專利名稱：一種蘇丹草種子組織培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種蘇丹草種子組織培養(yǎng)技術(shù)屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說是一種利用蘇丹草的種子為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)的技術(shù)。
背景技術(shù)：
蘇丹草為禾本科高粱屬一年生植物，原產(chǎn)于非洲的蘇丹，因其飼草產(chǎn)量高，再生能力強(qiáng)，營養(yǎng)價(jià)值豐富，適應(yīng)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，在我國大部分地區(qū)都有栽種。組織培養(yǎng)是指在無菌條件下利用人工培養(yǎng)基對(duì)植物組織進(jìn)行培養(yǎng)，是生物工程研究的基礎(chǔ)，是進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和植物改良研究的基本環(huán)節(jié)。相比利用幼穗、葉、莖等為外植體的組織培養(yǎng)方法，以種子為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)具有不受季節(jié)限制和取材方便的優(yōu)點(diǎn)。目前，以蘇丹草種子為外植體的組織培養(yǎng)的技術(shù)還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以蘇丹草種子為外植體的組織培養(yǎng)技術(shù)，為深入進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和性狀改良提供研究平臺(tái)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的
一種蘇丹草種子組織培養(yǎng)技術(shù)包括以下技術(shù)環(huán)節(jié)
①種子消毒將蘇丹草種子放在自來水下沖洗5-10min，在超凈工作臺(tái)上，用70%酒精處理30s (輕輕攪動(dòng))，然后放入O. 1%升汞中處理15 min后，無菌水沖洗4_5次；
②震蕩浸泡將消毒種子轉(zhuǎn)入盛有無菌水的小三角瓶中，放在振蕩器上振蕩12h左
右；
③愈傷組織誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊，將處理好的種子接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種4個(gè)半粒種子，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)；
④愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方MS基本培養(yǎng)基加入2，4-DO. 5mg/L。培養(yǎng)室溫度(25±1) °C，光源為40W日光燈，光照時(shí)間12h/d;
⑤將誘導(dǎo)的愈傷組織再接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
⑥繼代培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加2，4-DI. Omg/L ；
⑦在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天左右，將蘇丹草愈傷轉(zhuǎn)入到分化培養(yǎng)基中；
⑧分化培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加入6-BA2. Omg/L ；
⑨在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天左右，使之長成正常的小植株；
⑩將小植株轉(zhuǎn)移到裝有蛭石營養(yǎng)缽中，將其放入25°C培養(yǎng)箱煉苗一周左右即可移栽。本發(fā)明的有益效果
一種以蘇丹草種子為外植體的組織培養(yǎng)技術(shù)可以為深入進(jìn)行蘇丹草的遺傳轉(zhuǎn)化和性狀改良提供研究平臺(tái)。例如在組織培養(yǎng)的環(huán)節(jié)中，可以對(duì)愈傷組織進(jìn)行化學(xué)誘變，也可以對(duì)培養(yǎng)體進(jìn)行染色體加倍，還可以對(duì)愈傷組織進(jìn)行優(yōu)良基因的導(dǎo)入接種，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研究等等。通過這些手段，可以高效快速的培育出具有各種優(yōu)異性狀的蘇丹草新品種。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
舉例1，蘇丹草品系722種子的組織培養(yǎng)
①種子消毒將蘇丹草種子放在自來水下沖洗10min，在超凈工作臺(tái)上，用70%酒精處理30s (輕輕攪動(dòng))，然后放入O. 1%升汞中處理15 min后，無菌水沖洗5次；
②震蕩浸泡將消毒種子轉(zhuǎn)入盛有無菌水的小三角瓶中，放在振蕩器上振蕩12h ；
③愈傷組織誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊，將處理好的種子接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種4個(gè)半粒種子，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)；
④愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方MS基本培養(yǎng)基加入2，4-DO. 5mg/L。培養(yǎng)室溫度
(25±1) °C，光源為40W日光燈，光照時(shí)間12h/d ；
⑤將誘導(dǎo)的愈傷組織再接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
⑥繼代培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加2，4-DI. Omg/L ；
⑦在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天，將蘇丹草愈傷轉(zhuǎn)入到分化培養(yǎng)基中；
⑧分化培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加入6-BA2. Omg/L ；
⑨在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天，使之長成正常的小植株；
⑩將小植株轉(zhuǎn)移到裝有蛭石營養(yǎng)缽中，將其放入25°C培養(yǎng)箱煉苗8天移出室外定植。
具體實(shí)施方式
舉例2，蘇丹草品系Sa種子的組織培養(yǎng)
①種子消毒將蘇丹草種子放在自來水下沖洗10min，在超凈工作臺(tái)上，用70%酒精處理30s (輕輕攪動(dòng))，然后放入O. 1%升汞中處理15 min后，無菌水沖洗5次；
②震蕩浸泡將消毒種子轉(zhuǎn)入盛有無菌水的小三角瓶中，放在振蕩器上振蕩12h ；
③愈傷組織誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊，將處理好的種子接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種4個(gè)半粒種子，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)；
④愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方MS基本培養(yǎng)基加入2，4-DO. 5mg/L。培養(yǎng)室溫度(25±1) °C，光源為40W日光燈，光照時(shí)間12h/d ；
⑤將誘導(dǎo)的愈傷組織再接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
⑥繼代培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加2，4-DI. Omg/L ；
⑦在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天，將蘇丹草愈傷轉(zhuǎn)入到分化培養(yǎng)基中；
⑧分化培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加入6-BA2. Omg/L ；
⑨在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天，使之長成正常的小植株；
⑩將小植株轉(zhuǎn)移到裝有蛭石營養(yǎng)缽中，將其放入25°C培養(yǎng)箱煉苗10天，移出室外定植。
權(quán)利要求
1. 一種蘇丹草種子組織培養(yǎng)技術(shù)包括以下技術(shù)環(huán)節(jié) ①種子消毒將蘇丹草種子放在自來水下沖洗5-10min，在超凈工作臺(tái)上，用70%酒精處理30s (輕輕攪動(dòng))，然后放入O. 1%升汞中處理15 min后，無菌水沖洗4_5次；②震蕩浸泡將消毒種子轉(zhuǎn)入盛有無菌水的小三角瓶中，放在振蕩器上振蕩12h左右； ③愈傷組織誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊，將處理好的種子接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種4個(gè)半粒種子，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)； ④愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方MS基本培養(yǎng)基加入2，4-DO. 5mg/L,培養(yǎng)室溫度(25±1) °C，光源為40W日光燈，光照時(shí)間12h/d; ⑤將誘導(dǎo)的愈傷組織再接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)； ⑥繼代培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加2，4-DI. Omg/L ； ⑦在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天左右，將蘇丹草愈傷轉(zhuǎn)入到分化培養(yǎng)基中； ⑧分化培養(yǎng)基配方MS培養(yǎng)基加入6-BA2. Omg/L ； ⑨在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)40天左右，使之長成正常的小植株； ⑩將小植株轉(zhuǎn)移到裝有蛭石營養(yǎng)缽中，將其放入25°C培養(yǎng)箱煉苗一周左右即可移栽。
全文摘要
一種蘇丹草種子組織培養(yǎng)技術(shù)屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，其主要過程有種子消毒、震蕩浸泡、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)、愈傷組織繼代培養(yǎng)、愈傷組織分化培養(yǎng)、小苗煉苗培養(yǎng)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102972298SQ20121052255
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月7日
發(fā)明者李杰勤, 王麗華, 詹秋文, 胡能兵, 林平, 王世建, 楚利 申請(qǐng)人:安徽科技學(xué)院