專利名稱：楓香無性系組培繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組培繁育方法，具體涉及楓香無性系組培繁育方法，屬于林木組培繁育技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
Wk香iLiquidambar formosana Hance)是金縷梅科楓香樹屬的樹種。落葉大喬木，高達(dá)40m，最大胸徑達(dá)Im以上。樹干通直；多分枝，樹冠圓錐形。原產(chǎn)我國，以長江流域以南為中心,東至臺(tái)灣、西至云南、南達(dá)海南、北到河南。在海南以五指山為最常見。楓香樹在我國南方低山、丘陵地區(qū)營造風(fēng)景林很合適，在濕潤肥沃土壤中大樹參天十分壯麗。亦可在園林中栽作庭蔭樹，秋季日夜溫差變大后葉變紅、紫、橙紅等，增添園中秋色?？捎诓莸毓轮病仓?，或于山坡、池畔與其他樹木混植。倘與常綠樹叢配合種植，秋季紅綠相襯，會(huì)顯得格外 美麗。又因楓香具有較強(qiáng)的耐火性和對(duì)有毒氣體的抗性，可用于廠礦區(qū)綠化。園林中為良好庇蔭樹種，尤其南方的秋景主要為楓香樹的紅葉，也有充作行道樹的
隨著人們環(huán)保意識(shí)和商品林建設(shè)能力的提高，大規(guī)模造林綠化廣泛開展，近些年來?xiàng)飨闳斯ち珠_始大量發(fā)展，楓香良種苗木用量逐年遞增，苗木市場(chǎng)前景廣闊。以往楓香苗木培育技術(shù)主要有二種，一是種子培育，即在種子成熟期，從楓香上采摘果實(shí)，把果實(shí)經(jīng)地過去皮處理，得到種子，然后通過對(duì)種子適當(dāng)?shù)奶幚磉M(jìn)步播種催芽培育苗木；其二是扦插繁育，即從楓香上采摘半木質(zhì)化的穗條，用激素處理穗條后，把穗條插入適當(dāng)?shù)幕|(zhì)中培育苗木。楓香苗木的培育主要依靠種子繁育實(shí)生苗。但種子繁育苗木存在如下缺點(diǎn)，一是種子育苗季節(jié)性強(qiáng)，一年一茬，種子長期保存困難，I年之后發(fā)芽率大幅下降；二是經(jīng)科學(xué)選育的良種一般種子都很少，難以滿足生產(chǎn)應(yīng)用的需求，而營建種子園投資大，周期長 ’三是種子培育苗木不能培育無性系，生產(chǎn)上林份分化大，林相參差不齊，對(duì)經(jīng)過選擇表現(xiàn)優(yōu)良的單株，無法實(shí)現(xiàn)規(guī)模利用。楓香扦插繁育的缺點(diǎn)是，一是老樹穗條成活率低，因此需要營建扦插用的采穗圃，經(jīng)過修剪矮化，培育合適的冠形，多產(chǎn)穗條。采穗圃需要精細(xì)化管理，必須投入大量的人工，在勞動(dòng)力成本日漸高漲的今日，采穗圃管理成本難以承受；二是采穗母株容易老化，使用周期不長，3-5年后即要淘汰；三是扦插成活率受天氣、管理、基質(zhì)、生根素等諸多因素的影響，往往成活率難以保證；四是苗木價(jià)格偏高，市場(chǎng)難以接受。隨著組培技術(shù)的發(fā)展，研究人員都試圖用組培技術(shù)對(duì)楓香進(jìn)行繁育研究，研究人員以常規(guī)組培技術(shù)作參照，發(fā)現(xiàn)楓香在組織培養(yǎng)中存在以下幾方面的問題一是組培芽增殖時(shí)，褐化現(xiàn)象嚴(yán)重，芽尖壞死，甚至枯褐而死；二楓香組培苗移栽成活率低，苗期培育周期長，所以研究開發(fā)新的組培技術(shù)對(duì)楓香的繁育有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有種子繁育和扦插繁育技術(shù)的不足，提供一種楓香無性系組培繁育方法，該方法克服了楓香種子繁育受季節(jié)影響、種子發(fā)芽率低，繁殖速率慢的缺點(diǎn)，同時(shí)克服了扦插苗繁育的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了楓香良種大規(guī)模繁育。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下
楓香無性系組培繁育方法，包括如下步驟
外植體一芽有誘導(dǎo)一芽的增殖一生根誘導(dǎo)一生根苗的煉苗一組培苗的移栽，具體方法如下
(1)外植體材料的消毒取當(dāng)年生嫩梢去掉葉片，切段，使每段為帶有廣2個(gè)腋芽的莖段，莖段先用O. 2%滅菌凈在超聲波清洗儀中處理20 30min，無菌水清洗6次，再用O. 1%升汞，2 5滴吐溫80，處理3 5min，無菌水清洗6次后備用；消毒成功率在60%以上(見表I)。表I外植體材料的消毒試驗(yàn) __
試驗(yàn)序號(hào)I接種芽數(shù)I無菌活體數(shù)I成功率(％)
1120 —7663.33
295 —5760.0
3丨63丨44丨69· 84
(2)芽的誘導(dǎo)把步驟(I)經(jīng)消毒的莖段，接種到芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)過6 15d的培養(yǎng)，在腋芽處開始萌動(dòng)，并長出新芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為DCRft+6-BA O. 5mg+NAA O. 05 O. 5 mg ;芽的誘導(dǎo)率最高達(dá)70% (見表2)。表2芽的誘導(dǎo)率的消毒試驗(yàn)
試驗(yàn)序號(hào)I無菌活體數(shù)I萌芽數(shù)I誘導(dǎo)率(％)—
1_76_53_69. 74_
25738 66.67
3丨44|31 丨70· 45
(3)芽的增殖將步驟(2)長出的新芽培養(yǎng)30d后，切割下來，接到繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)6 15d，形成叢生芽，所述的增殖培養(yǎng)基為DCRft+ 6-BA O. I O. 8 mg + KT O. I O. 8 mg +IBA O. 5 O. 3 mg +IAA O. 05 O. 3 mg ;芽的增殖系數(shù)最聞達(dá)5. 2 (見表3) ο表3不同激素不同水平組合正交L9 (34)試驗(yàn)芽增殖結(jié)果分析
權(quán)利要求
1.楓香無性系組培繁育方法，其特征在于包括如下步驟(I)外植體材料的消毒取當(dāng)年生嫩梢去掉葉片，切段，使每段為帶有廣2個(gè)腋芽的莖段，莖段先用O. 2%滅菌凈在超聲波清洗儀中處理20 30min，無菌水清洗6次，再用O. 1%升汞，2 5滴吐溫80，處理3 5min，無菌水清洗6次后備用；(2)芽的誘導(dǎo)把步驟(I)經(jīng)消毒的莖段，接種到芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，經(jīng)過6 15d的培養(yǎng)，在腋芽處開始萌動(dòng)，并長出新芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為DCRft+ 6-BA O. 5mg+NAA O. 05 O. 5 mg ; (3)芽的增殖將步驟(2)長出的新芽培養(yǎng)30d后，切割下來，接到繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)6 15d，形成叢生芽，所述的增殖培養(yǎng)基為DCR改+ 6-BA O. I O. 8 mg + KT O. I O. 8mg +IBA O. 5 O. 3 mg +IAA O. 05 O. 3 mg ；(4)生根誘導(dǎo)步驟(3)的叢生芽的單芽長到I. 5 2cm左右長時(shí)，選取葉片展開的單芽，分割下來接到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 10d，莖基部誘導(dǎo)出根，所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS改+IBA I. 5 2. 5mg +IAA I. 5 2. 5 mg + + 6-BA O O. 5mg + NAA O. 05 O. 5mg ；(5)生根苗的煉苗經(jīng)過生根誘導(dǎo)，當(dāng)苗誘導(dǎo)生根后，將瓶苗置于有70%遮蔭的大棚中煉苗30 40d后，苗高3cm以上，可進(jìn)行移栽；(6)組培苗的移栽與管理將步驟(5)進(jìn)行煉苗的楓香苗移栽，移栽分二步，第一步采用穴盤容器育苗，將生根苗移栽到消毒的基質(zhì)上，移栽25d后，施葉面肥2次，2次需相隔I周，以后每周噴O. 2%復(fù)合肥一次；第二步采用營養(yǎng)袋育苗；在第一步進(jìn)行的35 50d后，楓香組培苗長至苗高4 6cm以上時(shí)，將小苗移栽到以黃心土為基質(zhì)，并用O. 1%高錳酸鉀溶液消毒的營養(yǎng)袋上；各步驟移植時(shí)，把根放進(jìn)預(yù)先打好的小孔中，使根系舒展，充分壓實(shí)，使根土密接，要防止栽植過深、窩根或露根，移栽后澆透水；栽植后用塑料薄膜作小拱狀蓋好小苗保濕，遮蔭60-80% ;為防止病害，移苗后當(dāng)天噴防病藥劑800 - 1000倍菌毒清液或多菌靈一次，以后每周噴藥劑一次，3d后逐漸打開的塑料薄膜，15天后全部打開，待小苗長出新葉時(shí)方可開始薄施肥，I個(gè)月后，可進(jìn)行正常的水肥管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的楓香無性系組培繁育方法，其特征在于步驟(6)第一步所述基質(zhì)為珍珠巖和泥炭土按1:3配比混合而成的基質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的楓香無性系組培繁育方法，其特征在于步驟(6)第一步所述的消毒是采用O. 1%高錳酸鉀溶液消毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的楓香無性系組培繁育方法，其特征在于所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基均添加蔗糖40g/L，生根階段的培養(yǎng)基添加蔗糖20g/L，全部培養(yǎng)基均添加卡拉膠O. 6 O. 7%，pH值為5. 8。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的楓香無性系組培繁育方法，其特征在于培養(yǎng)室的培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件25 30°C，每天光照12 16h，光照度為1500 30001x。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的楓香無性系組培繁育方法，其特征在于所述的DCRft培養(yǎng)基的組成及其含量為NH4NO3 600 mg/L, KNO3 510 mg/L、KH2PO4 285 mg/L、CaCl2·2Η20 787mg/L、MgSO4·7Η20 555 mg/L、FeSO4*7Η20 27. 8 mg/L、Na2-EDTA 37. 3 mg/L、MnSO4·4Η2022. 3 mg/L、ZnSO4* 7H20 8. 6 mg/L、H3BO4 6. 2 mg/L、KI 0. 83 mg/L > Na2MoO4*2H20 0. 25mg/L、CuSO4.5H20 0. 025 mg/L、CoC12.6H20 0. 025 mg/L、肌醇 200 mg/L、甘氨酸 2mg/L ^VB1 0. I mg/L > VB6 0. 5 mg/L、VC 2 mg/L > VB3 0. 5 mg/L、L_ 半胱氨酸 5mg/L、PVPK30 500 mg/L、糖 40000 mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的楓香無性系組培繁育方法，其特征在于所述的MS 培養(yǎng)基的組成及其含量為NH4N03 1650 mg/L、KNO3 1900mg/L、KH2PO4 179 mg/L、CaCl2·2Η20440mg/L、MgS04.7H20 370 mg/L、FeSO4.7H20 27. 8 mg/L、Na2-EDTA 37. 3 mg/L、MnSO4·4Η20 22. 3 mg/L、ZnSO4.7H20 8.6 mg/L、H3BO4 6.2 mg/L、KI 0. 83 mg/L、Na2MoO4·2Η20 0. 25 mg/L、CuS04.5H20 0. 025 mg/L、CoC12.6H20 0. 025 mg/L、肌醇 100mg/L、甘氛酸 2 mg/L、VB1 0. I mg/L、VB6 0. 5 mg/L、VC 2 mg/L、VB3 0. 5 mg/L、L-半胱氨酸 5mg/L、PVPK30 100 mg/L、糖 20000 mg/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種楓香無性系組培繁育方法，屬于林木組培繁育技術(shù)領(lǐng)域，該方法步驟為外植體材料的消毒→芽的誘導(dǎo)→芽的增殖→生根誘導(dǎo)→生根苗的煉苗→組培苗的移栽與管理，具體方法是將當(dāng)年生的嫩梢去掉葉片，切段成為每段帶有1～2個(gè)腋芽的莖段，將莖段消毒，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，新芽再進(jìn)行增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、培育出的生根苗進(jìn)行煉苗馴化，最后將經(jīng)馴化的苗移栽到消毒的基質(zhì)上，進(jìn)行移栽苗的管理；采用該方法育苗不受季節(jié)限制，生產(chǎn)成本低，節(jié)約土地資源，同時(shí)采用該方法能有效防止褐化現(xiàn)象，有效增殖率高，生根苗生長整齊，培養(yǎng)周期短，組培苗移栽成活率高，苗期培育周期短，可以推動(dòng)楓香無性系育種，對(duì)解決良種規(guī)模擴(kuò)繁和推廣起到重要作用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102823497SQ201210346938
公開日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月19日
發(fā)明者曾令海 申請(qǐng)人:廣東省林業(yè)科學(xué)研究院