開發(fā)病原體-響應(yīng)嵌合啟動子的新型植物來源順式-調(diào)節(jié)元件的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種促進(jìn)病原體可誘導(dǎo)性或者誘導(dǎo)子可誘導(dǎo)性的分離順式-調(diào)節(jié)元件，該調(diào)節(jié)元件包含一個核酸分子，其核苷酸序列符合以下一種核心序列基序：a)vaaagtm，b)aaacca，c)scaaam，d)acrcg，e)sktgkact，f)mrtsack，g)ccaccaa，h)tcgtctcttc，i)wwkgwc或者一種與a)至i)互補(bǔ)的核心序列基序。
【專利說明】開發(fā)病原體-響應(yīng)嵌合啟動子的新型植物來源順式-調(diào)節(jié)元件

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種順式-調(diào)節(jié)元件和由該順式-調(diào)節(jié)元件生成的具有病原體或者誘導(dǎo)子誘導(dǎo)植物活性的嵌合啟動子。此外，上述發(fā)明涉及一種宿主細(xì)胞、一種轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞、一種轉(zhuǎn)基因植物組織以及一種轉(zhuǎn)基因植物和其種子。此外，上述發(fā)明還涉及一種用于生成轉(zhuǎn)基因植物，尤其是抗病原體植物的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]由于真菌、病毒、線蟲和細(xì)菌導(dǎo)致的植物疾病導(dǎo)致全球大量的作物減產(chǎn)，影響了農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量，因此需要大量使用化學(xué)殺蟲劑，因?yàn)橹参锏淖匀环烙胧?借助該自然防御措施可以防御大量的潛在病原體或者延遲和限制其擴(kuò)散)通常不足以抵抗病蟲害?？梢允褂没蚣夹g(shù)方案創(chuàng)造可抵抗上述病原體的植物。通過在感染點(diǎn)(病原體和植物之間的接觸點(diǎn))有針對性地形成可觸發(fā)植物較強(qiáng)耐抗反應(yīng)的蛋白(作用劑)表達(dá)或者可自行毒殺病原體或者可抑制病毒生長的分子表達(dá)使得植物具有較高的奶抗性。
[0003]可觸發(fā)植物較強(qiáng)耐抗反應(yīng)的作用劑包括諸如自動活性耐抗基因(R-基因)或者可激活植物內(nèi)源耐抗基因的非病原性基因蛋白。較強(qiáng)的耐抗反應(yīng)包括超敏反應(yīng)(HR)、宿主組織在感染位置的控制性細(xì)胞死亡、通過木化作用和形成角質(zhì)增強(qiáng)植物的細(xì)胞壁，形成植物抗毒素和產(chǎn)生PR(病原體相關(guān)的)蛋白。
[0004]因?yàn)樵撃涂狗磻?yīng)具有較高的能量需求，且可能導(dǎo)致植物細(xì)胞死亡(壞死)，因此其觸發(fā)過程必須進(jìn)行嚴(yán)格的控制。相同的情況也適用于病原體毒性蛋白或者肽的表達(dá)，只要該蛋白或者肽的基本表達(dá)對植物或者其農(nóng)業(yè)特性(例如產(chǎn)量)具有不利作用。在一種轉(zhuǎn)基因方案中，可以通過使用具有期望特性的啟動子進(jìn)行控制。
[0005]通過使用各種已知的自然病原體誘導(dǎo)啟動子，例如PRl-啟動子，可以實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因(如作用劑)的病原體誘導(dǎo)表達(dá)(Rushton等，1996)。尤其是，微陣列技術(shù)的發(fā)展使得已經(jīng)可以對大量的病原體誘導(dǎo)啟動子進(jìn)行識別(W0 03/00898, WO 02/50293或者JP2003284566)。
[0006]這一類的自然病原體誘導(dǎo)啟動子可能會顯示出非特定活性，因?yàn)槠湫枰ㄟ^大量不同的刺激才可以激活。其原因在于，啟動子的分子結(jié)構(gòu)由多種不同的順式-調(diào)節(jié)元件組成，存在巨大差異的信號整合于一個復(fù)雜的表達(dá)方案中。由此，自然病原體誘導(dǎo)啟動子也表現(xiàn)出不需要的活性(例如在特定的組織中)或者表現(xiàn)為較高的背景活性。
[0007]例如小麥中的抵抗素病原體誘導(dǎo)啟動子在種子形成和種子萌芽過程中活動(Kovalchuk等,2010)。上述PRl-啟動子不僅通過病原體，而且也通過衰老進(jìn)行誘導(dǎo)(Morris 等，2000)
[0008]在其他試驗(yàn)中顯示，自然的、因銹病誘發(fā)的亞麻Fisl啟動子在轉(zhuǎn)化后不適合對亞麻中L6抗銹基因自動活性形式的表達(dá)進(jìn)行針對性調(diào)節(jié)，并使得除了抗銹性能外不會出現(xiàn)負(fù)面的農(nóng)業(yè)特性，例如產(chǎn)量低下(Howles等，2005)。
[0009]一種提高啟動子最需要特性的可能性是識別負(fù)責(zé)順式-調(diào)節(jié)元件所需的誘導(dǎo)以及由順式-調(diào)節(jié)元件組成的嵌合啟動子的結(jié)構(gòu)(Venter, 2007)。其他刺激的序列基序被去除。
[0010]對多種病原體誘導(dǎo)基因的啟動子進(jìn)行了更詳細(xì)的試驗(yàn)，其中，對促成病原體專有誘導(dǎo)的多種順式-調(diào)節(jié)元件進(jìn)行了識別(Strittmatter等，1996 ； Eu I gem等,2000 ；Kirsch等，2000，2001 ;HimmelbaCh等，2010)。其他示例為通過分步突變自然病原體-誘導(dǎo)啟動子識別的順式-調(diào)節(jié)元件D-Box，S-Box或者W-Box (W000/29592)或者接頭分區(qū)區(qū)域LSlO或者LS7 (Lebel等，1998)。尤其是W-Box試驗(yàn)情況良好，可以利用其核心序列TTGAC (C/T)對W-Box在自然病原體誘導(dǎo)啟動子中的附加變體進(jìn)行查找。
[0011]此外，可以借助程序，例如MEME(Bailey 和 Elkan, 1994 ；Humphry 等,2010)或者BEST (Che等，2005)利用生物信息方法對新型順式-調(diào)節(jié)元件進(jìn)行識別。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于，順式-調(diào)節(jié)元件不再識別為較短的單獨(dú)序列，而是識別為經(jīng)確定以的序列基序，通過該序列基序可以對多個順式-調(diào)節(jié)元件變體，即多個轉(zhuǎn)錄因子連接位置的變體進(jìn)行確定。當(dāng)然，這一類的生物信息方案也經(jīng)常用于測定假陽性序列，從而使得僅對潛在序列或者序列基序進(jìn)行預(yù)先選擇。但通常必須強(qiáng)制證明和檢驗(yàn)順式-調(diào)節(jié)元件的功能，并專門對促進(jìn)病原體誘導(dǎo)的順式-調(diào)節(jié)元件的功能進(jìn)行檢驗(yàn)和證明。此外，這一類的實(shí)驗(yàn)室分析通?；ㄙM(fèi)不菲。
[0012]另外可以通過組合使用不同順式-調(diào)節(jié)元件提高啟動子特性(Rushton等，2002)。對此，組合使用不會導(dǎo)致活性升高(協(xié)助作用)，而是這一類的協(xié)助作用僅在特有的、單獨(dú)的、不可預(yù)言的組合中出現(xiàn)，因此在任何情況下均需要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行測定。例如已經(jīng)公開的是組合使用順式-調(diào)節(jié)元件 D-Box和S-Box的嵌合啟動子(W0 00/29592)。元件重復(fù)的次數(shù)調(diào)節(jié)啟動子數(shù)量和背景活性。
[0013]在開發(fā)病原體誘導(dǎo)嵌合啟動子的過程中的另一問題是不同植物物種的功能性。一般而言，盡管在幾乎所有迄今為止試驗(yàn)的植物類型中通過已知的病原體誘導(dǎo)嵌合啟動子均可以確定病原體的可誘導(dǎo)性，但在非病原體侵害條件下會顯示其他的背景活性。該背景噪音會根據(jù)使用嵌合啟動子的植物類型發(fā)生波動。同時與誘導(dǎo)率(被感染組織中的啟動子活性和未被感染組織中的啟動子活性比)和啟動子的絕對活性(啟動子數(shù)量)相關(guān)。例如，通過未被感染組織中較強(qiáng)的背景活性僅可以確定受感染組織中較低的病原體-可誘導(dǎo)性。
[0014]根據(jù)當(dāng)前的知識水平，對于所述的背景活性、誘導(dǎo)率、啟動子數(shù)量、誘導(dǎo)動力學(xué)和啟動子活動的空間延伸方面的波動主要?dú)w因于所使用的啟動子的順式-調(diào)節(jié)元件(Rushton等，2002，Venter, 2002)。即使已知的嵌合啟動子比自然啟動子占優(yōu)勢，仍然存在對嵌合啟動子進(jìn)一步優(yōu)化的需求，尤其是對順式-調(diào)節(jié)元件和/或順式-調(diào)節(jié)元件的組合。此外還缺少良好特征化的順式-調(diào)節(jié)元件和這一類順式-調(diào)節(jié)元件的適當(dāng)組合，借助該元件或者元件組合可以構(gòu)成在不同植物物種中確保高度專用和可控、符合需求的病原體誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的嵌合啟動子，此外，該表達(dá)僅由于病原體侵害以及幾乎僅在感染位置進(jìn)行表達(dá)(Gurr&RushtOn，2005)。因此，上述發(fā)明的任務(wù)在于提供這一類新型的促進(jìn)病原體可誘導(dǎo)性的順式-調(diào)節(jié)元件和元件組合。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]在下文中對于本申請中使用的部分概念進(jìn)行更詳細(xì)的說明:
[0016]上述發(fā)明意義上的“誘導(dǎo)子”是指誘導(dǎo)物或者信使物質(zhì)，該物質(zhì)可以誘導(dǎo)對植物病原體的防御措施，例如植物抗毒素的合成。誘導(dǎo)子既可以是內(nèi)源性的，也可以是外源性的。誘導(dǎo)子(外源)主要來自病原體，并被植物所識別。誘導(dǎo)子也包含PAMP (病原相關(guān)分子模式)，例如Flagelin，PEP25和Chitin。使用誘導(dǎo)子模仿病原體感染或者和病原體接觸，其方法是通過以人工的方式在存在病原體的情況下進(jìn)行應(yīng)用。結(jié)合上述發(fā)明，誘導(dǎo)子尤其可用于檢驗(yàn)催化劑的可誘導(dǎo)性。
[0017]“單獨(dú)序列”是指核苷酸或者堿基(對)的順序，其中在單獨(dú)序列中的每個位置僅通過一個單獨(dú)固定規(guī)定的堿基(a，c，g或者t)加以確定。單獨(dú)序列分離自自然啟動子，可說明生物信息分析的結(jié)果。單獨(dú)序列由核心序列和側(cè)面的序列段組成?！皢为?dú)序列”的概念也指其核苷酸或者堿基(對)順序符合單獨(dú)序列的核酸分子。
[0018]“核心序列”是指順式-調(diào)節(jié)元件特定段落中核苷酸或者堿基(對)的順序，其中，該段落對于順式-調(diào)節(jié)元件的功能而言發(fā)揮主要作用。核心序列是單獨(dú)序列的組成部分?！昂诵男蛄小备拍钜仓钙浜塑账峄蛘邏A基(對)順序符合核心序列的核酸分子。
[0019]“啟動子”是指不可翻譯DNA-序列，比較典型的為向上的編碼區(qū)域，該區(qū)域包含用于RNA-聚合酶的連接處，且發(fā)起DNA的轉(zhuǎn)錄。此外，啟動子還經(jīng)常包含其他用作基因表達(dá)調(diào)節(jié)器的元件(例如順式-調(diào)節(jié)元件)。
[0020]“最小啟動子”是指僅具有用于發(fā)起轉(zhuǎn)錄的基本元件的啟動子(例如TATA-Box和/或發(fā)起劑)。
[0021]“嵌合啟動子”是指一種在自然中不存在的由多種元件組成的啟動子。該啟動子包含最小啟動子，且在最小啟動子上游具有至少一個順式-調(diào)節(jié)元件，該調(diào)節(jié)元件用作專門的反式作用因子(trans-acting factors,例如轉(zhuǎn)錄因子)。嵌合啟動子可以根據(jù)期望的要求進(jìn)行設(shè)計(jì)，并通過不同的因子進(jìn)行誘導(dǎo)或者復(fù)制。順式-調(diào)節(jié)元件或者順式-調(diào)節(jié)元件的選擇對于啟動子的特性或者活性水平具有決定性意義。嵌合啟動子中的順式-調(diào)節(jié)元件即可以與所使用的最小啟動子異源，即順式-調(diào)節(jié)元件來自于其他有機(jī)物或者與所使用的最小啟動子不同的物種(例如在圖15A-C中所示)，嵌合啟動子中的順式-調(diào)節(jié)元件也可以與所使用的最小啟動子同源，即順式-調(diào)節(jié)元件和最小啟動子組合出現(xiàn)在自然啟動子中，但順式-調(diào)節(jié)元件自身或者作為嵌合啟動子中的附加元件位于和自然啟動子相比不同的基因環(huán)境中。嵌合啟動子也可以指通過對至少一種順式-調(diào)節(jié)元件進(jìn)行多聚二發(fā)生變化的(自然)啟動子(例如在圖15D中所示)。
[0022]“互補(bǔ)”核苷酸序列基于一個雙鏈DNA，與第一個DNA鏈互補(bǔ)的第二個DNA鏈符合堿基對規(guī)則，且在考慮方向的情況下具有與第一鏈堿基等同于的核苷酸堿基(例如:5’ -gcat-3’ 和 5’ -atgc-3’ 互補(bǔ))。
[0023]“病原體”是指在和植物相互作用的過程中導(dǎo)致在植物一個或者多個部位出現(xiàn)疾病癥狀的有機(jī)物。病原體包含諸如動物類、真菌類、細(xì)菌類或者病毒性有機(jī)物或者卵菌亞綱真菌。
[0024]“病原體感染”是指病原體物質(zhì)代謝準(zhǔn)備滲透至植物宿主組織的最早時間點(diǎn)。對于真菌或者卵菌亞綱真菌包括連接處的生長或者形成專門的感染結(jié)構(gòu)，例如滲透連接處和附著胞。
[0025]“病原體/誘導(dǎo)子-可誘導(dǎo)性”或者“病原體/誘導(dǎo)子”可誘導(dǎo)“在本發(fā)明中是指啟動子的特有性能，在病原體感染或者使用誘導(dǎo)子后可導(dǎo)致至少增強(qiáng)兩倍的有效連接基因的轉(zhuǎn)錄。此外，“病原體/誘導(dǎo)子-可誘導(dǎo)性”或者“病原體/誘導(dǎo)子”可誘導(dǎo)“在本發(fā)明中也可以指在病原體感染或者使用誘導(dǎo)子后至少增強(qiáng)兩倍轉(zhuǎn)錄的基因性能。
[0026]根據(jù)本發(fā)明，上述任務(wù)通過新型的促進(jìn)病原體和/或誘導(dǎo)子可誘導(dǎo)性的順式-調(diào)節(jié)元件加以解決。該調(diào)節(jié)元件尤其在核心序列中和已知元件存在顯著差異，因此，并非已知元件的變體。此外，根據(jù)本發(fā)明的順式-調(diào)節(jié)元件用作新轉(zhuǎn)錄因子的識別和/或連接處，這使得，促進(jìn)的病原體和/或誘導(dǎo)子可誘導(dǎo)性具有了全新的特性。根據(jù)本發(fā)明的順式-調(diào)節(jié)元件通過啟動子中的生物信息方案被病原體或者PAMP(誘導(dǎo)子)誘導(dǎo)的擬南芥基因所識別。分離出的順式-調(diào)節(jié)元件單獨(dú)序列由于不同的分析步驟分為八個基序組(基序組1，5，11，12，18，21，27和32)。此外，也可以將多個分離出的單獨(dú)序列分配給一個基序組21η。在一個包含單獨(dú)序列的基序組中，與已經(jīng)識別的基序相比，顯示較高程度的可保留性?；蚪M的單獨(dú)序列均與一個特征核心序列基序中的單獨(dú)序列相一致。因此所述的任務(wù)通過一種包含核酸分子的分離順式-調(diào)節(jié)元件加以解決，其核苷酸序列對應(yīng)于以下一種核心序列基序:
[0027]a) vaaagtm,
[0028]b)
[0029]c) scaaam,
[0030]d) acrcg,
[0031]e)sktgkact,
[0032]f)mrtsack,
[0033]g) ccaccaa,
[0034]h) tcgtctcttc 或者
[0035]i)wwkgwc。
[0036]在特征化核心序列基序a)至i)中較難保留的堿基位置按照如下方式進(jìn)行說明:’r’代表鳥嘌呤(g)或者腺嘌呤(a)，即一種嘌呤堿基，’k’代表鳥嘌呤(g)或者胸腺嘧啶(t)/尿嘧啶(u)，’s’代表鳥嘌呤(g)或者胞嘧啶(c)，’m’代表腺嘌呤(a)或者胞嘧啶(c)，’w’代表腺嘌呤(a)或者胸腺嘧啶(t)/尿嘧啶(U)。一種特定的核心序列基序說明至少一種屬于核心序列基序的基序組單獨(dú)序列的核心序列的子序列，其中子序列至少為單獨(dú)序列的總核心序列的30%。對于包含核心序列基序g)和h)的基序組而言，整個核心序列的核心序列基序和單獨(dú)序列相同。本發(fā)明同時包含一種分離出的順式-調(diào)節(jié)元件，該調(diào)節(jié)元件包含一種核酸分子，其核苷酸序列為a)至i)互補(bǔ)核心序列基序中的一種。特定基序組的特征化的核心序列也可以多次出現(xiàn)在一個單獨(dú)序列的核心序列中，核心序列基序也可以疊加出現(xiàn)在核心序列中和/或者分別顯示不同的方向。例如，基序組I中順式09的核心序列一方面具有一個與核心序列基序acrcg等同于的子序列，另一方面具有一個疊加兩個堿基的和acrcg互補(bǔ)的核心序列基序(即cgygt)等同于的子序列。另一個示例位于基序組11中核心序列21G-2_M1_S2中，核心序列具有兩個子序列，每個子序列疊加一個堿基，且分別與aaacca的互補(bǔ)核心序列基序，即等同于tggttt。
[0037]對于基序組1，5，11，12，21，21η和27而言，根據(jù)功能性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對其中包含特征化核心序列基序的家族基序進(jìn)行定義。家族基序說明了一種轉(zhuǎn)錄因子或者一個轉(zhuǎn)錄因子家族的跟蹤識別特征。家族基序的優(yōu)點(diǎn)在于其包含識別/連接區(qū)域的可能變體。一個基序組的家族基序優(yōu)先包含在該基序組中包含的單獨(dú)序列的所有核心序列。由此，針對單獨(dú)序列的一部分考慮順式-調(diào)節(jié)元件的互補(bǔ)鏈；為方便理解，這一類已經(jīng)識別的根據(jù)本發(fā)明的順式-調(diào)節(jié)序列的互補(bǔ)序列在隨后使用’(inv)’進(jìn)行標(biāo)識。通過該方式定義的家族基序具有至少15個核苷酸，優(yōu)先為至少13個核苷酸，特別優(yōu)先為至少11個核苷酸的長度。除了相應(yīng)的核心序列基序，家族基序具有相應(yīng)的側(cè)面區(qū)域，該側(cè)面區(qū)域在根據(jù)本發(fā)明的順式-調(diào)節(jié)元件用于嵌合啟動子中時對其性能(例如背景活性和表達(dá)強(qiáng)度)具有重要的定量影響。隨著側(cè)面區(qū)域特定堿基與單獨(dú)序列中核心序列之間距離的上升，其定量影響會降低。為了對家族基序進(jìn)行定義，也可以額外考慮其他超出單獨(dú)序列核心序列的側(cè)面區(qū)域中的高保留單獨(dú)喊基，該單獨(dú)喊基對豕族基序進(jìn)彳了擴(kuò)展?；蚪MI，5,11,12, 21, 21η和27的豕族基序在表格I的第2欄中作了說明。本發(fā)明中也包含一種具有核酸分子的分離的順式-調(diào)節(jié)元件，其核苷酸序列:
[0038]a)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:1的家族基序,其包含核心序列基序vaaagtm,
[0039]b)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:2的家族基序，其包含核心序列基序aaacca，
[0040]c)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:3的家族基序，其包含核心序列基序scaaam，
[0041]d)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:4的家族基序，其包含核心序列基序acrcg，
[0042]e)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:5的家族基序，其包含核心序列基序sktgkact，
[0043]f)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:6的家族基序，其包含核心序列基序mrtsack，
[0044]g)對應(yīng)于根據(jù)SEQ ID NO:41的家族基序,其包含核心序列基序wwkgwc,或者對應(yīng)于與a)至g)中的一種互補(bǔ)的家族基序。
[0045]此外家族基序也可以更短。在其最短的形式中，家族基序被定義為最小家族基序，該家族基序根據(jù)單獨(dú)序列的方向等同于共同的核心序列基序僅包含反應(yīng)堿基位置，該堿基位置在一個基序組的所有單獨(dú)序列的核心序列中進(jìn)行復(fù)制。在部分情況下，最小家族基序等同于核心序列基序。在表格I第2欄中，家族基序被覆蓋，下劃線部分為基序組1，5，11，12，21，21η和27的最小豕族基序。
[0046]表格1:基序組1，5，11，12，21，21η，27和32說明，該說明包含基于基序組的核心序列基序(I)，家族基序⑵和歸入基序組的單獨(dú)序列⑶；最小家族基序使用下劃線，核心序列基序在家族基序中加粗顯不。
[0047](’ η’代表任意堿基；’ h’代表a, c或者t/u d’代表a, g或者t/u V’代表a, g或者c r'代表g或者a, ’ k’代表g或者t/u, ’ s’代表g或者c, ’m’代表a或者c y’代表t/u或者c w’代表a或者t/u)
[0048]

【權(quán)利要求】
1.賦予病原體可誘導(dǎo)性或者誘導(dǎo)子可誘導(dǎo)性的分離的順式-調(diào)節(jié)元件，該調(diào)節(jié)元件包含一個核酸分子，其核苷酸序列對應(yīng)于以下一種核心序列基序:
a)vaaagtm，
b)aaacca，
c)scaaam,
d)acrcg，
e)sktgkact，
f)mrtsack,
g)ccaccaa，
h)tcgtctcttc， i)wwkgwc,或者 對應(yīng)于與a)至i)互補(bǔ)的核心序列基序。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的分離的順式-調(diào)節(jié)元件，其特征在于，核酸分子的核苷酸序列代表所述核心序列的部分 序列或所述順式-調(diào)節(jié)元件核心序列。
3.分離的順式-調(diào)節(jié)元件，包含一個核酸分子，其核苷酸序列: a)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:1的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序vaaagtm, b)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:2的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序 c)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:3的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序scaaam, d)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:4的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序acrcg, e)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:5的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序sktgkact， f)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:6的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序mrtsack, g)對應(yīng)于根據(jù)SEQID NO:41的家族基序，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的核心序列基序wwkgwc, h)對應(yīng)于與a)至f)中的一種互補(bǔ)的家族基序。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的分離的順式-調(diào)節(jié)元件，其特征在于，家族基序包含所述順式-調(diào)節(jié)元件的核心序列。
5.分離的順式-調(diào)節(jié)元件，包含一個核酸分子: a)含根據(jù)以下編號的核苷酸序列:SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ IDNO:10, SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:15，SEQID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21,SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23，SEQ ID NO:24，SEQ ID NO:25，SEQ ID NO:26，SEQ ID NO:.27，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:30，SEQ ID NO:31，SEQ ID NO:32，SEQ IDNO:33, SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:42，SEQ ID NO:43 或者 SEQ ID NO:44，b)含根據(jù)以下編號核心序列的核苷酸序列:SEQID NO:7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:.15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ IDNO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43 或者 SEQ ID NO:44，或者 c)含一個與a)或者b)中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列。
6.嵌合啟動子，該嵌合啟動子適合通過病原體感染或者使用病原體誘導(dǎo)子進(jìn)行處理在植物細(xì)胞中表達(dá)有效連接的核酸分子，且包含一個最小啟動子和至少一個根據(jù)權(quán)利要求1至5中一項(xiàng)的順式-調(diào)節(jié)元件。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的嵌合啟動子，其特征在于，嵌合啟動子至少包含一種順式-調(diào)節(jié)元件的多聚體，對此，其中的至少一個順式-調(diào)節(jié)元件為根據(jù)權(quán)利要求1至5中一項(xiàng)的順式-調(diào)節(jié)元件。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的嵌合啟動子，其特征在于，多聚體為一種二聚體或者四聚體。
9.一種重組基因，該基因包含根據(jù)權(quán)利要求6至8中一項(xiàng)的嵌合啟動子。
10.一種載體，該載體包含根據(jù)權(quán)利要求6至8中一項(xiàng)的嵌合啟動子或者根據(jù)權(quán)利要求9的重組基因。
11.一種原核或者真核宿主細(xì)胞，該細(xì)胞包含根據(jù)權(quán)利要求6至8中一項(xiàng)的嵌合啟動子，根據(jù)權(quán)利要求9的重組基因或者根據(jù)權(quán)利要求10的載體。
12.—種轉(zhuǎn)基因植物，通過根據(jù)權(quán)利要求6至8中一項(xiàng)的嵌合啟動子，根據(jù)權(quán)利要求9的重組基因或者根據(jù)權(quán)利要求10的載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的植物的種子、細(xì)胞、組織或者部分。
14.用于生成根據(jù)權(quán)利要求12的植物的方法，包含: a)在至少一個植物細(xì)胞中導(dǎo)入根據(jù)權(quán)利要求6至8中一項(xiàng)的嵌合啟動子，根據(jù)權(quán)利要求9的重組基因或者根據(jù)權(quán)利要求10的載體，和 b)植物的再生。
【文檔編號】A01H5/10GK104136615SQ201280070286
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月23日
【發(fā)明者】D·施塔爾, F·韋爾特邁爾, R·黑爾, J·科施曼, J·尼邁爾 申請人:Kws種子股份有限公司