專利名稱：一種用于棉花采摘前促脫葉的生物菌劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物菌劑，特別是涉及一種用于棉花采摘前促脫葉的生物菌劑的制備方法。
背景技術(shù)：
新疆地區(qū)棉花在采摘前，需要噴施大量的脫葉劑，但現(xiàn)有的脫葉劑均為化學(xué)產(chǎn)品，對環(huán)境污染很大，因此新疆農(nóng)六師農(nóng)科所領(lǐng)導(dǎo)與科研人員多年來一直在研究和探索一種生物促脫落的技術(shù)與產(chǎn)品來解決這個難題。本發(fā)明以3 個菌株 ACCC30387 :灰葡萄抱 Botrytis cinerea Pers. ex Fr.、ACCC30384 :葡萄抱Botrytissp.和ACCC31183 :禾谷絲核菌Rhizoctonia cerealis vander
Hoven (這3個菌種均購自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心)的發(fā)酵液為棉花促脫葉的生物菌劑的活性成分，輔以天然載體物質(zhì)(腐植酸鉀)、保護(hù)劑(海藻酸鉀)和PH值調(diào)節(jié)劑(檸檬酸、碳酸氫鈉)配制成專用于棉花采摘前促進(jìn)葉片脫落的生物菌劑。本發(fā)明的生物菌劑，產(chǎn)生的次生物質(zhì)可以促進(jìn)棉花在采摘前葉片脫落，提高機(jī)械化作業(yè)的效率，目的是替代目前施用量巨大的化學(xué)藥劑，而且是進(jìn)口的產(chǎn)品成本很高，重點解決化學(xué)脫葉劑施用后造成的土壤、水源、大氣的等環(huán)境污染問題，以及人畜的生存安全問題，本發(fā)明的生物菌劑為生物制劑，能夠滿足國家對安全環(huán)保的戰(zhàn)略要求，以實現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益、社會效益的高度統(tǒng)一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的生物菌劑是采用如下方法制備的步驟一、制備發(fā)酵液(I)制備菌株ACCC30387的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯酰腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6. 0 ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度28°C，通氣量開始在I : 1.2(v. v.m)，培養(yǎng)24小時后增至I : 1.5(v. v.m)，48小時后降至I : 1&.^111)，發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中40030387:灰葡萄孢的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液；(2)制備菌株ACCC30384的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方蔗糖_30g，MgSO4 WH2O-O. 5g，F(xiàn)eSO4 *4H20-0. Olg，NaN03_3g，KC1-0. 5g，K2HPO4-Ig,黃原膠 _3g，瓊脂_5g，清水補(bǔ)齊至IOOOg ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度28°C，通氣量開始在I : I (v. V. m),培養(yǎng)24小時后增至I : I. 2 (v. V. m), 48小時后繼續(xù)增至I : I. 5 (v. v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC30384 :葡萄孢的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液。(3)制備菌株ACCC31183 :的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯酰腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6. 0 ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度25 0C，通氣量開始在I l(v. V. m)，培養(yǎng)24小時后增至1:1.2 (v. v. m)，48小時后繼續(xù)增至I : I. 5(v. v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC31183 禾谷絲核菌的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液；菌株ACCC30387 為灰葡萄抱 Botrytis cinerea Pers. ex Fr.；菌株ACCC30384 為葡萄抱 Botrytis sp.；菌株ACCC31183 為禾谷絲核菌 Rhizoctonia cerealis vander Hoven ；上述3種菌株均購自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心；步驟二 生物菌劑的制備將按重量計的菌株ACCC30387的發(fā)酵液20%，菌株ACCC30384的發(fā)酵液20%，菌株ACCC31183的發(fā)酵液20%，腐植酸鉀10%，海藻酸鉀10 %，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將PH值調(diào)節(jié)至6. 0，余量用清水補(bǔ)齊后混合攪拌溶解均勻，制得本發(fā)明所述生物菌劑。上述百分比均為重量百分比。本發(fā)明的生物菌劑可以促進(jìn)棉花在采摘前葉片脫落，提高機(jī)械化作業(yè)的效率，解決化學(xué)脫葉劑對環(huán)境的污染問題。本發(fā)明的生物菌劑應(yīng)該在棉花采摘前20天開始整株噴施，每隔5-7天施用一次，連續(xù)使用3次以上效果顯著。但在實際的生產(chǎn)應(yīng)用中，本發(fā)明的生物菌劑促棉葉脫落的效果比化學(xué)藥劑略低，所需要噴施的次數(shù)比化學(xué)藥劑多，發(fā)揮作用所需要的時間比化學(xué)試劑要長，這是本發(fā)明與目前大量應(yīng)用的化學(xué)藥劑(乙烯利與脫落酸的復(fù)配產(chǎn)品)比起來存在的不足之處，仍需要我們科研工作者繼續(xù)努力研究，開發(fā)出促脫落效率更高、施用一次就見效、發(fā)揮效果所需時間短的更好的產(chǎn)品。但是本發(fā)明為生物制劑，使用成本低廉，安全環(huán)保無污染，在面對國家對環(huán)境保護(hù)與生活安全的戰(zhàn)略要求時，本發(fā)明的生物菌劑便成為值得推廣和應(yīng)用的有經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益和社會效益的好產(chǎn)品了。具體的實施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，本發(fā)明用以下具體實例進(jìn)行說明，但本發(fā)明不局限于這些具體實施例。實施例I :制備本發(fā)明的生物菌劑所使用的菌株菌株ACCC30387 為灰葡萄抱 Botrytis cinerea Pers. ex Fr.；菌株ACCC30384為葡萄抱Botrytis sp.;菌株ACCC31183為禾谷絲核菌Rhizoctoniacerealis vander Hoven ;這3種菌株均購自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。首先，制備菌株ACCC30387的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯酰腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6. 0 ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度28 °C，通氣量開始在I : I. 2 (v. v.m)，培養(yǎng)24小時后增至I : 1.5(v. v.m)，48小時后降至I : 1&.^111)，發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中40030387:灰葡萄孢的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液；其次，制備菌株ACCC30384的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方蔗糖_30g，MgSO4 WH2O-O. 5g，F(xiàn)eSO4 *4H20-0. Olg，NaN03_3g，KC1-0. 5g，K2HPO4-Ig,黃原膠 _3g，瓊脂_5g，清水補(bǔ)齊至IOOOg ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接 入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度28°C，通氣量開始在I : I (v. V. m),培養(yǎng)24小時后增至I : I. 2 (v. V. m), 48小時后繼續(xù)增至I : I. 5 (v. v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC30384 :葡萄孢的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液。再次，制備菌株ACCC31183 :的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方20%馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g, KH2P04-3g, MgSO4 7H20_1. 5g，硫胺素-0. 05g，羥烯腺嘌呤-0. 3g，烯酰腺嘌呤-0. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6. 0 ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度25 0C，通氣量開始在I l(v. V. m)，培養(yǎng)24小時后增至1:1.2 (v. v. m)，48小時后繼續(xù)增至I : I. 5(v. v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC31183 禾谷絲核菌的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液；最后將菌株ACCC30387的發(fā)酵液200g，菌株ACCC30384的發(fā)酵液200g，以及菌株ACCC31183的發(fā)酵液200g，腐植酸鉀100g，海藻酸鉀100g，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將pH值調(diào)節(jié)至6. 0，余量用清水補(bǔ)齊至IOOOg后混合攪拌溶解均勻，制得本發(fā)明所述生物菌劑。拮抗試驗將菌株ACCC30387、ACCC30384、ACCC31183在PDA培養(yǎng)基上，三點放置相互間距3cm，每個組合重復(fù)三次，進(jìn)行交叉拮抗試驗，結(jié)果表明三者相互之間不存在拮抗，能夠共同生長。實施例2 :測定本發(fā)明生物菌劑的生物活性表I.菌劑ACCC30387、ACCC30384、ACCC31183、本發(fā)明生物菌劑的促脫葉效果名稱 ACCC30387 ACCC30384 ACCC31183 本發(fā)明生物菌劑 _72.4%_56. 9%_38. 5%_93. 6%_從表I.數(shù)據(jù)可以看出單一菌劑促進(jìn)脫落的效果明顯不如混配在一起的復(fù)合菌劑的效果好，說明三種菌劑按一定比例混配在一起可以發(fā)揮微生物之間優(yōu)勢互補(bǔ)與協(xié)同增效的作用。在田間將上述制得生物菌劑稀釋1000倍后，采用噴施的辦法于棉花采摘前20內(nèi)天連續(xù)噴施3次，第一次噴施后，每間隔5-7天噴施一次，可使90%以上的棉葉在20天內(nèi)迅 速衰老脫落。本發(fā)明的一種用于棉花采摘前促脫葉的生物菌劑的制備方法已經(jīng)通過具體的實施例進(jìn)行了描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本發(fā)明的內(nèi)容適當(dāng)改變原料、工藝條件等環(huán)節(jié)來實現(xiàn)相應(yīng)的其它目的，其相關(guān)改變都沒有脫離本發(fā)明的內(nèi)容，所有類似的替換和改動對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，都被視為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于棉花采摘前促脫葉的生物菌劑，所述生物菌劑是采用如下方法制得的 步驟一、制備發(fā)酵液 (1)制備菌株ACCC30387的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方20%馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH2P04-3g, MgSO1 · 7H20_1. 5g，硫胺素_0. 05g,羥烯腺嘌呤_0. 3g，烯酰腺嘌呤-O. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6. 0 ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. O X IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3 %的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度28°C，通氣量開始在I I. 2 (V. V. m)，培養(yǎng)24小時后增至I I. 5 (v. v. m)，48小時后降至I : I (V. V. m)，發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC30387 :灰葡萄孢的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液； (2)制備菌株ACCC30384的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方蔗糖_30g，MgSO4 ·7Η20-0· 5g，F(xiàn)eSO4 ·4Η20_0. Olg，NaN03_3g，KC1-0. 5g，K2HPO4-Ig,黃原膠 _3g，瓊脂_5g，清水補(bǔ)齊至IOOOg ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2.OX IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度28°C，通氣量開始在I : I (V. V. m),培養(yǎng)24小時后增至I : I. 2 (v. v. m), 48小時后繼續(xù)增至I : 1.5(v. v. m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC30384 :葡萄孢的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液。
(3)制備菌株ACCC31183:的發(fā)酵液液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方20 %馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH2P04-3g, MgSO4 · 7H20_1. 5g，硫胺素_0. 05g,羥烯腺嘌呤_0. 3g，烯酰腺嘌呤-O. 3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6. 0 ;按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達(dá)到2. O X IO9個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3 %的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度25°C，通氣量開始在I I (V. V. m)，培養(yǎng)24小時后增至I I. 2 (v. v. m)，48小時后繼續(xù)增至I : 1.5(v.v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC31183:禾谷絲核菌的菌量達(dá)到20-30億個/ml時為合格菌液； 步驟二 生物菌劑的制備 將按重量計的菌株ACCC30387的發(fā)酵液20 %，菌株ACCC30384的發(fā)酵液20%，菌株ACCC31183的發(fā)酵液20%，腐植酸鉀10%，海藻酸鉀10 %，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將pH值調(diào)節(jié)至6.0，余量用清水補(bǔ)齊后混合攪拌溶解均勻，制得本發(fā)明所述生物菌劑，所述％均為重量百分比。
2.權(quán)利要求I的生物菌劑用于棉花采摘前促脫葉的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種棉花采摘前促脫葉的生物菌劑，所述生物菌劑采用3種菌株ACCC30387灰葡萄孢Botrytis cinerea Pers.ex Fr.、ACCC30384葡萄孢Botrytis sp.和ACCC31183禾谷絲核菌Rhizoctonia cerealis vander Hoven，經(jīng)發(fā)酵后與其它輔料混合制得，該生物菌劑可以促進(jìn)棉花在采摘前葉片脫落，提高機(jī)械化作業(yè)的效率，解決化學(xué)脫葉劑對環(huán)境的污染問題。
文檔編號A01N63/02GK102972444SQ20121046677
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月19日
發(fā)明者趙戰(zhàn)勝 申請人:新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)農(nóng)六師農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所