專利名稱：一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法。
背景技術(shù)：
羅漢果(Siraitiagrosvenori (Swingle)C. Jeffrey)是我國重要的特產(chǎn)中藥材，其果實為藥、食兼用果品，是僅次于甘蔗的第二大甜味劑原料，廣泛用于中成藥、保健食品、飲料、烹飪作料等的制作。因為羅漢果是雌雄異株，又花期不遇，加之花粉粘重且著生于花藥不易被昆蟲觸及的地方，所以很難像普通的風(fēng)媒花或蟲媒花那樣傳粉，因此自然條件下，結(jié)果的機率極低(目前人工栽培仍然必須 人工授粉)。同時，羅漢果種子實生苗有70%左右為雄株，且要等到2 3年之后，開花時才能判定，生產(chǎn)上基本無實用價值。但是，羅漢果的習(xí)性是，到了秋季分枝藤蔓會向下垂，并迅速伸長，一經(jīng)著地就會膨大變作指頭大小的塊莖(俗稱“薯塊”、“薯仔”)，可以頑強地越冬，來年萌發(fā)成為獨立的新植株。這是羅漢果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工壓蔓，小“塊莖”依然是羅漢果最重要的種源。然而，這些傳統(tǒng)塊莖容易傳播病毒及其它病蟲害，又難以大批量生產(chǎn)，無法滿足現(xiàn)代規(guī)?；N植的需求。上世紀(jì)末無菌無毒的羅漢果組培苗研究成功，很快就取代傳統(tǒng)塊莖成為最重要的種源。但羅漢果組培苗在包裝運輸中容易損傷，尤其是遇到市場滯銷時，更需要占用大量場地和人工護理，而且難以長時間存貯。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法。該方法簡單易操作，可實現(xiàn)大批量生產(chǎn)，培育得到的羅漢果組培塊莖無菌無毒，且便于運輸和長時間存貯，有很強的市場適應(yīng)性。本發(fā)明所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，包括以下步驟I)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將分切得到的帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)90 100天，即得到所述的羅漢果組培塊莖；其中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SA O. 3 O. 8mg · L-1+ 鹿糖 5 12% ；所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17 (±2) °C;光照周期晝/夜8 10h/16 14h ;光照強度1200 15001xo上述方法中步驟3)中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方優(yōu)選為MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SAO. 4 O. 6mg *L k 鹿糖 5 10%;進一步優(yōu)選為MS+LFS O. 3 O. 8mg *L :+SA O. 5mg *L :+蔗糖8% ;更優(yōu)選為MS+LFS O. 5mg · L^+SAO. 5mg · Γ1+蔗糖8%。本申請所述的改良MS固體培養(yǎng)基的pH值與常規(guī)MS培養(yǎng)基的pH值相同，通常為5. 8 6. O。上述配方中，蔗糖的濃度5 12%代表每升培養(yǎng)基中含有50 120g的蔗糖。配方中的LFS為靈發(fā)素(Lingfasu，代號PGR-08)，同時具有細(xì)胞分裂素和生長素兩類植物生長調(diào)節(jié)劑生物活性的特點；SA為撒酸(Salycylic Acid)。步驟3)中，所述的培養(yǎng)條件優(yōu)選為溫度晝/夜25/17(±2)°C ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強度1200 15001x ;其中光照強度進一步優(yōu)選為1200 13001x。更優(yōu)選的培養(yǎng)條件為 溫度:晝/夜25/17 (±2) 0C ;光照周期 晝/夜8h/16h ;光照強度12001x。由本發(fā)明所述方法誘導(dǎo)形成的羅漢果組培塊莖是腋芽的直接膨大，實為短縮分枝，前尖后圓，形似玉米穗，只是體積比傳統(tǒng)塊莖小很多，如黃豆或花生米。而野生塊莖或人工壓蔓塊莖則是已經(jīng)伸展開來的分枝藤蔓的觸地部分或被掩埋部分的膨大，兩端形態(tài)差異不顯著，體積較大，如手指般大小。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述方法將LFS和SA加入到常規(guī)MS固體培養(yǎng)基中，通過 優(yōu)化培養(yǎng)基的撒酸、蔗糖等的含量得到改良的MS固體培養(yǎng)基；再將分切得的帶腋芽單節(jié)莖段微型扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中并于特定的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)以誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的形成。整個方法簡單易操作，并且可實現(xiàn)大批量生產(chǎn)；由該方法培育得到的羅漢果組培塊莖無菌無毒，且便于運輸(誘導(dǎo)完成后，將得到的羅漢果組培塊莖取出，洗凈，直接置于紙箱或木箱中暫存運輸即可)和長時間存貯(將洗凈的羅漢果組培塊莖采用室內(nèi)外沙埋存貯即可)，既可用于當(dāng)年栽種，亦可貯存至第二年栽種，有很強的市場適應(yīng)性。
具體實施例方式下面以具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。實施例1I)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)在凈化工作臺上切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將分切得到的帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于20瓶裝有改良MS固體培養(yǎng)基中(每瓶微扦插5個帶腋芽單節(jié)莖段)，培養(yǎng)95天后，再生組培苗的各主莖中下部的節(jié)位即誘導(dǎo)出膨大的短縮側(cè)莖，前尖后圓，形似玉米穗，長度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)，即為本發(fā)明所述的羅漢果組培塊莖；其中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1mg · L^+SA O. 5mg · L—1+蔗糖8% ；所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25(±2) V /17(±2) V ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強度 12001x。按照收獲塊莖總個數(shù)/接種莖段總個數(shù)X 100%來計算塊莖收率(下同)，塊莖收率為75%。實施例2重復(fù)實施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 3mg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實施例1，長度在O. 5 1. Ocm范圍內(nèi)。
經(jīng)計算，塊莖收率為110%。實施例3重復(fù)實施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 5mg · L :+SA 0. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實施例1，長度在O. 5 1. Ocm范圍內(nèi)。經(jīng)計算，塊莖收率為160%。實施例4
重復(fù)實施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 8mg · L :+SA 0. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實施例1，長度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)。經(jīng)計算，塊莖收率為148%。實施例5重復(fù)實施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFS1. Omg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實施例1，長度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)。經(jīng)計算，塊莖收率為150%。實施例6重復(fù)實施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFS1. Omg · L^+SA O. 3mg · Γ1+蔗糖10 % ;培養(yǎng)條件改為溫度晝/夜25(±2)°C /17 (±2) °C;光照周期:晝/夜10h/14h ;光照強度13001x ;培養(yǎng)時間改為90天。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實施例1，長度在O. 5 1. 5cm范圍內(nèi)。經(jīng)計算，塊莖收率為40%。實施例7重復(fù)實施例1的方法，只是將改良MS固體培養(yǎng)基配方修改為MS+LFSO. 3mg · L^+SA 0. 8mg · Γ1+蔗糖12 % ;培養(yǎng)條件改為溫度晝/夜25(±2)°C /17 (±2) °C;光照周期:晝/夜9h/15h ;光照強度15001x ;培養(yǎng)時間改為100天。誘導(dǎo)得到的羅漢果組培塊莖形態(tài)同實施例1，長度在O. 5 1. Ocm范圍內(nèi)。經(jīng)計算，塊莖收率為72%。田間實驗2011年，申請人按本發(fā)明實施例1的方法進行誘導(dǎo)，將得到的羅漢果組培塊莖從瓶中取出洗凈、晾干后，直接播種于實驗田中，之后按常規(guī)管理方式進行管理，發(fā)芽成活率^90% (發(fā)芽成活數(shù)/播種數(shù)X 100% )。
權(quán)利要求
1.一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于包括以下步驟1)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將分切得到的帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)90 100天，即得到所述的羅漢果組培塊莖；其中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1 1. Omg · L_1+SA O. 3 O. 8mg · Γ1+ 鹿糖5 12% ；所述的培養(yǎng)條件為 溫度:晝/夜25/17 (±2) °C;光照周期晝/夜8 10h/16 14h ； 光照強度1200 15001x。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于步驟3)中，所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O.1 1. Omg · L ^SAO. 4 O. 6mg · L :+鹿糖5 10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O. 3 O. 8mg · L :+SA O. 5mg .L1+ 鹿糖 8%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS O. 5mg · L_1+SA O. 5mg · L—1+ 鹿糖 8%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述改良MS固體培養(yǎng)基的pH值為5. 8 6. O。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任一項所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于步驟3)中，所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17 (±2) V ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強度 1200 15001x。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的光照強度 1200 13001x。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，其特征在于所述的培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17(±2)°C ;光照周期晝/夜8h/16h ;光照強度12001x。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)羅漢果組培塊莖的方法，包括以下步驟1)按常規(guī)方法獲得羅漢果脫毒組培苗；2)切去脫毒組培苗上部頂芽和下部帶根節(jié)，取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；3)將帶腋芽單節(jié)莖段微扦插于改良MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)90～100天，即得；其中，改良MS固體培養(yǎng)基配方為MS+LFS 0.1～1.0mg·L-1+SA 0.3～0.8mg·L-1+蔗糖5～12％；培養(yǎng)條件為溫度晝/夜25/17(±2)℃；光照周期晝/夜8～10h/16～14h；光照強度1200～1500lx。該方法簡單易操作，可實現(xiàn)大批量生產(chǎn)，育得的羅漢果組培塊莖無菌無毒，便于運輸和長時間存貯，有很強的市場適應(yīng)性。
文檔編號A01H4/00GK103004598SQ201210548769
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月18日
發(fā)明者許鴻源 申請人:永?？圃戳_漢果有限責(zé)任公司