專利名稱：用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測(cè)定方法，具體的說是一種用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法。
背景技術(shù)：
牧草被草食動(dòng)物采食或人為剪割后，常常表現(xiàn)出“再生性”，這是牧草維持自身生存，抵御草食動(dòng)物傷害的最基本的生物學(xué)特性之一，其對(duì)維持草場(chǎng)生產(chǎn)、提高產(chǎn)草量也都有重要的意義，牧草去葉后所留的不同茬高，會(huì)對(duì)牧草的再生產(chǎn)生重要的影響。不同的茬高會(huì)造成的地上部分貯存的有機(jī)物質(zhì)的不同，從而會(huì)對(duì)牧草的再生產(chǎn)生不同的影響。因?yàn)槟敛菰匍L(zhǎng)的本質(zhì)問題是一個(gè)利用能量和物質(zhì)來制造新生有機(jī)物質(zhì)的過 程，然而，牧草去葉不但會(huì)嚴(yán)重抑制其光合作用，減少光合產(chǎn)物的供應(yīng)，甚至在去葉嚴(yán)重的情況下，會(huì)導(dǎo)致光合作用完全中斷，所以，由于去葉后所留茬高差別所造成的體內(nèi)貯存的有機(jī)產(chǎn)物量的差別，有可能會(huì)對(duì)其再生產(chǎn)生非常重要的影響。有效排除由茬高所引起的體內(nèi)貯存的有機(jī)產(chǎn)物量的差別對(duì)再生的影響，才能從本質(zhì)上反映不同茬高黑麥草的再生能力的強(qiáng)弱，但如何有效地檢測(cè)到，這種排除茬高所造成的體內(nèi)貯存的有機(jī)產(chǎn)物量的差別對(duì)再生的影響后，不同茬高多花黑麥草再生能力的強(qiáng)弱，至今未見報(bào)道。尋找一種有效的方法，來檢測(cè)不同茬高多花黑麥草，由非茬高因素所誘導(dǎo)的再生能力的強(qiáng)弱，對(duì)研究牧草的再生具有重要的意義，然而至今還未見關(guān)于這方面具體測(cè)量方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)上述問題的不足，提供用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法。本發(fā)明為解決上述問題所采用的技術(shù)方案是
一種用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法，包括以下步驟
步驟一選取生長(zhǎng)一致的2周齡多花黑麥草108株，以每盆6株植入18個(gè)相同的花盆內(nèi)，花盆內(nèi)裝有混合基質(zhì)，按重量份數(shù)比混合基質(zhì)由3份蛭石和I份草炭土組成，在平均溫度為25°C，每天平均光照為8小時(shí)條件下，培養(yǎng)70天后，將這18盆多花黑麥草隨機(jī)分為2組，每組9盆，即試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b，再把試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分別隨機(jī)分為al、a2、a3亞組和bl、b2、b3亞組，每亞組3盆；剪去試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b中的多花黑麥草葉片，a組和b組分別留不同茬高；
直接取試驗(yàn)亞組al和bl，或者將試驗(yàn)組a和b中已剪去葉的多花黑麥草繼續(xù)培養(yǎng)并剪葉后取試驗(yàn)亞組al和bl，培養(yǎng)和剪葉方法為日均溫度20°C條件下培養(yǎng)，每隔6天剪掉葉片一次，連續(xù)剪葉N次，a組和b組每次剪過之后分別與之前留相同茬高；
將剪葉后的試驗(yàn)亞組al和bl的根與茬分離，得到多花黑麥草茬，將多花黑麥草茬放入75 V的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草茬烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草茬烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組al和試驗(yàn)亞組bl的茬生物量Ra和Rb，備用；
步驟二 將試驗(yàn)亞組a2、a3和b2、b3中多花黑麥草在溫度為20_25°C條件下培養(yǎng)，6天后，在步驟一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麥草葉片，得到多花黑麥草新生葉，將試驗(yàn)亞組a2和b2中的多花黑麥草新生葉送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草新生葉烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草新生葉烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組a2和b2新生葉生物量La和Lb，備用；
步驟三利用測(cè)得的多花黑麥草茬生物量Ra、Rb，新生葉生物量La、Lb，根據(jù)公式RIa =
JaTL·
—X 100%和RIb = -- X 100%計(jì)算多花黑麥草再生能力指數(shù)RIa和RIb的大小，備用；hixRh
步驟四用酶聯(lián)免疫法測(cè)量步驟二中的試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉片的玉米素核苷含量， 得到試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉玉米素核苷含量Za和Zb，備用；
步驟五比較RIa和RIb的大小或Za和Zb的大小，值較大者就說明該組黑麥草的再生能力較強(qiáng)。如果當(dāng)RIa大于RIb時(shí)，Za大于Zb ;當(dāng)RIa小于RIb時(shí)，Za小于Zb，則說明用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法為有效方法。本發(fā)明的有益效果為
a、本發(fā)明能有效測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的強(qiáng)弱，對(duì)研究牧草的再生具有重要的意義；
b、本發(fā)明的測(cè)量方法簡(jiǎn)單，易于操作，便于廣泛應(yīng)用，并且實(shí)用性強(qiáng)；
C、本發(fā)明所需儀器簡(jiǎn)單，成本低廉，提高了經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。一種用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法，包括以下步驟 步驟一選取生長(zhǎng)一致的2周齡多花黑麥草108株，以每盆6株植入18個(gè)相同的花盆
內(nèi)，花盆內(nèi)裝有混合基質(zhì)，按重量份數(shù)比混合基質(zhì)由3份蛭石和I份草炭土組成，在平均溫度為25°C，每天平均光照為8小時(shí)條件下，培養(yǎng)70天后，將這18盆多花黑麥草隨機(jī)分為2組，每組9盆，即試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b，再把試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分別隨機(jī)分為al、a2、a3亞組和bl、b2、b3亞組，每亞組3盆；剪去試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b中的多花黑麥草葉片，a組和b組分別留不同茬高；
直接取試驗(yàn)亞組al和bl，或者將試驗(yàn)組a和b中已剪去葉的多花黑麥草繼續(xù)培養(yǎng)并剪葉后取試驗(yàn)亞組al和bl，培養(yǎng)和剪葉方法為日均溫度20°C條件下培養(yǎng)，每隔6天剪掉葉片一次，連續(xù)剪葉N次，a組和b組每次剪過之后分別與之前留相同茬高；
將剪葉后的試驗(yàn)亞組al和bl的根與茬分離，得到多花黑麥草茬，將多花黑麥草茬放入750C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草茬烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草茬烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組al和試驗(yàn)亞組bl的茬生物量Ra和Rb，備用；
步驟二 將試驗(yàn)亞組a2、a3和b2、b3中多花黑麥草在溫度為20_25°C條件下培養(yǎng)，6天后，在步驟一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麥草葉片，得到多花黑麥草新生葉，將試驗(yàn)亞組a2和b2中的多花黑麥草新生葉送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草新生葉烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草新生葉烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組a2和b2新生葉生物量La和Lb，備用；
步驟三利用測(cè)得的多花黑麥草茬生物量Ra、Rb，新生葉生物量La、Lb，根據(jù)公式RIa =
ΓT Jk
X 100%和RIb = -- X 100%計(jì)算多花黑麥草再生能力指數(shù)RIa和RIb的大小，備用；EaRb
步驟四用酶聯(lián)免疫法測(cè)量步驟二中的試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉片的玉米素核苷含量，
得到試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉玉米素核苷含量Za和Zb，備用；
步驟五比較RIa和RIb的大小或Za和Zb的大小，值較大者就說明該組黑麥草的再生
能力較強(qiáng)。如果當(dāng)RIa大于RIb時(shí)，Za大于Zb ;當(dāng)RIa小于RIb時(shí)，Za小于Zb，則說明用
玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法為有效方法。實(shí)施例I
一種用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法，包括以下步驟
步驟一選取生長(zhǎng)一致的2周齡多花黑麥草108株，以每盆6株植入18個(gè)相同的花盆內(nèi)，花盆內(nèi)裝有混合基質(zhì)，按重量份數(shù)比混合基質(zhì)由3份蛭石和I份草炭土組成，在平均溫度為25°C，每天平均光照為8小時(shí)條件下，培養(yǎng)70天后，將這18盆多花黑麥草隨機(jī)分為2組，每組9盆，即試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b，再把試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分為隨機(jī)分為al、a2、a3亞組，和bl、b2、b3亞組，每亞組3盆；剪去試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b中的多花黑麥草葉片，試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分別留Icm和5cm的茬高，記為剪葉第I次，在第I次剪葉后立即取試驗(yàn)亞組al和bl，將根與茬分離，得到多花黑麥草茬。將多花黑麥草茬送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草茬烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草茬烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組al和試驗(yàn)亞組bl的茬生物量Ra和Rb，備用；
步驟二 將試驗(yàn)亞組a2、a3和b2、b3中多花黑麥草在溫度為25°C條件下培養(yǎng)，6天后，在步驟一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麥草葉片，得到多花黑麥草新生葉，將試驗(yàn)亞組a2和b2中的多花黑麥草新生葉送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草新生葉烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草新生葉烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組a2和b2新生葉生物量La和Lb，備用；
步驟三利用測(cè)得的多花黑麥草茬生物量Ra、Rb，新生葉生物量La、Lb，根據(jù)公式RIa =
TI Si
—X 100%和RIb = — X 100%計(jì)算多花黑麥草再生能力指數(shù)RIa和RIb的大小，備用；EaEb
步驟四用酶聯(lián)免疫法測(cè)量步驟二中的試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉片的玉米素核苷含量，得到試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉玉米素核苷含量Za和Zb，備用；
步驟五比較RIa和RIb的大小，Za和Zb的大小。值較大者就說明該組黑麥草的再生能力較強(qiáng)。如果當(dāng)RIa大于RIb時(shí)，Za大于Zb ;而當(dāng)RIa小于RIb時(shí)，Za小于Zb，則說明可用再生葉中玉米素核苷含量的高低來間接反映黑麥草再生能力的強(qiáng)弱；
結(jié)果表明RIa % 81. 30%, RIb 為 70. 19%, Za 為 234. 51ng/g, Zb 為 150. 21 ng/g ；RIa 比RIb高15. 82%，說明在I次去葉的情況下，留有茬高為Icm的多花黑麥草比留茬高為5cm的多花黑麥草具有更強(qiáng)的再生能力；Za比Zb高56. 1%，證明在I次去葉的情況下，用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法為有效方法。實(shí)施例2
用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法，包括以下步驟步驟一選取生長(zhǎng)一致的2周齡多花黑麥草108株，以每盆6株植入18個(gè)相同的花盆內(nèi)，花盆內(nèi)裝有混合基質(zhì)，按重量份數(shù)比混合基質(zhì)由3份蛭石和I份草炭土組成，在平均溫度為25°C，每天平均光照為8小時(shí)條件下，培養(yǎng)70天后，將這18盆多花黑麥草隨機(jī)分為2組，每組9盆，即試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b，再把試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分為隨機(jī)分為al、a2、a3亞組，和bl、b2、b3亞組，每亞組3盆；剪去試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b中的多花黑麥草葉片，試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分別留Icm和5cm的茬高，將試驗(yàn)組a和b中已剪去葉的、且留茬高分別為Icm和5cm的多花黑麥草在日均溫度為20°C條件下培養(yǎng)，每隔6天剪掉葉片一次，連續(xù)剪葉2次，a組和b組所留茬高同樣分別為Icm和5cm，記為剪葉第3次，，在第3次剪葉后立即取試驗(yàn)亞組al和bl，將根與茬分離，得到多花黑麥草茬。將多花黑麥草茬送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草茬烘干物，然后用電子天平測(cè)茬烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組al和試驗(yàn)亞組bl的茬生物量Ra和Rb，備用；
步驟二 將試驗(yàn)亞組a2、a3和b2、b3中多花黑麥草在溫度為25°C條件下培養(yǎng)，6天后，在步驟一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麥草葉片，得到多花黑麥草新生葉，將試驗(yàn)亞組a2和b2中的多花黑麥草新生葉送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草新生葉烘干物，然后用電子天平測(cè)新生葉烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組a2和b2新生葉生物量La和Lb,備用；
步驟三利用測(cè)得的多花黑麥草茬生物量Ra、Rb，新生葉生物量La、Lb，根據(jù)公式RIa =
TJ- 7
~ X 100%和RIb = Ir X 100%計(jì)算多花黑麥草再生能力指數(shù)RIa和RIb的大小，備用；RaBh
步驟四用酶聯(lián)免疫法測(cè)量步驟二中的試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉片的玉米素核苷含量，得到試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉玉米素核苷含量Za和Zb，備用；
步驟五比較RIa和RIb的大小，Za和Zb的大小。值較大者就說明該組黑麥草的再生能力較強(qiáng)。如果當(dāng)RIa大于RIb時(shí)，Za大于Zb ;而當(dāng)RIa小于RIb時(shí)，Za小于Zb，則說明可用再生葉中玉米素核苷含量的高低來間接反映黑麥草再生能力的強(qiáng)弱；
結(jié)果表明，RIa 為 20. 59%, RIb 為 37. 51%, Za 為 83. 96ng/g, Zb 為 33. 90 ng/g ；RIb 比RIa高82. 18%，說明在3次去葉的情況下，留有茬高為5cm的多花黑麥草比留茬高為Icm的多花黑麥草具有更強(qiáng)的再生能力；Za比Zb高147. 7%，證明在3次去葉的情況下，用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法為有效方法。
權(quán)利要求
1.一種用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟一選取生長(zhǎng)一致的2周齡多花黑麥草108株，以每盆6株植入18個(gè)相同的花盆內(nèi)，花盆內(nèi)裝有混合基質(zhì)，按重量份數(shù)比混合基質(zhì)由3份蛭石和I份草炭土組成，在平均溫度為25°C，每天平均光照為8小時(shí)條件下，培養(yǎng)70天后，將這18盆多花黑麥草隨機(jī)分為2組，每組9盆，即試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b，再把試驗(yàn)組a和試驗(yàn)組b分別隨機(jī)分為al、a2、a3亞組和bl、b2、b3亞組，每亞組3盆；剪去試驗(yàn)組 a和試驗(yàn)組b中的多花黑麥草葉片，a組和b組分別留不同茬高； 直接取試驗(yàn)亞組al和bl，或者將試驗(yàn)組a和b中已剪去葉的多花黑麥草繼續(xù)培養(yǎng)并剪葉后取試驗(yàn)亞組al和bl，培養(yǎng)和剪葉方法為日均溫度20°C條件下培養(yǎng)，每隔6天剪掉葉片一次，連續(xù)剪葉N次，a組和b組每次剪過之后分別與之前留相同茬高； 將剪葉后的試驗(yàn)亞組al和bl的根與茬分離，得到多花黑麥草茬，將多花黑麥草茬放入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草茬烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草茬烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組al和試驗(yàn)亞組bl的茬生物量Ra和Rb，備用； 步驟二 將試驗(yàn)亞組a2、a3和b2、b3中多花黑麥草在溫度為20_25°C條件下培養(yǎng)，6天后，在步驟一所留茬高的位置上剪掉新生的多花黑麥草葉片，得到多花黑麥草新生葉，將試驗(yàn)亞組a2和b2中的多花黑麥草新生葉送入75°C的烘干箱內(nèi)，烘干，得到每盆多花黑麥草新生葉烘干物，然后用電子天平測(cè)每盆多花黑麥草新生葉烘干物質(zhì)量，分別得到試驗(yàn)亞組a2和b2新生葉生物量La和Lb，備用； 步驟三利用測(cè)得的多花黑麥草茬生物量Ra、Rb，新生葉生物量La、Lb，根據(jù)公式RIa =TaTL·—X 100%和RIb = -- X 100%計(jì)算多花黑麥草再生能力指數(shù)RIa和RIb的大小，備用；ΑλRh 步驟四用酶聯(lián)免疫法測(cè)量步驟二中的試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉片的玉米素核苷含量，得到試驗(yàn)亞組a3和b3新生葉玉米素核苷含量Za和Zb，備用； 步驟五比較RIa和RIb的大小或Za和Zb的大小，值較大者就說明該組黑麥草的再生能力較強(qiáng)；如果當(dāng)RIa大于RIb時(shí)，Za大于Zb ;當(dāng)RIa小于RIb時(shí)，Za小于Zb，則說明用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法為有效方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用玉米素核苷測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的方法，培植不同茬高多花黑麥草，用酶聯(lián)免疫法測(cè)量新生葉片中玉米素核苷，通過比較新生葉片中玉米素核苷含量，含量大者說明其再生能力更強(qiáng)。本發(fā)明能有效測(cè)定不同茬高多花黑麥草再生能力的強(qiáng)弱，對(duì)研究牧草的再生具有重要的意義；本發(fā)明的測(cè)量方法簡(jiǎn)單，易于操作，便于廣泛應(yīng)用，并且實(shí)用性強(qiáng)。
文檔編號(hào)A01G7/00GK102919066SQ20121046331
公開日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月17日
發(fā)明者王曉凌, 朱亞平, 亓琳, 李雪林, 董普輝 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)