去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的制作方法
【專利摘要】公開了用于脫除流體的免疫球蛋白和白細(xì)胞的裝置、系統(tǒng)和方法。用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的方法包括：（a）將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)；和，（b）將生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
【專利說明】去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞
[0001]相關(guān)申請的交叉參考
[0002]本專利申請是2011年2月28日提交的共同未決的U.S.專利申請N0.13/036, 169的部分繼續(xù)，將其按引用并入。
發(fā)明背景
[0003]血液和血液成分中不合需要的物質(zhì)(如，白細(xì)胞、免疫球蛋白和細(xì)胞因子)的存在可以在接受輸血的病人中導(dǎo)致不利影響。例如，白細(xì)胞污染的輸血與發(fā)燒反應(yīng)、異源免疫、移植對宿主疾病和輸入的紅細(xì)胞或血小板的排斥相關(guān)。免疫球蛋白的輸入與例如輸血相關(guān)的急性肺損傷(TRALI)相關(guān)，其是U.S.輸血相關(guān)死亡的最常見誘因。
[0004]盡管使用白細(xì)胞脫除(depletion)濾器可以除去白細(xì)胞，但用于除去免疫球蛋白的常規(guī)技術(shù)涉及勞動密集型和試劑密集型的工作，如將PH控制至非常高或非常低的水平、特定的鹽條件和流速的小心控制。這樣的技術(shù)與處理用于輸入病人體內(nèi)的血液和血液成分不相適。
[0005]本發(fā)明提 供了改善至少一些現(xiàn)有技術(shù)缺陷的方法。從以下所示的描述將清楚本發(fā)明的這些和其他優(yōu)勢。
[0006]發(fā)明簡述
[0007]本發(fā)明的一個實(shí)施方案提供了用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的裝置，該裝置包括生物流體容器，其中含有免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)。
[0008]在另一個實(shí)施方案中，提供了一種生物流體濾器裝置，該裝置包括外殼和放置在外殼中的穿過流體流動路徑的多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，所述外殼包括進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，該裝置進(jìn)一步包括用于接收免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室。
[0009]在另一個實(shí)施方案中，提供了一種用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括(a)生物流體容器，其中含有免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)；和，(b)白細(xì)胞脫除裝置，其包括外殼，所述外殼具有進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，并且在進(jìn)口和出口之間并穿過流體流動路徑放置了多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器；其中白細(xì)胞脫除濾器是生物流體容器的下游并且與生物流體容器流動連通。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，一種用于處理生物流體的方法包括脫除流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞，在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括將脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體提供給患者，優(yōu)選，哺乳動物。
[0011]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方案的用于處理生物流體的方法包括將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)；并且，將生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，來獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0012]在用于處理生物流體的方法的另一個實(shí)施方案中，該方法包括將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，以獲得脫除了免疫球蛋白的生物流體；并且，將脫除了免疫球蛋白的生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0013]在另一個實(shí)施方案中，提供了一種生物流體產(chǎn)品，其中根據(jù)本發(fā)明，該產(chǎn)品已經(jīng)脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞。優(yōu)選，該產(chǎn)品適于用作輸血產(chǎn)品，例如，用于人和動物，如馬。
[0014]附圖的幾個視圖的簡述
[0015]圖1是根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)的一個實(shí)施方案的圖解說明，其包括用于接收生物流體的第一個容器和第一個容器的下游，第一個容器含有免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)，第一個容器的下游是包括免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)室(用于接收從第一個容器通過的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì))的濾器裝置和包括白細(xì)胞脫除元件的白細(xì)胞脫除濾器，該系統(tǒng)進(jìn)一步包括用于接受脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體的第二個容器，其中第二個容器是濾器裝置的下游。
[0016]圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明的濾器裝置的一個實(shí)施方案的視圖(用于圖1中所示系統(tǒng)的實(shí)施方案中)，其中濾器裝置包括進(jìn)口、出口和內(nèi)環(huán)，并且該裝置包括用于接收免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室，以及包括白細(xì)胞脫除過濾元件的白細(xì)胞脫除濾器。圖2A顯示了裝配裝置的截面?zhèn)纫晥D；圖2B顯不了進(jìn)口部分和出口部分的各種視圖。
[0017]圖3是根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)的一個實(shí)施方案的圖解說明，其包括用于接收生物流體的第一個容器和第一個容器的下游，第一個容器包括其中含有免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的網(wǎng)袋，第一個容器的下游是包括白細(xì)胞脫除濾器的濾器裝置，該系統(tǒng)進(jìn)一步包括用于接收脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體的第二容器，其中第二個容器是濾器裝置的下游。
[0018]圖4是根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)的另一個實(shí)施方案的圖解說明，其包括用于接收生物流體的第一個容器，第一個容器包括排列的含有免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的濾器和白細(xì)胞脫除過濾元件，以提供用于免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室，該系統(tǒng)進(jìn)一步包括用于接收脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體的第二個容器。
[0019]發(fā)明詳述
[0020]有利地，根據(jù)本發(fā)明，可以在pH和鹽濃度的生理?xiàng)l件下，去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞，所述生理?xiàng)l件與血液和血液成分(如血漿、紅細(xì)胞和血小板(如,血小板濃縮物)的正常生理功能相適。其他優(yōu)點(diǎn)是可以實(shí)施本發(fā)明而不需要將吸附劑材料填充至特定色譜柱中的勞動密集型嘗試，并且不需要特定的設(shè)備來控制流速或結(jié)合動力學(xué)。此外，生物流體可以在相對短的時間段內(nèi)脫除免疫球蛋白和白細(xì)胞，例如，約I小時或更短，優(yōu)選，約45分鐘或更短。
[0021 ] 根據(jù)本發(fā)明，各種免疫球蛋白可以結(jié)合免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)，例如，完整的免疫球蛋白，包括單克隆和多克隆抗體，及其重鏈和/或輕鏈和/或其片段，例如，F(xiàn)ab、F(ab’)2、Fc^PF-特別地，可以結(jié)合IgG。替換地，或另外地，以下任一種中的一種或多種:IgA、IgM、IgD和IgE。替換地或另外地，在一些實(shí)施方案中，其他不需要的材料，例如，細(xì)胞因子和/或病原體(例如，朊病毒)，可以結(jié)合介質(zhì)并除去。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方案，一種用于處理生物流體的方法包括脫除流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞并且獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體；在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括將脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體給予患者，優(yōu)選，哺乳動物。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明的另一個實(shí)施方案，提供了一種用于從生物流體中去除免疫球蛋白和白細(xì)胞的方法，該方法包括(a)將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)；和，(b)將生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0024]在另一個實(shí)施方案中，一種用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的方法包括(a)將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，以獲得脫除了免疫球蛋白的生物流體；和(b)將脫除了免疫球蛋白的生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0025]在另一個實(shí)施方案中，一種用于降低或防止馬的紅細(xì)胞溶血的方法包括從母馬獲得生物流體或初乳，脫除生物流體或初乳中的免疫球蛋白和白細(xì)胞，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體或脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的初乳，并且將脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體或脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的初乳給予馬駒。
[0026]優(yōu)選，免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)包含珠子，并且該方法的一個實(shí)施方案包括將生物流體接觸柔性容器中的珠子，所述柔性容器如柔性血袋。
[0027]在一個實(shí)施方案中，該方法包括將來自柔性血袋的生物流體通過濾器裝置，所述濾器裝置包括外殼，所述外殼具有進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，其中將多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器置于外殼中并穿過流體流動路徑。
[0028]該方法的一個實(shí)施方案包括隨著生物流體通過裝置，將珠子留在濾器裝置的珠子接收室中?；蛘?，該方法的一個實(shí)施方案包括隨著生物流體從血袋流向?yàn)V器裝置，將珠子留在柔性血袋中，所述柔性血 袋包括保留珠子的多孔元件。
[0029]在該方法的一些實(shí)施方案中，將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)還包括將生物流體接觸細(xì)胞因子特異性結(jié)合介質(zhì)，并且脫除生物流體中的免疫球蛋白和至少一種細(xì)胞因子。
[0030]在另一個實(shí)施方案中，用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的裝置包括其中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器的生物流體容器。在裝置的一個實(shí)施方案中，生物流體容器包括具有壁的柔性容器，所述壁包括柔性膜，并且排列多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)，以提供具有至少一個封閉端的中空結(jié)構(gòu)，所述中空結(jié)構(gòu)中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)。
[0031]根據(jù)本發(fā)明另一個實(shí)施方案的濾器裝置包括外殼，內(nèi)環(huán)，和白細(xì)胞脫除濾器，所述外殼包括進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，白細(xì)胞脫除濾器包括置于外殼中并穿過流體流動路徑的白細(xì)胞脫除過濾元件，白細(xì)胞脫除濾器具有面對進(jìn)口的上游表面，和面對出口的下游表面，該裝置進(jìn)一步包括用于接收免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的上游室，該室具有由內(nèi)環(huán)限定的側(cè)壁，其中將室進(jìn)行排列，以接收通過進(jìn)口的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)。在一個實(shí)施方案中，該裝置進(jìn)一步包括多孔元件，如網(wǎng)或篩元件，這是白細(xì)胞脫除過濾元件的上游表面的上游，例如，其中網(wǎng)或篩元件提供了用于接收免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室的底壁。例如，可以將網(wǎng)或篩元件插入內(nèi)環(huán)和白細(xì)胞脫除濾器裝置的上游表面之間。
[0032]可替換地或另外地，在裝置的一些實(shí)施方案中，將內(nèi)環(huán)進(jìn)行排列，使得接收的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)在外殼內(nèi)形成填充柱樣基質(zhì)。
[0033]根據(jù)系統(tǒng)的一個實(shí)施方案的用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的系統(tǒng)包括(a)生物流體容器，其中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)；和6)白細(xì)胞脫除裝置，其包括外殼，所述外殼具有進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，該裝置還具有置于進(jìn)口和出口之間并穿過流體流動路徑的多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器；其中白細(xì)胞脫除裝置是生物流體容器的下游，并且與生物流體容器流體連通。
[0034]在另一個實(shí)施方案中，提供了一種生物流體產(chǎn)品，其中根據(jù)本發(fā)明，生物流體已經(jīng)脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞。優(yōu)選，該產(chǎn)品(例如，包含以下任一種中的一種或多種:紅細(xì)胞、血小板和血衆(zhòng))適于用作輸血產(chǎn)品，例如，用于人和動物，如馬。
[0035]在另一個實(shí)施方案中，提供了一種初乳產(chǎn)品，其中根據(jù)本發(fā)明，初乳已經(jīng)脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞。優(yōu)選，該產(chǎn)品適用于給予動物，如馬。
[0036]裝置和系統(tǒng)的實(shí)施方案適用于各種應(yīng)用，包括將生物流體給予人和動物，并且測試生物流體的相容性。生物流體可以來自各種來源，優(yōu)選哺乳動物。優(yōu)選哺乳動物是食肉目，包括貓科(貓)和犬科(狗)，更優(yōu)選來自偶蹄目，包括?？?母牛)和豬科(豬)或奇蹄目，包括馬科(馬)。例如，本發(fā)明的實(shí)施方案可以用于處理給予馬的生物流體，例如，用于防止或減少紅細(xì)胞裂解，例如，防止或減少馬駒中的新生兒同種溶血病(isoerythrolysis)。
[0037]通常，哺乳動物是靈長目、Ceboids或Simoids (猴)或類人目(人和猿)。尤其優(yōu)選的哺乳動物是人。[0038]現(xiàn)在將更詳細(xì)地描述本發(fā)明的每一個組成部分，其中相同的組成部分具有相同的參照號。
[0039]根據(jù)本發(fā)明使用以下定義。
[0040]生物流體。生物流體包括與活的生物體相關(guān)的任何處理過的或未處理過的流體，特別是血液，包括全血、溫血或冷血、臍血和存儲的或新鮮的血液；處理過的血液，如用至少一種生理溶液稀釋過的血液，所述生理溶液包括但不限于，鹽水、營養(yǎng)物和/或抗凝液；血液成分，如血小板濃縮物(PC)、富含血小板血漿(PRP )、低血小板血漿(PPP )、無血小板血漿、血漿、新鮮冷凍血漿(FFP)、從血漿獲得的成分、壓積紅細(xì)胞(PRC)、過渡區(qū)材料或血沉棕黃層(BC);源自血液或血液成分或源自骨髓的血液產(chǎn)品；干細(xì)胞；從血漿分離并重懸浮于生理流體或防凍流體中的紅細(xì)胞；以及從血漿分離并重懸浮于生理流體或防凍流體中的血小板。生物流體還包括含有骨髓吸出物的生理溶液。在根據(jù)本發(fā)明處理前，生物流體可以已經(jīng)經(jīng)過處理去除了一些白細(xì)胞。如本文中所用的，血液制品或生物流體指的是上述成分，并且通過其他方法獲得的并具有相似特性的相似血液制品或生物流體。
[0041]“單位”是來自供體或源自一個單位的全血的生物流體的量。也可以指在單次捐獻(xiàn)過程中抽取的量。通常，單體體積不同，病人與病人之間以及捐獻(xiàn)與捐獻(xiàn)之間的含量不同。可以合并或結(jié)合一些血液成分的多個單位，特別是血小板和血沉棕黃層，通常通過結(jié)合四個或更多個單位來完成。
[0042]如本文中所用的，術(shù)語“閉合的”指的是可以收集和處理(并且，如果需要，操作，例如，分離一部分、分離成各種成分、過濾、存儲和防腐)生物流體(例如，供體血、血樣和/或血液成分)的系統(tǒng)，而不需要損害系統(tǒng)的無菌完整性。閉合系統(tǒng)可以是最初制得的，或使用稱為“無菌碼頭(docking)”裝置連接系統(tǒng)組成部分而成的。說明性的無菌碼頭裝置公開于例如 U.S.專利 4，507，119,4, 737，214 和 4，913，756 中。
[0043]各種免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)是本領(lǐng)域已知的，并且根據(jù)本發(fā)明可以使用。結(jié)合介質(zhì)可以是任何合適的材料，限制在于材料基本上沒有不利地影響產(chǎn)品(例如，輸血產(chǎn)品)中所需的生物流體成分或所需的初乳成分。例如，關(guān)于生物流體，結(jié)合介質(zhì)基本上沒有不利地影響以下的一種或多種:紅細(xì)胞、血小板、血漿和血漿蛋白。關(guān)于初乳，在結(jié)合介質(zhì)去除免疫球蛋白的同時，結(jié)合介質(zhì)基本上沒有影響非免疫球蛋白初乳蛋白。優(yōu)選，介質(zhì)包括大致為球形的吸附劑顆粒，如珠子，例如，有機(jī)材料，如纖維素、淀粉、瓊脂、葡聚糖或瓊脂糖(例如，包括Sepharose?);親水性合成聚合物，包括取代或未取代的聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯親水性聚合物，如聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚砜，以及共聚物或苯乙烯和二乙烯基苯，及其混合物?；蛘撸梢允褂脽o機(jī)材料，包括，但不限于，礦物材料，如硅石；含水凝膠硅石、氧化鋯、氧化鈦、氧化鋁；和其他陶瓷材料。還可以使用這些材料的混合物，或通過共聚作用形成的復(fù)合材料，或其他類型的珠子，盡管也可以使用纖維介質(zhì)和膜。吸附劑顆?？梢岳缬捎H水性樹脂、疏水性樹脂、離子交換樹脂或活性碳制得。
[0044]在其中結(jié)合介質(zhì)是吸附劑顆粒的那些實(shí)施方案中，顆粒，例如，珠子，優(yōu)選是多孔的。珠子，特別是多孔珠子，可以具有高表面積，例如，至少約40m2/g至約700m2/g，盡管在一些實(shí)施方案中，表面積可以小于約40m2/g或大于約700m2/g。通常，多孔珠子具有至少約5m2/g的表面積。顆?？梢允侨魏魏线m的直徑。通常，顆粒為約500微米(μ m)直徑或更小，更常見地，約150微米直徑或更小，例如，在約10微米至約500微米直徑的范圍內(nèi)。如果需要，在將生物流體接觸顆粒之前，可以將顆粒潤濕，例如，通過用以下任一種中的一種或多種來潤濕顆粒:緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖鹽水(PBS))、抗氧化劑(例如，降低對所需生物流體成分，例如，紅細(xì)胞的氧化損傷，合適抗氧化劑的一個實(shí)例是N-乙?；?半胱氨酸(NAC)，例如，約I至約50nm的范圍)、紅細(xì)胞添加劑溶液和血小板添加劑溶液。
[0045]通常，在其中結(jié)合介質(zhì)是吸附劑顆粒并且待處理一個單位的生物流體的那些實(shí)施方案中，使用約2至約500g顆粒。
[0046]結(jié)合介質(zhì)通常是經(jīng)過處理或修飾的，例如，使用各種官能團(tuán)(例如，離子、疏水、酸性、堿性)和/或連接配體，例如，以提供所需的結(jié)合特異性。在一個說明性的實(shí)施方案中，吸附劑顆粒介質(zhì)包括4-巰基-乙基-吡啶(4-MEP ) HyperCeI?色譜吸附劑(Pal ICorporation,NY);在其他說明性實(shí)施方案中，吸附劑顆粒介質(zhì)包括苯丙胺(PPA)HyperCel?色譜吸附劑(Pall Corporation, NY);或具有與其連接的蛋白A和/或蛋白G的色譜吸附劑、羥磷灰石HA UltrOgel?、基于三嗪的蛋白A、擬晶(PiOmetic)和/或按照國際公開 N0.W02005/07371U 國際公開 N0.W02004/024318 ；U.S.專利 6，498，236 或 U.S.專利7，144，743中所述制備的介質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，可以使用化學(xué)物質(zhì)的組合。
[0047]通常，盡管顆粒保留在容器中(例如，保留在網(wǎng)或篩袋或小袋中，或容器可以包括多孔元件，如網(wǎng)或篩，防止顆粒通過容器的出口)，或在過濾元件的空腔內(nèi)，或在濾器裝置的室內(nèi)，但單獨(dú)的顆粒是松散的，沒有通過結(jié)合基質(zhì)而被固定。然而，在一些實(shí)施方案中，通過結(jié)合基質(zhì)將顆粒固定。
[0048]各種多孔白細(xì)胞脫除濾器、多孔白細(xì)胞脫除過濾元件和多孔白細(xì)胞脫除介質(zhì)適用于本發(fā)明中。在一個說明的實(shí)施方案中，多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器包括至少一種多孔纖維狀白細(xì)胞脫除元件，其含有至少一種多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)，其中該介質(zhì)可以包含一層或多層介質(zhì)。濾器可以包括多個過濾元件。濾器可以包括其他元件、層或組成部分，其可以具有不同的結(jié)構(gòu)和/或功能，例如，預(yù)過濾、支撐、排泄、間隔和緩沖中的一種。說明性地，濾器還可以包括至少一個其他元件，如網(wǎng)和/或篩。
[0049] 可以使用各種材料，包括合成聚合材料，來產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的過濾元件的纖維狀多孔介質(zhì)。合適的合成聚合材料包括，例如，聚對苯二甲酸丁二酯(PBT)、聚乙烯、聚乙烯對苯二甲酸酯(PET)、聚丙烯、聚甲基戊烯、聚偏二氟乙烯、聚砜、聚醚砜、尼龍6、尼龍66、尼龍6T、尼龍612、尼龍11和尼龍6共聚物，其中更優(yōu)選聚酯，例如PBT和PET。通常，從熔噴的纖維制備纖維狀多孔介質(zhì)。例如，U.S.專利4，880，548 ;4，925，572，5，152，905和6，074，869，公開了從熔噴的纖維制得的多孔過濾元件。
[0050]過濾元件可以具有任何所需的臨界潤濕表面張力(CffST，如例如U.S.專利N0.4，925，572中所限定的)?？梢园凑毡绢I(lǐng)域已知的來選擇CWST，例如，如例如在U.S.專利5，152，905,5, 443，743,5, 472，621和6，074，869中另外公開的。通常，過濾元件具有高于約53達(dá)因/cm (約53Xl(T5N/cm)的CWST，更常見為高于約58達(dá)因/cm (約58X 10-5Ν/cm)，并且可以具有約66達(dá)因/cm (約66 X 10_5N/cm)或更高的CWST。在一些實(shí)施方案中，元件可以具有約62達(dá)因/cm至約115達(dá)因/cm (約62至約162 X l(T5N/cm)的CWST。
[0051]在一些實(shí)施方案中，至少一個過濾元件在生理pH (例如，約7至約7.4)下具有負(fù)ζ電勢。例如，過濾元件在生理PH下可以具有約-3毫伏(mv)的ζ電勢，或ζ電勢可以為更大的負(fù)值，例如，在約_5mv至約-25mv的范圍中。[0052]可以通過濕或干氧化、通過在表面上涂覆或沉積聚合物，或通過接枝反應(yīng)，來修飾過濾元件的表面特征(例如，以影響CWST、包括表面電荷，例如，正或負(fù)電荷，和/或改變表面的極性或親水性)。修飾包括，例如，輻射、極性或帶電的單體、用帶電的聚合物涂覆和/或固化表面以及進(jìn)行化學(xué)修飾，以在表面上連接官能團(tuán)?？梢酝ㄟ^暴露于能源，如氣體等離子體、蒸汽等離子體、電暈放電、熱、范德格萊夫發(fā)生器、紫外光、電子束，或通過暴露于各種其他輻射形式，或通過使用等離子體處理的表面蝕刻或沉積，來實(shí)現(xiàn)接枝反應(yīng)。
[0053]過濾元件可以具有任何合適的孔結(jié)構(gòu),例如,孔大小(例如，如通過泡點(diǎn)，或通過Klj所顯示的，例如，U.S.專利4，340，479中所述的，或通過毛細(xì)管冷凝流動孔隙測量法所顯示的)、孔等級、孔直徑(例如，使用例如U.S.專利4，925，572中所述的改良OSU F2測試表征時)，或降低或允許一種或多種目標(biāo)材料隨著流體通過元件通道的去除率。盡管認(rèn)為主要通過吸附來去除白細(xì)胞，但也可以通過過濾來去除?？梢赃x擇孔結(jié)構(gòu)，以去除至少一些水平的白細(xì)胞，同時使所需的成分通過那里，例如，血漿、血小板和紅細(xì)胞中的至少一種。所用的孔結(jié)構(gòu)取決于待處理的流體的組成和所需的處理過的流體的流出物水平。
[0054]過濾元件可以具有多種構(gòu)造，例如，基本上平的、波紋狀的、圓柱狀的、中空圓柱狀的、小袋樣、袋樣、短襪樣，或這些構(gòu)造的組合。在一個實(shí)施方案中，如以下更詳細(xì)描述的，以具有封閉端和開口端的小袋、袋、短襪或管的一般形式來安置至少一個過濾元件(例如，其中導(dǎo)管通過開口端，而過濾元件密封，使得流體通過導(dǎo)管進(jìn)入濾器)。
[0055]在包括多個過濾兀件的一些實(shí)施方案中，濾器通常置于外殼中，所述外殼包括至少一個進(jìn)口和至少一個出口并且限定了進(jìn)口和出口之間至少一個流體流動路徑，其中濾器穿過流體流動路徑，以提供濾器裝置。在一些實(shí)施方案中，濾器裝置包括免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)接收室?？商鎿Q地，或另外地，免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)可以安置在外殼中。優(yōu)選，濾器裝置是可滅菌的?？梢允褂萌魏魏线m形狀的并且提供至少一個進(jìn)口和至少一個出口的外殼。
[0056]在一些實(shí)施方案中，可以從任何合適的剛性不透性材料制得外殼，包括任何不透性的熱塑材料，其與待處理的生物流體相適。例如，可以從聚合物制得外殼。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，外殼是聚合物，更優(yōu)選透明或半透明的聚合物，如丙烯酸樹脂、聚丙烯樹脂、聚苯乙烯樹脂或聚碳酸化樹脂。這樣的外殼可以容易地和經(jīng)濟(jì)地制造，并且可以觀察生物流體通過外殼的流動。合適的外殼包括，但不限于，U.S.專利4，880，548,4, 25，572,5, 660，731和6，231,770中公開的那些。
[0057]在一些實(shí)施方案中，如以下更詳細(xì)描述的,外殼進(jìn)一步包括一個或多個免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)截留結(jié)構(gòu)，如至少一個內(nèi)環(huán)和/或支撐物，如篩或網(wǎng)。通常，從外殼相同材料制得內(nèi)環(huán)，例如，丙烯酸樹脂、聚丙烯樹脂、聚苯乙烯樹脂或聚碳酸化樹脂。
[0058]在一個實(shí)施方案中，濾器裝置包括外殼、內(nèi)環(huán)和包含一個或多個過濾元件的生物流體濾器，所述外殼包括進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，優(yōu)選其中至少一個過濾元件包括白細(xì)胞脫除過濾元件，放置于外殼中穿過流體流動路徑，濾器具有面對進(jìn)口的上游表面和面對出口的下游表面，該裝置進(jìn)一步包括用于接收免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的(濾器)上游室，該室具有由內(nèi)環(huán)限定的側(cè)壁，其中將室排列，以接收通過進(jìn)口的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)。
[0059]例如，圖2說明了濾器裝置600 (用于圖1中所示的系統(tǒng)1000中)的一個實(shí)施方案，濾器裝置600包括外殼500，外殼500包括具有進(jìn)口 101、進(jìn)口端口 101a、任選連通進(jìn)口端口 IOla的進(jìn)口通道107的進(jìn)口部分100，具有出口 201、出口端口 201a、任選連通出口端口的出口通道207的出口部分200，和具有內(nèi)側(cè)壁310的內(nèi)環(huán)300，并且外殼限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑。所說明的濾器裝置進(jìn)一步包括白細(xì)胞脫除濾器400，其包括多孔白細(xì)胞脫除元件410，其包括多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)420，其中白細(xì)胞脫除濾器400包括上游表面401和下游表面402，并且將白細(xì)胞脫除濾器400置于外殼中，穿過流體流動路徑。在這個說明的實(shí)施方案中，裝置還包括白細(xì)胞脫除過濾元件400的上游表面401上游的任選多孔元件350 (如網(wǎng)或篩)，網(wǎng)具有上游表面351和下游表面352，其中該裝置進(jìn)一步包括用于接收通過進(jìn)口和進(jìn)口端口的免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)的室150，該室具有由內(nèi)環(huán)300的內(nèi)側(cè)壁310限定的室側(cè)壁155和由網(wǎng)350的上游表面351限定的室底壁175。根據(jù)本發(fā)明，濾器可以包括多個過濾元件，例如，濾器可以包括白細(xì)胞脫除過濾元件上游的預(yù)過濾元件(未顯示)。在其中裝置包括包含白細(xì)胞脫除過濾元件上游的預(yù)過濾元件的濾器并且裝置進(jìn)一步包括網(wǎng)的那些實(shí)施方案中，將網(wǎng)排列在預(yù)過濾元件的上游。
[0060]在圖2中所示的實(shí)施方案中，將環(huán)300插入外殼500的進(jìn)口部分100和外殼的出口部分200之間，提供了室的內(nèi)側(cè)壁，和一部分的外殼外壁?；蛘撸?，環(huán)可以插入進(jìn)口部分的內(nèi)徑部分，其中環(huán)提供了室的內(nèi)側(cè)壁，并且環(huán)沒有提供一部分的外殼外壁。
[0061]外殼可以包括多種構(gòu)造。在圖2B所示的實(shí)施方案中，進(jìn)口部分100包括進(jìn)口部分壁103，其包括內(nèi)表面104，其包括狹槽105，以及多個同心脊106和通道107，其中脊和通道被狹槽隔斷。在這個說明的實(shí)施方案中，狹槽深度有變化，在接近進(jìn)口端口 IOla的末端具有較深的深度，比狹槽的另一端深。相似地，在圖2B中所示的實(shí)施方案中，出口部分與進(jìn)口部分相同，并且出口部分200包括出口部分壁203，其包括內(nèi)表面204，其包括狹槽205，以及多個同心脊206和通道207，其中脊和通道被狹槽隔斷。在這個說明的實(shí)施方案中，狹槽深度有變化，在接近出口端口 201a的末端具有較深的深度，比狹槽的另一端深。
[0062]在該裝置的一些實(shí)施方案中，將內(nèi)環(huán)進(jìn)行排列，使得接收的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)在外殼 內(nèi)的室中形成填充柱樣基質(zhì)。例如，可以基于以下關(guān)于待使用的免疫球蛋白結(jié)合顆粒的一個或多個因素來選擇內(nèi)環(huán)的內(nèi)徑和/或高度，大小、體積和/或表面積，使得通過進(jìn)口的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)被網(wǎng)或篩或白細(xì)胞脫除濾器截留，并且在外殼內(nèi)形成填充柱樣基質(zhì)。
[0063]在另一個實(shí)施方案中，可以使用柔性外殼，例如，柔性容器，優(yōu)選具有至少兩個端口的柔性容器(如，血袋)，并且將至少一個過濾元件和/或免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)置于柔性容器中。
[0064]例如，可以將免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)置于柔性或剛性容器中，使生物流體通過端口進(jìn)入容器中，使生物流體接觸結(jié)合介質(zhì)。生物流體可以接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，持續(xù)任何合適的時間段，例如，但不限于，約30分鐘或更長，幾小時或更長，約24小時或更長，或約2天或更長。結(jié)合介質(zhì)在容器中可以是松散的(例如，在圖1中所示的容器10中是松散的)，或，例如，截留在包含網(wǎng)或孔的小袋中(例如，如圖3中所示，結(jié)合介質(zhì)裝置800包括含有密封小袋850的柔性容器810 (如，血袋)，所述密封小袋850包括網(wǎng)壁，其中含有結(jié)合介質(zhì)的珠子(結(jié)合介質(zhì)未顯示))，網(wǎng)防止介質(zhì)通過小袋，圖3還說明了連接小袋和袋的繩索875)，或容器可以包括允許生物流體從容器通過端口而不允許結(jié)合介質(zhì)通過容器的多孔元件，如篩或網(wǎng)。
[0065]可替換地，或另外地，可以將至少一個過濾元件置于包含至少兩個或多個端口的柔性容器中，至少第一個端口提供進(jìn)口，而至少第二個端口提供出口，其中第一個和第二個端口限定了進(jìn)口和出口之間至少一個流體流動路徑，其中將過濾元件穿過流體流動路徑來放置，以提供濾器裝置。在一個實(shí)施方案中(例如，如圖4中所示，顯示了濾器裝置700，其包括柔性容器710 (如，血袋)，其包含白細(xì)胞脫除過濾元件750，所述元件進(jìn)行排列，以提供用于其中的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室(免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)未顯示))，至少一個過濾元件可以以具有封閉端和開口端的小袋的一般形式來排列，結(jié)合介質(zhì)在小袋的空腔中，并且排列在進(jìn)口端口和出口端口之間的柔性容器內(nèi)，使得生物流體通過進(jìn)口，進(jìn)入小袋的空腔中，使得其接觸結(jié)合介質(zhì)，并且通過包含多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)的過濾元件的封閉端，以及通過出口。在圖4中所示的實(shí)施方案中，導(dǎo)管提供了進(jìn)口 701和進(jìn)口端口 701a，其中導(dǎo)管通過過濾元件750的開口端，并且過濾元件對于導(dǎo)管是密封的，使得生物流體通過導(dǎo)管進(jìn)入小袋的空腔中。從空腔流出通過過濾元件封閉端的流體隨后通過出口 702，并且在所示的實(shí)施方案中，出口沒有連接過濾元件。
[0066]合適的柔性容器可以是裝配的形式，例如，聚合材料，如與形成血袋中所用那些相同或相似的薄膜，如塑化聚氯乙烯、塑化超高分子量PVC樹脂、乙烯丁基丙烯酸酯共聚物(EBAC)樹脂、乙烯甲基丙烯酸酯共聚物(EMAC)樹脂和乙烯醋酸乙烯酯(EVA)。
[0067]如本領(lǐng)域已知的，可以利用例如粘合劑、溶劑、激光焊接、射頻密封、超聲波密封和/或熱密封，來密封外殼(例如，剛性或柔性)。另外地，或可替換地，可以通過注入成型來密封外殼。
[0068]通常，將根據(jù)本發(fā)明的濾器裝置和免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)包括在生物流體處理系統(tǒng)中，例如 ，包括多個導(dǎo)管和容器的系統(tǒng)，所述容器優(yōu)選是柔性容器，如血袋(例如，采集袋和/或附屬(satellite)袋)。生物流體處理系統(tǒng)可以適用于處理初乳。在一個實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的系統(tǒng)包括閉合系統(tǒng)，并且可以處理生物流體，同時保持系統(tǒng)閉合。各種合適的容器和導(dǎo)管是本領(lǐng)域已知的。例如，血液采集袋和附屬袋，以及導(dǎo)管，可以從塑化聚氯乙烯制得。袋子和/或?qū)Ч芤部梢詮睦缫蚁┒』┧狨ス簿畚?EBAC)樹脂、乙烯甲基丙烯酸酯共聚物(EMAC)樹脂、塑化超高分子量PVC樹脂和乙烯醋酸乙烯酯(EVA)制得。袋子和/或?qū)Ч芤部梢詮睦缇巯N、聚氨酯、聚酯和聚碳酸酯制得。
[0069]所述系統(tǒng)的實(shí)施方案可以包括其他組成部分，如本領(lǐng)域已知的，如以下任一種中的一個或多個:容器(優(yōu)選，柔性容器，如血袋)、連接器、取樣裝置(例如，柔性小袋和/或剛性容器)、排風(fēng)口(vent)(例如，氣體進(jìn)口和/或氣體出口)和流動控制裝置(例如，夾鉗和/或串聯(lián)裝置，如傳送分支關(guān)閉裝置和/或閥門)。例如，圖1、3和4中所示系統(tǒng)的實(shí)施方案進(jìn)一步包括取樣袋，足夠的導(dǎo)管長度，用于提供多個用于取樣同時保持閉合系統(tǒng)的片段，血袋
10、20、710和810，以及多個流動控制裝置。使用圖1、3和4中所示的實(shí)施方案，由于在優(yōu)選的實(shí)施方案中，實(shí)施本發(fā)明的同時維持閉合系統(tǒng)，將含有生物流體或初乳的容器例如無菌裝載至生物流體處理系統(tǒng)中，以給容器10 (圖1)、容器810 (圖3)或容器710 (圖4)提供流體連通。在圖3所示的實(shí)施方案中，該系統(tǒng)在結(jié)合介質(zhì)裝置800的下游還包括白細(xì)胞脫除裝置900 (例如，可購得的白細(xì)胞脫除裝置)。另外，圖1和3中所示系統(tǒng)的實(shí)施方案進(jìn)一步包括氣體進(jìn)口 51和氣體出口 52。在包括排風(fēng)口(如，氣體進(jìn)口和/或氣體出口)的那些實(shí)施方案(例如，包括外殼和置于外殼中的至少一個排風(fēng)口元件)中，多種材料適于用作排風(fēng)口材料。合適的元件，包括親水性微孔膜和疏水性多孔膜，以及排風(fēng)口，公開于，例如，U.S.專利N0.5，126，054和5，451，321中。優(yōu)選，當(dāng)根據(jù)閉合系統(tǒng)使用時，氣體進(jìn)口和氣體出口防止細(xì)菌通過那里，例如，氣體進(jìn)口和氣體出口包括具有細(xì)菌阻斷孔等級的排風(fēng)口元件。[0070]本發(fā)明的實(shí)施方案適用于處理生物流體和初乳。在以下的公開內(nèi)容中，盡管提及“生物流體”，但也可以用相同的方式處理初乳。
[0071]根據(jù)本發(fā)明，將生物流體(例如,全血、至少一種血液成分或血液制品)接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，并且通過多孔纖維性白細(xì)胞脫除介質(zhì)。優(yōu)選，免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)包含顆粒。
[0072]通常，將生物流體接觸容器中的顆粒后，將生物流體與顆?；旌希?，通過顛倒含有生物流體和顆粒的容器一次或兩次來混合。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選使用往復(fù)式、軌道、旋轉(zhuǎn)型(包括3-D旋轉(zhuǎn)器)攪拌機(jī)，或轉(zhuǎn)子混合機(jī)，以及搖床設(shè)備，來攪拌容器，因?yàn)槭褂眠@樣的攪拌機(jī)或搖床設(shè)備，特別在延長的時間段內(nèi)，可以導(dǎo)致溶血和/或血小板激活。
[0073]根據(jù)本發(fā)明方法的一個實(shí)施方案，并且使用圖3中所示的示例性系統(tǒng)作為參考，將生物流體接觸免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)，以獲得脫除了免疫球蛋白的生物流體，并且隨后將脫除了免疫球蛋白的生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0074]根據(jù)該方法的另一個實(shí)施方案，并且使用圖4中所示的示例性系統(tǒng)作為參考，免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)在同一容器或外殼中，并且將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，并且通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)，基本上同時獲得了脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0075]在該方法的再另一個實(shí)施方案中，并且使用圖1中所示的示例性系統(tǒng)和圖2中所示的示例性裝置作為參考，將生物流體接觸第一個容器中的免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，并且將生物流體和免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)通過第一個容器，進(jìn)入濾器裝置中，所述濾器裝置包括(a)用于接收免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室和(b)多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)；使得結(jié)合介質(zhì)留在室內(nèi)，而生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
[0076]隨后可以按照本領(lǐng)域已知的來處理根據(jù)本發(fā)明所獲得的脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。因此，可以將脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體進(jìn)行存儲、分析和/或給予患者。
[0077]以下實(shí)施例進(jìn)一步說明了本發(fā)明，但當(dāng)然，不應(yīng)當(dāng)以任何方式解釋為限制其范圍。
[0078]實(shí)施例1
[0079]該實(shí)施例證明了包括其中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)的血袋的裝置去除了全血中的免疫球蛋白和白細(xì)胞。
[0080]準(zhǔn)備了兩種類型的白細(xì)胞脫除濾器，兩種類型都從多層纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)構(gòu)成，其中一般按照U.S.專利4，925，572中所述的來制備介質(zhì)。一種類型的濾器具有6層介質(zhì)，另一種具有 12 層。將約 15 克(4-MEP)HyperGel? 色譜吸附劑(Pall Corporation, NY)置于一疊層的中央，將層折疊并且在邊緣熱封，形成約4英寸寬和約6英寸高的“小袋”，其中將小袋的開口端密封至通過其中的導(dǎo)管的外壁。
[0081]將小袋置于1000mL血袋中，以形成總地如圖4中所示的濾器裝置。
[0082]將一單位的全血與CP2D抗凝劑混合。從該單位分離出兩個90mL部分的血液，并且測定了白細(xì)胞和免疫球蛋白的水平。
[0083]將90mL部分置于濾器裝置中，并且置于搖桿上30分鐘。將處理過的血液轉(zhuǎn)移至另一個血袋中，并且測定了白細(xì)胞和免疫球蛋白的剩余水平。
[0084]在回收的60.5mL的體積中，6層小袋提供了 99.1%的白細(xì)胞減少，94.8%的IgG減少，和64.6%的IgA減少。在回收的45.5mL的體積中，12層茶袋提供了 99.8%的白細(xì)胞減少，94.6%的IgG減少，和70.9%的IgA減少。
[0085]該實(shí)施例證明了含有白細(xì)胞脫除介質(zhì)和免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)的裝置可以提供聞于99%的白細(xì)胞去除和聞于90%的IgG去除。
[0086]實(shí)施例2
[0087]該實(shí)施例證明了包括含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)的血袋和包含免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)室和其中的多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器的下游的濾器裝置的系統(tǒng)去除了壓積紅細(xì)胞(PRC)中的免疫球蛋白和白細(xì)胞，其中濾器裝置還捕獲了通過血袋的免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)。
[0088]獲得了通常如圖2中所示的濾器裝置，其包括3.5英寸直徑的進(jìn)口和出口外殼部分，和可插入外殼部分之間的環(huán)，各自都由聚碳酸酯制得。濾器包括預(yù)過濾元件和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除元件，其中通常按照U.S.專利4，925，572中所述的來制備元件。將35-40微米聚乙烯3.5英寸直徑的篩置于預(yù)過濾元件的頂部，并且在外殼的出口部分和環(huán)之間，濾器和篩被密封。
[0089]將約30克(干重)纖維素珠子，(4-MEP)HyperCel?色譜吸附劑(PaliCorporation, NY)置于1000mL血液轉(zhuǎn)移袋中，接著加入約IOmL磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
[0090] 將AS-3添加劑溶液中的一單位(約350mL)的5天時間的壓積紅細(xì)胞置于袋中，并且將袋置于設(shè)定為60rpm的轉(zhuǎn)子混合器上15分鐘。
[0091]將袋連接濾器裝置，并且在60英寸的落差高度下將紅細(xì)胞重力過濾。珠子被截留在免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)室中，而收集通過裝置的濾過紅細(xì)胞，并且使用流式細(xì)胞計數(shù)器進(jìn)行分析。
[0092]在約320mL的回收體積中，白細(xì)胞含量降低約5.171og (51og=99.999%)，IgG降低約98%，IgA降低約81%，而IgM降低約42%。
[0093]實(shí)施例3
[0094]該實(shí)施例證明了包括含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)的血袋的裝置還去除了壓積紅細(xì)胞中的細(xì)胞因子。因此，例如，如果在白細(xì)胞脫除前存儲生物流體，使細(xì)胞因子水平增加，根據(jù)本發(fā)明一個實(shí)施方案的處理生物流體將去除生物流體中的免疫球蛋白、白細(xì)胞和細(xì)胞因子。
[0095]該實(shí)施例還證明了白細(xì)胞脫除濾器去除了白細(xì)胞，但沒有去除壓積紅細(xì)胞中顯著水平的細(xì)胞因子。
[0096]將兩單位的約22-33天時間的ABO相容的未脫除白細(xì)胞的紅細(xì)胞濃縮物集合在一起，并且分成兩個大約300mL的等份。
[0097]將一個等份無菌連接含有約25-33克(干重)纖維素珠子(4_ (MEP) HyperCel?色譜吸附劑(Pall Corporati on，NY))和約IOmL磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的標(biāo)準(zhǔn)血袋。將紅細(xì)胞與珠子混合約45分鐘，隨后將紅細(xì)胞通過袋子，并分析。
[0098]將另一個等份經(jīng)由60英寸落差高度的重力過濾來通過BPF4?高效白細(xì)胞脫除濾器(Pall Corporation, Port Washington, NY),收集濾過的流體，并分析。
[0099]關(guān)于接觸色譜吸附劑的等份，白細(xì)胞間介素1_β (IL-Ιβ )降低約45.7%，白細(xì)胞間介素-6 (IL-6)降低約26.9%，白細(xì)胞間介素-8 (IL-8)降低約57.1%，而組織壞死因子-a (TNF- α )降低約 49.9%。
[0100]關(guān)于通過白細(xì)胞脫除濾器的等份，白細(xì)胞間介素1-β (IL-Ιβ )基本上沒有降低，白細(xì)胞間介素-6 (IL-6)基本上沒有降低，白細(xì)胞間介素-8 (IL-8)降低約35.0%，而組織壞死因子-a (TNF- α )降低約7.5%。
[0101]實(shí)施例4
[0102]該實(shí)施例證明了可以去除馬血中的免疫球蛋白和白細(xì)胞。
[0103]收集一定體積的馬全血，與CPD抗凝劑混合(500-600mL的血液與約63_70mL的CPD混合)，獲取樣品來測定IgG和白細(xì)胞的預(yù)過濾水平。
[0104]將一些體積的與CPD混合的血液在5000g下離心5分鐘，以制備紅細(xì)胞濃縮物(RCC)，去除了約80%的血漿(通常，制備RCC時去除約90-95%的血漿，存在額外體積的血漿使得存在足量的IgG，用于隨后的分析)，并且將紅細(xì)胞重懸浮于紅細(xì)胞添加劑溶液(AS-3)中。獲取樣品，以測定RCC中IgG和白細(xì)胞的預(yù)過濾水平。
[0105]在一個實(shí)施方案中，將約50mL體積的抗凝全血和約50mL的血漿置于分開的血液轉(zhuǎn)移袋中，每個袋子含有約22克(干重)纖維素珠子((4-MEP)HyperCelTM色譜吸附劑(PallCorporation,NY))和磷酸鹽緩沖鹽水(PBS),并且在血液或血衆(zhòng)通入袋子后,將袋子顛倒一次或兩次。將全血和血漿(以及珠子)的袋子在室溫下保持約60分鐘。將一組全血/血漿袋置于旋轉(zhuǎn)混合機(jī)上，而一組置于實(shí)驗(yàn)臺上，沒有混合，持續(xù)60分鐘。
[0106]在另一個實(shí)施方案中，將約IOOmL的抗凝全血和添加劑溶液中約300mL的RCC置于分開的血液轉(zhuǎn)移袋中，每個袋子含有約33克(干重)纖維素珠子((4-MEP) HyperCel?色譜吸附劑(Pall Corporation, NY))和磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，并且血液或RCC通入袋子中后，將袋子顛倒一次或兩次。在室溫下，將全血和RCC (以及珠子)的袋子置于實(shí)驗(yàn)臺上，沒有進(jìn)一步混合。
[0107]獲得了如實(shí)施例2中所述的濾器裝置，連接至袋子，并將抗凝全血和RCC在約45英寸的落差高度進(jìn)行了重力過濾。珠子被截留在免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)室中，收集通過裝置的濾過血液和紅細(xì)胞，并使用流式細(xì)胞計數(shù)器進(jìn)行分析(關(guān)于殘余的白細(xì)胞)。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和SDS-PAGE分析了 IgG的水平。
[0108]去除了大部分的IgG (使用33克珠子分別去除了全血和RCC中的91.6%和92.8%IgG ;使用22克珠子去除了約95%IgG)，并且使用或未用旋轉(zhuǎn)混合機(jī)混合的結(jié)果相似。全血和RCC中的白細(xì)胞的預(yù)過濾濃度分別為5.23±0.38X103白細(xì)胞/ yL和6.42±1.01X IO3白細(xì)胞/yL。過濾后，濃度分別降至0.04±0.01白細(xì)胞/μ L和0.19±0.25白細(xì)胞/μ L，去除超過99.99%。
[0109]實(shí)施例5
[0110]該實(shí)施例證明了包括含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)的血袋的裝置還去除了壓積紅細(xì)胞中的阮病毒。
[0111]獲得了紅細(xì)胞添加劑溶液(AS-3)中一單位的1-2天時間的紅細(xì)胞濃縮物(RCC)。將約50mL的等滲緩沖鹽水(PBS)中的傳染癢病的倉鼠大腦勻漿(SIHBH)加入約200mL的RCC中，以提供約2%(v/v)的淀粉狀蛋白濃縮物。獲取約20mL的等份來測定RCC中的IgG、白細(xì)胞和淀粉狀蛋白的預(yù)過濾水平。
[0112]將添加劑溶液中的RCC置于含有約30克(干重)纖維素珠子((4-MEP) HyperCel?色譜吸附劑(Pall Corporation, NY),該珠子還具有與其連接的分支聚伯胺，N_(3_氨丙基甲基丙烯酰胺)(ΑΡΜΑ, Polysciences, Warrington, PA))和磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的血液轉(zhuǎn)移袋中，RCC通入袋子中后，將袋子顛倒一次或兩次。在室溫下，將含有珠子和RCC的袋子置于實(shí)驗(yàn)臺約45分鐘，沒有進(jìn)一步的混合。
[0113]獲得了如實(shí)施例2中所述的濾器裝置，將其連接至袋子，并將RCC在約45英寸的落差高度進(jìn)行了重力過濾。珠子被截留在免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)室中，并且收集通過裝置的濾過紅細(xì)胞，并使用流式細(xì)胞計數(shù)器進(jìn)行分析(關(guān)于殘余的白細(xì)胞)。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和SDS-PAGE分析了 IgG和淀粉狀蛋白的水平。
[0114]結(jié)果表明顯著去除了傳染性淀粉狀蛋白(去除超過約90%)，以及顯著去除了 IgA和IgG (各自去除約79%和98%)，以及白細(xì)胞(約去除99.99%)。
[0115]所有參考文獻(xiàn),包括出版物、專利申請和專利,其中引用的,在此并入作為參考至如同每篇參考文獻(xiàn)單獨(dú)和特意表明引入作為參考的相同程度，并且在此將其全部列出。
[0116] 描述本發(fā)明的內(nèi)容中(尤其在以下權(quán)利要求的內(nèi)容中)的術(shù)語“一個(a)”和“一種(an)”和“該(the)”以及相似指代解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非文中另外指出或明顯與內(nèi)容相矛盾。術(shù)語“包含”、“具有”、“包括”和“含有”解釋為開放式術(shù)語(即，表示“包括，但不限于”)，除非另外指出。在此數(shù)值范圍的引用僅僅用來作為單獨(dú)涉及落入范圍內(nèi)的每個分開值的速記方法，除非文中另外指出，并且將每個分開值結(jié)合至說明書中，如同在文中單獨(dú)描述。可以以任何合適的順序進(jìn)行文中所述的所有方法，除非文中另外指出或另外與內(nèi)容明顯相矛盾。文中提供的任一個實(shí)例或示例性語言(例如，“如”)的使用僅僅是用來更好地說明本發(fā)明，并且對發(fā)明的范圍沒有限制，除非另外要求。說明書中沒有語言應(yīng)當(dāng)解釋為表示任何未要求的要素為本發(fā)明實(shí)施必需的。
[0117]文中描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，包括發(fā)明人已知的用于實(shí)施本發(fā)明的最佳方式。在閱讀之前的描述時，那些優(yōu)選實(shí)施方案的變化對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將變得清楚。發(fā)明人預(yù)期本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠按照需要使用這些變化，并且發(fā)明人打算以文中具體描述以外的其他方式來實(shí)施本發(fā)明。因此，本發(fā)明包括適用法律所允許的所附權(quán)利要求中所述主題的所有改變和等價體。此外，本發(fā)明包括其所有可能變化中上述要素的任意組合，除非文中另外指出或另外與內(nèi)容明顯相矛盾。
【權(quán)利要求】
1.一種用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的方法，該方法包括: (a)將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)；和 (b)將生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
2.一種用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的方法，該方法包括: Ca)將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)，以獲得脫除了免疫球蛋白的生物流體；和， (b)將脫除了免疫球蛋白的生物流體通過多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)是珠子。
4.權(quán)利要求3的方法，包括將生物流體接觸柔性容器中的珠子。
5.權(quán)利要求4的方法，包括將生物流體從柔性容器通過濾器裝置，所述濾器裝置包括外殼，所述外殼具有進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，其中將多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器置于外殼中并穿過流體流動路徑。
6.權(quán)利要求5的方法，其中多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器具有上游表面和下游表面，濾器裝置進(jìn)一步包括濾器上游的珠子接收室，該方法包括隨著生物流體通過裝置將珠子截留在裝置中。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的方法，其中將生物流體接觸免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)還包括將生物流體接觸細(xì)胞因子特異性結(jié)合介質(zhì)，其中免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)包括細(xì)胞因子特異性結(jié)合介質(zhì)。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的方法,在維持閉合系統(tǒng)的同時進(jìn)行。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，包括從人獲得生物流體。
10.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，包括從馬哺乳動物獲得生物流體。
11.一種用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的裝置，該裝置包括其中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)的生物流體容器。
12.權(quán)利要求11的裝置，其中生物流體容器包含柔性容器，所述柔性容器具有包括柔性膜的壁，并且其中將多孔纖維狀白細(xì)胞脫除介質(zhì)進(jìn)行排列，以提供具有至少一個閉合端的中空結(jié)構(gòu)，所述中空結(jié)構(gòu)在其中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)。
13.一種濾器裝置，其包括外殼和置于外殼中的穿過流體流動路徑的白細(xì)胞脫除濾器，所述外殼包括進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，所述白細(xì)胞脫除濾器具有面對進(jìn)口的上游表面，和面對出口的下游表面，該裝置進(jìn)一步包括用于接收通過進(jìn)口的免疫球蛋白結(jié)合介質(zhì)的室，該室具有由內(nèi)環(huán)限定的側(cè)壁，其中將室排列在進(jìn)口和白細(xì)胞脫除過濾元件的上游表面之間。
14.權(quán)利要求13的裝置，進(jìn)一步包括網(wǎng)元件，提供了所述室的底壁。
15.一種用于去除生物流體中的免疫球蛋白和白細(xì)胞的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括: (a)生物流體容器，其中含有免疫球蛋白特異性結(jié)合介質(zhì)； (b)白細(xì)胞脫除裝置，其包括外殼和多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器，所述外殼具有進(jìn)口和出口并且限定了進(jìn)口和出口之間的流體流動路徑，并且所述多孔纖維狀白細(xì)胞脫除濾器放置在進(jìn)口和出口之間并穿過流體流動路徑；其中白細(xì)胞脫除裝置是生物流體容器的下游，并且與生物流體容器流體連通。
16.一種用于降低或防止馬的紅細(xì)胞溶血的方法，其包括: Ca)從母馬獲得生物流體或初乳， (b)脫除生物流體或初乳中的免疫球蛋白和白細(xì)胞，以獲得脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體或脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的初乳；和 (C)將脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的生物流體或脫除了免疫球蛋白和白細(xì)胞的初乳給予馬駒。
【文檔編號】A01N1/02GK103929955SQ201280010697
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2012年2月27日 優(yōu)先權(quán)日:2011年2月28日
【發(fā)明者】S·索米莫-庫克 申請人:帕爾公司