用于治療非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的多個方面提供了用于治療非酒精性脂肪性肝炎和相關肝纖維化的方法。具體地，本發(fā)明的多個方面涉及包含半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物的治療性制劑用于治療非酒精性脂肪性肝炎和相關肝纖維化的用途。
【專利說明】用于治療非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯組合物
[0001]相關串請的交叉參考
[0002]本申請要求2011年9月16日提交的美國臨時申請系列號61/535，655和2012年6月6日提交的美國臨時申請系列號61/656，288的權益和優(yōu)先權,每份文獻的全部公開內容通過引用的方式完整地并入本文。
【背景技術】
[0003]非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和脂肪性肝炎(NASH)在美國是常見的肝病。在組織病理學上，這些病癥類似于酒精性肝病，但是它們出現(xiàn)在很少飲酒或不飲酒的人中。肝臟中的病理學變化包括但不限于肝細胞中脂肪積累、肝細胞變性跡象、炎性細胞浸潤、過多纖維組織沉積、肝細胞結節(jié)形成、肝硬化和肝細胞癌。迄今，不存在針對這些病癥的特異性療法。因此，對提供用于在具有或沒有相關肝纖維化的情況下治療非酒精性脂肪性肝炎的方法存在需求。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的多個方面涉及使用用于腸胃外或腸內施用的治療性組合物治療患有脂肪肝、非酒精性脂肪肝病(NALFD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化或非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌的受治療者的方法，所述治療性組合物包含在可接受藥用載體中的含有半乳糖的多糖化合物。在一些方面，本發(fā)明涉及用于治療脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴發(fā)肝纖維化、NASH伴發(fā)肝硬化或NASH伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌的含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物的組合物。本發(fā)明的其他方面涉及半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物在制備用于治療脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴發(fā)肝纖維化、NASH伴發(fā)肝硬化或NASH伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌的藥物組合物中的用途。在一些實施方案中，含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治療劑的混合物可以用于治療脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴發(fā)肝纖維化、NASH伴發(fā)肝硬化或NASH伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌或用于制備治療這些疾病的藥物組合物。
[0005]在一些實施方案中，含有半乳糖的多糖化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0006]在一些實施方案中，該方法包括步驟:獲得用于腸胃外或腸內施用的組合物，所述組合物包含在可接受藥用載體中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物；向受治療者施用有效量的用于腸胃外施用的組合物，所述受治療者患有脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴發(fā)肝纖維化、NASH伴發(fā)肝硬化或NASH伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌中的一種。
[0007]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致NAFLD或NASH分級評分系統(tǒng)的嚴重性降低至少一分、NASH活動性的血清標記的水平降低、NASH疾病活動性降低或NASH的醫(yī)學后果減輕。
[0008]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時,所述有效量的組合物可以導致肝臟中脂肪的積累(脂肪肝)減少，如通過評估肝細胞中微泡狀和大泡狀脂肪顆粒或通過非侵入成像方法(包括但不限于超聲法或磁共振法)從肝組織學切片所確定。在一些實施方案中，肝臟中脂肪的積累減少至少10%，如以含有脂肪的肝細胞的百分數(shù)評估并按照NAFLD分級系統(tǒng)或通過圖像分析分級。
[0009]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時,所述有效量的組合物可以導致肝細胞氣球樣變減少，如通過評估表示毒性和無能力調節(jié)細胞體積的肝細胞腫脹從肝組織學切片確定。在一些實施方案中，肝細胞氣球樣變減少至少10%，如以腫脹肝細胞的百分數(shù)評估并按照NAFLD分級系統(tǒng)分級。 [0010]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致肝組織學樣本中炎性細胞浸潤減少，如通過肝臟樣本的門脈區(qū)、中央?yún)^(qū)和小葉區(qū)中嗜中性粒細胞和淋巴細胞的數(shù)目評估。在一些實施方案中，肝組織學樣本中炎性細胞浸潤減少至少10%，如以使用NAFLD分級系統(tǒng)所評定的炎性細胞的百分數(shù)評估。
[0011]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致肝臟中膠原蛋白的積累減少，如通過定量分析肝組織學切片的天狼猩紅染色所確定。在一些實施方案中，肝臟中膠原蛋白的積累減少至少5%，如以指示膠原蛋白的天狼猩紅的肝組織染色陽性的百分數(shù)評估。
[0012]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致NASH活動性的血清標記的水平降低。在一些實施方案中，NASH活動性的血清標記可以包括但不限于轉氨酶的血清水平、還原型或氧化型輔酶Q的血清水平或本領域已知的NASH活動性的其他血清標記的組合。
[0013]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致肝纖維化或肝硬化減少，這基于包括纖維化的生物化學標記的水平降低、肝纖維化或肝硬化的非侵入性檢驗或纖維化或肝硬化的肝組織學分級的證據(jù)。
[0014]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致NAFLD或NASH分級評分系統(tǒng)(一種廣泛使用的評分系統(tǒng))的嚴重性降低至少一分，所述分級評分系統(tǒng)包括但不限于NAFLD活動性評分(NAS)，由NASH臨床研究網(wǎng)絡(在2002年由國家糖尿病、消化病及腎病研究所(NIDDK)建立)提出。
[0015]在一些實施方案中，當在需要該組合物的受治療者中施用時，所述有效量的組合物可以導致NASH伴發(fā)肝纖維化或肝硬化的醫(yī)學后果如門靜脈高壓癥、肝蛋白質合成減少、高膽紅素血癥或腦病減輕。
[0016]在一些實施方案中，所述化合物是多糖并且可以在化學上定義為半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯(GA-RG)。在一些實施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是含有主鏈的選擇性解聚的支化雜聚物，所述主鏈主要包含1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)部分，伴隨較少的交替性1，4-連接的GalA和1，2-連接的鼠李糖(Rha)的主鏈組成，該主鏈轉而與任意數(shù)目的主要包含1，4-β-D-半乳糖(Gal)的側鏈連接。在一些實施方案中，所述化合物是含有主鏈的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主鏈主要包含1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)部分，伴隨較少的交替性1，4-連接的GalA和1，2-連接的鼠李糖(Rha)的主鏈組成，該主鏈轉而與任意數(shù)目的主要包含1，4-β-D-半乳糖(Gal)殘基和l，5-a-L-阿拉伯糖(Ara)殘基的側鏈連接。其他的側鏈次要組分可以包括木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和巖藻糖(Fuc)。
[0017]在一些實施方案中，所述半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包含以2:1或3:1的比率存在的1，4-β-D-半乳糖殘基和l，5-a-L_阿拉伯糖殘基。在一些實施方案中，所述半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包含相當于總摩爾糖的至少10摩爾百分數(shù)的I, 4- β -D-半乳糖殘基、I, 5- a -L-阿拉伯糖殘基或其組合。
[0018]在一些實施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從5kDa至55kDa、2kDa至80kDa或20kDa至70kDa的平均分子量。
[0019]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的治療劑聯(lián)合使用。在一些實施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以用于混合物中。
[0020]在一些實施方案中，所述化合物是與治療有效量的半胱胺或其藥學上可接受的鹽，或胱胺或其藥學上可接受的鹽聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0021]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的各種抗氧化化合物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述聯(lián)合使用包括但不限于腸胃外或口服施用包含甘草酸苷、五味子、抗壞血酸、L-谷胱甘肽、水飛薊素、硫辛酸和d- α -生育酚的組合物。
[0022]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的各種抗氧化化合物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述聯(lián)合使用包括但不限于腸胃外或口服施用包含水溶性維生素E配制品、混合的類胡蘿卜素或硒的組合物。
[0023]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的腸胃外或口服施用的卵磷脂或復合維生素B聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0024]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的膽鹽配制品聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述膽鹽配制品包括但不限于熊脫氧膽酸、其他天然存在或合成性膽酸或膽酸鹽的鵝脫氧膽酸。
[0025]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的大麻素-1 (CBl)受體拮抗劑和/或反向激動劑聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0026]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的PPAR(過氧化物酶體增殖物活化受體)活性調節(jié)物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0027]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的由以下式代表的苯并硫氮雜
罩頭或苯并硫雜罩類化合物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述化合物含有硫代酰胺鍵和季銨取代基。
[0028]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的抑制蛋白質酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反義構建體聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0029]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的可用作組胺H3拮抗劑的雜原子連接的取代哌啶及其衍生物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0030]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的抑制硬脂酰-輔酶α δ -9去飽和酶的吡咯烷衍生物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0031]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的含有脂連素的促分泌素或誘導物活性的酰胺類化合物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0032]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的季銨類化合物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0033]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的異黃酮類化合物聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0034]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的大環(huán)內酯類抗生素聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0035]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的目前用來治療多發(fā)性硬化的免疫調節(jié)劑藥物醋酸格拉默(Glatiramer acetate)(也稱作共聚物1、Cop-1或克帕松(copaxone),如Teva Pharmaceuticals所銷售)聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醒酸酯。
[0036]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的正五聚蛋白(包括但不限于重組正五聚蛋白-2)聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0037]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的司汀聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述司汀例如是但不限于HMG-CoA還原酶抑制劑如阿托伐他汀和辛伐他汀。
[0038]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的N-乙酰半胱氨酸聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0039]在另一個實 施方案中，所述化合物是與治療有效量的可以抑制單一半乳糖凝集素蛋白或一組半乳糖凝集素蛋白的另一種半乳糖凝集素抑制劑聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述半乳糖凝集素抑制劑包括但不限于半乳糖凝集素的有機小分子抑制劑、單克隆抗體、RNA抑制劑、小結合肽或蛋白質抑制劑。
[0040]在另一個實施方案中，所述化合物是與治療有效量的抑制賴氨酰氧化酶(或交聯(lián)膠原蛋白的其他類似酶)的單克隆抗體或抗結締組織生長因子的單克隆抗體聯(lián)合使用的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。
[0041 ] 在一些實施方案中，所述用于腸胃外施用的組合物的功效可以通過將該組合物施用于NASH的動物模型來確定，所述動物模型包括但不限于導致糖尿病并飼喂高脂膳食的小鼠。在一些實施方案中，將該組合物施用于NASH的動物模型可以導致肝細胞脂肪積累減少至少5%、肝臟的炎性細胞浸潤減少至少5%或肝臟膠原蛋白含量減少至少5%，如通過形態(tài)定量法所確定。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]將參考附圖對本發(fā)明進行進一步解釋，其中相同的結構在幾個視圖中始終由相同的數(shù)字表示。所示的圖不必然地符合比例，相反當說明本發(fā)明的原理時通常將作為重點。
[0043]圖1示出了脂肪性肝炎STAM小鼠模型中治療的實驗設計。
[0044]圖2A是顯示在第6-9周治療組中STAM小鼠體重變化的圖。圖2B是顯示在第9_12周治療組中STAM小鼠體重變化的圖。
[0045]圖3A是顯示在第6-9周治療組中STAM小鼠內的全血葡萄糖的比較圖。圖3B是顯示在第9-12周治療組中STAM小鼠內的全血葡萄糖的比較圖。
[0046]圖4顯示用蘇木精和伊紅(H&E)以及用天狼猩紅染色的正常小鼠和NASH小鼠模型的組織學。
[0047]圖5A顯示溶媒處理的NASH小鼠模型和GR-MD-02處理的NASH小鼠模型的組織學。圖5B是顯示治療組之間的STAM小鼠內NFLD活動性評分比較的圖。
[0048]圖6顯示在第6-9周和在第9-12周采用天狼猩紅染色的實驗組的肝組織學。
[0049]圖7A是顯示在第6-9周實驗組之間肝組織學中天狼猩紅陽性面積比較的圖。圖7B是顯示在第9-12周實驗組之間肝組織學中天狼猩紅陽性面積比較的圖。圖7C是顯示在全部動物中實驗組之間肝組織學中天狼猩紅陽性面積比較的圖。
[0050]圖8A顯示了實驗組肝組織中的α-平滑肌肌動蛋白(SMA)的免疫組織化學染色。圖SB顯示了實驗組肝組織中的α-平滑肌肌動蛋白(SMA)的數(shù)字式形態(tài)測量學。
[0051]圖9Α顯示了實驗組肝組織中的半乳糖凝集素-3的免疫組織化學染色。圖9Β顯示了實驗組肝組織中的半乳糖凝集素-3的數(shù)字式形態(tài)測量學。
【具體實施方式】
[0052]本文中公開了本發(fā)明的詳細實施方案；然而，應當理解所公開的實施方案僅是說明可以按多種形式體現(xiàn)的本發(fā)明。此外，所給出的與本發(fā)明的多個實施方案相關的每個實施例意在是示意性的并且非限制性的。另外，附圖不必然地按照比例，可以放大一些特征以顯示特定組分的細節(jié)。此外，圖中所顯示的任何量值、說明等意在是示意性的并且非限制性的。因此，本文中公開的特定結構和功能細節(jié)不得理解為限制性的，而僅應理解為教導本領域技術人員以多種方式使用本發(fā)明的代表性基礎。
[0053]除非另外說明，否則本文中所表述的全部百分數(shù)均是重量/重量。 [0054]非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的主要特征是肝細胞中脂肪積累伴有少量炎癥。通?；诟闻K活組織檢查鑒定這些患者，所述肝臟活組織檢查因為血清中輕度升高的肝臟轉氨酶水平或在非侵入性檢驗(如計算機化斷層成像或超聲法)時懷疑脂肪肝而進行。
[0055]發(fā)現(xiàn)一個亞類的患有NAFLD的個體患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，其為脂肪肝外加炎性細胞(包括但不限于嗜中性粒細胞或淋巴細胞)浸潤在小葉、中央靜脈和門脈區(qū)內部形成和肝細胞損傷跡象，包括但不限于氣球樣變性。NASH的這種炎性狀態(tài)可以導致纖維組織(包括但不限于膠原蛋白)沉積，這可以導致肝硬化、結節(jié)形成并最終導致肝細胞癌。
[0056]疾病進程是隱伏的，因為大部分患有NASH的人感覺良好并且沒有意識到他們具有肝臟問題。盡管缺少癥狀，但NASH可能是嚴重的并且可以導致纖維物質在肝臟中沉積，這可以導致嚴重瘢痕化和/或肝硬化以及在一些情況下導致肝細胞癌。因此，對可以早期鑒定NASH并跟蹤其進展的臨床檢驗存在需求。
[0057]NAFLD和NASH是常見病癥。美國國家健康研究所報道，10_20%的美國人患有NAFLD并3-5%患有NASH。兩種病癥正在變得常見，因為更多數(shù)目的人患有肥胖癥和糖尿病的，包括兒童和青少年。NASH可以進展成肝硬化的事實使之成為主要健康問題。
[0058]雖然NASH已經(jīng)變得更常見，但是其基礎性病因仍不清楚。它最經(jīng)常出現(xiàn)在超重或肥胖的中年人中，他們中許多患有代謝綜合征、胰島素抵抗或顯性糖尿病。然而，NASH不簡單地是影響肝臟的肥胖癥。NASH可能侵襲兒童和青少年。
[0059]NASH中肝損傷的近因未知。已經(jīng)提出了多個理論。這些理論中的一些包括肝細胞抵抗胰島素作用，損傷肝臟并招募額外炎性細胞的炎性細胞因子由脂肪細胞及其他炎性細胞產生和肝細胞中的氧化應激，伴隨產生損傷肝臟細胞并引起炎癥的反應性氧自由基。[0060]目前 ，不存在針對NASH的特異性療法并且目前僅向患者提供一般健康建議。這些建議包括減輕體重、攝入平衡和健康膳食、增加體力活動并避免酒和不必要的藥物。減輕體重可以在一些NASH患者中改善血清肝臟檢驗并且可以改善組織學肝損傷跡象，但是它不逆轉嚴重肝病。此外，并非全部NASH患者均超重。
[0061]已經(jīng)評價或正在NASH患者中評價多種實驗方法，包括使用抗氧化劑，如維生素E、硒、甜菜堿和抗糖尿病劑，包括二甲雙胍、羅格列酮和吡格列酮。全部臨床結果迄今均令人失望。
[0062]半乳糖凝集素-3蛋白近來涉及NASH的發(fā)病機理。半乳糖凝集素(也稱作半乳素或S-凝集素)是結合β_半乳糖苷的凝集素家族。半乳糖凝集素作為通用名在1994年針對動物凝集素家族提出(Barondes, S.H.等人，Galectins:a family of animalb-galactoside-binding lectins.Cel 176，597-598，1994)。該家族由含有至少一個對β-半乳糖苷存在親和力的特征性糖識別結構域(CRD)并共有某些序列元件定義。在相同肽鏈內部，一些半乳糖凝集素含有僅存在一些額外氨基酸的CRD，而其他半乳糖凝集素含有由連接肽連接的兩個CRD，并且一種半乳糖凝集素(半乳糖凝集素-3)含有與一種不同類型結構域連接的一個CRD。半乳糖凝集素糖識別結構域(CRD)是約135個氨基酸的β-夾層。兩個折疊片略微彎曲，同時6條鏈形成凹陷側并且5條鏈形成凸出側。凹陷側形成其中結合糖的槽(Leffler H, Carlsson S，Hedlund M, Qian Y, Poirier F (2004)."Introductionto galectins".Glycoconj.J.19(7-9):433-40)。
[0063]已經(jīng)顯示廣泛類型的生物現(xiàn)象與半乳糖凝集素相關，例如，發(fā)育、分化、形態(tài)發(fā)生、腫瘤轉移、凋亡、RNA剪接等。然而，關于半乳糖凝集素借以展示這些功能(特別在糖識別方面)的機制，相對知之甚少。
[0064]通常，糖結構域結合到與糖蛋白接合的半乳糖殘基。已經(jīng)鑒定到以串聯(lián)方式含有一個或兩個糖結構域的至少15種哺乳動物半乳糖凝集素蛋白。
[0065]每種半乳糖凝集素蛋白含有一個半乳糖結合結構域和允許與其他半乳糖凝集素蛋白同型二聚化或異二聚化的其他結構域。半乳糖凝集素蛋白在生理條件下以低水平在寬范圍的細胞和組織中表達并存在于胞核、細胞質中并且由非傳統(tǒng)分泌途徑分泌入胞外空間。
[0066]半乳糖凝集素的半乳糖結合結構域與位于細胞表面上或胞外基質蛋白上的含有半乳糖的糖蛋白結合。半乳糖凝集素上的二聚化結構域促進半乳糖凝集素蛋白的相互作用，因而在膜或基質糖蛋白之間產生相互作用。這些相互作用促進細胞-細胞、細胞-基質和基質-基質相互作用和膜受體締合，這可以造成細胞受體活性的激活、失活或調節(jié)，導致調節(jié)胞內信號傳導和后續(xù)事件。
[0067]某些半乳糖凝集素蛋白從處于病理狀態(tài)的細胞明顯上調并且以高的量分泌。處于組織炎癥狀態(tài)和修復(纖維化、瘢痕化)的多種炎性細胞(包括但不限于巨噬細胞和淋巴細胞)表達半乳糖凝集素，特別是半乳糖凝集素-1和半乳糖凝集素_3。
[0068]缺少半乳糖凝集素-3基因的小鼠已經(jīng)用來探索半乳糖凝集素-3在包括炎癥和纖維化的許多疾病狀態(tài)下作為關鍵組分的功能。這些半乳糖凝集素-3敲除小鼠已經(jīng)顯示出抵抗因毒素施用所致的肝纖維化、肺纖維化和腎纖維化。
[0069]半乳糖凝集素-3敲除小鼠也已經(jīng)用來探索半乳糖凝集素-3在NASH中的重要性。在這些實驗中，小鼠飼以高脂膳食以引起NAFLD和NASH的形成。正常小鼠容易形成脂肪肝、肝臟中炎性浸潤和肝纖維化。與之形成鮮明對比，半乳糖凝集素-3敲除小鼠不形成那樣多的脂肪肝，并且具有最少的炎性浸潤和纖維化。這些數(shù)據(jù)表明半乳糖凝集素-3可能是NASH療法的重要靶。
[0070] 抑制半乳糖凝集素-3是本發(fā)明中一項作為半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯功效基礎的潛在機制。 [0071 ] 術語“有效量”意指半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或與半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯聯(lián)合的其他藥劑的量，所述量在作為腸胃外劑量或在口服制劑中施用于患有NAFLD、NASH或NASH伴發(fā)纖維化或肝硬化的動物或人時能夠改善NAS評分至少一分或減少膠原蛋白面積百分數(shù)至少5%。
[0072]在一些方面，表征了用于治療需要其的受治療者中半乳糖凝集素參與其中的一種或多種疾病、病癥或病狀(例如，控制、減輕、緩解、改善或延緩其進展)的方法或用于預防所述疾病、病癥或病狀的方法(例如，延遲其發(fā)作或降低形成風險)。所述方法包括向該受治療者施用有效量的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物或向患有脂肪肝、NALFD、NASH、NASH伴發(fā)肝纖維化、NASH伴發(fā)肝硬化或NASH伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌中的一種的受治療者施用有效量的包含半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物的組合物。
[0073]術語“藥學上可接受的載體”指生理相容的任何和全部溶劑、分散介質，例如，人白蛋白或交聯(lián)型明膠多肽、包衣、抗細菌劑和抗真菌藥化合物、等滲劑(例如，氯化鈉或谷氨酸鈉)和吸收延遲性化合物等。用于藥學活性物質的此類介質和化合物的用途是本領域熟知的。優(yōu)選地，載體適于口服、靜脈內、肌內、皮下、腸胃外、脊髓或硬膜外施用(例如，通過注射或輸注)。取決于施用途徑，活性化合物可以包覆于保護該化合物免遭可能使這種化合物失活的酸和其他天然條件作用的材料中。
[0074]術語“功效”在一些實施方案中指表明與NASH或NASH伴發(fā)纖維化或肝硬化相關的肝臟組織學研究結果改善，如通過NAS評分或膠原蛋白百分數(shù)所確定。
[0075]在一些實施方案中，所述治療方法包括獲得包含在可接受的藥用載體中的化合物的用于腸胃外或腸內施用的組合物的步驟。在一些實施方案中，該化合物是多糖并且可以在化學上定義為半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，一種選擇性解聚的支化雜聚物，其主鏈主要由1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)部分組成，伴隨較少的交替性1，4-連接的GalA和1，2-連接的鼠李糖(Rha)的主鏈組成，該主鏈轉而與任意數(shù)目的主要包含1，4-β-D-半乳糖(Gal)的側鏈連接。其他側鏈次要組分可以包括阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和巖藻糖(Fuc) ο
[0076]在一些實施方案中，該化合物是多糖并且可以在化學上定義為半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯的亞型，稱作半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，一種選擇性解聚的支化雜聚物，其主鏈主要由1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)部分組成，伴隨較少的交替性1，4_連接的GalA和1，2_連接的鼠李糖(Rha)的主鏈組成，該主鏈轉而與任意數(shù)目的主要包含1，4-β -D-半乳糖(Gal)殘基和1，5_ a -L阿拉伯糖(Ara)殘基的側鏈連接。其他的側鏈次要組分可以包括木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和巖藻糖(Fuc)。
[0077]在一些實施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物可以通過美國系列號 8，236，780 中和名稱為 “Composition of Novel Carbohydrate Drug for Treatmentof Human Diseases (用于治療人類疾病的新糖藥物組合物)”的國際專利申請N0.PCT/US12/55311中描述的方法產生，這些文獻通過引用的方式完整地并入用于全部目的。
[0078]在一些實施方案中，所述化合物可以從天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果膠合成，如同從含有8-12%果膠的蘋果渣制造出的那一種。
[0079]在一些實施方案中，可以在糖苷連接的甲氧基化α-1，4-連接的GalA的充分受控和特異性水解情況下合成所述化合物，同時保留含有富集量的l，4-13-D_Gal和1，5- a -L-Ara的側鏈?？梢酝ㄟ^GC-MS (氣相色譜-質譜法)和AELC-PAD (陰離子交換液相色譜-脈沖安培檢測器)法定量地測定1，4- β -D-Gal和1，5- a -L-Ara的量。
[0080]在一些實施方案中，可以通過如下的方法產生所述化合物，即，該方法包括在I至IOOmM還原形式的額外過渡金屬離子如Cu++存在或不存的情況下，通過從抗壞血酸產生的離子化OH-和/或過氧化物定向過氧化裂解糖苷鍵所分解代謝的解聚。其他過渡金屬如Ca++或Fe++可以用于此目的。
[0081]在一些實施方案中，所述解聚化合物可以在2°C至60°C的溫度暴露于8至10之間的pHIO至30分鐘以啟動受控有限的去甲氧基化，以產生與最高87%的初始水平相比甲氧基化程度為40%至70%的解聚化合物，并且可以稱作中等甲氧基化的化合物。認為半乳糖醛酸的完全甲氧基化是大約DE87%。
[0082]在一些實施方案中，所述解聚組合物可以暴露于多次熱酸性醇洗滌(例如在范圍從30°C至80°C的溫度)以除去任何殘留的內毒素、銅和重金屬、農業(yè)污染物和其他雜質。
[0083]在一些實施方 案中，所述化合物是在化學上定義為半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯的多糖，一種具有2，000至80，000、或20，000至70，000、或5，000至55，000道爾頓的平均分子量分布的支化雜聚物，如通過SEC-RI和/或SEC-MALLS法所確定。
[0084]在一些實施方案中，本發(fā)明化合物中1，5-a-L-Ara殘基的摩爾百分數(shù)可以是零或僅以至多1%的痕量存在。
[0085]在一些實施方案中，所述化合物是具有可以分別超過10%總摩爾糖的
I,4-β -D-Gal殘基和1，5- a -L-Ara殘基摩爾百分數(shù)的半乳阿拉伯糖_鼠李糖半乳糖醒酸酯，所述1，4-β -D-半乳糖殘基和1，5-α-L-阿拉伯糖殘基的近似比率范圍是從1:1至3:1。
[0086]在一些實施方案中，所述化合物可以是分子量范圍大幅度降低(例如從約2，000至約80，000D)的高度可溶的改性多糖，從而與治療性制劑相容以通過多種途徑用于多種施用，所述途徑包括但不限于靜脈內、皮下、關節(jié)內、吸入和口服。
[0087]在一些實施方案中，所述化合物可以從天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果膠合成，所述果膠可以來自任何植物來源，包括但不限于柑橘果、蘋果或甜菜。
[0088]在一些實施方案中，所述化合物可以從天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果膠合成，如同從含有8-12%果膠的蘋果渣制造出的那一種。
[0089]在一些實施方案中，可以在糖苷連接的甲氧基化α-1，4-連接的GalA的充分受控和特異性水解情況下合成所述化合物，同時保留具有富集量的l，4-13-D_Gal和1，5- a -L-Ara的側鏈?？梢酝ㄟ^GC-MS (氣相色譜-質譜法)和AELC-PAD (陰離子交換液相色譜-脈沖安培檢測器)法定量地測定1，4- β -D-Gal和1，5- a -L-Ara的量。
[0090]在一些實施方案中，可以通過如下的方法產生所述化合物，即，該方法包括在I至IOOmM還原形式的額外過渡金屬離子如Cu++存在或不存的情況下，通過從抗壞血酸產生的離子化OH-和/或過氧化物定向過氧化裂解糖苷鍵所分解代謝的解聚。其他過渡金屬如Ca++或Fe++可以用于此目的。
[0091]在一些實施方案中，所述解聚化合物可以在2°C至30°C的溫度暴露于8至10之間的pHIO至30分鐘以啟動受控有限的去甲氧基化，以產生與最高87%的初始水平相比甲氧基化程度為40%至70%的解聚化合物，并且可以稱作中等甲氧基化的化合物。認為半乳糖醛酸的完全甲氧基化是大約DE87%。
[0092]在一些實施方案中，所述解聚組合物可以暴露于多次熱酸性醇洗滌(50_65°C )以除去任何殘留的內毒素、銅和重金屬、農業(yè)污染物和其他雜質。
[0093]在一些實施方案中，通過修飾天然存在的聚合物以針對所需范圍降低分子量、減少烷基化基團(去甲氧基化或脫乙?；?，制備可溶性化學改變的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。在化學修飾之前，天然多糖可以具有在大約40，000-1, 000, 000D之間的分子量范圍，伴隨多個糖分支，例如，由I至20個葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等單糖組成的分支，并且這些分支可以通過中性單糖如鼠李糖連接到主鏈。這些分子可以進一步包括單個或一連串可以從少到約2%至多到約70%酯化的糖醛酸糖主鏈。多個分支本身可以具有多個糖分支，所述多個分支任選地包含主要產生疏水實體的中性糖和中性糖衍生物。
[0094]在一些實施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯組合物可以使用來自任何植物來源的果膠原料通過各種處理產生，所述處理包括加熱、高或低pH、多種形式的分子量排阻過濾(或這些方法的組合)，所述果膠原料包括但不限于蘋果、柑橘或甜菜果膠，其中一些可作為USP果膠物質商業(yè)上可獲得。
[0095]在一些實施方案中，所述化合物落在包括基本上脫甲氧基化的聚半乳糖醛酸主鏈的大類內，所述聚半乳糖醛酸主鏈具有從其上懸垂的鼠李糖殘基。認為在這種類型的物質中，從主鏈懸垂的末端半乳糖單元結合到半乳糖凝集素蛋白。剩余的分子主體可以激動化合物在調節(jié)免疫系統(tǒng)反應方面的作用。盡管不希望受推測限制，剩余的分子主體可以與剩余的半乳糖凝集素蛋白部分相互作用和/或可以延長糖部分與它的結合。
[0096]在一些實施方案中，所述治療性組合物可以口服、通過靜脈內注射、通過皮下注射或通過輸注施用。
[0097]盡管前面的討論已經(jīng)主要涉及基于改性果膠的治療性物質，但是應當理解本發(fā)明不受如此限制。根據(jù)本發(fā)明的一般原理，可以使用可與半乳糖凝集素相互作用于并且阻斷半乳糖凝集素的一大類化合物的任何成員。在一個實施方案中，這些物質包括糖類物質，因為這類物質毒性低并且顯示出與半乳糖凝集素強烈的相互作用或顯示出強烈的抗炎作用。改性果膠物質包括一個特定組的糖類物質。同樣，可以類似地使用其合成和半合成類似物如聚半乳糖醛酸物質。
[0098]然而，本發(fā)明的另一類物質包括具有與第二部分連接的第一部分的分子，所述第一部分一般是糖類并且能夠結合到半乳糖凝集素，所述第二部分失活或否則調節(jié)蛋白質活性。該第二部分不需要是糖類并且可以包括交聯(lián)包含半乳糖凝集素蛋白活性部分的蛋白質區(qū)段或與半乳糖凝集素相互作用的另一種蛋白質的活性部分或否則使之變性的物質。這類物質包括活性種類如單獨或組合的硫或其他硫族元素如巰基、硫氫基等。其他活性種類可以包括氰基、硫氰酸酯、烷基化劑、醛等。一些活性種類可以是蛋白質，包括但不限于單克隆抗體。
[0099]本發(fā)明的一些方面涉及在治療NASH或NALD方面含有合適或增加的功效的NASH治療性制劑。在一些實施方案中，所述NASH治療性制劑包含有效量的半乳糖-多糖。在一些實施方案中，所述NASH治療性制劑可以單獨施用或在混合物或配方中與有效量的治療劑共同施用。該制劑可以進一步包含額外的NASH治療劑或賦形劑，其中制劑處于粉末形式或處于液體形式。
[0100]在另一個實施方案中，有效量的含有半乳糖的多糖可以在用于口服施用的制劑中施用。配制可以包括物理改變化合物或添加各種增強含有半乳糖的多糖口服吸收的物質的方法。
[0101]在一些實施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以用于混合物中。術語“混合物”意指混合在一起以形成組合的多于一種組分。出于本發(fā)明的目的，“混合物”意指在施用之前或之后或與之同時的任何時間，兩種或更多種化合物的混合物。
[0102]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的半胱胺或其藥學上可接受的鹽、或胱胺或其藥學上可接受的鹽聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，994，226，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0103]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的各種抗氧化化合物聯(lián)合使用，所述聯(lián)合使用包括但不限于腸胃外或口服施用包含甘草酸苷、五味子、抗壞血酸、L-谷胱甘肽、水飛薊素、硫辛酸和d-α -生育酚的組合物[參見美國專利N0.7，078，064，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0104]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的各種抗氧化化合物聯(lián)合使用，所述聯(lián)合使用包括但不限于腸胃外或口服施用包含水溶性維生素E配制品、混合的類胡蘿卜素或硒的組合物[參見美國專利N0.6，596，762，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0105]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的腸胃外或口服施用的卵磷脂或復合維生素B聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7,018,652 ;6，180, 139，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0106]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的膽鹽配制品聯(lián)合使用，所述膽鹽配制品包括但不限于熊脫氧膽酸、其他天然存在或合成性膽酸或膽酸鹽的鵝脫氧膽酸[參見美國專利N0.6，297，229，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0107]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的大麻素-1 (CBl)受體拮抗劑和/或反向激動劑聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，999，107 ;7，906，652，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0108]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的PPAR(過氧化物酶體增殖物活化受體)活性調節(jié)物聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，994，353，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。 [0109]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的由以下式代表的苯并硫氮雜罩類或苯并硫雜;￥類化合物聯(lián)合使用，所述化合物含有硫代酰胺鍵和季銨取代基[參見美國專利N0.7，973，030，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0110]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的抑制蛋白質酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反義構建體聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7,897, 583，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0111]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的可用作組胺H3拮抗劑的雜原子連接的取代哌啶及其衍生物聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，846，946,該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。 [0112]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的抑制硬脂酰-輔酶a S-9去飽和酶的吡咯烷衍生物聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，754，745，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0113]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的含有脂連素的促分泌素或誘導物活性的酰胺類化合物聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，732，637，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0114]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的季銨類化合物聯(lián)合使用[參見美國專利N0.7，312，208，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0115]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的異黃酮類化合物聯(lián)合使用[參見美國專利N0.6，592，910，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0116]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的大環(huán)內酯類抗生素聯(lián)合使用[參見美國專利N0.5，760，010，該文獻通過引用的方式明確地并入用于全部目的]。
[0117]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的目前用來治療多發(fā)性硬化的免疫調節(jié)劑藥物醋酸格拉默(Glatiramer acetate)(也稱作共聚物l、Cop_l或克帕松(copaxone),如Teva Pharmaceuticals所銷售)聯(lián)合使用。
[0118]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的司汀聯(lián)合使用，所述司汀例如但不限于HMG-CoA還原酶抑制劑如阿托伐他汀和辛伐他汀。
[0119]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的N -乙酰半胱氨酸聯(lián)合使用。
[0120]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的可以抑制單一半乳糖凝集素蛋白或一組半乳糖凝集素蛋白的另一種半乳糖凝集素抑制劑聯(lián)合使用，所述半乳糖凝集素抑制劑包括但不限于半乳糖凝集素的有機小分子抑制劑、單克隆抗體、RNA抑制劑、小結合肽或蛋白質抑制劑。
[0121]在一些實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的抑制賴氨酰氧化酶的單克隆抗體或與結締組織生長因子結合的單克隆抗體聯(lián)合使用。
[0122]在另一個實施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以與治療有效量的正五聚蛋白(包括但不限于重組正五聚蛋白-2)聯(lián)合使用。
[0123]在一些實施方案中，將所述的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和其他化合物作為單獨或與上文所列出的其他化合物組合的療法提出，用于人NASH，作為緩解或逆轉肝細胞脂肪積累、門脈內和小葉內炎性浸潤和纖維化(包括但不限于竇周隙中膠原蛋白沉積)、肝硬化以及用于阻止肝細胞癌進展的方法。另外，提出了肝病病變的這些改善將通過減少肝纖維化和肝硬化的并發(fā)癥(包括肝細胞癌形成)對個體健康產生因而發(fā)生的積極作用。
[0124]在一些實施方案中，有效量的含有半乳糖的多糖可以通過多種途徑施用，所述途徑包括通過作為重復靜脈推注或恒量輸注給予的靜脈內輸注的腸胃外途徑、皮內注射、作為重復快速濃注或恒量輸注皮下給予或口服施用。
[0125]對于實驗動物，含有半乳糖的多糖的有效腸胃外劑量(靜脈內、腹內或皮下給予)是在 2mg/kg 直至 160mg/kg 體重、或 10mg/kg、或 30mg/kg、或 60mg/kg、或 90mg/kg 或 120mg/kg體重范圍內。
[0126]對于實驗動物，含有半乳糖的多糖的有效腸胃外劑量(靜脈內、腹內或皮下給予)可以每周三次、每周二次、每周一次、每兩周一次、每月一次或作為恒量輸注施用。
[0127]對于人類受治療者，含有半乳糖的多糖的有效腸胃外劑量(靜脈內或皮下給予)是在 0.5mg/kg 直至 25mg/kg 體重、或 lmg/kg、或 2mg/kg、或 5mg/kg、或 7.5mg/kg、或 IOmg/kg體重或15mg/kg體重的范圍內。
[0128]對于人類受治療者，含有半乳糖的多糖的有效腸胃外劑量(靜脈內或皮下給予)可以每周三次、每周二次、每周一次、每兩周一次、每月一次或作為恒量輸注施用。
[0129]在一些實施方案中，可以通過NASH的血清生物標記水平至少10%的變化評價治療有效量，所述血清生物標記包括但不限于透明質酸和膠原蛋白的其他分解產物、細胞角蛋白-18和其他細胞骨架細胞蛋白、金屬蛋白酶I和II的組織抑制劑和其他來自肝臟的膠原蛋白和基質蛋白酶?？梢允褂妹庖邷y定法和與疾病嚴重性和治療相關的水平在血清或肝組織中測量這些化合物和生物標記。
[0130]在一些實施方案中，可以通過NASH的血清生物標記至少10%的變化評價治療有效量，所述血清生物標記包括但不限于脂質或蛋白質來源的反應性氧產物、還原或氧化型形式的輔酶Q和脂質分子或綴合物?？梢酝ㄟ^包括免疫測定法和電泳以及它們與疾病嚴重性和治療相關的水平的各種手段測量這些生物標記。
[0131]在一些實施方案中，治療有效量可以由NASH的血清生物標記至少10%的變化評價，所述血清生物標記包括但不限于包括但不限于TNF-a、TGF-β或IL_8的細胞因子、骨橋蛋白、或指示NASH存在或嚴重性的血清組分的代謝譜(這些包括血清標記和尿標記)。一種或多種這些細胞因子譜，如通過免疫測定法或采用LC質譜的蛋白質組評估所測量，可以提供對疾病活動性的評估和疾病治療中追蹤的標記。
[0132]在一些實施方案中，治療有效量可以由NASH的病理生理學譜至少10%的變化評價，所述病理生理學譜包括在肝臟活組織檢查時的組織病理學研究結果，包括但不限于肝細胞內脂肪跡象、肝細胞毒性，包括但不限于透明體、炎性細胞浸潤(包括但不限于淋巴細胞和各種淋巴細胞亞類和嗜中性粒細胞)、膽管細胞變化、內皮細胞變化、枯否(Kupffer)巨噬細胞數(shù)目、膠原蛋白沉積(包括但不限于竇周、門脈和中央膠原蛋白沉積和門脈至中央橋接膠原蛋白沉積)、扭曲正常構造的肝細胞結節(jié)、與惡變一致的肝細胞異型性和組合用于NASH嚴重性分級的各類觀察結果的各種量表和方法。這類組織學的評估是NASH診斷的必要條件并且因此整體地與評估療法相關。
[0133] 在一些實施方案中，治療有效量可以通過NASH臨床表現(xiàn)的至少10%的變化評價，所述臨床表現(xiàn)包括但不限于臨床檢驗的階段和疾病的嚴重性、疾病的臨床體征和癥狀和醫(yī)學并發(fā)癥。NASH的階段和嚴重性的臨床檢驗包括但不限于血液學檢驗(包括但不限于紅細胞計數(shù)和形態(tài)、白細胞計數(shù)和分化及形態(tài)，血小板計數(shù)和形態(tài))、血清或血漿脂類，包括但不限于甘油三酯、膽固醇、脂肪酸、脂蛋白種類和脂質過氧化種類、血清或血漿酶(包括但不限于天冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(AP)、Y谷氨酰轉肽酶(GGTP)、乳酸脫氫酶(LDH)和同工型、指示肝臟合成能力的血清或血漿白蛋白和其他蛋白質、指示肝臟清除代謝副產物的能力的膽紅素或其他化合物的血清或血漿水平、血清或血漿電解質(包括但不限于鈉、鉀、氯化物、鈣、磷)、凝血譜，包括但不限于凝血酶時間(PT)、部分促凝血酶原激酶時間(PTT)、特定凝血因子水平、出血時間和血小板功能。臨床檢驗還包括但不限于評估肝臟構造、結構完整性或功能的非侵入性和侵入性檢驗，包括但不限于計算機化斷層成像(CT掃描)、超聲法(US)、超聲波彈性成像(包括但不限于FitooScan)或其他肝組織彈性測量法、磁共振掃描或光譜法、經(jīng)皮針或薄壁細針或經(jīng)頸靜脈肝臟活組織檢查和組織學評估(包括但不限于使用親和染料或免疫組織化學對不同組分染色)、測量肝門-靜脈楔壓梯度，或可以被開發(fā)用于評估肝組織中NASH嚴重性的其他非侵入性或侵入性檢驗。
[0134]在一些實施方案中，治療有效量可以通過疾病的臨床體征和癥狀的至少10%的變化評價，所述臨床體征和癥狀包括乏力，肌肉重量減輕、蛛形血管瘤、腹痛、腹脹、腹水、胃腸道出血、其他出血并發(fā)癥、易于淤紫和淤斑、外周性水腫、肝腫大、結節(jié)性硬肝(nodularfirm liver)、嗜睡、睡眠障礙和昏迷。NASH的醫(yī)學并發(fā)癥與肝硬化相關并且包括腹水、外周性水腫、食管及其他胃腸道血管曲張、胃腸道出血、其他出血并發(fā)癥，消瘦和肌肉消耗、肝腎綜合征和肝性腦病。與肝硬化相關的NASH其他并發(fā)癥是形成足夠嚴重到確保列入肝移植名單或接受肝移植的并發(fā)癥。
[0135]在一些實施方案中，治療有效量在對糖尿病患者中全血糖或血清脂類升高的患者中血清脂類沒有任何影響的情況下，對NASH肝病和/或纖維化具有影響。
[0136]在一些實施方案中，可以通過肝組織或血清中半乳糖凝集素-3水平至少10%的降低評價治療有效量。
[0137]在一些實施方案中，可以通過血清中半乳糖凝集素-3水平的變化評價治療有效量。
[0138]實施例1:制造半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯類化合物的方法
[0139]以下僅是產生治療性多糖的示意性例子，不意在限制本發(fā)明。在這種情況下，所產生的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯已經(jīng)在本申請中標記為GR-MD-02。
[0140]將蘋果果膠USP HM(50kg)溶解并且在水中加熱至35_85°C。加入IM HCl或NaOH以將溶液的pH調節(jié)到pH5-7并充分混合。將混合在35-85°C設定點繼續(xù)2小時。根據(jù)需要加入IM NaOH或HCl以將pH再調節(jié)到5和7之間。將溶液冷卻至30°C。在30°C，將pH調節(jié)到5和7之間。
[0141]將CuSO4加入到調節(jié)過pH的果膠溶液中，從而形成ImM的最終CuSO4濃度。將ImMCuSO4溶液在10°C和30°C之間的溫度混合30分鐘。
[0142]在30分鐘ImM CuSO4混合步驟結束時，加入50克抗壞血酸鈉(量經(jīng)預先校準以獲得所需的MW)并混合5到20分鐘。加入H2O2,以0.02開始并直至1.0摩爾/kg果膠(對于初始的開始果膠麗預先校準)，并且將H2O2濃度維持4小時(使用定量檢驗，Sigma,St-Louis)，同時將溶液pH維持在4和7之間。
[0143]向溶液加入5M NaOH從而形成8和10之間的溶液pH。將調節(jié)過pH的溶液混合10-30分鐘。隨后向調節(jié)過pH的溶液加入濃HCl以將溶液的pH調節(jié)到4和5之間。一旦調節(jié)到PH4和5之間，可以將溶液在2°C和8°C之間保持混合2至24小時。
[0144]隨后將溶液加熱到80°C持續(xù)30-180分鐘，并且向該溶液加入l_5kg過濾助劑(Celite)，并將添加過Celite的溶液攪拌30分鐘，隨后過濾。棄去過濾產生的固體。
[0145]將濾液在真空下濃縮1.5-3倍，隨后將pH調節(jié)到3和5之間。按50%重量加入熱的乙醇或異丙醇。將混合物攪拌1-2小時以沉淀產物，隨后過濾混合物。棄去濾液，留下白色至米白色沉淀物。[0146]向該溶液加入冷的96%乙醇，并且隨后將所產生的漿液攪拌30分鐘。將溶液過濾并棄去濾液。重復96%乙醇漿液步驟，接著是最終過濾并回收白色至米白色沉淀物。
[0147]實施例2:治療脂肪性肝炎小鼠模型的方法
[0148]該實施例中使用的實驗模型是其中誘導糖尿病并施用高脂膳食的小鼠，一個已經(jīng)稱作STAM小鼠的模型。如圖1中所示，在出生后立即用單次注射鏈佐星誘導糖尿病，接著4周后小鼠開始攝食高脂膳食。這是一個經(jīng)證明的模型，其中小鼠一致地形成NASH伴隨肝細胞脂肪積累、肝細胞毒性跡象、門脈和小葉炎性浸潤、竇周纖維化、晚期纖維化伴發(fā)結節(jié)形成、肝硬化并且最終在一定百分數(shù)的動物中形成肝細胞癌。
[0149]疾病出現(xiàn)的進展是截止5周齡時脂肪肝(FL)，截止7周齡時脂肪性肝炎(NASH)，截止9周齡時纖維化(Fib)，截止13周齡時結節(jié)形成(N)，并且一些動物截止16周齡時形成肝細胞癌(HC)(圖1)。
[0150]在每個所示的開始時間，將如實施例1中所述產生的GR-MD-02以60mg/kg劑量每周二次靜脈內給予四(4)周。在第6周至第9周給予早期治療并且在第9周至第12周給予晚期治療。
[0151]在圖2A-2B中顯示了在早期和晚期治療期后處死的動物的體重變化。與用GR-MD-02治療的動物相比，對于用溶媒(僅生理鹽水)治療的動物不存在體重差異。這表明了在總體水平，幾乎不存在或不存在治療對動物的毒性效應，并且檢測到的任何變化不太可能是由動物的總體健康引起。
[0152]圖3A-3B中顯示了治療組之間的全血葡萄糖的比較。這表明了血糖水平在溶媒對照和GR-MD-02組中均明顯升高，同時在早期或晚期治療方案情況下沒有統(tǒng)計差異。小鼠中的正常血糖是大約100mg/dL并且STAM動物中的平均數(shù)在700和800mg/dL之間，因此表明了所有動物均患有顯性糖尿病。
[0153]圖4顯示了正常小鼠和NASH小鼠中肝臟的組織學。用蘇木精和伊紅(H&E)染色的肝臟切片顯示出正常肝臟和NASH肝臟之間的明顯差異，NASH肝臟顯示出脂肪填充的巨大肝細胞、肝細胞氣球樣變性和炎性細胞浸潤。用天狼猩紅染色的肝臟切片突顯了I型膠原蛋白的存在。圖4顯示了正常肝臟中非常少的膠原蛋白，但是在NASH肝臟中局限于中央靜脈周圍和竇周腔隙中的膠原蛋白增加。該結果表明在這個小鼠模型中獲得了 NASH病變。
[0154]NFLD活動性評分用來在肝臟組織學切片上評價肝病的嚴重性，并且給予三個NASH病變方面的評分，所述NASH病變方面包括脂肪肝(O ?5%)、I (5-33%)、2 (33-66%)或3 (>66%))、肝細胞氣球樣變(0(無)、1(少許)或3(許多))以及小葉炎癥(0(無病灶)、I ?2個病灶/200x視野)、2 (2-4個病灶/200x視野)或3 (>4個病灶/200x視野))。
[0155]總分數(shù)是NFLD活動性評分。
[0156]圖5B顯示了對早期治療組中溶媒和GR-MD-02治療組之間STAM小鼠內肝臟組織學的NFLD活動性評分的比較。溶媒治療小鼠的評分是平均數(shù)5，證實了 NASH的存在。當與溶媒動物相比時， 在GR-MD-02治療的STAM小鼠組中存在高度統(tǒng)計顯著的NFLD活動性評分降低，平均評分為3并P-值小于0.01。這些數(shù)據(jù)表明了 GR-MD-02減少肝臟中與NASH相關的病變。
[0157]圖6顯示了在第6-9周和第9-12周溶媒組和GR-MD-02治療組之間STAM小鼠的肝臟活組織檢查中天狼猩紅陽性面積的比較。天狼猩紅是對膠原纖維具有特異性親和力的組織學染料，使它們染成紅色，并且因此是用于評估肝臟活組織檢查中纖維化程度的定量工具。相對于溶媒對照，在早期治療組和晚期治療組中均存在在GR-MD-02治療動物中所見到的天狼猩紅染色明顯減少。
[0158]使用計算機輔助形態(tài)測量分析評估來自三個治療組的每個組的肝臟組織病理學切片上天狼猩紅染色的面積。圖7A、7B和7C顯示了膠原蛋白百分比面積在早期治療組和晚期治療組中并在合并兩個組評估時明顯統(tǒng)計顯著地減少。這些結果表明了用GR-MD-02治療由于降低NASH的活動性而減少小鼠中的肝纖維化。另外，晚期治療組表明了用GR-MD-02治療能夠逆轉NASH小鼠中的纖維化(圖7B)。
[0159]該數(shù)據(jù)進一步表明了在對全血糖不存在作用的情況下，所測試的治療性化合物的功效對NASH肝病和纖維化具有作用。相對于對照組，治療組中的血糖不降低，表明可以在沒有有效治療糖尿病的情況下治療肝病。
[0160]在肝臟中沉積膠原蛋白的原代細胞是活化的星狀細胞。NASH中的炎性浸潤活化靜息星狀細胞，所述星狀細胞在其活化狀態(tài)下分泌形成與疾病相關的纖維組織的膠原蛋白。圖8A顯示了蛋白質α-平滑肌肌動蛋白的免疫組織化學染色，α-平滑肌肌動蛋白是活化的星狀細胞的標記。用GR-MD-02治療導致α-平滑肌肌動蛋白明顯減少，這表明了活化的星狀細胞明顯減少(圖SB)。這是采用治療減少膠原蛋白沉積的機制之一。
[0161]圖9Α顯示了在溶媒治療和GR-MD-02治療的實驗組的肝組織中半乳糖凝集素_3蛋白的免疫組織化學染色。在溶媒治療的動物中的巨噬細胞內主要存在半乳糖凝集素-3的高水平表達。用GR-MD-02治療導致肝臟中與疾病病變改善相關的半乳糖凝集素-3的明顯減少(圖9Β)。
[0162]可以理解本文所描述的實施例和實施方案是僅僅用于說明性目的，并且根據(jù)它們的各種修改或改變將包括在本申請的精神與范圍內以及所附權利要求書的范圍內。本文中引用的所有出版物、專利和專利申請在此通過引用的方式完整并入用于全部目的。
【權利要求】
1.一種方法，包括步驟: 獲得包含在可接受藥用載體中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯的用于腸胃外或腸內施用的組合物； 向需要其的受治療者施用導致以下至少一種情況的有效量的組合物: 非酒精性脂肪肝病或非酒精性脂肪性肝炎分級評分系統(tǒng)的嚴重性降低至少一分、非酒精性脂肪性肝炎活動性的血清標記的水平降低、非酒精性脂肪性肝炎疾病活動性減輕或非酒精性脂肪性肝炎的醫(yī)學后果減輕， 其中，所述受治療者具有以下至少一種疾病:脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化或非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，施用導致肝臟中脂肪的積累減少至少10%。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，施用導致肝臟中脂肪的積累減少，如以肝臟中具有脂肪的肝細胞的百分數(shù)評估。
4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述肝臟中脂肪的積累減少由超聲成像法或磁共振成像法評估。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，施用導致肝細胞氣球樣變減少至少10%。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述肝細胞氣球樣變減少以腫脹肝細胞的百分數(shù)評估。
7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，施用導致肝臟樣本的門脈區(qū)、中央?yún)^(qū)和小葉區(qū)中嗜中性粒細胞和淋巴細胞的浸潤減少至少10%。
8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，施用導致肝臟中膠原蛋白的積累減少至少5% ο
9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于，通過使用超聲或磁共振彈性成像測量組織硬度/彈性，非侵入地確定肝臟中膠原蛋白積累的減少。
10.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，非酒精性脂肪性肝炎活動性的血清標記選自由轉氨酶、還原型或氧化型輔酶Q或其組合組成的組。
11.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述減輕NASH伴發(fā)肝纖維化或肝硬化的醫(yī)學后果包括減輕門靜脈高壓癥、降低肝蛋白質合成能力、高膽紅素血癥或腦病。
12.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，施用導致肝組織或血清中半乳糖凝集素-3降低至少10%。
13.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包括1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)殘基主鏈，所述主鏈與α _1，2連接的鼠李糖殘基和α-1，4-連接的GalA殘基交替低聚物的支化雜聚物連接，所述鼠李糖殘基攜帶1，4-β -D-半乳糖殘基的低聚物的主要分支。
14.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯進一步包含木糖殘基、葡萄糖殘基、巖藻糖殘基或其組合。
15.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)殘基主鏈的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半 乳糖醛酸酯，所述主鏈與α-1，2連接的鼠李糖殘基和α-1，4_連接的GalA殘基交替低聚物的支化雜聚物連接，所述鼠李糖殘基攜帶1，4-β -D-半乳糖殘基、1，5-α-L-阿拉伯糖殘基或其組合的低聚物的主要分支。
16.根據(jù)權利要求15所述的方法，其特征在于，所述l，4-13-D-半乳糖殘基和1，5-a-L-阿拉伯糖殘基以2:1或3:1的比率存在。
17.根據(jù)權利要求15所述的方法，其特征在于，所述1，4-β-D-半乳糖殘基、所述1，5-α-L-阿拉伯糖殘基或其組合相當于總摩爾糖的至少10摩爾百分數(shù)。
18.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從5kDa至55kDa的平均分子量。
19.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從2kDa至80kDa的平均分子量。
20.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從20kDa至70kDa的平均分子量。
21.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，在施用步驟中，半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯與有效量的治療劑共同施用。
22.根據(jù)權利要求21所述的方法，其特征在于，所述治療劑是以下之一:半胱胺或其藥學上可接受的鹽、胱胺或其藥學上可接受的鹽、抗氧化化合物、卵磷脂、復合維生素B、膽鹽配制品、大麻素-1 (CBl)受體的拮抗劑、大麻素-1 (CBl)受體的反向激動劑、過氧化物酶體增殖物活化受體活性調節(jié)物、苯并硫氮雜罩類或苯并硫雜;f:類化合物、抑制蛋白質酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反義構建體、雜原子連接的取代哌啶及其衍生物、吡咯烷衍生物、含有脂連素的促分泌素或誘導物活性的酰胺類化合物、季銨類化合物、醋酸格拉默、正五聚蛋白、HMG-CoA還原酶抑制劑、N-乙酰半胱氨酸、異黃酮類化合物、大環(huán)內酯類抗生素、半乳糖凝集素抑制劑、抗體或前述的任何組合。
23.根據(jù)權利要求22所述的方法，其特征在于，所述抗氧化化合物包括水溶性維生素E配制品、混合的類胡蘿卜素、硒或它們的組合。
24.根據(jù)權利要求22所述的方法，其特征在于，所述膽鹽配制品包括熊脫氧膽酸、天然存在的膽酸或膽酸鹽的鵝脫氧膽酸、合成膽酸或膽酸鹽的鵝脫氧膽酸或它們的組合。
25.根據(jù)權利要求22所述的方法，其特征在于，所述正五聚蛋白是重組正五聚蛋白-2。
26.根據(jù)權利要求22所述的方法，其特征在于，所述HMG-CoA還原酶抑制劑包括阿托伐他汀、辛伐他汀或它們的組合。
27.根據(jù)權利要求22所述的方法，其特征在于，所述半乳糖凝集素抑制劑包括半乳糖凝集素的有機小分子抑制劑、單克隆抗體、RNA抑制劑、小結合肽、蛋白質抑制劑或它們的組合。
28.根據(jù)權利要求22所述的方法，其特征在于，所述抗體是抗賴氨酰氧化酶的抗體或抗結締組織生長因子的抗體。
29.一種半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯在制備用于治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化或非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌的藥物組合物中的用途。
30.根據(jù)權利要求29所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包括.1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)殘基主鏈，所述主鏈與α _1，2連接的鼠李糖殘基和α-1，4-連接的GalA殘基交替低聚物的支化雜聚物連接，所述鼠李糖殘基攜帶1，4-β -D-半乳糖殘基的低聚物的主要分支。
31.根據(jù)權利要求29所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)殘基主鏈的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主鏈與α-1，2連接的鼠李糖殘基和α-1，4_連接的GalA殘基交替低聚物的支化雜聚物連接，所述鼠李糖殘基攜帶1，4-β -D-半乳糖殘基、.1，5-α-L-阿拉伯糖殘基或其組合的低聚物的主要分支。
32.根據(jù)權利要求31所述的用途，其特征在于，所述l，4-13-D-半乳糖殘基和.1，5-a-L-阿拉伯糖殘基以2:1或3:1的比率存在。
33.根據(jù)權利要求31所述的用途，其特征在于，所述l，4-13-D-半乳糖殘基、.1，5-α-L-阿拉伯糖殘基或其組合相當于總摩爾糖的至少10摩爾百分數(shù)。
34.根據(jù)權利要求29所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從5kDa至55kDa的平均分子量。
35.根據(jù)權利要求29所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從2kDa至80kDa的平均分子量。
36.根據(jù)權利要求29所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從20kDa至70kDa的平均分子量。
37.一種用于治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化或非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌的含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治療劑的混合物。
38.一種含有在藥學上可接受載體中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治療劑的混合物在制備用于治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化或非酒精性脂肪性肝炎伴發(fā)肝硬化及肝細胞癌的藥物組合物中的用途。
39.根據(jù)權利要求37所述的混合物，其特征在于，所述治療劑是以下之一:半胱胺或其藥學上可接受的鹽、胱胺或其藥學上可接受的鹽、抗氧化化合物、卵磷脂、復合維生素B、膽鹽配制品、大麻素-1 (CBl)受體的拮抗劑、大麻素-1 (CBl)受體的反向激動劑、過氧化物酶體增殖物活化受體活性調節(jié)物、苯并硫氮雜罩類或苯并硫雜；f:類化合物、抑制蛋白質酪氨酸磷酸酶的RNA反義構建體PTPRU、雜原子連接的取代哌啶及其衍生物、吡咯烷衍生物、含有脂連素的促分泌素或誘導物活性的酰胺類化合物、季銨類化合物、醋酸格拉默、正五聚蛋白、HMG-CoA還原酶抑制劑、N-乙酰半胱氨酸、異黃酮類化合物、大環(huán)內酯類抗生素、半乳糖凝集素抑制劑、抗體或前述的任何組合。
40.根據(jù)權利要求37所述的混合物，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包括1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)殘基主鏈，所述主鏈與α -1，2連接的鼠李糖殘基和α -1, 4_連接的GalA殘基交替低聚物的支化雜聚物連接，所述鼠李糖殘基攜帶1，4-β -D-半乳糖殘基的低聚物的主要分支。
41.根據(jù)權利要求37所述的混合物，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1，4-連接的半乳糖醛酸(GalA)和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)殘基主鏈的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主鏈與α-1，2連接的鼠李糖殘基和α-1，4_連接的GalA殘基交替低聚物的支化雜聚物連接，所述鼠李糖殘基攜帶1，4-β -D-半乳糖殘基、.1，5-α-L-阿拉伯糖殘基或其組合的低聚物的主要分支。
42.根據(jù)權利要求41所述的混合物，其特征在于，所述l，4-13-D-半乳糖殘基和.1，5-a-L-阿拉伯糖殘基以2:1或3:1的比率存在。
43.根據(jù)權利要求41所述的混合物，其特征在于，所述l，4-13-D-半乳糖殘基、.1，5-α-L-阿拉伯糖殘基或其組合相當于總摩爾糖的至少10摩爾百分數(shù)。
44.根據(jù)權利要求37所述的混合物，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從5kDa至55kDa的平均分子量。
45.根據(jù)權利要求37所述的混合物，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從2kDa至80kDa的平均分子量。
46.根據(jù)權利要求37所述的混合物，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范圍從20kDa至70kDa 的平均分子量。
【文檔編號】A01N43/04GK103945695SQ201280049079
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2012年9月14日 優(yōu)先權日:2011年9月16日
【發(fā)明者】彼得·G·特拉伯, E·佐默, 阿納特爾·A·科爾約瑟夫 申請人:卡萊克汀醫(yī)療有限公司