專利名稱：一種基于枝干滴注技術(shù)簡捷高效誘導(dǎo)棗樹2n花粉的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于枝干滴注技術(shù)簡捷高效誘導(dǎo)棗樹2η花粉的方法。
背景技術(shù)：
冬餓iZiziphus jujuba Mill.)為我國第一大干果樹種,近年來發(fā)展迅速。為適應(yīng)棗產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，新品種選育工作迫在眉睫。由于棗花小、去雄難度大，加之胚高度敗育，棗樹雜交育種舉步維艱，倍性育種已經(jīng)成為培育棗新品種的重要途徑之一。通過無性多倍化獲得的多倍體，由于沒有外來優(yōu)異基因的滲入，不能實現(xiàn)優(yōu)異基因的重組，迫切需要通過有性多倍化途徑開展棗樹的倍性育種。2n花粉(又稱巨型花粉)在有性倍性育種中具有重要價值。據(jù)本專利發(fā)明人檢測，在自然條件下，絕大多數(shù)棗樹優(yōu)良品種的2n花粉自然發(fā)生比例極低，僅有I. 79%的棗樹品種可以產(chǎn)生1%以上的2n花粉，最高達(dá)9. 41%，絕大多數(shù)優(yōu)良品種的2n花粉自然發(fā)生比例極低，不能滿足倍性育種需要。因此，對棗樹優(yōu)良品種進(jìn)行2n花粉誘導(dǎo)，進(jìn)而通過有性雜交整合優(yōu)良性狀，進(jìn)行有性多倍體育種，具有重要的價值。本專利發(fā)明人曾嘗試?yán)猛磕ǚā⑽?chuàng)法進(jìn)行巨型花粉的誘導(dǎo)，其中涂抹法費時費力，效率很低；微創(chuàng)法誘導(dǎo)2n花粉的比例可以達(dá)到18. 3%，但由于微創(chuàng)法是對較細(xì)的單個棗吊進(jìn)行割傷處理，也比較費工，誘導(dǎo)效率仍然不能滿足大規(guī)模育種實踐的需要。本發(fā)明專利采用枝干滴注技術(shù)，使誘變劑通過枝干進(jìn)入棗吊中，誘導(dǎo)時期容易掌握，由于在一個樹干處滴注可以影響其上幾十甚至幾百個棗吊，從而可以實現(xiàn)在I天內(nèi)對大量棗吊進(jìn)行2n花粉誘導(dǎo)，并且可以獲得高比例的2n花粉，大大提高了 2n花粉的誘導(dǎo)效率，對加速棗樹有性多倍化育種進(jìn)程具有重要價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明建立了一種基于枝干滴注技術(shù)簡潔高效誘導(dǎo)棗樹2n花粉的方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是于棗花粉母細(xì)胞旺盛減數(shù)分裂期，以秋水仙素為誘變劑，利用鉆孔器對棗樹枝干基部進(jìn)行打孔，然后采用輸液的方式將秋水仙素藥液直接滴注到枝干中，使藥液通過木質(zhì)部向上運輸，阻止花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中紡錘絲的形成，誘導(dǎo)花粉染色體加倍，從而獲得2n花粉。本發(fā)明的具體內(nèi)容，即利用枝干滴注技術(shù)簡捷高效誘導(dǎo)棗樹2n花粉的具體方法如下
(1)枝干預(yù)處理于盛花前18-24d，選擇生長健壯的枝干，在枝干光滑部位用鉆孔器打直徑3mm的孔洞，深達(dá)木質(zhì)部，但避免接觸到髓；
(2)2n花粉的誘導(dǎo)首先用牛皮紙將輸液瓶和輸液管包嚴(yán)；然后將O.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，秋水仙素溶液用量根據(jù)滴注部位以上的棗吊數(shù)量和長度來定，平均每棗吊用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，用保鮮膜將針頭固定在孔中，調(diào)整流速，防止藥液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器；
(3)花粉的采集和觀測到蕾裂期，采集枝干處理部位以上的花蕾，于室內(nèi)用解剖針快速剝?nèi)〕墒旎ǚ?，置于載玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置Ih后,鏡檢2η花粉比例及活力。本發(fā)明專利的有益效果是，通過枝干滴注秋水仙素，可高效誘導(dǎo)獲得高比例的2η花粉，直接用于授粉，可大幅度提高雜交后代中三倍體的出現(xiàn)幾率。該技術(shù)應(yīng)用于棗樹2η花粉誘導(dǎo)，方法簡單便捷，誘導(dǎo)效率顯著提高。


圖I誘導(dǎo)獲得的高活力2η花粉(染成紅色的巨型花粉)。
具體實施例方式以二倍體棗優(yōu)良品種‘蜂蜜罐’和二倍體酸棗類型‘邢0604’為試材，于2012年5月7日選擇生長健壯的枝干，在枝干的光滑部位打直徑為3_的孔洞，深達(dá)木質(zhì)部；用牛皮紙將輸液瓶和輸液管包嚴(yán)后，將O. 3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，滴注部位以上的棗吊平均每個用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，用保鮮膜將針頭固定好，調(diào)整流速，并確保藥液不外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器，以滴注蒸餾水為對照；于5月25日-5月30日，采集滴注處理部位以上處于蕾裂期的花蕾，于室內(nèi)用解剖針快速剝?nèi)〕墒旎ǚ郏糜谳d玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置Ih后鏡檢；平均2n花粉比例分別達(dá)23. 4%和20. 3%，最高分別達(dá)31. 8%和23. 0%，所獲2n花粉的活力分別為80%和85%，而對照的平均2n花粉比例分別為O和3%，后者2n花粉活力為85%。
權(quán)利要求
1.一種基于枝干滴注技術(shù)簡捷高效誘導(dǎo)棗樹2η花粉的方法，其特征在于包括以下幾個步驟(1)枝干預(yù)處理于盛花前18-24d，選擇生長健壯的枝干，在枝干光滑部位用鉆孔器打一孔洞，深達(dá)木質(zhì)部；(2)2n花粉的誘導(dǎo)首先用牛皮紙或其他遮光材料將輸液瓶和輸液管包嚴(yán)；然后將O.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，秋水仙素溶液用量根據(jù)滴注部位以上棗吊的數(shù)量和長度來定，平均每棗吊用秋水仙素溶液O. 5-0. 8ml ;之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中， 將針頭固定好，防止藥液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器；(3)花粉的采集和觀測到蕾裂期，采集枝干處理部位以上的花蕾，快速剝?nèi)〕墒旎ǚ郏糜谳d玻片上，滴加O. 5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置Ih后，鏡檢2n花粉比例及活力。
全文摘要
一種基于枝干滴注技術(shù)簡捷高效誘導(dǎo)棗樹2n花粉的方法，于棗花粉母細(xì)胞旺盛減數(shù)分裂期，以秋水仙素為誘變劑，用鉆孔器對棗樹枝干基部進(jìn)行打孔，然后將秋水仙素藥液直接滴注到枝干中，使藥液通過木質(zhì)部向上運輸，阻止花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中紡錘絲的形成，誘導(dǎo)花粉染色體加倍，從而獲得2n花粉。該方法應(yīng)用于棗樹2n花粉誘導(dǎo)，誘導(dǎo)時間容易掌握，并且可以在1天內(nèi)對大量棗吊進(jìn)行2n花粉誘導(dǎo)，并獲得高比例的2n花粉，加速棗樹有性多倍化育種進(jìn)程。
文檔編號A01H1/08GK102972288SQ201210534328
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者劉孟軍, 劉平, 李嬌 申請人:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)