專利名稱：棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種雜交育種方法。
背景技術(shù)：
棕點(diǎn)石斑魚{Epinephelus fuscoguttatus)又稱褐點(diǎn)石斑魚，俗稱老虎斑、虎頭斑，為暖水性島礁性魚類，在我國(guó)主要分布于東海和南海，資源量比較稀少。由于其肉味鮮美、生長(zhǎng)快、市場(chǎng)潛力大，養(yǎng)殖前景看好。鞍帶石斑魚俗名龍膽石斑，又稱紫石斑，為暖水性海洋底層魚類，是石斑魚類中體型最大的種類之一，有斑王之稱，主要產(chǎn)地是東南亞、澳洲水域以及我國(guó)南海(南沙群島)、臺(tái)灣附近海域。鞍帶石斑魚種苗來源稀少，市場(chǎng)售價(jià)昂貴，而且該種魚生長(zhǎng)迅速、抗病力強(qiáng)。棕點(diǎn)石斑魚肉質(zhì)鮮美，生長(zhǎng)速度和抗病能能力并不突出，而鞍帶石斑魚生長(zhǎng)速度快、抗病力強(qiáng)，但肉質(zhì)不及棕點(diǎn)石斑魚。根據(jù)遺傳學(xué)特性，品種間的雜交技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)兩種魚優(yōu)勢(shì)性狀的集成。目前國(guó)內(nèi)已有開展棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法的研究，但國(guó)內(nèi)人工繁殖操作技術(shù)并不完善，苗種成活率低，產(chǎn)量不穩(wěn)定，成為養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法，所要解決的技術(shù)問題一是構(gòu)建工廠化環(huán)境下棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚親魚人工促熟技術(shù)，以調(diào)節(jié)棕點(diǎn)石斑魚和鞍帶石斑 魚性成熟時(shí)間，解決棕點(diǎn)石斑魚和鞍帶石斑魚發(fā)育受外界環(huán)境限制問題；二是構(gòu)建棕點(diǎn)石斑魚精子超低溫冷凍技術(shù)，保存鞍帶石斑魚精液，解決因棕點(diǎn)石斑魚和鞍帶石斑魚因性成熟時(shí)間不一致，受精困難的問題；三是構(gòu)建受精卵臭氧消毒技術(shù)，進(jìn)行臭氧消毒，有效切斷細(xì)菌、病毒性疾病從受精卵到苗種的垂直傳播。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法，其特征在于
1)、親本篩選雜交育種選擇6 10齡鞍帶石斑魚作為雄性親本，4飛齡棕點(diǎn)石斑魚作為雌性親本；
2)、親本培育將雌雄親本分別放養(yǎng)于不同親魚培育池內(nèi)，每池放養(yǎng)5 10尾；棕點(diǎn)石斑魚養(yǎng)殖水溫保持在2(T38°C，鞍帶石斑魚養(yǎng)殖水溫保持在2(Γ30攝氏度；親本餌料為鮐魚、鲅魚的任一種或者兩種的任意比例混合投喂，水溫彡24°C時(shí)2天投喂I次，2(T23°C時(shí)每周投喂2次，每次投喂量占魚體體重的1% ；
3)、人工促熟技術(shù)通過調(diào)控親魚培育的水溫度，控制育苗時(shí)間在每年6月份，措施為從第一年的12月份開始，親魚培育水溫從23°C逐步降低至20°C再逐步升溫至25°C不再升高，升溫和降溫頻率控制在每20天升高或降低1°C ;至第二年5月份準(zhǔn)備繁殖時(shí)，鞍帶石斑魚親魚從25°C升溫至30°C不再升高，升溫頻率每3天升高1°C ;棕點(diǎn)石斑魚從25°C升溫至28°C不再升高，升溫頻率每3天升高1°C ；4)、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化選擇在第二年2月份進(jìn)行，強(qiáng)化時(shí)間選擇親魚培育水溫由最低值開始上升的過程中進(jìn)行，營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化包括增加魷魚、維生素C、維生素E、裂壺藻；
5)、精子超低溫冷凍保存第二年5飛月份開始進(jìn)行鞍帶石斑魚精子超低溫冷凍保存，通過鏡檢的方式確定雄魚發(fā)育及精子質(zhì)量情況，選擇發(fā)育成熟、成活率達(dá)到95%以上的精子進(jìn)行超低溫冷凍保存；按照精子與冷凍稀釋液體積比1:1將精子加入到冷凍稀釋液中，一并置于液氮中保存?zhèn)溆?；其中冷凍稀釋液的配比是每升葡萄?4g，氯化鈉Sg，碳酸氫鈉O. 08g，二甲基亞砜IOmL,胎牛血清10mL，余量為去離子水；
6)、雌性親本催產(chǎn)第二年5月份開始對(duì)棕點(diǎn)石斑魚雌魚進(jìn)行鏡檢，挑選腹部明顯膨脹，卵巢發(fā)育至IV期的雌魚放養(yǎng)在培育池內(nèi)，水溫維持28°C ;對(duì)棕點(diǎn)石斑魚雌魚進(jìn)行藥物注射催產(chǎn)，注射所用催產(chǎn)劑配置方法取400 800IU/kg魚體重的HCG和2 3ug/kg魚體重的LRH- A3，混合后加O. 9%的生理鹽水2ml/條魚溶解；將催產(chǎn)劑一次性進(jìn)行魚體注射，注射部位為背部肌肉。注射后效應(yīng)時(shí)間約為36小時(shí)；
7)、人工授精對(duì)催產(chǎn)后腹部柔軟輕壓有透明卵流出的棕點(diǎn)石斑雌魚，進(jìn)行人工擠卵，使用玻璃或塑料容器接收；將鞍帶石斑魚冷凍精液在37°C水浴中快速?gòu)?fù)溫解凍，按照精、卵數(shù)量比1: 1000的比例混合均勻，干法授精，將受精卵放在孵化槽內(nèi)，孵化20小時(shí)左右，收集上浮發(fā)眼卵。所述的棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法，其特征在于還包括以下步驟采用臭氧消毒方式對(duì)上浮發(fā)眼卵進(jìn)行消毒，水溫應(yīng)控制在25 26°C，水體臭氧濃度O. 3^0. 5ppm,每次網(wǎng)袋放入約IOOOml受精卵，消毒時(shí)間I分鐘，消毒時(shí)受精卵須充分浸入溶有臭氧的消毒水中。本發(fā)明的積極效果在于采用人工促熟技術(shù)，對(duì)棕點(diǎn)石斑魚和鞍帶石斑魚親魚發(fā)育進(jìn)行人工調(diào)控，實(shí)現(xiàn)了北方春季育苗的工廠化實(shí)施；采用鞍帶石斑魚精子超低溫冷凍保存技術(shù)，突破了鞍帶石斑魚雄魚與棕點(diǎn)石斑魚雌魚親本性成熟時(shí)間不一致的瓶頸，實(shí)現(xiàn)工廠化雜交育種；采用了受精卵臭氧消毒技術(shù)，降低了細(xì)菌、病毒性疾病從受精卵到苗種的垂直傳播的幾率，使雜交品種仔稚魚成活率提高到40%。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明1、親本篩選
雜交育種選擇鞍帶石斑魚作為雄性親本，棕點(diǎn)石斑魚作為雌性親本。鞍帶石斑魚選擇6^10齡親魚，棕點(diǎn)石斑魚選擇4飛齡親魚；親本應(yīng)選擇選擇體表光滑、無傷、無疾病的健康個(gè)體。2、親本培育
將雌雄親本分別放養(yǎng)于不同親魚培育池內(nèi)，養(yǎng)殖池尺寸6mX6mX3m，每池放養(yǎng)5 10尾，棕點(diǎn)石斑魚養(yǎng)殖水溫保持在2(T38°C (不同時(shí)期對(duì)于溫度的要求不同)，鞍帶石斑魚養(yǎng)殖水溫保持在2(Γ30攝氏度(不同時(shí)期對(duì)于溫度的要求不同)；親本餌料為鮐魚、鲅魚的任一種或者兩種的任意比例混合投喂，投喂量根據(jù)水溫變化而定，水溫彡24°C時(shí)2天投喂I次，2(T23°C時(shí)每周投喂2次，每次投喂量占魚體體重的1%。3、人工促熟技術(shù)本發(fā)明的人工促熟技術(shù)主要采用控溫的方式，通過調(diào)控親魚培育的水溫度，從而控制育苗時(shí)間在每年6月份。具體措施為一般從第一年的12月份開始，親魚培育水溫從23°C逐步降低至20°C再逐步升溫至25°C不再升高，升溫(降溫)頻率控制在每20天升高(降低)TC。至第二年5月份準(zhǔn)備繁殖時(shí)，鞍帶石斑魚親魚從25°C升溫至30°C不再升高，升溫頻率每3天升高1°C ;棕點(diǎn)石斑魚從25°C升溫至28°C不再升高，升溫頻率每3天升高1°C。4、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化選擇在第二年2月份進(jìn)行，強(qiáng)化時(shí)間選擇親魚培育水溫由最低值開始上升的過程中進(jìn)行，營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化主要增加魷魚、維生素C、維生素E、裂壺藻等。5、精子超低溫冷凍保存第二年5飛月份開始進(jìn)行鞍帶石斑魚精子超低溫冷凍保存。通過鏡檢的方式確定雄魚發(fā)育及精子質(zhì)量情況，選擇發(fā)育成熟、成活率達(dá)到95%以上的精子進(jìn)行超低溫冷凍保存。按照精子與冷凍稀釋液體積比1:1將精子加入到冷凍稀釋液中，一并置于液氮中保存?zhèn)溆?。其中冷凍稀釋液的配比是以IL溶液為例，需葡萄糖24g，氯化鈉8g，碳酸氫鈉O. 08g，二甲基亞砜(DMSO)lOmL，胎牛血清(FBS)IOmL,用去離子水定容至IL06、雌性親本催產(chǎn)第二年5月份開始對(duì)棕點(diǎn)石斑魚雌魚進(jìn)行鏡檢，挑選腹部明顯膨脹，卵巢發(fā)育至IV期(IV期特征卵巢呈青灰色稍帶棕黃色，卵粒明顯，放置固定液中可游離脫落。)的雌魚放養(yǎng)在尺寸6mX6mX3m的培育池內(nèi)，水溫維持28°C。對(duì)棕點(diǎn)石斑魚雌魚進(jìn)行藥物注射催產(chǎn)。注射所用催產(chǎn)劑配置方法取人絨毛膜促性腺激素(HCG)400 ^800IU/kg魚體重和促排卵素3號(hào)(LRH- A3)(促排卵素3號(hào)屬于促黃體生成素釋放激素類似物)2^3ug/kg魚體重，混合后O. 9%的生理鹽水2ml/條魚溶解，配置成催產(chǎn)劑。將催產(chǎn)劑一次性進(jìn)行魚體注射，注射部位為背部肌肉。注 射后效應(yīng)時(shí)間約為36小時(shí)，可進(jìn)行人工擠卵。間隔3天后可重復(fù)進(jìn)行催產(chǎn)。7、人工授精對(duì)催產(chǎn)后腹部柔軟輕壓有透明卵流出的棕點(diǎn)石斑雌魚，進(jìn)行人工擠卵，使用玻璃或塑料容器接收；將鞍帶石斑魚冷凍精液在37°C水浴中快速?gòu)?fù)溫解凍，按照精、卵數(shù)量比1:1000的比例混合均勻，干法授精，將受精卵放在孵化槽內(nèi)，孵化20小時(shí)左右，收集上浮發(fā)眼卵。8、受精卵消毒采用臭氧消毒方式對(duì)上浮發(fā)眼卵進(jìn)行消毒，采用20L消毒槽，水溫應(yīng)控制在25 26°C，水體臭氧濃度O. 3^0. 5ppm，每次網(wǎng)袋放入約IOOOml受精卵，消毒時(shí)間I分鐘，消毒時(shí)受精卵須充分浸入溶有臭氧的消毒水中。
權(quán)利要求
1.棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法，其特征在于 1)、親本篩選雜交育種選擇6 10齡鞍帶石斑魚作為雄性親本，4飛齡棕點(diǎn)石斑魚作為雌性親本； 2)、親本培育將雌雄親本分別放養(yǎng)于不同親魚培育池內(nèi)，每池放養(yǎng)5 10尾；棕點(diǎn)石斑魚養(yǎng)殖水溫保持在2(T38°C，鞍帶石斑魚養(yǎng)殖水溫保持在2(T30攝氏度；親本餌料為鮐魚、鲅魚的任一種或者兩種的任意比例混合投喂，水溫彡24°C時(shí)2天投喂I次，2(T23°C時(shí)每周投喂2次，每次投喂量占魚體體重的1% ； 3)、人工促熟技術(shù)通過調(diào)控親魚培育的水溫度，控制育苗時(shí)間在每年6月份，措施為從第一年的12月份開始，親魚培育水溫從23°C逐步降低至20°C再逐步升溫至25°C不再升高，升溫和降溫頻率控制在每20天升高或降低1°C ;至第二年5月份準(zhǔn)備繁殖時(shí)，鞍帶石斑魚親魚從25°C升溫至30°C不再升高，升溫頻率每3天升高1°C ;棕點(diǎn)石斑魚從25°C升溫至28°C不再升高，升溫頻率每3天升高1°C ； 4)、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化選擇在第二年2月份進(jìn)行，強(qiáng)化時(shí)間選擇親魚培育水溫由最低值開始上升的過程中進(jìn)行，營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化包括增加魷魚、維生素C、維生素E、裂壺藻； 5)、精子超低溫冷凍保存第二年5飛月份開始進(jìn)行鞍帶石斑魚精子超低溫冷凍保存，通過鏡檢的方式確定雄魚發(fā)育及精子質(zhì)量情況，選擇發(fā)育成熟、成活率達(dá)到95%以上的精子進(jìn)行超低溫冷凍保存；按照精子與冷凍稀釋液體積比1:1將精子加入到冷凍稀釋液中，一并置于液氮中保存?zhèn)溆?；其中冷凍稀釋液的配比是每升葡萄?4g，氯化鈉Sg，碳酸氫鈉0. 08g, 二甲基亞砜10mL，胎牛血清10mL，余量為去離子水； 6)、雌性親本催產(chǎn)第二年5月份開始對(duì)棕點(diǎn)石斑魚雌魚進(jìn)行鏡檢，挑選腹部明顯膨脹，卵巢發(fā)育至IV期的雌魚放養(yǎng)在培育池內(nèi)，水溫維持28°C ;對(duì)棕點(diǎn)石斑魚雌魚進(jìn)行藥物注射催產(chǎn)，注射所用催產(chǎn)劑配置方法取400 800IU/kg魚體重的HCG和2 3ug/kg魚體重的LRH- A3，混合后加0. 9%的生理鹽水2ml/條魚溶解；將催產(chǎn)劑一次性進(jìn)行魚體注射，注射部位為背部肌肉；注射后效應(yīng)時(shí)間約為36小時(shí)； 7)、人工授精對(duì)催產(chǎn)后腹部柔軟輕壓有透明卵流出的棕點(diǎn)石斑雌魚，進(jìn)行人工擠卵，使用玻璃或塑料容器接收；將鞍帶石斑魚冷凍精液在37°C水浴中快速?gòu)?fù)溫解凍，按照精、卵數(shù)量比1: 1000的比例混合均勻，干法授精，將受精卵放在孵化槽內(nèi)，孵化20小時(shí)左右，收集上浮發(fā)眼卵。
2.如權(quán)利要求1所述的棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法，其特征在于還包括以下步驟采用臭氧消毒方式對(duì)上浮發(fā)眼卵進(jìn)行消毒，水溫應(yīng)控制在25 26°C，水體臭氧濃度0. 3^0. 5ppm，每次網(wǎng)袋放入約IOOOml受精卵，消毒時(shí)間I分鐘，消毒時(shí)受精卵須充分浸入溶有臭氧的消毒水中。
全文摘要
本發(fā)明是棕點(diǎn)石斑魚與鞍帶石斑魚的一種工廠化雜交育種方法，選擇鞍帶石斑魚親魚和棕點(diǎn)石斑魚親魚進(jìn)行親魚培育，人工調(diào)控鞍帶石斑魚培育水溫從23℃到20℃再到30℃，棕點(diǎn)石斑魚親魚培育水溫從23℃到20℃再到28℃，次年5-6月份取鞍帶石斑魚成熟精液備用。挑選腹部明顯膨脹，卵巢發(fā)育至Ⅳ期的雌魚，注射催產(chǎn)劑，36小時(shí)效應(yīng)期后，撈取棕點(diǎn)石斑雌魚進(jìn)行人工擠卵，然后將收集的棕點(diǎn)石斑魚卵與采集好的鞍帶石斑精液按照體積比1000:1混合，加入海水完成受精，將受精卵放在孵化槽內(nèi)，經(jīng)過20小時(shí)左右，收集上浮發(fā)眼卵，采用濃度0.3-0.5ppm的臭氧進(jìn)行消毒。實(shí)現(xiàn)了棕點(diǎn)石斑魚和鞍帶石斑魚雜交育種。
文檔編號(hào)A01K61/00GK103026994SQ201310001580
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2013年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月4日
發(fā)明者翟介明, 李波, 武鵬飛, 李文升, 龐尊方, 馬文輝, 劉江春, 孫禮娟 申請(qǐng)人:萊州明波水產(chǎn)有限公司