專利名稱：一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于菌種培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種蜜環(huán)菌液體菌株的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
蜜環(huán)菌(Armlllaria mellea)屬擔(dān)子菌亞門，傘菌目，白蘑科,蜜環(huán)菌屬，是一種夏、秋季發(fā)生，能兼性寄生，藥食兼用的真菌。蜜環(huán)菌具有抗炎、抗腫瘤、抗輻射、促進造血機能、降低血糖、增強免疫力、提高記憶力等作用，還可治療由不同病因引起的眩暈綜合癥、血管性頭疼等常見病、多發(fā)病，并具有一定的抑制腫瘤生長等藥理和保健功能。目前已開發(fā)出多種與密環(huán)菌有關(guān)的藥品和保健品，如:蜜環(huán)菌片、腦心舒口服液、蜜環(huán)菌浸膏、蜜環(huán)菌糖漿等。公知的蜜環(huán)菌培養(yǎng)方法有固態(tài)發(fā)酵和液體深層發(fā)酵。固態(tài)發(fā)酵周期過長、容易染菌、藥效成分分離困難；目前，液體深層發(fā)酵普遍受歡迎，但液體發(fā)酵存在發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基成本較高、種子菌質(zhì)量不高，大小不一、發(fā)酵產(chǎn)物較低。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明提供一種蜜環(huán)菌液體菌株的培養(yǎng)方法，能有效地提高菌株的培養(yǎng)效率和質(zhì)量。為解決上述問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:I)制備母種:制作試管培養(yǎng)基并進行高壓滅菌30_45min,冷卻后在無菌環(huán)境下向試管培養(yǎng)基中接入豌豆粒大小的菌種塊，置于23-28°C環(huán)境中避光培養(yǎng)6-12天；2)搖瓶培養(yǎng):制備搖瓶培養(yǎng)基，然后將步驟I)中培養(yǎng)的母種進行碎化處理，在無菌環(huán)境下接種到搖瓶中，將接好種的搖瓶放在25-28°C，震蕩頻率500-650 / min的電磁搖床上培養(yǎng)4-7天；3)發(fā)酵罐培養(yǎng):對發(fā)酵罐進行空罐滅菌，然后在發(fā)酵罐中配置發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基，在液體培養(yǎng)基的表層或淺表層設(shè)置起支架作用的支撐物，并進行滅菌處理；將步驟2)中搖瓶培養(yǎng)的菌種流入發(fā)酵罐中，完成發(fā)酵罐接種；打開發(fā)酵罐的氣泵，設(shè)置通氣量為015-0.35L/min，溫度控制為25-28 °C，使菌種在發(fā)酵罐中培養(yǎng)5_9天。進一步，所述步驟I)中的試管培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)含:玉米粉60_80g，黃豆粉10-15g，蔗糖(白糖)10-18g，PH 值為 5.5-6.5。進一步，所述步驟2)中的搖瓶培養(yǎng)基和步驟3)中的發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基均為為每升培養(yǎng)基含:大米面15-25g，白糖12-20g，酵母膏0.5_2g，蛋白胨3_9g，磷酸二氫鉀1.0-2.5g，硫酸鎂 0.5-1.25g，PH 值為 5.5-6.5。進一步，所述步驟3)中的起支撐作用的支撐物為:不銹鋼絲網(wǎng)或者海綿。本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明利用玉米粉、大豆粉、大米粉和食用蔗糖為培養(yǎng)基，原料為成本低、易獲得的農(nóng)副產(chǎn)品，不僅降低了生產(chǎn)成本，而且還提高了農(nóng)副產(chǎn)品利用價值；同時，對種子菌進行碎化處理，可使菌球變小并大小一致，提高了種子菌的質(zhì)量，加快了菌球生長速度，使蜜環(huán)菌深層液體發(fā)酵生長迅速、產(chǎn)量大幅提高。且本發(fā)明中采用靜置懸浮培養(yǎng)，菌株自培養(yǎng)基中吸取營養(yǎng)，自空氣中吸收氧份，菌絲體向下方生長直至長成粗壯的菌索并充滿整個發(fā)酵罐。所得到的菌索以干重法計，蜜環(huán)菌可達35-40g/L。相對于固態(tài)發(fā)酵或普通的液體深層發(fā)酵，操作簡單，分離方便，周期短，菌索產(chǎn)量高、活性多糖產(chǎn)率也高且穩(wěn)定。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步描述，在此發(fā)明的示意性實施例以及說明用來解釋本發(fā)明，但并不作為對本發(fā)明的限定。實施例1一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:I)制備母種:制作試管培養(yǎng)基，玉米粉75g，黃豆粉12g，蔗糖(白糖)13g，PH值為
6.0。并進行高壓滅菌40min，冷卻后在無菌環(huán)境下向試管培養(yǎng)基中接入豌豆粒大小的菌種塊，置于25°C環(huán)境中避光培養(yǎng)10天；2)搖瓶培養(yǎng):制備搖瓶培養(yǎng)基，大米面20g,白糖15g,酵母膏Ig,蛋白胨5g,磷酸二氫鉀2.0g，硫酸鎂lg，PH值為6.5。然后將步驟I)中培養(yǎng)的母種進行碎化處理，在無菌環(huán)境下接種到搖瓶中，將接好種的搖瓶放在25°C，震蕩頻率500 / min的電磁搖床上培養(yǎng)4天;3)發(fā)酵罐培養(yǎng):對發(fā)酵罐進行空罐滅菌，然后在發(fā)酵罐中配置發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基，大米面20g，白糖15g，酵母膏l(xiāng)g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2.0g，硫酸鎂lg，PH值為6.5。在液體培養(yǎng)基的表層設(shè)置不銹鋼絲網(wǎng)，并進行滅菌處理；將步驟2)中搖瓶培養(yǎng)的菌種流入發(fā)酵罐中，完成發(fā)酵罐接種；打開發(fā)酵罐的氣泵，設(shè)置通氣量為0.25L/min，溫度控制為27°C，使菌種在發(fā)酵罐中培養(yǎng)7天，完成液體菌種的培養(yǎng)。實施例2一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:I)制備母種:制作試管培養(yǎng)基，玉米粉60g，黃豆粉10g，蔗糖(白糖)10g，PH值為
5.5。并進行高壓滅菌30min，冷卻后在無菌環(huán)境下向試管培養(yǎng)基中接入豌豆粒大小的菌種塊，置于23°C環(huán)境中避光培養(yǎng)6天；2)搖瓶培養(yǎng):制備搖瓶培養(yǎng)基，大米面15g,白糖12g,酵母膏0.5g,蛋白胨3g,磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，PH值為5.5。然后將步驟I)中培養(yǎng)的母種進行碎化處理，在無菌環(huán)境下接種到搖瓶中，將接好種的搖瓶放在26°C，震蕩頻率600 / min的電磁搖床上培養(yǎng)5天；發(fā)酵罐培養(yǎng):對發(fā)酵罐進行空罐滅菌，然后在發(fā)酵罐中配置發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基，大米面20g，白糖15g，酵母膏l(xiāng)g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2.0g，硫酸鎂lg，PH值為6.5。在液體培養(yǎng)基的表層設(shè)置不銹鋼絲網(wǎng)，并進行滅菌處理；將步驟2)中搖瓶培養(yǎng)的菌種流入發(fā)酵罐中，完成發(fā)酵罐接種；打開發(fā)酵罐的氣泵，設(shè)置通氣量為0.15L/min，溫度控制為25°C，使菌種在發(fā)酵罐中培養(yǎng)5天，完成液體菌種的培養(yǎng)。實施例3
一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:U制備母種:制作試管培養(yǎng)基，玉米粉80g，黃豆粉15g，蔗糖(白糖)18g，PH值為
6.5。并進行高壓滅菌45min，冷卻后在無菌環(huán)境下向試管培養(yǎng)基中接入豌豆粒大小的菌種塊，置于28°C環(huán)境中避光培養(yǎng)12天；2)搖瓶培養(yǎng):制備搖瓶培養(yǎng)基，大米面25g，白糖20g，酵母膏2g，蛋白胨9g，磷酸二氫鉀2.5g，硫酸鎂1.25g，PH值為6.5。然后將步驟I)中培養(yǎng)的母種進行碎化處理，在無菌環(huán)境下接種到搖瓶中，將接好種的搖瓶放在28°C，震蕩頻率650 / min的電磁搖床上培養(yǎng)7天；3)發(fā)酵罐培養(yǎng):對發(fā)酵罐進行空罐滅菌，然后在發(fā)酵罐中配置發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基，大米面20g，白糖15g，酵母膏l(xiāng)g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2.0g，硫酸鎂lg，PH值為6.5。在液體培養(yǎng)基的表層設(shè)置海綿，并進行滅菌處理；將步驟2)中搖瓶培養(yǎng)的菌種流入發(fā)酵罐中，完成發(fā)酵罐接種；打開發(fā)酵罐的氣泵，設(shè)置通氣量為0.35L/min，溫度控制為28°C，使菌種在發(fā)酵罐中培養(yǎng)9天，完成液體菌種的培養(yǎng)。本發(fā)明的技術(shù)方案不限于上述具體實施例的限制，凡是根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案做出的技術(shù)變形，均落入 本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述該方法包括以下步驟: 1)制備母種:制作試管培養(yǎng)基并進行高壓滅菌30-45min,冷卻后在無菌環(huán)境下向試管培養(yǎng)基中接入豌豆粒大小的菌種塊，置于23-28°C環(huán)境中避光培養(yǎng)6-12天； 2)搖瓶培養(yǎng):制備搖瓶培養(yǎng)基，然后將步驟I)中培養(yǎng)的母種進行碎化處理，在無菌環(huán)境下接種到搖瓶中，將接好種的搖瓶放在25-28°C，震蕩頻率500-650 / min的電磁搖床上培養(yǎng)4-7天； 3)發(fā)酵罐培養(yǎng):對發(fā)酵罐進行空罐滅菌，然后在發(fā)酵罐中配置發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基，在液體培養(yǎng)基的表層或淺表層設(shè)置起支架作用的支撐物，并進行滅菌處理；將步驟2)中搖瓶培養(yǎng)的菌種流入發(fā)酵罐中，完成發(fā)酵罐接種；打開發(fā)酵罐的氣泵，設(shè)置通氣量為015-0.35L/min，溫度控制為25-28 °C，使菌種在發(fā)酵罐中培養(yǎng)5_9天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟I)中的試管培養(yǎng)基為每升培養(yǎng)含:玉米粉60-80g，黃豆粉10-15g，蔗糖(白糖)10-18g，PH值為5.5-6.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟2)中的搖瓶培養(yǎng)基和步驟3)中的發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基均為每升培養(yǎng)基含:大米面15-25g，白糖12-20g，酵母膏0.5-2g，蛋白胨3-9g，磷酸二氫鉀1.0-2.5g，硫酸鎂0.5-1.25g，PH值為5.5-6.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟3)中的起支撐作用的支撐物為 :不銹鋼絲網(wǎng)或者海綿。
全文摘要
本發(fā)明公開一種蜜環(huán)菌液體菌種的培養(yǎng)方法，包括制備母種、搖瓶培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，本發(fā)明原料成本低、易獲得，且對種子菌進行碎化處理，可使菌球變小并大小一致，提高了種子菌的質(zhì)量，加快了菌球生長速度，使蜜環(huán)菌深層液體發(fā)酵生長迅速、產(chǎn)量大幅提高。本發(fā)明中采用靜置懸浮培養(yǎng)，菌株自培養(yǎng)基中吸取營養(yǎng)，自空氣中吸收氧份，菌絲體向下方生長直至長成粗壯的菌索并充滿整個發(fā)酵罐。所得到的菌索以干重法計，蜜環(huán)菌可達35-40g/L。相對于固態(tài)發(fā)酵或普通的液體深層發(fā)酵，操作簡單，分離方便，周期短，菌索產(chǎn)量高、活性多糖產(chǎn)率也高且穩(wěn)定。
文檔編號C05F11/00GK103070012SQ201310009898
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月10日
發(fā)明者肖永東 申請人:關(guān)嶺自治縣豐碩食用菌農(nóng)民專業(yè)合作社