新型乳酸菌以及使用其的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種乳酸菌，針對因糖含量少而現(xiàn)有的乳酸菌無法得到充分的發(fā)酵品質(zhì)改善效果地進(jìn)行丁酸發(fā)酵的青貯飼料或發(fā)酵飼料原料，其抑制丁酸發(fā)酵，能夠穩(wěn)定制備高品質(zhì)的青貯飼料或發(fā)酵飼料。本發(fā)明提供在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1～0.4質(zhì)量%的牧草煮汁培養(yǎng)基中每1mL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌，含有該乳酸菌的青貯飼料制備用微生物制劑，以及利用該制劑的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法。
【專利說明】新型乳酸菌以及使用其的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及能夠抑制丁酸發(fā)酵的乳酸菌，含有其的微生物制劑以及使用該制劑的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法。
【背景技術(shù)】 [0002]將作為家畜主食的牧草、飼料作物等在厭氧條件下進(jìn)行乳酸發(fā)酵而得的青貯飼料是當(dāng)今乳品業(yè)中必須的飼料，制備優(yōu)質(zhì)的青貯飼料對于奶農(nóng)而言是非常重要的技術(shù)。在此之際，被稱為不良發(fā)酵的問題屢屢發(fā)生，這是在青貯飼料中與乳酸菌相比丁酸菌的增殖更有優(yōu)勢，結(jié)果造成青貯飼料中的丁酸含量變高的問題。丁酸濃度變高的青貯飼料不僅引起牛的嗜好性降低，采食量的減少，而且會成為與酮癥等疾病相關(guān)的問題。因此作為防止因這樣的丁酸菌引起的腐敗的一個(gè)方法，在青貯飼料制備時(shí)添加乳酸菌的技術(shù)正在普及。因而作為使用的乳酸菌已有大量報(bào)告，但大多數(shù)是通過加速乳酸發(fā)酵的進(jìn)行，降低PH來抑制丁酸發(fā)酵。但是有時(shí)這些乳酸菌尤其是在因水分高、糖含量少、或者土壤的混入多等易發(fā)生丁酸發(fā)酵的條件下不能充分抑制丁酸菌，現(xiàn)在因丁酸發(fā)酵而制備腐敗的青貯飼料也成為問題。
[0003]作為添加到青貯飼料的乳酸菌出現(xiàn)效果的條件，材料牧草中的可溶性糖類最低也需要在干燥物中為5.0~6.0% (換算為原料物是1.0~3.0%)以上(非專利文獻(xiàn)I)。另一方面，由于糖含量少的牧草、飼料作物也有很多，所以目前為止報(bào)告的青貯飼料用的乳酸菌不能充分發(fā)揮效果，丁酸發(fā)酵的情形多。
[0004]然而，在乳酸菌的一部分中，已知有通過發(fā)酵或者培養(yǎng)會產(chǎn)生作為抗菌性蛋白質(zhì)的細(xì)菌素。其中乳酸鏈球菌素是作為乳酸菌的一種的乳酸乳球菌的一部分株產(chǎn)生的抗菌性蛋白質(zhì)，其由34個(gè)氨基酸構(gòu)成且在分子內(nèi)含有羊毛硫氨酸、3-甲基羊毛硫氨酸、脫氫丙氨酸、脫氫酪氨酸、2-氨基丁酸。乳酸鏈球菌素中存在幾個(gè)類似物，目前為止結(jié)構(gòu)確定的類似物包括乳酸鏈球菌素A、乳酸鏈球菌素Z、乳酸鏈球菌素Q這3種。此外，近年報(bào)告了乳房鏈球菌(Streptococcus Uberis)產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素U和乳酸乳球菌產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素F0
[0005]由于乳酸鏈球菌素以包括丁酸菌的革蘭氏陽性菌為中心具有大范圍的抗菌譜，將其添加到青貯飼料，具有抑制丁酸菌的可能性。實(shí)際上，在食品領(lǐng)域，自被WHO和FAO認(rèn)可以來，作為類似物之一的乳酸鏈球菌素A在世界范圍內(nèi)廣泛作為奶酪、蔬菜罐頭等的食品保存劑加以利用。但是，將乳酸鏈球菌素直接添加到食品時(shí)，需要通過乳酸菌的培養(yǎng)產(chǎn)生高濃度的乳酸鏈球菌素并將其提取、精制、干燥的工序，通常存在費(fèi)用昂貴的問題。此外，乳酸鏈球菌素具有速效性的抗菌作用，但其效果很難持續(xù)，因與添加對象的成分發(fā)生相互作用有時(shí)其效果會降低。
[0006]因此，研究嘗試將產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌添加到奶酪、酸菜、豆味噌、米味噌等食品中(非專利文獻(xiàn)2~5)，但是沒有將其實(shí)際用于作為青貯飼料原料的牧草、飼料作物、食品制造副產(chǎn)物等。作為其理由，一般認(rèn)為這些青貯飼料原料與食品素材相比，缺乏包含乳酸菌的生長所必須的糖的營養(yǎng)源，沒有像添加到食品素材時(shí)那樣的殺菌工序，所以與其它微生物的競爭也很激烈，因而即使添加對食品素材有效果的產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌，也不會獲得充分的效果。因此，還報(bào)告了在合成培養(yǎng)基中產(chǎn)生高濃度乳酸鏈球菌素的乳酸菌、在發(fā)酵大麥提取物培養(yǎng)基中產(chǎn)生乳酸鏈球菌素(專利文獻(xiàn)1、非專利文獻(xiàn)6)，但還沒有即使在合成培養(yǎng)基或發(fā)酵大麥提取物培養(yǎng)基中能夠產(chǎn)生高濃度的乳酸鏈球菌素，在營養(yǎng)源不同的青貯飼料材料中也產(chǎn)生高濃度乳酸鏈球菌素的現(xiàn)有文獻(xiàn)。
[0007]此外，在以青貯飼料作為對象的情形中，已報(bào)告了將產(chǎn)生細(xì)菌素的乳酸乳球菌R050株添加到青貯飼料材料草的青貯飼料制備方法(專利文獻(xiàn)2)，但也報(bào)告了沒有獲得充分的發(fā)酵品質(zhì)改善效果的案例，效果不穩(wěn)定，進(jìn)而在青貯飼料中是否產(chǎn)生細(xì)菌素完全不清楚(非專利文獻(xiàn)7、8)。此外，專利文獻(xiàn)3中，也有關(guān)于添加產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌和乳酸鏈球菌素耐性乳酸菌的青貯飼料制備方法的報(bào)告，雖然在青貯飼料中檢測到200IU/g的乳酸鏈球菌素活性，但是由于與不產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的其它乳酸菌株添加區(qū)相比pH、有機(jī)酸含量、相對于全氮的氨態(tài)氮濃度等發(fā)酵品質(zhì)沒有變化，所以是在常見的乳酸菌也能夠獲得良好的發(fā)酵的糖含量(干燥物中5.0%以上、原料物中1.0%以上)下的結(jié)果，對于該乳酸菌在糖含量少的嚴(yán)格條件下的效果而言還不明確。
[0008]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009]專利文獻(xiàn)
[0010]專利文獻(xiàn)1:日本再表W0 2005/080550號公報(bào)
[0011]專利文獻(xiàn)2:日本特開2004-41064號公報(bào)
[0012]專利文獻(xiàn)3:EP1273237A1
[0013]非專利文獻(xiàn)
[0014]非專利文獻(xiàn)1:增子孝義(1999),青忙飼料科學(xué)的進(jìn)步，Dairy Japan公司，99-101
[0015]非專利文獻(xiàn)2:Delves_Broughton，J.et al.Antonie van Leeuwenhoek (1996)69:193-202
[0016]非專利文獻(xiàn)3:Harris,L.J.et al.App1.Environ.Microbiol.(1992)58:1484-1589
[0017]非專!文獻(xiàn)4:TakeoKato et al.Biosc1.Biotechnol.Biochem.(1999)63:642-647
[0018]非專利文獻(xiàn)5:TakeoKato et al.Biosc1.Biotechnol.Biochem.(2001)65:330-337
[0019]非專利文獻(xiàn)6:Furuta Y.et al.J.Biosc1.Bioeng.(2008) 106:393-397
[0020]非專利文獻(xiàn)7:蔡義民等，畜產(chǎn)草地研究成果信息(2002) N0.2:53-54
[0021]非專利文獻(xiàn)8:小林壽美等，日草志(2010) 56:39-46

【發(fā)明內(nèi)容】

[0022]本發(fā)明的目的在于提供以下技術(shù)，即，選拔即使在容易進(jìn)行丁酸發(fā)酵的青貯飼料的發(fā)酵條件下也具有高濃度產(chǎn)生乳酸鏈球菌素能力的乳酸菌，并將含有具有該能力的乳酸菌的微生物制劑添加到青貯飼料中而穩(wěn)定地制備高品質(zhì)的青貯飼料或發(fā)酵飼料。
[0023]本發(fā)明人為了選拔在青貯飼料環(huán)境中發(fā)揮能力的乳酸菌，制成完全不添加糖類而單糖和二糖含量非常低的牧草的煮汁培養(yǎng)基，利用其來培養(yǎng)乳酸菌，篩選出產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的菌株。通過該篩選，在牧草煮汁培養(yǎng)基中，成功選拔出顯示比已知乳酸鏈球菌素產(chǎn)生株強(qiáng)的乳酸鏈球菌素活性的乳酸菌，從而完成本發(fā)明。[0024]SP，本發(fā)明涉及以下的[1]~[11]。
[0025][1], 一種乳酸菌，其特征在于，在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每1mL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素。
[0026][2].根據(jù)[1]所述的乳酸菌，其中，在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.7質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每1mL上清液產(chǎn)生100IU以上的乳酸鏈球菌素。
[0027][3],根據(jù)[1]或[2]所述的乳酸菌，其中，在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生100IU以上的乳酸鏈球菌素。
[0028][4],根據(jù)[1]~[3]中任一項(xiàng)所述的乳酸菌，是乳酸乳球菌SBS-0001株(NITEBP-1107)或乳酸乳球菌 SBS-0002 株(NITE BP-1108)。
[0029][5].一種青貯飼料制備用微生物制劑，其特征在于，含有在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。
[0030][6],根據(jù)[5]所述的青貯飼料制備用微生物制劑，其中，乳酸菌是[2]~[4]中任一項(xiàng)所述的乳酸菌。
[0031][7],根據(jù)[5]或[6]所述的青貯飼料制備用微生物制劑，其中，進(jìn)一步含有具有耐酸性的乳酸菌。
[0032][8],根據(jù)[7]所述的青貯飼料制備用微生物制劑，其中，具有耐酸性的乳酸菌是副干酪乳桿菌 SBS-0003 株(NITE BP-1109)。
[0033][9].一種青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法，其特征在于，添加青貯飼料制備用微生物制劑，所述青貯飼料制備用微生物制劑含有在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。
[0034][10].根據(jù)[9]所述的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法，其中，乳酸菌是[2]~
[4]中任一項(xiàng)所述的乳酸菌。
[0035][11].根據(jù)[9]或[10]所述的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法，其中，所述青貯飼料制備用微生物制劑進(jìn)一步含有具有耐酸性的乳酸菌。
[0036]本發(fā)明提供在大多受苦于青貯飼料或發(fā)酵飼料的丁酸發(fā)酵的奶農(nóng)中，在作為實(shí)際的青貯飼料發(fā)酵條件的糖含量少的材料中也能產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌。此外，提供通過在上述乳酸菌中加入具有耐酸性的乳酸菌從而抑制丁酸發(fā)酵且使品質(zhì)良好的乳酸發(fā)酵成為可能的微生物制劑。由此本發(fā)明使制造安全性高、家畜采食性好的青貯飼料或發(fā)酵飼料成為可能。
【具體實(shí)施方式】
[0037]本發(fā)明的產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌通過選拔以下的乳酸菌而得到，該乳酸菌在單糖和二糖的總計(jì)含量為1.0質(zhì)量％以下、優(yōu)選為0.7質(zhì)量％以下、更優(yōu)選為0.4質(zhì)量％以下的牧草煮汁培養(yǎng)基中產(chǎn)生乳酸鏈球菌素。
[0038]本發(fā)明中,在用于選拔產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌的牧草煮汁培養(yǎng)基中使用的牧草只要是用于青貯飼料或發(fā)酵飼料的牧草即可，無特別限制，例如可例舉苜蓿、三葉草、梯牧草、鴨茅、草蘆、偃麥草、意大利黑麥草、多年生黑麥草、高羊茅、草甸羊茅、Festulolium(7 二 7卜口 U々△)、草地早熟禾、小糠草、堅(jiān)尼草、非洲虎尾草、象草等牧草。優(yōu)選假定易發(fā)生丁酸發(fā)酵的條件，優(yōu)選使用糖含量少的苜蓿、三葉草、梯牧草、鴨茅、草蘆、偃麥草、堅(jiān)尼草、非洲虎尾草、象草等。作為牧草的形態(tài)，可以以割取的鮮草的狀態(tài)使用，也可以以冷藏或冷凍保存的狀態(tài)使用，也可以以將通風(fēng)干燥、冷凍干燥的牧草粉碎后的干燥粉末的狀態(tài)使用。此外，也可以利用作為飼料流通的苜蓿草顆粒(>一寸卜)或干草塊。
[0039]作為牧草煮汁培養(yǎng)基，使用僅將這些牧草用熱水浸出的浸出液作為營養(yǎng)源的培養(yǎng)基。此處熱水的溫度優(yōu)選為50~100°C，進(jìn)一步更優(yōu)選為70~100°C。此外，牧草浸出到熱水的時(shí)間優(yōu)選為10~180分鐘，進(jìn)一步優(yōu)選為30~120分鐘。浸出液優(yōu)選根據(jù)需要過濾除去固體成分來使用。為了在糖含量少的條件下選拔產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌，優(yōu)選用水將牧草煮汁培養(yǎng)基中的單糖和二糖的總計(jì)含量稀釋調(diào)整為1.0質(zhì)量％以下、優(yōu)選為0.7質(zhì)量％以下、進(jìn)一步優(yōu)選為0.4質(zhì)量％以下來使用。此外，優(yōu)選的單糖和二糖的總計(jì)含量的下限是0.1質(zhì)量％,更優(yōu)選為0.2質(zhì)量％。 [0040]用于選拔本發(fā)明的產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌的培養(yǎng)條件，是常用的乳酸菌生長的條件即可，例如可以在牧草煮汁培養(yǎng)基中以0.1~1.0質(zhì)量％接種，在25~35°C靜置培養(yǎng)8~24小時(shí)。
[0041]通常，由于乳酸鏈球菌素產(chǎn)生株具有乳酸鏈球菌素耐性，所以作為I次篩選，當(dāng)然可選拔在乳酸鏈球菌素添加培養(yǎng)基中生長的株。這種情況下，作為用于選拔的培養(yǎng)基，可使用含有乳酸鏈球菌素100~1000IU/mL的MRS培養(yǎng)基等。進(jìn)一步地，與本發(fā)明的目的一致的乳酸鏈球菌素產(chǎn)生菌的選拔，可通過測定培養(yǎng)基上清液中的乳酸鏈球菌素濃度或測定乳酸鏈球菌素活性來進(jìn)行。乳酸鏈球菌素濃度例如可通過高效液相色譜法等進(jìn)行測定。此外，乳酸鏈球菌素活性以對乳酸菌或者丁酸菌的乳酸鏈球菌素敏感性株的抗菌活性為指標(biāo)進(jìn)行測定，例如，通過測定對保加利亞乳桿菌的抗菌活性來進(jìn)行測定。乳酸鏈球菌素活性優(yōu)選以乳酸鏈球菌素含量進(jìn)行測定。培養(yǎng)液上清液的乳酸鏈球菌素含量可依照通常知曉的方法進(jìn)行測定，例如，其活性可通過Agar Well法進(jìn)行測定。即，在1.5%瓊脂MRS培養(yǎng)基的平板上放置青霉素杯(直徑8mm)，此處將混合有作為指示菌的保加利亞乳桿菌(LactobacillusbulRaricus).TCM1002T株的培養(yǎng)液0.1%的0.75%瓊脂MRS培養(yǎng)基重疊。瓊脂固化后，去除青霉素杯，將其作為抗菌試驗(yàn)用平板使用，將過濾除菌后的培養(yǎng)液上清液添加到由青霉素杯形成的孔中，在37°C厭氧培養(yǎng)24小時(shí)后，測定對指示菌的阻止圓的直徑。利用作為標(biāo)準(zhǔn)物的乳酸鏈球菌素制劑(Sigma公司，含有乳酸鏈球菌素2.5%)，能夠測定每I y g乳酸鏈球菌素的活性值是40IU (每I ii g乳酸鏈球菌素制劑為1IU)。
[0042]本發(fā)明的乳酸菌是，在單糖和二糖的總計(jì)含量是0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。
[0043]此外，本發(fā)明的乳酸菌的優(yōu)選方式是在單糖和二糖的總計(jì)含量是0.1~0.7質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生100IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。更優(yōu)選為在單糖和二糖的總計(jì)含量是0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生100IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。
[0044]進(jìn)而，進(jìn)一步優(yōu)選所述牧草煮汁培養(yǎng)基的單糖和二糖的總計(jì)含量為0.2~0.4質(zhì)量％。該培養(yǎng)基的乳酸鏈球菌素產(chǎn)生量是每ImL上清液為40IU以上，優(yōu)選為100IU以上，進(jìn)一步優(yōu)選為100~400IU，進(jìn)一步優(yōu)選為100~300IU。
[0045]此外，本發(fā)明的乳酸菌即使在pH為5的低pH條件下也具有在單糖和二糖的總計(jì)含量是0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的能力。在如此的低PH條件下產(chǎn)生乳酸鏈球菌素意味著本發(fā)明的乳酸菌能發(fā)揮更長時(shí)間效果。
[0046]作為上述的產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌，優(yōu)選為屬于乳球菌屬的乳酸菌，進(jìn)一步優(yōu)選為屬于乳酸乳球菌的乳酸菌。作為具體例子，可舉出乳酸乳球菌SBS-0001株(NITEBP-1107)、乳酸乳球菌SBS-0002株(NITE BP-1108)、乳酸乳球菌SBS-0004株、乳酸乳球菌SBS-0005株，優(yōu)選舉出乳酸乳球菌SBS-0001株(NITE BP-1107)、乳酸乳球菌SBS-0002株(NITE BP-1108)。
[0047]上述的SBS-0001株以及SBS-0002株保藏于(獨(dú))制品評價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心(地址:日本千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8，郵編292-0818)(保藏日:平成23年06月15日)。
[0048]由于本發(fā)明的乳酸菌具有即使在糖含量低的牧草的存在下也能生長、發(fā)酵的能力，能大量產(chǎn)生乳酸鏈球菌素，所以作為青貯飼料制備用微生物制劑的成分是有用的。
[0049]上述的乳酸菌的培養(yǎng)可使用常見的乳酸菌用培養(yǎng)基進(jìn)行。作為培養(yǎng)基，只要是用于乳酸菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基即可，無特別限制，例如可使用GYP培養(yǎng)基(小崎道雄等(1992)，乳酸菌實(shí)驗(yàn)手冊，朝倉書店刊)、MRS 培養(yǎng)基(de Man, J.C.et al.(1960), Journal of AppliedBacteriology, Vol.23，130-135)。關(guān)于培養(yǎng)條件無特別限制，通常可在pH5.0~7.0、25~40°C培養(yǎng)10~24小時(shí)。培養(yǎng)的乳酸菌可以以培養(yǎng)液或者將菌體濃縮的濃縮液的狀態(tài)添加到青貯飼料或發(fā)酵飼料中，也可將這些液體以冷凍品的形式使用。此外，也可以以使培養(yǎng)的乳酸菌與適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑或基材一起冷凍干燥、噴霧干燥、流動層干燥而得到的粉末的狀態(tài)進(jìn)行使用。
[0050]本發(fā)明的微生物制劑中，可含有一種或者多種本發(fā)明的產(chǎn)生乳酸鏈球菌素的乳酸菌株。此外，也可含有其它乳酸菌。特別地，通過含有具有耐酸性的乳酸菌，從而可以提供在抑制丁酸發(fā)酵的基礎(chǔ)上還能夠良好乳酸發(fā)酵的微生物制劑。這種情況下，其它乳酸菌當(dāng)然優(yōu)選為乳酸鏈球菌素耐性高的株。作為具有耐酸性的乳酸菌無特別限制，例如可舉出植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)等。優(yōu)選為副干酪乳桿菌 SBS-0003 株(NITE BP-1109)、鼠李糖乳桿菌SBT-2300株、植物乳桿菌畜草I號株，進(jìn)一步優(yōu)選為副干酪乳桿菌SBS-0003株(NITE BP-1109)。
[0051]上述的SBS-0003株保藏于(獨(dú))制品評價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專利微生物保藏中心(地址:日本千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8，郵編292-0818)(保藏日:平成23年06月15曰)。
[0052]上述微生物制劑中的本發(fā)明的乳酸菌與具有耐酸性的乳酸菌的含有比例無特別限制，以質(zhì)量比計(jì)優(yōu)選為1:100~100:1，更優(yōu)選為1:9~9:1，進(jìn)一步優(yōu)選為3:7~7:3。
[0053]此外，根據(jù)需要本發(fā)明的微生物制劑中可含有酶。作為酶的種類可例舉纖維素酶、半纖維素酶等。
[0054]本發(fā)明中的微生物制劑可用于多種青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備。作為用于青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備的青貯飼料或發(fā)酵飼料原料只要是作為常見飼料使用的原料即可，無特別限制，例如作為牧草或飼料作物，可舉出苜蓿、三葉草、梯牧草、鴨茅、草蘆、偃麥草、意大利黑麥草、多年生黑麥草、高羊茅、草甸羊茅、Festulolium ( 7 二 ^卜a丨」々A)、草地早熟禾、小糠草、堅(jiān)尼草、非洲虎尾草、象草、燕麥、大麥、黑麥、高粱、蘇丹草、日本稷子、玉米、飼料稻等。作為食品制造副產(chǎn)物，可舉出啤酒柏、豆腐柏、茶柏、清酒柏、威士忌柏、甜菜渣、甘蔗渣、咖啡柏、果汁渣、羽衣甘藍(lán)柏、淀粉柏等。作為農(nóng)產(chǎn)副產(chǎn)品，可舉出稻桿、麥桿、非標(biāo)準(zhǔn)蔬菜等。此外，也可以在將食品制造副產(chǎn)物、青貯飼料、農(nóng)產(chǎn)副產(chǎn)品、干草、精飼料、維生素?礦物質(zhì)制劑等混合制備的發(fā)酵TMR中添加。優(yōu)選將這些青貯飼料或發(fā)酵飼料原料的水分調(diào)節(jié)為40~90質(zhì)量％來使用。
[0055]作為添加的方法，包括將微生物制劑溶解?混懸于水等中對原料噴霧的方法，將粉狀的微生物制劑分布?混合于原料的方法等。
[0056]添加的菌數(shù)，優(yōu)選以總計(jì)每Ig原料IO3~IO7個(gè)、優(yōu)選為IO4~IO6個(gè)的方式進(jìn)行添加。
[0057]青貯飼料或發(fā)酵飼料通常在厭氧條件下發(fā)酵。用于發(fā)酵的容器，只要能夠保持厭氧狀態(tài)的程度即可，無特別限制，例如可舉出地面青貯倉、青貯倉(7夕〃々寸4 口)、溝式青貯窖、青貯塔、地下青貯窖、混凝土筒倉、杯式筒倉(力v 寸彳口)、輥包(口一 X —>)、柔性集裝袋等。通常在外部氣溫(5~30°C左右)放置一周以上進(jìn)行發(fā)酵。
[0058]使用本發(fā)明的微生物制劑得到的青貯飼料或發(fā)酵飼料，由于丁酸發(fā)酵有效地被抑制，因此牛的嗜好性、 采食量良好，而且不發(fā)生酮癥。
實(shí)施例
[0059]以下，舉出實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍不受這些實(shí)施例的限制。
[0060]<實(shí)施例1 >牧草煮汁培養(yǎng)基中的乳酸鏈球菌素活性
[0061]測定了各乳酸菌在牧草煮汁培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)的培養(yǎng)液上清液的乳酸鏈球菌素活性。
[0062]牧草煮汁培養(yǎng)基按照以下方法制成。向苜蓿草顆粒100g中加入I升蒸餾水，沸水浴中液溫達(dá)到90°C后熬煮30分鐘。用紗布過濾，擠壓殘?jiān)?，將濾液進(jìn)行離心分離后由濾紙進(jìn)行過濾。將濾液定容為I升，分裝于試管中，在高壓釜(115°C，20分)中滅菌。
[0063]牧草煮汁培養(yǎng)基中的糖含量，按照以下方法測定。在培養(yǎng)基360 ill中加入乙腈840 u I進(jìn)行混合，室溫靜置15分鐘。通過離心(15000rpm、15分鐘)去除沉淀，將上清液用0.2 iim的過濾器過濾后以HPLC進(jìn)行分析。將檢測的單糖和二糖(木糖、葡萄糖、果糖、蔗糖)的含量進(jìn)行合計(jì)，作為糖含量。
[0064]將如表1所示的各乳酸菌在MRS液體培養(yǎng)基中進(jìn)行前培養(yǎng)，將該前培養(yǎng)液離心棄去培養(yǎng)基，在菌體中加入與培養(yǎng)基等量的生理鹽水。將該菌體懸浮液以1%接種于牧草煮汁培養(yǎng)基中，32°C靜置培養(yǎng)8小時(shí)，測定培養(yǎng)液的吸光度(660nm)。將該培養(yǎng)液離心，通過AgarWell法測定用0.2 y m的過濾器去除菌體的培養(yǎng)上清液中的乳酸鏈球菌素活性。
[0065][表 I]
[0066]
【權(quán)利要求】
1.一種乳酸菌，其特征在于，在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸菌，其中，在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.7質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生100IU以上的乳酸鏈球菌素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乳酸菌，其中，在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生100IU以上的乳酸鏈球菌素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的乳酸菌，是乳酸乳球菌SBS-0001株即保藏編號NITE BP-1107或乳酸乳球菌SBS-0002株即保藏編號NITE BP-1108。
5.一種青貯飼料制備用微生物制劑，其特征在于，含有在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的青貯飼料制備用微生物制劑，其中，乳酸菌是權(quán)利要求2~4中任一項(xiàng)所述的乳酸菌。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的青貯飼料制備用微生物制劑，其中，進(jìn)一步含有具有耐酸性的乳酸菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的青貯飼料制備用微生物制劑，其中，具有耐酸性的乳酸菌是副干酪乳桿菌SBS-0003株即保藏編號NITE BP-1109。
9.一種青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法，其特征在于，添加青貯飼料制備用微生物制劑，所述青貯飼料制備用微生物制劑含有在單糖和二糖的總計(jì)含量為0.1~0.4質(zhì)量％的牧草煮汁培養(yǎng)基中每ImL上清液產(chǎn)生40IU以上的乳酸鏈球菌素的乳酸菌。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法，其中，乳酸菌是權(quán)利要求2~4中任一項(xiàng)所述的乳酸菌。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的青貯飼料或發(fā)酵飼料的制備方法，其中，所述青貯飼料制備用微生物制劑進(jìn)一步含有具有耐酸性的乳酸菌。
【文檔編號】A23K1/18GK103781898SQ201280031729
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月29日
【發(fā)明者】北村亨, 大淵俊, 本間滿, 上西寬司, 副島洋 申請人:雪印種苗株式會社