72h后即可進行烘干粉碎，過100目篩后既得成品。所述的斜面培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料馬鈴薯100g，麩皮20g、葡萄糖log、酵母浸出粉5g、蛋白胨5g，瓊脂粉20g，加水至1L，pH為6. 0 7. 2。所述的液體搖瓶培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉15g、花生餅粉10g、白砂糖20g、葡萄糖10g、酵母浸出粉5g、加水至1L，pH為6. 0 7. 2。
所述的液體種子罐培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉15g、花生餅粉10g、白砂糖30g、、酵母粉5g、, MgSO4 0. 5g、KH2PO4 0. 5g、各組分混勻后補水至1L、pH為6. 0 7. 2。所述的液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉15g、花生餅粉10g、白砂糖30g、、酵母粉5g、MgSO4 0. 5g、KH2PO4 0. 5g、各組分混勻后補水至1L，并用飽和NaOH溶液調pH值為6.8。所述的固體發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉250g、谷糠粉50g、麩皮 50g、玉米粉 650g、MgSO4 0.5g、KH2PO4 0. 5g、pH 為 6. 0 7. 2。本發(fā)明的優(yōu)點是該蟲草飼料添加劑具有獨特的先進性(1)、所用菌株為一種保健食品的生產菌種；應用于動物保健尚無產品面市，具有超前的意識和領先水平，同時其安全性和有效性易于被人接受和認可；(2)、動物試驗結果表明不僅提高飼料轉化率而節(jié)約成本，更快增加肉用動物體重而提高產量，而且可以在不用藥或少用藥的前提下因增強動物的免疫調節(jié)能力提高其成活率而降低成本，只需很少的添加量就能達到很好的增重效果，如0. 2%的添加量可比對照增重10% 25% (具體使用案例如表I和表2所示)；新型蟲草飼料添加劑具有顯著的抗病、促生長作用，而且具有毒副作用小、無藥物殘留、無耐藥性等優(yōu)點，是新一代廣譜、高效綠色飼料添加劑；(3)、生產蟲草飼料飼料添加劑還具有原料來源廣、易生產、成本低廉、質量可控、使用方便、應用廣泛和實際效果好等特點；(4)、生產過程中固體培養(yǎng)的菌絲及其分泌到剩余培養(yǎng)基質中的活性成分一起經后期熟化后被用作添加劑原料，從而最大限度地利用了資源，追求更大的經濟和社會效益，而無污染；(5)產品有效性先進，產品不僅能顯著的提高動物的免疫和生產性能，而且可顯著的提高畜禽產品的品質、改善其營養(yǎng)結構和風味。表I蟲草飼料添加劑對青腳麻雞生產性能的影響
權利要求
1.一種蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是制備方法包括菌種擴培、菌種發(fā)酵、后期熟化；所述菌種為蝙蝠蛾擬青霉菌種(Paecilomyces hepiali Chen et Dai),菌種擴培包括原種擴大培養(yǎng)、斜面試管菌種培養(yǎng)和液體搖瓶種子培養(yǎng)三步；所述菌種的發(fā)酵包括液體種子罐發(fā)酵、液體發(fā)酵罐發(fā)酵和固體發(fā)酵罐發(fā)酵；所述后期熟化為將固體發(fā)酵罐發(fā)酵后的物料，置入網盤，放入25°C無菌車間，進行后期熟化；具體制備方法按如下步驟進行 (1)原種擴大培養(yǎng)將分離純化的菌種接入小麥粒培養(yǎng)基，放入22°C培養(yǎng)箱，培養(yǎng)時間為15天，待菌絲長滿三角瓶并開始產孢即可；斜面試管菌種培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的原菌種接種于斜面試管，放入22°C培養(yǎng)箱,培養(yǎng)7d,待菌絲長滿試管即可；液體搖瓶種子培養(yǎng)，在IOOOml三角瓶中裝入400ml培養(yǎng)基，121 °C濕熱滅菌30min，待冷卻至室溫，將培養(yǎng)好的斜面菌種接入三角瓶中培養(yǎng)基內，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱，溫度22土 TC, 180r/m條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為96h 120h ； (2)液體菌種發(fā)酵和固體發(fā)酵液體種子罐發(fā)酵,在100L機械攪拌發(fā)酵罐中裝入50L液體培養(yǎng)基，PH值為6. 0 7. 2，通入濕熱蒸汽，使罐內培養(yǎng)基溫度維持在121°C 123°C進行滅菌，滅菌時間為30min。滅菌后冷卻至22°C，將4瓶培養(yǎng)好的液體搖瓶種子接入培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度22 ± I °C，攪拌機轉速為30r/m 50r/m，通無菌空氣量為1:0. 6V/V. min,罐壓0.03mpa 0. 05mpa,培養(yǎng)72h，達到生長指數期；液體發(fā)酵罐生產，在2000L發(fā)酵罐中裝入1000L液體培養(yǎng)基，pH值為6. 0 7. 2，通入濕熱蒸汽，使罐內培養(yǎng)基溫度維持在121°C 123°C進行滅菌，滅菌時間為30min，滅菌后冷卻至22°C，將種子罐的50L液體種子全部接入液體發(fā)酵罐培養(yǎng)，培養(yǎng)時間培養(yǎng)溫度22± 1°C，攪拌機轉速為30r/m 50r/m，通無菌空氣量為1:0. 6V/V. min,罐壓0. 03mpa 0. 05mpa,培養(yǎng)48h，達到生長指數期；固體發(fā)酵，將固體物料置入固體發(fā)酵罐，加入適量水，其重量為物料水=9:1，攪拌均勻后，通入濕熱蒸汽滅菌，攪拌機轉速為6r/m 15r/m，使罐內培養(yǎng)基溫度維持在121°C 123°C進行滅菌，滅菌時間為lh，滅菌后冷卻至22°C，將液體發(fā)酵罐的液體種子接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，接種量為每kg干物料接入IOOml液體種子，培養(yǎng)溫度22土 TC，通無菌空氣量為1:0. 8V/V. min,罐壓0. 03mpa 0. 06mpa,每隔12h攪拌一次,攪拌機轉速為3r/m 5r/m,每次攪拌5min，培養(yǎng) 72h ； (3)后期熟化將固體發(fā)酵罐發(fā)酵72h的固體物料放于潔凈的網盤內，放置于24°C無菌通風室內進行后期熟化，料層厚度為5cm，熟化72h后即可進行烘干粉碎，過100目篩后既得成品。
2.根據權利要求I所述的蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是所述的斜面培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料馬鈴薯100g，麩皮20g、葡萄糖10g、酵母浸出粉5g、蛋白胨5g，瓊脂粉20g，加水至1L，pH為6. 0 7. 2。
3.根據權利要求I所述的蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是所述的液體搖瓶培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉15g、花生餅粉10g、白砂糖20g、葡萄糖10g、酵母浸出粉5g、加水至1L，pH為6. 0 7. 2。
4.根據權利要求I所述的蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是所述的液體種子罐培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉15g、花生餅粉10g、白砂糖3(^、、酵母粉58、，MgSO4 0. 5g、KH2PO4 0. 5g、各組分混勻后補水至1L、pH為6. 0 7. 2。
5.根據權利要求I所述的蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是所述的液體發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉15g、花生餅粉10g、白砂糖30g、、酵母粉5g、MgSO4 0. 5g、KH2PO4 0. 5g、各組分混勻后補水至1L，并用飽和NaOH溶液調pH值為6. 8。
6.根據權利要求I所述的蟲草飼料添加劑的制備方法，其特征是所述的固體發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方包括如下重量比的原料豆柏粉250g、谷糠粉50g、麩皮50g、玉米粉650g、MgS04·0.5g、KH2PO4 0. 5g、pH 為 6. 0 7. 2。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種飼料添加劑的制備方法，具體地說是涉及一種蟲草飼料添加劑的制備方法。該方法采用冬蟲夏草無性型菌株-蝙蝠蛾擬青霉進行斜面培養(yǎng)、液體發(fā)酵、固體發(fā)酵和后期熟化工藝生產的蟲草飼料添加劑，它不同于微生物活菌制劑，也不同于常規(guī)的蟲草類產品，它克服了以往產品的缺點，最大限度的保留了蟲草的功效成分，另外，產品生產原料中的谷糠粉，經特定高溫滅菌過程中的降解工藝后，通過微生物轉化成雙歧因子，能更好的促進動物生長、提高飼料的轉化率而降低成本，而且可以在不用藥或少用藥的前提下因提高動物免疫力和抗病性，提高成活率而降低成本。
文檔編號C05G3/00GK102783565SQ20121028337
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月10日 優(yōu)先權日2012年8月10日
發(fā)明者邵穎, 陳安徽, 陳宏偉, 馬玉春 申請人:徐州瀚韻生物科技有限公司