一種高粱轉基因植株的潮霉素涂葉鑒定法
【專利摘要】一種高粱轉基因植株的潮霉素涂葉鑒定法，屬于農(nóng)作物遺傳育種【技術領域】。在高粱3葉期，將潮霉素溶液涂抹在高粱幼苗的第2片葉子上，分別于3天和7天后觀察葉片有無灰色斑點或死亡，以此確認其是否為轉基因植株。方法簡單，操作容易，無需設備，費用低廉。
【專利說明】一種高粱轉基因植株的潮霉素涂葉鑒定法
【技術領域】
[0001]一種高粱轉基因植株的潮霉素涂葉鑒定法屬于農(nóng)作物遺傳育種領域，更具體地說是一種對高粱群體中轉基因植株進行篩選鑒定的方法。
【背景技術】
[0002]由于高粱轉基因的效率較低，往往需要培育大量的苗，從中篩選檢測轉基因成功的植株，因此需要一種高效的鑒定方法。目前植物轉基因鑒定方法主要是采用聚合酶鏈式反應(PCR)法。PCR鑒定的準確性很高，但在時間和精力方面投入較多，并且需要專門的儀器，代價高，效率低。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明提供了一種利用潮霉素涂抹葉片鑒定高粱轉基因苗的高效方法。相對于PCR法，該方法不但操作簡便，所需費用少，準確性高，而且不需要專用設備。利用PCR法對潮霉素涂葉鑒定法印證表明，該方法的鑒定準確率高達95%以上。
[0004]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:
1.一種高粱轉基因植株的潮霉素涂葉鑒定法，其特征在于，用潮霉素溶液涂抹葉片，目測葉片是否產(chǎn)生灰色斑點或死亡，以此確認是否為轉基因植株。
[0005]2.本發(fā)明的操作有以下要點:所述的潮霉素溶液為1%。潮霉素溶液；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片于高粱幼苗的3葉期進行；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是涂抹高粱幼苗第2片葉的正面；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是用脫脂棉蘸取1%。潮霉素溶液進行；所述的用潮霉素溶液涂抹葉片須戴一次性薄膜`手套進行；所述的目測葉片是否產(chǎn)生灰色斑點和死亡分別于涂抹后3天和7天進行；所述的確認是否轉基因苗的方法是:3天后觀察到處理過的葉片有灰色斑點且7天后該葉片發(fā)生死亡的苗定為非轉基因苗；3天后觀察到處理過的葉片無灰色斑點且7天后也未發(fā)生死亡的苗定為轉基因苗。
[0006]本發(fā)明的有益效果:采用本發(fā)明的方法鑒定高粱轉基因苗，與傳統(tǒng)的PCR法相比，操作簡單，無需昂貴的設備，費用低廉。用PCR方法印證表明，本發(fā)明的準確率高達95%以上，可謂精準高效。
【具體實施方式】
[0007]具體實施實例1:將S1390載體轉入到高粱品系U68中的轉基因鑒定
通過將S1390載體轉入到高粱品系U68中的操作，獲得了高粱轉基因的待測群體，在待測群體中檢測鑒定轉基因植株。方法是，在高粱幼苗3葉期，雙手戴一次性塑料薄膜手套，用脫脂棉球蘸取1%。潮霉素溶液均勻地涂抹在高粱幼苗第2片葉的正面，第2天再如法涂抹一次。涂抹后第3天觀測到有23株經(jīng)涂抹潮霉素的葉片上未出現(xiàn)灰色斑點且第7天也未發(fā)生異常。這23株即為潮霉素涂葉法鑒定出的轉基因苗。用PCR方法對這23株苗進行檢測，共有22株擴增出目的片斷，證實潮霉素涂葉法的鑒定準確率達95.6%。[0008]具體實施例2:將SRnai載體轉入到高粱品系3042B中的轉基因鑒定
通過將SRnai載體轉入到高粱品系3042B中的操作，獲得了高粱轉基因的待測群體，在待測群體中檢測鑒定轉基因植株。方法是，在高粱幼苗3葉期，雙手戴一次性塑料薄膜手套，用脫脂棉球蘸取1%。潮霉素溶液均勻地涂抹在高粱幼苗第2片葉的正面，第2天再如法涂抹一次。涂抹后第3天觀測到有87株經(jīng)涂抹潮霉素的葉片上未出現(xiàn)灰色斑點且第7天也未出現(xiàn)異常。這87株即為潮霉素涂葉法鑒定出的轉基因苗。用PCR方法對這87株苗進行檢測，共有84株擴增出目的片斷，證實`潮霉素涂葉法的鑒定準確率達96.5%。
【權利要求】
1.一種高粱轉基因植株的潮霉素涂葉鑒定法，利用高粱幼苗的葉片進行，其特征在于，用潮霉素溶液涂抹高粱葉片，目測葉片是否產(chǎn)生灰色斑點或死亡，以此確認是否為轉基因植株。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的潮霉素溶液為I %。潮霉素溶液。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片于高粱幼苗3葉期進行。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是涂抹高粱幼苗第2葉片。
5.根據(jù)權利要求1和權利要求4所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是涂抹在第2葉片的正面。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片是用脫脂棉蘸取1%。潮霉素溶液進行。
7.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹葉片須戴一次性薄膜手套進行。
8.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的目測葉片是否產(chǎn)生灰色斑點和死亡分別于涂抹后3天和7天進行。
9.根據(jù)權利要求1所述的一種高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的確認是否轉基因苗的方法是:3天后觀察到處理過的葉片有灰色斑點，或7天后發(fā)生死亡的苗定為非轉基因苗。
10.根據(jù)權利要求1所述的一種 高粱轉基因植株的目測鑒定法，其特征在于，所述的確認是否轉基因苗的做法是:3天后觀察到處理過的葉片無灰色斑點，且7天后也未發(fā)生死亡的苗定為轉基因苗。
【文檔編號】A01G7/06GK103843602SQ201210522496
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年12月7日 優(yōu)先權日:2012年12月7日
【發(fā)明者】李杰勤, 王麗華, 詹秋文, 陸景標, 張俊, 林平, 趙庭, 萬海波, 周青, 王茂輝, 劉井良, 李萬祥 申請人:安徽科技學院