專利名稱：蝴蝶蘭植物組織培養(yǎng)基配制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。
背景技術(shù)：
蝴蝶蘭是蘭科植物中栽培最為廣泛、普及的種類之一。由于花大，花期長，花色鮮艷，色澤多樣，花型優(yōu)美，深受人們的喜愛，市場需求量大，但是蝴蝶蘭傳統(tǒng)分株繁殖系數(shù)極低，雜交育種繁殖速度慢，雜交種子在自然條件下不易萌發(fā)，很難滿足市場需求。許多學(xué)者對蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)做了大量研究，但是蝴蝶蘭雜交品種多，缺少適應(yīng)性廣、滿足多個品種工廠化生產(chǎn)的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種蝴蝶蘭植物組織培養(yǎng)基配制方法，以解決蝴蝶蘭分株繁殖系數(shù)極低，雜交育種繁殖速度慢，雜交種子在自然條件下不易萌發(fā)，的問題，缺少適應(yīng)性廣、滿足多個品種工廠化生產(chǎn)的培養(yǎng)基等問題。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是采用組織培養(yǎng)技術(shù)，蝴蝶蘭的植物組織培養(yǎng)基配方，由種子萌發(fā)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基組成，4種培養(yǎng)基分別配制、配套應(yīng)用。種子萌發(fā)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭。分化培養(yǎng)基以1/3MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁，壯苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭，生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭，從而滿足蝴蝶蘭生長需要。種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤4. 5-5. 5毫克/升、I-萘乙酸O. 1-0. 3毫克/升、活性炭500-1500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；分化培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基1/3MS、6-芐氨基嘌呤2. 5-3. 5毫克/升、I-萘乙酸O. 18-0. 22毫克/升、活性炭800-1200毫克/升、香蕉汁80000-120000毫克/升、蔗糖25000-35000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；壯苗培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤I. 2-1. 7毫克/升、吲哚-3- 丁酸I. 2-1. 7毫克/升、花寶I號200-800毫克/升、花寶2號800-1200毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；生根培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、1-萘乙酸O. 2-0. 8毫克/升、香蕉汁50000-150000毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；其制備工藝如下
I、種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調(diào)整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。2、分化培養(yǎng)基配方的制備按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. 0333升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調(diào)整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。3、壯苗培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調(diào)整pH值為5.8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. I-ο. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。4、生根培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液 與I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調(diào)整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。采用本發(fā)明的積極效果是種子萌發(fā)培養(yǎng)基種子播種后萌發(fā)時間比較短，40天體內(nèi)全部萌發(fā)并形成類原球莖，這個分化培養(yǎng)基配方使培養(yǎng)周期只有40天左右，分化倍數(shù)在
5-15之間，理論上一個芽一年可以繁殖上百萬株苗；壯苗培養(yǎng)基使蝴蝶蘭組培苗生長速度加快生根，生產(chǎn)出的苗子整齊度高；生根培養(yǎng)基配方生根率高，當(dāng)接種40天后。生根率在95%以上，且每棵苗生根條數(shù)在3-10之間。
具體實施例方式以制備I升分化培養(yǎng)基，I升生根培養(yǎng)基為例，其原料配方配比為種子萌發(fā)培養(yǎng)基種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方10倍MS母液O. I升、6-芐氨基嘌呤5毫克、I-萘乙酸O. 2毫克、活性炭1000毫克、蔗糖20000毫克、瓊脂粉5000毫克；分化培養(yǎng)基配方10倍MS母液O. 0333升、6-芐氨基嘌呤3毫克、I-萘乙酸O. 2毫克、活性炭1000毫克、香蕉汁100000毫克、蔗糖30000毫克、瓊脂粉5000毫克；壯苗培養(yǎng)基配方10倍MS母液O. I升、6-芐氨基嘌呤I. 5毫克、吲哚-3- 丁酸I. 5毫克、花寶I號500毫克、花寶2號1000毫克、活性炭2000毫克、蔗糖200000毫克、瓊脂粉5000毫克/升；生根培養(yǎng)基配方10倍MS母液O. I升、I-萘乙酸
O.5毫克、香蕉汁100000毫克、活性炭2000毫克、蔗糖20000毫克、瓊脂粉5000毫克；其制備流程如下
I、種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液與
6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升；調(diào)整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。2、分化培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取O. 0333升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升；調(diào)整pH值為5.8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。3、壯苗培養(yǎng)培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取I. O升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、吲哚-3- 丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升；調(diào)整PH值為5.8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. I-ο. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。4生根培養(yǎng)基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取I. O升10倍MS母液與I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升； 調(diào)整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。
權(quán)利要求
1.一種蝴蝶蘭植物組織培養(yǎng)基配制方法，其特征是采用組織培養(yǎng)技術(shù)，通過調(diào)整激素配比使其適應(yīng)蝴蝶蘭的生長發(fā)育，蝴蝶蘭的植物組織培養(yǎng)基配方由種子萌發(fā)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基組成，4種培養(yǎng)基分別配制、配套應(yīng)用；種子萌發(fā)培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭；分化培養(yǎng)基以1/3MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁，壯苗培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭，生根培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)添加了 I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭，從而滿足蝴蝶蘭生長需要；種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤4. 5-5. 5毫克/升、I-萘乙酸0. 1-0. 3毫克/升、活性炭500-1500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；分化培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基1/3MS、6-芐氨基嘌呤2. 5-3. 5毫克/升、I-萘乙酸0. 18-0. 22毫克/升、活性炭800-1200毫克/升、香蕉汁80000-120000毫克/升、蔗糖25000-35000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；壯苗培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤I. 2-1. 7毫克/升、噴B朵-3- 丁酸I. 2-1. 7毫克/升、花寶I號200-800毫克/升、花寶2號800-1200毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；生根培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、1-萘乙酸0. 2-0. 8毫克/升、香蕉汁50000-150000毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；其制備工藝如下 (1)種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. 0升； E調(diào)整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養(yǎng)； (2)分化培養(yǎng)基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. 0333升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. 0升； E調(diào)整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養(yǎng)； (3)壯苗培養(yǎng)基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. O升； E調(diào)整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養(yǎng)； (4)生根培養(yǎng)基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. I升10倍MS母液與I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. 0升； E調(diào)整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養(yǎng)。
全文摘要
一種蝴蝶蘭植物組織培養(yǎng)基配制方法，涉及一種植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。該配制方法采用組織培養(yǎng)技術(shù)，其培養(yǎng)基配方由種子萌發(fā)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基組成，4種培養(yǎng)基分別配制、配套應(yīng)用。種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸、活性炭、蔗糖、瓊脂粉；分化培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基1/3MS、6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸、活性炭、香蕉汁、蔗糖、瓊脂粉；壯苗培養(yǎng)基配方:基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶1號、花寶2號、活性炭、蔗糖、瓊脂粉；生根培養(yǎng)基配方基本培養(yǎng)基MS、1-萘乙酸、香蕉汁、活性炭、蔗糖、瓊脂粉；按上述組分配方分別制備、獲得所需培養(yǎng)基產(chǎn)品，實現(xiàn)了蝴蝶蘭植物組織培養(yǎng)和高倍繁育。
文檔編號A01H4/00GK102845311SQ20121038380
公開日2013年1月2日 申請日期2012年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月11日
發(fā)明者張友秋, 趙學(xué)燕, 王雙雙, 王道帥 申請人:山東鑫秋種業(yè)科技有限公司