專利名稱：蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用，屬于飼料 技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蟲草，指麥角菌科真菌在多種鱗翅目昆蟲蛹及幼蟲的子座及幼蟲尸體生長的復(fù)合 體，目前已發(fā)現(xiàn)四百多種的蟲草，如冬蟲夏草、亞香棒蟲草、涼山蟲草、新疆蟲草、分枝蟲草、 藿克蟲草、蛹蟲草等。天然蟲草含有各種各樣的生物活性物質(zhì)含有豐富的蟲草酸、不飽和脂 肪酸、維生素B12、麥角留醇、六碳糖醇、生物堿等。據(jù)實驗研究表明，天然蟲草具有調(diào)節(jié)免 疫系統(tǒng)功能、抗腫瘤作用、抗疲勞、抗病毒、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能等多種藥用功效。天然野 生蟲草資源有限，由于過度挖掘，蟲草生長的生態(tài)環(huán)境受到嚴(yán)重破壞。目前，完整的蟲草人 工栽培技術(shù)尚未成熟，使蟲草資源的開發(fā)利用受到制約。近年來，利用工業(yè)發(fā)酵技術(shù)，將蟲 草菌進(jìn)行液體或固體發(fā)酵培養(yǎng)，實驗表明其發(fā)酵產(chǎn)物不但在食品和醫(yī)藥上有很好的應(yīng)用價 值，而且在畜禽養(yǎng)殖上也有應(yīng)用前景。魏建忠等人(2005)用3株蟲草無性型菌株(P2、P5、 P6)分別進(jìn)行固體和液體發(fā)酵培養(yǎng)，將得到的6種蟲草菌絲體飼料添加劑(合肥邁可羅生物 工程有限公司提供)進(jìn)行飼喂試驗，結(jié)果表明蟲草添加劑對雞體增重和飼料轉(zhuǎn)化率有明顯 提高，其中用液體培養(yǎng)的P2和P5菌株濃度為O. 2%時效果最佳，與對照組相比增重分別提 高11. 04 %、11. 56 %，差異顯著。陳安徽等人(2007 )將一種蟲草無性型菌株P(guān)5深層液體發(fā) 酵菌絲體作為飼料添加劑，在日糧中添加O. 25%的蟲草飼料添加劑不僅可顯著提高肉仔雞 胸肌和腿肌中蛋白質(zhì)和氨基酸的總含量，并且可顯著提高肉仔雞肌肉中人體必需氨基酸和 風(fēng)味氨基酸的含量，還可以顯著降低胸肌和腿肌中粗脂肪的含量。劉惠莉等(2008)利用蟲 草激活強(qiáng)化免疫飼料添加劑對豬進(jìn)行飼喂試驗，試驗結(jié)果表明蟲草強(qiáng)化飼料添加劑具有免 疫增強(qiáng)作用，與特異性疫苗聯(lián)合免疫可提高機(jī)體對疫苗的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生免疫抗體水平高 于未使用添加劑組，添加蟲草強(qiáng)化飼料添加劑組口蹄疫免疫抗體水平顯著高于對照組，而 且抗體持續(xù)期較長，在I個月后，抗體水平仍非常理想，與對照比較，試驗組獲得更為理想 的免疫效果。
對蝦養(yǎng)殖是高度集約化的養(yǎng)殖模式，現(xiàn)有的飼料存在營養(yǎng)不均衡，抗生素濫用等 問題，養(yǎng)殖病害嚴(yán)重，藥物殘留導(dǎo)致水產(chǎn)品質(zhì)量安全問題。開發(fā)高效、無殘留、無公害的對蝦 飼料添加劑成為對蝦養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的迫切需要。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng) 用，以提高南美白對蝦成活率、增重率和飼料利用率等生長指標(biāo)及增強(qiáng)免疫力。
本發(fā)明提供的蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用，所述蟲生 真菌液體發(fā)酵菌絲體為中華被毛孢OyirswiWJa sinensis)液體發(fā)酵菌絲體、古尼擬青霉 {Paecilomyces gunnii )液體發(fā)酵菌絲體或蛹草擬青霉液體發(fā)酵菌絲體。
所述蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體的制備如下O中華被毛孢液體發(fā)酵菌絲體的制備中華國被毛孢菌種活化后，接種于液體培養(yǎng)基 中，于溫度為17°c ±3，進(jìn)行搖床或發(fā)酵罐培養(yǎng)一定時間，收集菌絲體，干燥后制成干粉。
2)古尼擬青霉液體發(fā)酵菌絲體的制備古尼擬青霉菌種活化后，接種于液體培養(yǎng) 基，于溫度為23°C — 30°C，進(jìn)行搖床或發(fā)酵罐培養(yǎng)一定時間，收集菌絲體，干燥后制成干 粉。
3)蛹草擬青霉的液體發(fā)酵菌絲體的制備蛹草擬青霉菌種活化后,接種于液體培 養(yǎng)基，于溫度為23°C — 30°C，進(jìn)行搖床或發(fā)酵罐培養(yǎng)一定時間，收集菌絲體，干燥后制成干 粉。
所述液體培養(yǎng)基的配方2000 - 300 g/L馬鈴薯浸汁，葡萄糖10 — 40 g/L，蛋白 胨I 一 20 g/L，酵母膏O — 10 g/L，水1L，121 °C高溫滅菌。
本發(fā)明提供了將上述3種蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體干粉作為南美白對蝦飼料添 加劑的方法添加量為基礎(chǔ)對蝦飼料的I 一 10 %，可提高南美白對蝦的成活率、增重率和飼 料利用率等生長指標(biāo)，并提聞免疫力。
具體實施方式
實施例13種蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體干粉的制備I)中華被毛孢液體發(fā)酵菌絲體干粉的制備中國被毛孢{HirsuteIlasinensis、(冬蟲 夏草子囊孢子萌發(fā)及其無性型觀察，貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，31 (I) :3-5.)菌種活化后，接種于 裝有150 mL液體培養(yǎng)基(配方200 g/L馬鈴薯浸汁，葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L)的10 瓶三角瓶中(250 mL)中，于溫度為17°C，轉(zhuǎn)速為170 rpm的恒溫?fù)u床培養(yǎng)24 d。離心收集 菌絲體，于55°C烘干，制成菌絲體干粉。
2)古尼擬青霉液體發(fā)酵菌絲體干粉的制備古尼擬青霉gunnii) (古尼擬青霉液體發(fā)酵液有機(jī)粗提物產(chǎn)量的研究，生物技術(shù)，2012, 22 (I) 88-89)菌種活化 后，接種于裝有150mL液體培養(yǎng)基(200 g/L馬鈴薯，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L)的10瓶 三角瓶中(250 mL)，于溫度28 °C,轉(zhuǎn)速230 rpm，搖瓶培養(yǎng)7 d，制備一級種子液。取5 mL 一級種子液接種到裝有150 mL液體培養(yǎng)基(200 g/L的馬鈴薯浸汁，葡萄糖30 g/L，蛋白胨 5 g/L)的35瓶三角瓶中(250 mL)，于相同培養(yǎng)條件培養(yǎng)7d，制備二級種子液。將35瓶二 級種子液接種到裝有120 L液體培養(yǎng)基(200 g/L的馬鈴薯浸汁，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L)的發(fā)酵罐(200 L)中液體發(fā)酵培養(yǎng)，溫度控制28±0. 5 °C。發(fā)酵前期(0_76 h)通氣 量為0.7 vvm，發(fā)酵后期(76-100 h)通氣量O. 53 vvm。發(fā)酵前期(0-76 h)攪拌速度為180 rpm,發(fā)酵后期(76-100 h)攪拌速度150 rpm。發(fā)酵培養(yǎng)100 h后,用管式離心機(jī),進(jìn)行菌液 離心分離，菌絲體于55 °C烘干，并制成菌絲體干粉。
3)蛹草擬青霉液體發(fā)酵菌絲體干粉的制備將活化后的蛹草擬青霉 (.Paecilomyces mi Ii tar is)(蛹草擬青霉有機(jī)代謝產(chǎn)物的合成特點及生理作用，福建師范 大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2012，28 (4):111 — 114)菌塊在無菌條件下接種到裝有150mL 馬鈴薯葡萄糖蛋白胨液體培養(yǎng)基(配方200 g/L馬鈴薯浸汁，葡萄糖20 g/L，蛋白胨3 g/L)的20瓶三角瓶(250mL)中，然后將其放置搖床振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為230 r/min，28 °C恒溫培養(yǎng)5 d,制成種子液3 L0將3 L蛹草擬青霉種子液接種到50 L發(fā)酵罐，發(fā)酵罐裝30 L 馬鈴薯葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(配方200 g/L馬鈴薯的浸汁，葡萄糖30 g/L，蛋白胨5 g/L), 28 °C ,通氣量10-15 L/min，壓力O.1 MPa下發(fā)酵培養(yǎng)3 d，管式離心機(jī)，進(jìn)行菌液離心分離，菌絲體于55 °C烘干，并制成菌絲體干粉。
實施例2采用過濾循環(huán)水系統(tǒng)進(jìn)行南美白對蝦養(yǎng)殖實驗，每個養(yǎng)殖水箱的規(guī)格為50 X 80 cm。設(shè) 3個實驗組和一個對照組，每組設(shè)3個重復(fù)(每個養(yǎng)殖水箱為I個重復(fù))，投放100尾南美白對蝦(已在大池生長30天、平均體重為O. 23g左右)。3個實驗組分別投喂添加5%中華被毛孢、古尼擬青霉和蛹草擬青霉液體發(fā)酵菌絲體干粉的基礎(chǔ)飼料(由福建大昌生物科技實業(yè)有限公司提供，主要成分為粗蛋白41 %、粗脂肪5%、粗纖維4%、粗灰分16%)，對照組投喂基礎(chǔ)飼料。日投餌率增加10%，分上午和下午投喂2次。每天中午用過濾循環(huán)水機(jī)循環(huán)2-4 h，凈化水質(zhì)，每周換一半水桶內(nèi)的水。實驗期間水溫在24. 5 - 28. 9 °C之間，24 h充氣。經(jīng)過30天養(yǎng)殖，分別測定各組每個重復(fù)的對蝦重量、體長、出肉率、成活率和飼料系數(shù)(表I)。 結(jié)果表明，在基礎(chǔ)飼料中添加5%中華被毛孢、古尼擬青霉和蛹草擬青霉液體發(fā)酵菌絲體干粉的實驗組對蝦各生長指標(biāo)比對照組顯著改善。飼料中添加中華被毛孢菌絲粉的實驗組對蝦的增長率、出肉率、成活率和飼料系數(shù)顯著改善；飼料中添加古尼擬青霉菌絲粉的實驗組對蝦的增重率、增長率、成活率和飼料利用率顯著提高；添加蛹草擬青霉菌絲粉的實驗組對蝦的增長率、出肉率和飼料利用率也顯著提高。
表I蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為飼料添加劑對南美白對蝦生長的影響
權(quán)利要求
1.蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用，其特征在于所述蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體為中華被毛孢sinensis)液體發(fā)酵菌絲體、古尼擬青霉 {Paecilomyces gunnii )液體發(fā)酵菌絲體或蛹草擬青霉 i/iiaris)液體發(fā)酵菌絲體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用,其特征在于，所述蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體的制備如下O中華被毛孢液體發(fā)酵菌絲體的制備中華國被毛孢菌種活化后，接種于液體培養(yǎng)基中，于溫度為17°C ±3，進(jìn)行搖床或發(fā)酵罐培養(yǎng)一定時間，收集菌絲體，干燥后制成干粉；2)古尼擬青霉液體發(fā)酵菌絲體的制備古尼擬青霉菌種活化后，接種于液體培養(yǎng)基，于溫度為23°C — 30°C，進(jìn)行搖床或發(fā)酵罐培養(yǎng)一定時間，收集菌絲體，干燥后制成干粉；3)蛹草擬青霉的液體發(fā)酵菌絲體的制備蛹草擬青霉菌種活化后,接種于液體培養(yǎng)基, 于溫度為23°C — 30°C，進(jìn)行搖床或發(fā)酵罐培養(yǎng)一定時間，收集菌絲體，干燥后制成干粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用,其特征在于，所述液體培養(yǎng)基的配方2000 - 300 g/L馬鈴薯浸汁，葡萄糖10 — 40 g/L，蛋白胨1- 20 g/L，酵母膏 0 — 10 g/L，水 1L，121 °C高溫滅菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體作為對蝦飼料添加劑的應(yīng)用，屬于飼料技術(shù)領(lǐng)域。所述蟲生真菌液體發(fā)酵菌絲體為中華被毛孢(Hirsutella sinensis)液體發(fā)酵菌絲體、古尼擬青霉(Paecilomyces gunnii)液體發(fā)酵菌絲體或蛹草擬青霉(Paecilomyces militaris)液體發(fā)酵菌絲體。用以提高南美白對蝦成活率、增重率和飼料利用率等生長指標(biāo)及增強(qiáng)免疫力。本發(fā)明可提高南美白對蝦的成活率、增重率和飼料利用率等生長指標(biāo)，并提高免疫力。
文檔編號A23K1/18GK103039739SQ201210556728
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者鄭永標(biāo), 林崗, 黃建忠, 黃楊 申請人:福建師范大學(xué)