新穎的抗真菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及新穎的抗真菌組合物，及其在處理農(nóng)產(chǎn)品中的用途。
【專利說明】新穎的抗真菌組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了控制植物疾病和預(yù)防作物微生物腐敗(spoilage)的新穎的抗真菌組合物。
[0002]發(fā)明背景
[0003]據(jù)估計世界作物產(chǎn)量的約25%由于微生物腐敗而損失，其中真菌導(dǎo)致的腐敗是迄今為止最嚴重的原因。從經(jīng)濟學觀點以及人道主義觀點(humane point)來看，預(yù)防食品腐敗都非常重要。畢竟世界上許多地方的人在遭受饑餓。
[0004]在抵抗植物和作物疾病以及減輕它們對產(chǎn)量和品質(zhì)造成的損傷方面的成功大幅取決于殺真菌劑的及時應(yīng)用。由于抗性現(xiàn)象的發(fā)生，許多殺真菌劑(例如苯并咪唑)的長期和頻繁使用促成了它們有效性的降低。
[0005]一類重要的殺真菌劑是吡唑(pyrazole)。吡唑殺真菌劑吸引了許多工業(yè)公司的注意力。這導(dǎo)致例如以下殺真菌劑的商業(yè)應(yīng)用:用于控制水稻紋枯病(rice sheat blight)的氟吡菌胺(furametpyr),和具有抵抗灰霉、白粉病、蘋果黑星病(apple scab)、銹病(rusts) >Rhizoctonia 和 Botrytis 的活性的吡噻菌胺(penthiopyrad)(見例如 Vicentiniet al.2007) 0在WO 2010/091803中公開了琥珀酸脫氫酶抑制劑如吡噻菌胺、氟吡菌酰胺(fluopyram)、聯(lián)苯吡菌胺(bixafen)和吡唑萘菌胺(isopyrazam)用于延長水果和蔬菜的貨架期和儲存穩(wěn)定性的用途。盡管目前它們對吡唑殺真菌劑具有敏感性，但是存在很高的下述風險:許多真菌會隨時間獲得抵抗這些殺真菌劑的抗性。
[0006]幾十年來,多烯大環(huán)內(nèi)酯抗霉菌劑那他霉素(natamycin)已被用于預(yù)防食品如乳酪和香腸上的真菌生長。通過使用Streptomyces natalensis發(fā)酵生產(chǎn)的這一天然防腐劑在全世界被廣泛用作食物防腐劑，并且在食品工業(yè)中具有安全使用的悠久歷史。在US5，597，598中公開了包含多烯抗真菌化合物、酸性抗真菌化合物和額外的有機酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽用于處理食品和農(nóng)產(chǎn)品的用途。那他霉素針對所有已知的食物腐敗真菌都非常有效。盡管那他霉素在例如乳酪工業(yè)中被應(yīng)用多年，但是迄今為止從未觀察到抗性真菌物種的發(fā)生。
[0007]因此可以得出結(jié)論:對更有效的、更加環(huán)境友好的、低毒性和有害性較低的用于處理植物和作物中的真菌生長和植物和作物上的真菌生長的抗微生物組合物(例如抗真菌組合物)具有嚴重的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明通過提供含有多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的新的協(xié)同抗微生物(例如抗真菌)組合物，解決了上述問題。在本文中使用時，術(shù)語“協(xié)同的”表示組合使用時抗真菌化合物的組合效果大于他們各自使用時的效果之和。
[0009]通常，兩種活性成分的協(xié)同活性可以例如使用處理交互作用層(treatmentinteraction stratum,見SI inker, 1998)在方差分析模型中測試。相對有效性可以通過下式計算:((未經(jīng)處理的對照的進化狀態(tài)值-組合物的進化狀態(tài)值)/ (未經(jīng)處理的對照的進化狀態(tài)值))X 100。然后可以通過下式計算交互作用系數(shù):((化合物A+化合物B的組合的相對有效性)/ (化合物A的相對有效性+化合物B的相對有效性))X 100。大于100的交互作用系數(shù)表示化合物之間的協(xié)同作用。
[0010] 或者可以如下計算協(xié)同作用:可以通過計算與用對照組合物處理的產(chǎn)品上的霉菌生長相比，用活性成分處理的產(chǎn)品上觀察到的霉菌生長的減少，來測定個體活性成分的抗真菌活性(以％計)?？梢愿鶕?jù)Colby方程(Colby，1967)計算包含兩種活性成分的組合抗真菌組合物的預(yù)期抗真菌活性(E，以％計):E = Χ+Υ_[ (X.Y)/100]，其中X和Y分別是個體活性成分X和Y的觀察到的抗真菌活性(以％計)。如果組合的觀察到的抗真菌活性(0，以％計)超出組合的預(yù)期抗真菌活性(Ε，以％計)并且因而協(xié)同因子0/Ε> 1.0，那么活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效應(yīng)。
[0011 ] 在本發(fā)明的一個實施方式中，至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物選自由聯(lián)苯吡菌胺(bixafen)、胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)、氟唑菌酰胺(fIuxapyroxad)、氟批菌胺(furametpyr)、批唑萘菌胺(isopyrazam)、氟唑菌苯胺(penf Iufen)、批噻菌胺(penthiopyrad)、批咪唑(rabenzazole)和環(huán)苯批菌胺(sedaxane)組成的組。在一個實施方式中，組合物可還含有兩種或更多不同的來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物。應(yīng)當理解，來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的衍生物(包括但不限于來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的鹽或溶劑合物)或來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的經(jīng)修飾的形式也可以應(yīng)用在本發(fā)明的組合物中。含有吡唑殺真菌劑例如聯(lián)苯吡菌胺的商業(yè)產(chǎn)品的例子是具有以下商品名的產(chǎn)品:Aviator⑧235 Xpro?和Siltra? Xpro?。所述商業(yè)產(chǎn)品可以被并入本發(fā)明中 。
[0012]在一個實施方式中，多烯抗真菌化合物選自由以下化合物組成的組:那他霉素、制霉菌素(nystatin)、兩性霉素B、三烯菌素(trienin)、意北霉素(etruscomycin)、菲律賓菌素(filipin)、欽氏菌素(chainin)、制皮菌素(dermostatin)、lymphosarcin、殺念珠菌素(candicidin)、金色制霉素(aureofungin) A、金色制霉素B、哈霉素(hamycin)A、哈霉素B和魯斯霉素(Iucensomycin)。在一個優(yōu)選的實施方案中，多烯抗真菌化合物是那他霉素。在一個實施方案中，組合物也可含有兩種或更多種不同的多烯抗真菌化合物。應(yīng)當理解，多烯抗真菌化合物的衍生物(包括但不限于多烯抗真菌化合物的鹽或溶劑合物)或經(jīng)修飾形式的多烯抗真菌化合物也可以在本發(fā)明的組合物中應(yīng)用。含有那他霉素的商業(yè)產(chǎn)品的一個例子是商品名為Delvocid ?的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品由DSM Food Specialties (荷蘭)生產(chǎn)，并且可以是含有例如50% (w/w)那他霉素的固體或是含有例如2-50% (w/v)那他霉素的液體。所述商業(yè)產(chǎn)品可以被并入本發(fā)明的組合物中。
[0013]本發(fā)明的組合物通常包含從約0.005g/l到約100g/l和優(yōu)選地從約0.01g/Ι到約50g/l的多烯抗真菌化合物。優(yōu)選地，所述量為0.01g/Ι到3g/l。
[0014]本發(fā)明的組合物通常包含從約0.0001g/l到約2000g/l和優(yōu)選地從約0.0005g/l到約1500g/l的來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物。更優(yōu)選地，所述量為從0.001g/l到 1000g/l。
[0015]在一個實施方式中，本發(fā)明的組合物還包含至少一種選自下組的額外化合物，所述組由粘著劑(sticking agent)、載劑、著色劑、保護性膠體、粘合劑(adhesive)、除草劑、肥料、增稠劑、掩蔽劑、觸變劑、表面活性劑、其他抗微生物化合物、洗滌劑、防腐劑、鋪展劑、填充劑、噴霧油、流動添加劑、礦物質(zhì)、溶劑、分散劑、乳化劑、濕潤劑、穩(wěn)定劑、消泡劑、緩沖劑、UV-吸收劑和抗氧化劑組成。其他抗微生物抗真菌化合物可以是抗真菌化合物(例如抑霉唑、噻苯達唑或百菌清)，或抵抗昆蟲、線蟲、螨蟲和/或細菌的化合物。當然，根據(jù)本發(fā)明的組合物也可以包含兩種或更多種任何上述額外的化合物。在兩種防抗真菌化合物被分別應(yīng)用的情況下，任何上述額外的化合物也可以與多烯抗真菌化合物和/或至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物組合。在一個實施方式中，額外的化合物是特定用途(例如食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)業(yè))可接受的添加劑。適用于食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)業(yè)的額外的化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
[0016]在一個特定的實施方式中，其他抗微生物化合物是屬于亞磷酸鹽類的天然作物保護化合物，例如KH2PO3或K2HPO3或這兩種亞磷酸鹽的混合物。在本文中使用時，含亞磷酸根的化合物表示包含亞磷酸根即PO3 (以例如H2PO3' HPO32-或PO33-的形式)的化合物，或允許釋放亞磷酸根離子的任何化合物，包括化合物例如亞磷酸和膦酸及其衍生物如酯和/或堿金屬鹽或堿土金屬鹽。在本發(fā)明的組合物包含多烯抗真菌化合物(例如那他霉素)和至少一種含亞磷酸根的化合物的情況下，相對于每克多烯抗真菌化合物，它們優(yōu)選地包含0.1g或更少的木素磺酸鹽(Iignosulphonate),更優(yōu)選地0.1g或更少的多酹。優(yōu)選地，相對于每克多烯抗真菌化合物，它們包含0.01g或更少的木素磺酸鹽，更優(yōu)選地0.01g或更少的多酚。具體地，它們不含木素磺酸鹽，并優(yōu)選地不含多酚。含亞磷酸根的化合物的合適例子是亞磷酸及其(堿金屬或堿土金屬)鹽，例如亞磷酸鉀鹽例如KH2PO3和K2HPO3,亞磷酸鈉鹽和亞磷酸銨鹽，和亞磷酸的(C1-C4)烷基酯及其鹽，例如乙基亞磷酸鋁(乙膦鋁(fosetyl-Al))、乙基亞磷酸鈣、異丙基亞磷酸鎂、異丁基亞磷酸鎂、仲丁基亞磷酸鎂和正丁基亞磷酸鋁。當然，含亞磷酸根的化合物的混合物也包括在內(nèi)。例如KH2POjP K2HPO3的混合物可以通過例如向KH2PO3溶液中添加KOH或K2CO3至5.0-6.0的終pH來容易地獲得。如上文所指出的，作物或植物中被代謝成為亞磷酸鹽/酯化合物的前體-型化合物也可以包括在本發(fā)明的組合物中。其例子是膦酸酯，例如乙膦鋁復(fù)合物。在例如作物或植物中，該分子的膦酸乙基酯部分被 代謝成為亞磷酸鹽/酯。這類化合物的一個例子是被稱作Aliette ?(Bayer,德國)的商業(yè)膦酸氫乙基酯(ethyl hydrogen phosphonate)。組合物中亞磷酸鹽/酯與那他霉素的比例(以重量計)一般在2: I到500: l(w/w)之間，優(yōu)選地在3: I到300: I (w/w)之間，更優(yōu)選地在5: I到200: l(w/w)之間。
[0017]根據(jù)本發(fā)明的組合物可具有從I到10、優(yōu)選地從2到9、更優(yōu)選地從3到8、最優(yōu)選地從4到7的pH。它們可以是固體例如粉末組合物，或者可以是液體。本發(fā)明的組合物可以是水性或非水性的即用型組合物，但是也可以是水性或非水性的濃縮組合物/懸浮液，或在使用前必須用合適的稀釋劑例如水或緩沖體系稀釋的儲存組合物、懸浮液和/或溶液?；蛘?，本發(fā)明的組合物也可以被用于制備涂層乳液。本發(fā)明的組合物也可以具有濃縮干產(chǎn)品(例如粉末、顆粒和片劑)的形式。它們可以被用于制備用于對產(chǎn)品進行浸沒或噴霧的組合物，所述產(chǎn)品例如是農(nóng)產(chǎn)品，包括植物、作物、蔬菜和/或水果。當然，當多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物作為獨立的組合物被施用時，以上也適用。
[0018]在另一個方面中，本發(fā)明涉及包含多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的試劑盒。多烯抗真菌化合物和至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物可存在于兩個獨立的包裝(例如容器)中。試劑盒的組分可以是包裝中的干燥形式或是液體形式。需要時，試劑盒可包含用于溶解化合物的說明書。另外，試劑盒可含有用于應(yīng)用化合物的說明書。
[0019]在另一方面，本發(fā)明涉及通過用多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物處理農(nóng)產(chǎn)品來保護產(chǎn)品抵抗真菌的方法。另外，可以在用多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物處理產(chǎn)品之前、同時或之后，用其他抗真菌和/或抗微生物化合物處理產(chǎn)品?？梢酝ㄟ^多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的順次應(yīng)用來處理產(chǎn)品，或反之亦然。或者，可以通過多烯抗真菌化合物和至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的同時應(yīng)用來處理產(chǎn)品。在同時應(yīng)用的情況下，化合物可存在于被同時應(yīng)用的不同的組合物中，或化合物可存在于單一組合物中。還在另一實施方式中，可以通過應(yīng)用兩種抗真菌化合物的單獨模式或交替模式來處理產(chǎn)品。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及通過對產(chǎn)品應(yīng)用多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物來處理產(chǎn)品的方法。通過應(yīng)用化合物，能夠預(yù)防產(chǎn)品上或產(chǎn)品中的真菌生長。也就是說，化合物保護產(chǎn)品抵抗真菌生長和/或抵抗真菌感染和/或抵抗真菌腐敗?；衔镆部梢员挥糜谔幚硪呀?jīng)感染真菌的產(chǎn)品。通過應(yīng)用化合物，歸因于這些產(chǎn)品上或產(chǎn)品中真菌的疾病發(fā)生可以被減緩、停止，或產(chǎn)品甚至可以從疾病中痊愈。在本發(fā)明的一個實施方式中，用根據(jù)本發(fā)明的組合物或試劑盒處理產(chǎn)品。在一個實施方式中，產(chǎn)品是食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)產(chǎn)品。在一個優(yōu)選的實施方式中，產(chǎn)品是農(nóng)廣品。
[0020] 多烯抗真菌化合物和至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物、根據(jù)本發(fā)明的組合物和根據(jù)本發(fā)明的試劑盒可以通過噴霧被應(yīng)用至產(chǎn)品。適用于將液體形式的這些化合物、組合物和試劑盒應(yīng)用至產(chǎn)品的其他方法也是本發(fā)明的一部分。這些方法包括但不限于，浸潰(dipping)、燒水、浸透(drenching)、引入接收器(dump tank)中、蒸發(fā)、霧化(atomizing)、成霧(fogging)、熏蒸、涂抹、刷抹(brushing)、粉化(dusting)、起泡、鋪展、包裝和涂覆(例如借助于蠟或靜電)。另外，也可以將抗真菌化合物注射進土壤中。使用自動化系統(tǒng)的噴霧應(yīng)用已知降低人力成本并且是成本有效的。為此目的可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法和設(shè)備。感染風險較高時，根據(jù)本發(fā)明的組合物也可以定期噴霧。感染風險較低時，噴霧間隔可以更長。取決于應(yīng)用的類型，應(yīng)用的多烯抗真菌化合物的用量可以從5ppm到10，OOOppm、優(yōu)選地從IOppm到5，OOOppm和最優(yōu)選地從20到1，OOOppm變化。取決于應(yīng)用類型，被應(yīng)用的至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的用量可從IOppm到5，OOOppm、優(yōu)選地從20ppm到3，OOOppm和最優(yōu)選地從50到1，OOOppm變化。
[0021]在一個特定的實施方式中，可以在收獲后處理農(nóng)產(chǎn)品。通過使用多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物，在較長的時間段中實現(xiàn)了收獲后和/或儲存疾病的控制，從而允許在長距離和在溫度與濕度方面具有不同的受控氣氛的多種儲存條件下運輸收獲的農(nóng)產(chǎn)品。收獲后儲存病癥為例如皮孔斑點(lenticel spots)、枯萎(scorch)、衰老性分解(senescent breakdown)、苦陷癥(bitter pit)、褐斑(scald)、水核(water core)、褐化(browning)、維管分解(vascular breakdown)、CO2 損傷、CO2 或 O2不足、和軟化。真菌疾病可例如由以下真菌引起:Mycosphaerella spp.、Mycosphaerellamusae、Mycosphaerella fragariae、Mycosphaerella citri ;毛霉屬的物種(Mucor spp.)，例如 Mucor piriformis ；Monilinia spp.，例如 Monilinia fructigena、Monilinia Iaxa ；擬莖點霉屬的物種(Phomopsis spp.)、Phomopsis natalensis ；Colletotrichum spp.，例如 Colletotrichum musae、 Colletotrichum gloeosporioides、 Colletotrichumcoccodes ；Verticillium spp.， 例如 Verticillium theobromae ；Nigrospora spp.；Botrytis spp.，例如 Botrytis cinerea ；Diplodia spp.，例如 Diplodia citri ；Pezicula spp.；Alternaria spp.，例如 Alternaria citr1、Alternaria alternata ；Septoria spp.，例如 Septoria depressa ；Venturia spp.，例如 Venturia inaequalis、Venturia pyrina ；Rhizopus spp.， 例如 Rhizopus stolonifer、Rhizopus oryzae ；Glomerella spp.，例如 Glomerella cingulata ；Sclerotinia spp.，例如 Sclerotiniafruiticola ；Ceratocystis spp.，例如 Ceratocystis paradoxa ；Fusarium spp.，例如Fusarium semitectum、Fusarium moniliforme、Fusarium solan1、Fusarium oxysporum ；Cladosporium spp.， 例如 Cladosporium fulvum、 Cladosporium cladosporioides、Cladosporium cucumerinum、Cladosporium musae ;青霉菌屬的物種(Penicillium spp.)，例如繩狀青霉菌(Penicillium funiculosum)、擴展青霉菌(Penicillium expansum)、指狀青霉菌(Penicillium digitatum)、意大利青霉菌(Penicillium italicum)；Phytophthora spp.， 例如 Phytophthora citrophthora、Phytophthora fragariae、Phytophthora cactorum、Phytophthora parasitica ；Phacydiopycnis spp.， 例如Phacydiopycnis malirum ；Gloeosporium spp.，例如 Gloeosporium album、Gloeosporiumperennans、Gloeosporium fructigenum、Gloeosporium singulata ；Geotrichum spp.，例如Geotrichum candi dum ；Phlyctaena spp.，例如Phlyctaena vagabunda ；Cylindrocarponspp.，例如 Cylindrocarpon mali ；Stemphyllium spp.，例如 Stemphyllium vesicarium ；Thielaviopsis spp.，例如 Thielaviopsis paradoxy ；曲霉屬的物種(Aspergillusspp.)，例如黑曲霉(Aspergillus niger)、Aspergillus carbonarius ；Nectria spp.，例如 Nectria galligena ；Cercospora spp.，例如 Cercospora angrec1、Cercospora api1、Cercospora atrofiliformis、Cercospora musae、Cercospora zeae—maydis。
[0022]本發(fā)明的另一方面涉及多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物保護產(chǎn)品抵抗真菌的用途。如上文所述，化合物可以順次或同時使用(例如應(yīng)用)。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及一種用途，其中根據(jù)本發(fā)明的組合物或試劑盒被應(yīng)用至產(chǎn)品。在一個實施方式中，產(chǎn)品是食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)產(chǎn)品。在一個優(yōu)選的實施方式中，產(chǎn)品是農(nóng)產(chǎn)品。
[0023]在一個特定的實施方式中，多烯抗真菌化合物和至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物可在藥物中被用于例如治療和/或預(yù)防真菌疾病。多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物可例如以藥物組合物的形式被使用。組合物可還包含藥物可接受的賦形劑?？拐婢衔锟煽诜┯没蚰c胃外施用。組合物的類型取決于施用途徑。
[0024]本發(fā)明的另一個方面涉及用多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物處理的產(chǎn)品。在一個實施方式中，用根據(jù)本發(fā)明的組合物或試劑盒處理產(chǎn)品。本發(fā)明因此涉及包含多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的產(chǎn)品。經(jīng)處理的產(chǎn)品的表面上和/或產(chǎn)品內(nèi)可包含多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物?；蛘撸?jīng)處理的產(chǎn)品可包含涂層，所述涂層包含這些化合物。在一個實施方式中，經(jīng)處理的產(chǎn)品表面上包含從0.0OOOOl到200mg/dm2、優(yōu)選地
0.00001到100mg/dm2、更優(yōu)選地從0.00005到10mg/dm2的多烯抗真菌化合物。在另一個實施方式中，它們在表面上包含從0.000001到200mg/dm2、優(yōu)選地0.00001到100mg/dm2、更優(yōu)選地從0.00005到10mg/dm2的至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物。在一個實施方式中，產(chǎn)品是食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)產(chǎn)品。在一個優(yōu)選的實施方式中，產(chǎn)品是農(nóng)產(chǎn)品。
[0025]在本文中使用時，術(shù)語“食品“應(yīng)當被非常廣義地理解，包括但不限于，乳酪、奶油乳酪、碎乳酪、松軟干酪(cottage cheese)、經(jīng)加工的乳酪、酸奶油、干燥的經(jīng)發(fā)酵的肉制品，包括薩拉米香腸和其他香腸、葡萄酒、啤酒、酸乳、果汁和其他飲料、沙拉醬、松軟干酪醬(cottage cheese dressing)、蘸料、烘焙制品和烘焙填料、表面釉(surface glaze)和糖霜、涂抹醬、披薩餅餡料、糕餅和糕餅填料、橄欖、橄欖鹵水(olive brine)、橄欖油、果汁、番茄泥和番茄糊、作料、和水果漿和其他類似的食品。
[0026]在本文中使用時，術(shù)語“飼料產(chǎn)品”也應(yīng)當非常廣義地理解，包括但不限于寵物食物、肉雞飼料等等。
[0027]在本文中使用時，術(shù)語“藥物產(chǎn)品”也應(yīng)當非常廣義地理解，包括包含活性分子例如藥物、藥劑或藥物化合物和任選地包含藥物可接受的賦形劑的產(chǎn)品，所述賦形劑即與活性分子組合用于制備合適或便利的劑型的任何惰性物質(zhì)。
[0028]在本文中使用時，術(shù)語“化妝品產(chǎn)品”也應(yīng)當非常廣義地理解，包括下述產(chǎn)品，所述產(chǎn)品被用于通過防止水分的蒸騰來保護或治療角質(zhì)組織如皮膚和唇、頭發(fā)和指甲的干燥，并且護理組織以及給予這些組織良好的外觀。術(shù)語“化妝品組合物”涉及的產(chǎn)品包括但不限于保濕霜、個人清潔產(chǎn) 品、閉合的藥物遞送貼片、指甲油、粉、擦拭片、護發(fā)素、皮膚處理乳液、剃須霜等等。
[0029]在本文中使用時，術(shù)語“農(nóng)產(chǎn)品”也應(yīng)當非常廣義地理解，包括但不限于谷物，例如小麥、大麥、裸麥、燕麥、水稻、高粱等等；甜菜，例如糖用甜菜(sugar beet)和飼料甜菜(fodder beet);梨果和核果和漿果，例如蘋果、梨、李子、杏、桃、杏仁、櫻桃、草莓、覆盆子和黑莓；豆科植物，例如豆子、扁豆、豌豆、大豆；油料植物，例如油菜、芥末、罌粟、橄欖、向日葵、椰子、蓖麻植物、可可、花生；葫蘆科，例如南瓜、小黃瓜(gherkins)、甜瓜、黃瓜、倭瓜、爺子；纖維植物，例如棉花、亞麻、大麻、黃麻；柑橘水果，例如橙、檸檬、葡萄柚、蜜桔、枸櫞；熱帶水果，例如木瓜、百香果、芒果、楊桃、菠蘿、香蕉、奇異果；蔬菜，例如菠菜、萵苣、蘆筍、十字花科如卷心菜和蕪菁、胡蘿卜、洋蔥、番茄、馬鈴薯、馬鈴薯種子(seed-potatoe)、尖辣椒(hot pepper)和甜椒；月桂樣植物,例如酪梨、肉桂、樟腦樹；或產(chǎn)品如玉米、煙草、堅果、咖啡、甘蔗、茶、葡萄藤、酒花、橡膠植物、以及觀賞植物例如切花、玫瑰、郁金香、百合、水仙花、藏紅花、風信子、大麗花、大丁草、康乃馨、倒掛金鐘(fuchsias)、菊花和球根花丼(flower bulbs)、灌木、落葉樹和常綠樹例如松柏植物、溫室植物和樹木。其包括但不限于植物及其部分、果實、種子、插條(cuttings)、栽培種、移植物、鱗莖、塊莖、根-塊莖、根莖、切花和蔬菜。
[0030]用于制備本文所述的組合物的方法是本發(fā)明的另一個方面。方法包括向至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物添加多烯抗真菌化合物。化合物可例如被單獨地添加至水性組合物并混合，需要時隨后調(diào)節(jié)pH、粘度等等。如果單獨添加，則單獨的化合物中的一些或全部可以是粉末形式，但是替代性地，一些或全部也可以是液體形式?；衔镆部衫缫苑勰┬问奖槐舜颂砑硬⒒旌?，以獲得粉末組合物。粉末狀的組合物可隨后被添加至水性組合物。
實施例
[0031]實施例1
[0032]收獲前應(yīng)用
[0033]用真菌接種香蕉植物的葉。未經(jīng)接種的葉被包括在內(nèi)作為對照。接著，用組合物I (那他霉素)、組合物2 (聯(lián)苯吡菌胺)、組合物3 (胺苯吡菌酮)、組合物4 (氟唑菌酰胺)、組合物5 (氟吡菌胺)、組合物6 (吡唑萘菌胺)、組合物7 (氟唑菌苯胺)、組合物8 (吡噻菌胺)、組合物9 (吡咪唑)、組合物10 (環(huán)苯吡菌胺)、組合物11 (那他霉素+聯(lián)苯吡菌胺)、組合物12 (那他霉素+胺苯吡菌酮)、組合物13 (那他霉素+氟唑菌酰胺)、組合物14 (那他霉素+氟吡菌胺)、組合物15 (那他霉素+吡唑萘菌胺)、組合物16 (那他霉素+氟唑菌苯胺)、組合物17 (那他霉素+吡噻菌胺)、組合物18 (那他霉素+吡咪唑)或組合物19 (那他霉素+環(huán)苯吡菌胺)處理葉的確定部分。通過噴霧應(yīng)用每種組合物。未經(jīng)處理的葉也包括在內(nèi)(未經(jīng)處理的對照)。
[0034]獲得的結(jié)果顯示本發(fā)明的組合物保護香蕉植物免于真菌生長，還證明與活性化合物各自應(yīng)用時的活性相比，本發(fā)明的組合物顯示協(xié)同增強的活性。
[0035]實施例2
[0036]收獲后應(yīng)用
[0037]根據(jù)de Lapeyre de Bellaire and Dubois (1987)所述方法使香蕉受傷。使用木塞穿孔器對香蕉造成創(chuàng)傷，之后用真菌孢子污染。在室溫下孵育若干小時后，將香蕉浸在以下組合物之一中:a)無處理(對照I)、b)浸在水中(對照2)、c)浸在那他霉素中、d)浸在聯(lián)苯吡菌胺中、e)浸在胺苯吡菌酮中、f)浸在氟唑菌酰胺中、g)浸在氟吡菌胺中、h)浸在吡唑萘菌胺中、i)浸在氟唑菌苯胺中、j)浸在吡噻菌胺中、k)浸在吡咪唑中、I)浸在環(huán)苯吡菌胺中、m)浸在那他霉素+聯(lián)苯吡菌胺中、η)浸在那他霉素+胺苯吡菌酮中、ο)浸在那他霉素+氟唑菌酰胺中、P)浸在那他霉素+氟吡菌胺中、q)浸在那他霉素+吡唑萘菌胺中、r)浸在那他霉素+氟唑菌苯胺中、s)浸在那他霉素+吡噻菌胺中、t)浸在那他霉素+吡咪唑中、u)浸在那他霉素+環(huán)苯吡菌胺中。在該處理后，將香蕉在閉合箱中于21°C和提高的濕度下孵育。每天視覺評價香蕉的真菌發(fā)展。
[0038]結(jié)果顯示與單獨的那他霉素或至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物相比，含有那他霉素和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的組合物更好地保護香蕉抵抗真菌。令人驚訝的是，那他霉素和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的組合應(yīng)用導(dǎo)致感染的強烈的協(xié)同減少。
[0039]實施例3
[0040]處理草莓
[0041]每個處理組使用十個新鮮的、有機的草莓。用0.5mm長的切口對每個草莓造成創(chuàng)傷，用10 μ I含有I X IO5孢子/ml的Botrytis cinerea懸浮液接種每個創(chuàng)口。在20°C下孵育2小時后，在新鮮制備的含有500ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft，荷蘭)、2000ppm聯(lián)苯吡菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個草莓各自浸潰I分鐘?？拐婢M合物還包含3.1% (w/w)蜂蠟、0.76% (w/w)甘油、0.66% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨醇單硬脂酸酯(Tween 60) >0.03% (w/w)甲基輕乙基纖維素(MHEC) >0.02% (w/w)黃原膠、
0.02% (w/w)消泡劑、0.15% (w/w)檸檬酸和0.01% (w/w)山梨酸鉀。組合物的pH為4。使用不含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合物作為對照。將經(jīng)處理的草莓在閉合箱中于暗中和20 °C下孵育。
[0042]在孵育期間，以雙重方式評價草莓上的霉菌生長:(i)計數(shù)每10個草莓總數(shù)中長有霉菌的草莓數(shù)量；和(ii)通過計算與用對照組合物處理的草莓上的霉菌生長相比，用抗真菌組合物處理的草莓上觀察到的霉菌生長的減少，來測定個體和組合的活性成分的抗真菌活性(以％計)。根據(jù)Colby方程(Colby, 1967)計算包含兩種活性成分的組合抗真菌組合物的預(yù)期抗真菌活性(E，以％計):[0043]E = X+Y-[(X.Y)/100]
[0044]其中X和Y分別是個體活性成分X和Y的觀察到的抗真菌活性(以％計)。如果組合的觀察到的抗真菌活性(0，以％計)超出組合的預(yù)期抗真菌活性(Ε，以％計)并且因而協(xié)同因子0/Ε > 1.0，那么活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效應(yīng)。
[0045]表1 (每10個草莓總數(shù)中長有霉菌的草莓數(shù))和表2 (抗真菌活性)中的結(jié)果清楚地證實，與單獨的那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺相比，包含500ppm那他霉素和2000ppm聯(lián)苯吡菌胺的抗真菌組合物在草莓上具有強得多的抗真菌活性。
[0046]孵育3到6天期間，用對照組合物或那他霉素任一單獨處理的所有10個草莓均顯示霉菌生長。使用聯(lián)苯吡菌胺處理時，第3天和第4天10個草莓中分別有8個和9個長有霉菌。然而，用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物處理的草莓中，第3天僅4個草莓觀察到霉菌生長，第4天僅5個草莓觀察到霉菌生長，第5天和第6天僅8個草莓觀察到霉菌生長(見表1)。另外，孵育3天和9天之間，對包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物觀察的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出15%到27%。相應(yīng)的協(xié)同因子從第3天的
1.2提高至第9天的6.0 (見表2)。
[0047]因此，500ppm那他霉素和2000ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用在草莓上具有非常強的協(xié)同抗真菌效應(yīng)。
[0048]實施例4
[0049]處理草莓
[0050]如實施例3中所述進行實驗，不同之處在于首先對每個草莓造成創(chuàng)口，然后在20°C下孵育2小時，再在新鮮制備的含有500ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft,荷蘭)、1000ppm聯(lián)苯吡菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個草莓各自浸潰I分鐘。處理后，用10 μ I含有I X IO5孢子/ml的Botrytis cinerea懸浮液接種每個草莓。根據(jù)實施例3中所述的兩種方法針對霉菌生長評價經(jīng)處理的草莓。
[0051]表3(抗真菌活性)和表4(每10個草莓總數(shù)中長有霉菌的草莓數(shù))中的結(jié)果顯示，與單獨包含那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺的組合物相比，包含500ppm那他霉素以及1000ppm聯(lián)苯吡菌胺的抗真菌組合物在限制草莓上霉菌生長方面更加成功。[0052]孵育3天后，觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性高8%，這導(dǎo)致> 1.0的協(xié)同因子(見表3)。
[0053]孵育5天后，用對照組合物或那他霉素任一處理的所有10個草莓均長有霉菌，用聯(lián)苯吡菌胺單獨處理的10個草莓中有8個長有霉菌。然而，對草莓應(yīng)用那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合時，第5天10個草莓中僅5個觀察到霉菌生長(見表4)。另外，第5天和第6天對包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合物觀察的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性分別超出16%和18%。因此，兩天中獲得的協(xié)同因子均> 1.0 (見表3)。
[0054]總而言之，該實施例的結(jié)果證明，500ppm那他霉素和1000ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用協(xié)同減少了草莓上的霉菌生長。
[0055]實施例5
[0056]處理草莓
[0057]如實施例3中所述進行實驗，不同之處在于在新鮮制備的含有250ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft,荷蘭)、500ppm聯(lián)苯批菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個有創(chuàng)口并且經(jīng)接種的草莓各自浸潰I分鐘。針對霉菌生長評價經(jīng)處理的草莓。根據(jù)實施例3中所述的方法，測定個體和組合的活性成分的抗真菌活性(以％計)。
[0058]表5中的結(jié)果顯示,包含250ppm那他霉素以及500ppm聯(lián)苯吡菌胺的抗真菌組合物在減少草莓上霉菌生長方面優(yōu)于單獨包含那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺任一的組合物。
[0059]孵育4、6、7、9和10天后，觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性高10%到20%，相應(yīng)的協(xié)同因子從第4天的1.2提高到第10天的> 10(見表5)。
[0060]因此,組合應(yīng)用 于草莓上時，250ppm那他霉素和500ppm聯(lián)苯吡菌胺之間存在抵抗真菌的強協(xié)同活性。
[0061]實施例6
[0062]處理草莓
[0063]如實施例3中所述進行實驗，不同之處在于在新鮮制備的含有250ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft，荷蘭)、250ppm聯(lián)苯吡菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個有創(chuàng)口并且經(jīng)接種的草莓各自浸潰I分鐘。將經(jīng)處理的草莓孵育一周，并從第3天起根據(jù)實施例3中所述的一種或兩種方法針對霉菌生長每天評價經(jīng)處理的草莓。
[0064]表6 (每10個草莓總數(shù)中長有霉菌的草莓數(shù))和表7 (抗真菌活性)明確證實，與單獨包含那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺的組合物相比，包含250ppm那他霉素以及250ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合抗真菌組合物更有效地保護草莓抵抗霉菌生長。
[0065]孵育3天后，用對照組合物處理的所有10個草莓均長有霉菌，用那他霉素單獨處理的10個草莓和用聯(lián)苯吡菌胺單獨處理的10個草莓中分別有8個和9個草莓長有霉菌。然而，用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物處理的10個草莓中僅有5個在第3天顯示霉菌生長(見表6)。
[0066]孵育4天和5天后，用對照組合物或那他霉素任一單獨處理的所有10個草莓均長有霉菌，用聯(lián)苯吡菌胺處理的10個草莓中分別有9個和10個長有霉菌。然而，用那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合處理的10個草莓中，第4天和第5天僅有7個和8個草莓長有霉菌(見表6)。另外，孵育4和7天之間，觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出13%到21%。相應(yīng)的協(xié)同因子因此從第4天的1.3提高到第7天的2.3(見表7)。[0067]因此，250ppm那他霉素和250ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用導(dǎo)致草莓上霉菌生長的強協(xié)同減少。
[0068]實施例7
[0069]處理蜜桔(mandarins)
[0070]每個處理組使用十個新鮮的有機蜜桔。根據(jù)de Lapeyre de Bellaire andDubois (1987)所述方法，使用木塞鉆孔器對每個蜜桔的皮造成一次創(chuàng)傷。隨后，用10μ I含有I X IO5孢子/ml的Penicillium italicum懸浮液接種每個創(chuàng)口。在20°C下孵育2小時后，在新鮮制備的包含500ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft,荷蘭)、2000ppm聯(lián)苯吡菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將蜜桔各自浸潰I分鐘。另外，抗真菌組合物包含3.1% (w/w)蜂臘、0.76% (w/w)甘油、0.66% (w/w)聚氧乙烯山梨聚糖單硬脂酸酯(Tween 60),0.03% (w/w)甲基羥乙基纖維素(MHEC),0.02% (w/w)黃原膠、0.02% (w/w)消泡劑、0.15% (w/w)檸檬酸和0.01% (w/w)山梨酸鉀。組合物的pH為4。使用不含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合物作為對照。
[0071]將經(jīng)處理的蜜桔在閉合箱中于暗中、20°C下孵育，并在孵育期間評價霉菌生長。根據(jù)實施例3中所述的Colby方法(Colby, 1967),通過計算與用對照組合物處理的蜜桔上的霉菌生長相比，用抗真菌組合物處理的蜜桔上觀察到的霉菌生長的減少，來測定個體和組合的活性成分的抗真菌活性(以％計)。
[0072]表8中的結(jié)果證明，包含500ppm那他霉素和2000ppm聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合比單獨的那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺更加成功地限制蜜桔上的霉菌生長。
[0073]孵育4、6、9、11、14和15天后，針對包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出6%到13%。上述這些天中每天相應(yīng)的協(xié)同因子>1.0，并且范圍是從第4天的1.2至第15天的2.8 (見表8)。
[0074]總而言之，該實施例的結(jié)果清楚地證明在蜜桔上組合應(yīng)用時，500ppm那他霉素和2000ppm聯(lián)苯吡菌胺的協(xié)同抗真菌效應(yīng)。
[0075]實施例8
[0076]處理蜜桔
[0077]如實施例7中所述進行實驗，不同之處是在新鮮制備的包含500ppm那他霉素(DSMFood Specialties, Delft,荷蘭)、1000ppm聯(lián)苯批菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個帶有創(chuàng)口的、經(jīng)接種的蜜桔各自浸潰I分鐘。根據(jù)實施例3中所述的Colby方法(Colby, 1967)評價個體和組合的活性成分在蜜桔上的抗真菌活性(以％計)。
[0078]結(jié)果(見表9)顯示,包含500ppm那他霉素和1000ppm聯(lián)苯吡菌胺的抗真菌組合物比單獨的那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺在蜜桔上具有更強的抗真菌活性。
[0079]孵育4、6、7、9、14和15天后，針對那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性高7%到14%之間，協(xié)同因子范圍從1.2到3.0(見表9)。
[0080]因此可以得出結(jié)論，500ppm那他霉素和1000ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用導(dǎo)致蜜桔上霉菌生長的協(xié)同減少。
[0081]實施例9
[0082]處理蜜桔[0083]如實施例7中所述進行實驗，不同之處是在新鮮制備的包含250ppm那他霉素(DSMFood Specialties, Delft,荷蘭)、500ppm聯(lián)苯吡菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個帶有創(chuàng)口的、經(jīng)接種的蜜桔各自浸潰I分鐘。根據(jù)實施例3中所述的Colby方法(Colby, 1967)評價個體和組合的活性成分在蜜桔上的抗真菌活性(以％計)。
[0084]結(jié)果(見表10)清楚地證明，250ppm那他霉素和500ppm聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合比單獨的那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺具有更高的抵抗蜜桔上霉菌生長的效力。
[0085]孵育4、6、7、9、11、13和15天后，針對包含那他霉素以及聯(lián)苯吡菌胺的組合物觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出9%到26%，這導(dǎo)致范圍從1.2到4.3的協(xié)同因子(見表10)。
[0086]因此，250ppm那他霉素和500ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用協(xié)同減少了蜜桔上的霉
菌生長。
[0087]實施例10
[0088]處理蜜桔
[0089]如實施例7中所述進行實驗，不同之處是在新鮮制備的包含250ppm那他霉素(DSMFood Specialties, Delft,荷蘭)、250ppm聯(lián)苯吡菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個帶有創(chuàng)口的、經(jīng)接種的蜜桔各自浸潰I分鐘。根據(jù)實施例3中所述的Colby方法(Colby, 1967)評價個體和組合的活性成分在蜜桔上的抗真菌活性(以％計)。 [0090]結(jié)果(見表11) 證明，包含250ppm那他霉素和250ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合物在減少蜜桔上霉菌生長方面優(yōu)于單獨包含那他霉素或單獨包含聯(lián)苯吡菌胺的組合物。
[0091]孵育3、4、6、7和9天后，針對包含那他霉素以及聯(lián)苯吡菌胺的組合物觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出10%到29%。因此，上述每一天的協(xié)同因子都超過>
1.0，并且從第3天的1.1提高至第9天的3.3 (見表11)。
[0092]因此，組合應(yīng)用于蜜桔上時，250ppm那他霉素和250ppm聯(lián)苯吡菌胺之間存在協(xié)同的抵抗真菌的活性。
[0093]實施例11
[0094]處理蘋果
[0095]每個處理組使用十個新鮮的、有機的蘋果。根據(jù)Lapeyre de Bellaire andDubois (1987)所述方法，使用木塞鉆孔器對每個蘋果造成創(chuàng)傷。隨后，用10μ I含有IXlO6孢子/ml的Penicillium italicum懸浮液接種每個創(chuàng)口。在20°C下孵育2小時后,在新鮮制備的含有500ppm那他霉素(DSM Food Specialties，Delft，荷蘭)、2000ppm聯(lián)苯吡菌胺任一或二者兼有的水性抗真菌組合物中將蘋果各自浸潰I分鐘。另外，抗真菌組合物包含3.1% (w/w)蜂臘、0.76% (w/w)甘油、0.66% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨醇單硬脂酸酯(Tween 60),0.03% (w/w)甲基羥乙基纖維素(MHEC) ,0.02% (w/w)黃原膠、0.02% (w/w)消泡劑、0.15% (w/w)檸檬酸和0.01% (w/w)山梨酸鉀。組合物的pH為4。使用不含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合物作為對照。將經(jīng)處理的蘋果在閉合箱中于暗中和20°C下孵育。
[0096]在孵育期間，以雙重方式評價蘋果上的霉菌生長:(i)計數(shù)每10個蘋果總數(shù)中長有霉菌的蘋果數(shù)量；和(ii)根據(jù)實施例3中所述Colby方法(Colby，1967)，通過計算與用對照組合物處理的蘋果上的霉菌生長相比，用抗真菌組合物處理的蘋果上觀察到的霉菌生長的減少，來測定個體和組合的活性成分的抗真菌活性(以％計)。[0097]表12(每10個蘋果總數(shù)中長有霉菌的蘋果數(shù))和表13(抗真菌活性)中的結(jié)果顯示，包含500ppm那他霉素和2000ppm聯(lián)苯吡菌胺的抗真菌組合物具有與單獨包含那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺的組合物相比更強的抗真菌活性。
[0098]孵育3天和4天后，用對照組合物處理的所有10個蘋果都長有霉菌，用那他霉素單獨處理的10個蘋果中9個長有霉菌，用聯(lián)苯吡菌胺單獨處理的10個蘋果中的5個長有霉菌。然而，用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合組合物處理的10個蘋果中，在第3天和第4天僅觀察到2個有霉菌生長(見表12)。
[0 099]孵育6天和7天后，用對照組合物或那他霉素任一單獨處理的所有10個蘋果都顯示霉菌生長，用聯(lián)苯吡菌胺單獨處理的10個蘋果中有8個顯示霉菌生長。然而，用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物處理10個蘋果導(dǎo)致，第6天和第7天分別僅有2和4個蘋果長有霉菌(見表12)。
[0100]在孵育的9到14天期間，用對照組合物、那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺任一單獨處理的所有蘋果均長有霉菌，而用那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合處理的10個蘋果中僅6個觀察到霉菌生長(見表12)。
[0101]另外，與預(yù)期的抗真菌活性相比，對那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合觀察的抗真菌活性在第3天超出14%，第6天超出幾乎50%，第9到14天超出約30%。在從3到14天的孵育周期期間，協(xié)同因子總是> 1.0,并且范圍是從1.2到2.1 (見表13)。
[0102]總而言之，組合應(yīng)用于蘋果上時，500ppm那他霉素和2000ppm聯(lián)苯吡菌胺之間存在令人驚訝的強抗真菌活性。
[0103]實施例12
[0104]處理蘋果
[0105]如實施例11中所述進行實驗，不同之處在于在新鮮制備的含有500ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷蘭)、1000ppm聯(lián)苯批菌胺或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個有創(chuàng)口并且經(jīng)接種的蘋果各自浸潰I分鐘。孵育期間，根據(jù)實施例3中所述的兩種方法針對霉菌生長評價經(jīng)處理的蘋果。
[0106]表14 (每10個蘋果總數(shù)中長有霉菌的蘋果數(shù))和表15 (抗真菌活性)中的結(jié)果顯示，與單獨包含那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺的組合物相比，包含500ppm那他霉素以及1000ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合物在限制蘋果上的霉菌生長方面更加成功。
[0107]孵育3天和4天后，用對照組合物處理的所有10個蘋果都長有霉菌，用那他霉素單獨處理的10個蘋果中9個長有霉菌，用聯(lián)苯吡菌胺單獨處理的10個蘋果中的6個長有霉菌。然而，用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合組合物處理的10個蘋果中，在第3天和第4天分別僅觀察到2個和3個長有霉菌(見表14)。
[0108]孵育6天和7天后，用對照組合物或那他霉素任一單獨處理的所有10個蘋果都顯示霉菌生長，用聯(lián)苯吡菌胺單獨處理的10個蘋果中分別有8個和9個顯示霉菌生長。然而，用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物處理10個蘋果導(dǎo)致，第6天僅有4個長有霉菌的蘋果，第7天僅有5個長有霉菌的蘋果(見表14)。
[0109]在孵育的9到14天期間，用對照組合物、那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺任一單獨處理的所有蘋果均長有霉菌，而用那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合處理的10個蘋果中僅6個觀察到霉菌生長(見表14)。[0110]另外，在3和14天的孵育期間，對包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合組合物觀察的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出23%到> 30%。上述孵育周期中協(xié)同因子持續(xù)>
1.0，并且從第3天的1.4提高至第14天的1.7 (見表15)。
[0111]該實施例的結(jié)果清楚地顯示，500ppm那他霉素和1000ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用協(xié)同減少的霉菌生長。
[0112]實施例13
[0113]處理蘋果
[0114]如實施例11中所述進行實驗，不同之處在于在新鮮制備的含有250ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft，荷蘭)、500ppm聯(lián)苯吡菌胺任一或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個有創(chuàng)口并且經(jīng)接種的蘋果各自浸潰I分鐘。孵育6、7和9天后，根據(jù)實施例3中所述的兩種方法針對霉菌生長評價經(jīng)處理的蘋果。
[0115]表16 (每10個蘋果總數(shù)中長有霉菌的蘋果數(shù))和表17 (抗真菌活性)中的結(jié)果顯示，包含250ppm那他霉素和500ppm聯(lián)苯吡菌胺二者的抗真菌組合物比單獨的那他霉素更有效地限制蘋果上的霉菌生長。
[0116]孵育6、7和9天后，用對照組合物、那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺任一單獨處理的所有10個蘋果都顯示霉菌生長。然而，在用那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合處理的10個蘋果中，第6、7和9天分別僅有5、6和8個長有霉菌(見表16)。另外，與預(yù)期的抗真菌活性相比，對包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合組合物觀察的抗真菌活性分別在第6天超出13 %、在第7天 超出9%和在第9天超出12%，這導(dǎo)致這些天中每一天協(xié)同因子都> 1.0(見表 17)。
[0117]因此可以得出結(jié)論，250ppm那他霉素和500ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用導(dǎo)致蘋果上霉菌生長的協(xié)同減少。
[0118]實施例14
[0119]處理蘋果
[0120]如實施例11中所述進行實驗，不同之處在于在新鮮制備的含有250ppm那他霉素(DSM Food Specialties, Delft，荷蘭)、250ppm聯(lián)苯吡菌胺任一或二者兼有的水性抗真菌組合物中將每個有創(chuàng)口并且經(jīng)接種的蘋果各自浸潰I分鐘。孵育期間，根據(jù)實施例3中所述的兩種方法針對霉菌生長評價經(jīng)處理的蘋果。
[0121]表18 (每10個蘋果總數(shù)中長有霉菌的蘋果數(shù))和表19 (抗真菌活性)中的結(jié)果證明，包含250ppm那他霉素和250ppm聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物抵抗蘋果上霉菌生長的活性比單獨包含那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺的組合物更強。
[0122]孵育6到15天期間，用對照組合物、那他霉素或聯(lián)苯吡菌胺任一單獨處理的所有蘋果都長有霉菌。然而，使用包含那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺二者的組合物進行處理時，第6到9天時10個蘋果中的6個長有霉菌，第11天到第15天時10個蘋果中的7個長有霉菌(見表18)。另外，與預(yù)期的抗真菌活性相比，對那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合觀察的抗真菌活性分別在第6天超出18%、在第9天超出32%、在第11天超出25%和在第14天超出20%。這些天中每一天的協(xié)同因子都> 1.0 (見表19)。
[0123]因此，該實施例明確地證明了 250ppm那他霉素和250ppm聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用在蘋果上的協(xié)同抗真菌效應(yīng)。[0124]實施例15
[0125]體外(In vitro)抗真菌活性
[0126]為了證實那他霉素與吡唑萘菌胺的組合針對Botrytis cinerea的協(xié)同抗真菌活性，使用96孔微量滴定板進行體外實驗。測試以下的組合物:
[0127]-對照(無活性成分)，
[0128]-1.25ppm 那他霉素(DSM Food Specialties, Delft,荷蘭),
[0129]-6.25ppm吡唑萘菌胺，
[0130]-1.25ppm那他霉素+6.25ppm吡唑萘菌胺。
[0131]用84 μ I PCB培養(yǎng)基填充微量滴定板的每個孔后，從制備于PCB培養(yǎng)基或甲醇中的單獨的儲備溶液中添加活性成分，這導(dǎo)致每孔100 μ I的中間體積。隨后，使用制備于PCB培養(yǎng)基中的100 μ I Botrytis cinerea懸浮液，以2.5χ103孢子/ml接種每個孔。因此,每個孔含有200 μ I的終體積和< 1%的甲醇,這不影響B(tài)otrytis cinerea的生長(數(shù)據(jù)未展示)O
[0132]將微量滴定板在25°C下孵育后，通過計算與無活性成分時觀察到的霉菌生長相t匕，存在活性成分時觀察到的霉菌生長的減少，來評價個體活性成分的體外抗真菌活性(以％計)。根據(jù)Colby方程(Colby，1967)計算活性成分組合的預(yù)期抗真菌活性(E，以％計): [0133]E = X+Y-[(X.Y)/100]
[0134]其中X和Y分別是個體活性成分X和Y的觀察到的抗真菌活性(以％計)。如果組合的觀察到的抗真菌活性(0，以％計)超出組合的預(yù)期抗真菌活性(Ε，以％計)并且因而協(xié)同因子0/Ε > 1.0，那么活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效應(yīng)。
[0135]結(jié)果顯示，與單獨的那他霉素或吡唑萘菌胺相比，那他霉素和吡唑萘菌胺(見表20)的活性成分組合更有效地抑制Botrytis cinerea的生長。針對那他霉素與吡唑萘菌胺的組合觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性高100%。因此，相應(yīng)的協(xié)同因子遠高于1.0。
[0136]因此，那他霉素和吡唑萘菌胺的活性成分組合協(xié)同地抑制了 Botrytis cinerea的生長。
[0137]實施例16
[0138]體外抗真菌活性
[0139]如實施例15中所述進行實驗，不同之處在于測試以下的組合物:
[0140]-對照(無活性成分)，
[0141]-0.63 或 1.25ppm 那他霉素(DSM Food Specialties, Delft,荷蘭),
[0142]_25ppm吡唑萘菌胺，
[0143]_25ppm聯(lián)苯批菌胺，
[0144]-0.63ppm那他霉素+25ppm吡唑萘菌胺，
[0145]-1.25ppm那他霉素+25ppm聯(lián)苯吡菌胺。
[0146]另外,使用Penicillium italicum接種。根據(jù)實施例15中所述方法測定個體活性成分和組合的活性成分的抗真菌活性(以％計)。
[0147]結(jié)果(見表21)顯示，那他霉素+吡唑萘菌胺和那他霉素+聯(lián)苯吡菌胺的活性成分組合比個體的那他霉素、吡唑萘菌胺或聯(lián)苯吡菌胺更成功地抑制Penicillium italicum的生長。針對活性成分組合那他霉素+吡唑萘菌胺和那他霉素+聯(lián)苯吡菌胺觀察到的抗真菌活性比預(yù)期的抗真菌活性超出25%，這導(dǎo)致> 1.0的協(xié)同因子。
[0148]因此，那他霉素和吡唑萘菌胺的組合應(yīng)用以及那他霉素和聯(lián)苯吡菌胺的組合應(yīng)用展示了抵抗Penicillium italicum的協(xié)同抗真菌活性。
[0149]表1.用包含500ppm那他霉素、2000ppm聯(lián)苯吡菌胺任一或二者兼有的組合物處理
后，在20°C下孵育的長有霉菌的草莓數(shù)。
[0150]
【權(quán)利要求】
1.包含多烯抗真菌化合物和至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物選自由聯(lián)苯吡菌胺、胺苯吡菌酮、氟唑菌酰胺、氟吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、吡咪唑和環(huán)苯吡菌胺組成的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中所述多烯抗真菌化合物是那他霉素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項所述的組合物，其中所述組合物還包含至少一種選自下組的額外的化合物，所述組由粘著劑、載劑、著色劑、保護性膠體、粘合劑、除草劑、肥料、增稠劑、掩蔽劑、觸變劑、表面活性劑、其他抗微生物化合物、洗滌劑、防腐劑、鋪展劑、填充劑、噴霧油、流動添加劑、礦物質(zhì)、溶劑、分散劑、乳化劑、濕潤劑、穩(wěn)定劑、消泡劑、緩沖劑、UV-吸收劑和抗氧化劑組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一項所述的組合物，其中所述多烯抗真菌化合物的量在從0.005g/l到約100g/l的范圍內(nèi)，所述至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的量在從約0.0OOlg/Ι到約2000g/l的范圍內(nèi)。
6.包含多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的試劑盒。
7.通過用多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑的抗真菌化合物處理產(chǎn)品來保護產(chǎn)品抵抗真菌的方法。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的·方法，其中用根據(jù)權(quán)利要求1到5中任一項所述的組合物或根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒來處理所述產(chǎn)品。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述產(chǎn)品選自由食品、飼料產(chǎn)品、藥物產(chǎn)品、化妝品產(chǎn)品和農(nóng)產(chǎn)品組成的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述產(chǎn)品是農(nóng)產(chǎn)品。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述產(chǎn)品在收獲后被處理。
12.包含多烯抗真菌化合物和至少一種來自吡唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的產(chǎn)品O
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品選自由食品、飼料產(chǎn)品、藥物產(chǎn)品、化妝品產(chǎn)品和農(nóng)產(chǎn)品組成的組。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品是農(nóng)產(chǎn)品。
15.多烯抗真菌化合物和至少一種來自批唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物用于保護產(chǎn)品抵抗真菌的用途。
【文檔編號】A01N45/02GK103547156SQ201280011557
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年3月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月3日
【發(fā)明者】雅各布斯·斯塔克, 安格里克·里克·德 申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司