專利名稱：：細(xì)菌淀粉酶在牛類動物的飼料中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中的高產(chǎn)牛(cow)在下述條件下生長，所述條件的特征為非常高的乳產(chǎn)量(奶牛(dairycow))或生長速率(肉用牛(beefcattle)),其后為同樣高的能量需求。當(dāng)增加攝入超過維持水平時，飼料的利用率(utilisation)就會顯著下降。部分出于此原因，反芻動物飼料中包括了越來越易于降解的飼料，例如含淀粉原料，如基于谷類的濃縮物和全谷物青忙飼料(wholecerealsilage)。經(jīng)常在排泄物(faeces)中回收含淀粉材料，這說明這些飼料組分的利用率還可進(jìn)一步增加。本發(fā)明涉及細(xì)菌淀粉酶在牛類動物(bovineanimal),如奶牛和肉用牛的飼料中的用途，特別是用于改進(jìn)乳產(chǎn)量(milkyield)、增重(weightgain)、表觀消化率(apparentdigestibility)、使用尼龍袋法(nylonbagmethod)的飼料干物質(zhì)(feedstuffdrymatter)的消失(disappearance),和/或飼料轉(zhuǎn)化率(feedconversion)。本發(fā)明還涉及組合物，如包含細(xì)菌淀粉酶的飼料添加劑和飼料，以及制備這些組合物的方法。
背景技術(shù)：
：W003/068256A1描述了用于改進(jìn)反芻動物營養(yǎng)的淀粉酶飼料補(bǔ)充劑。使用的淀粉酶是由米曲霉(Aspergillusoryzae)產(chǎn)生的真菌淀粉酶。Tricarico等在AnimalScience2005,81:365-374描述了含有α-淀粉酶活性的米曲霉提取物對泌乳的(Iactating)荷爾斯坦因(Holstein)奶牛的瘤胃發(fā)酵(ruminalfermentation)和乳產(chǎn)生的影響。美國專利號3，250，622公開了特定添加劑的用途，所述添加劑含有蛋白分解酶和淀粉分解酶以及膠酶(gumase)，其與磨碎的麥芽載體密切相關(guān)，用于刺激奶牛中乳的產(chǎn)生。沒有指定所述酶的來源。Mora-Jaimes等(Agrociencia36(I)(2002)，31-39)研究了用淀粉酶處理的喂食羊羔的高粱谷物的性能和瘤胃發(fā)酵。Rojo等(AnimalFeedScienceandTechnology,123-124(2005),655-665)研究了來自地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)和黑曲霉(Aspergillusniger)的外源淀粉酶對瘤胃淀粉消化和羊羔性能的影響。W001/41795A1涉及蛋白酶和季氨羧酸內(nèi)鹽的組合在球蟲病(coccidiosis)和細(xì)菌感染的治療和/或預(yù)防中的用途。而且還要求保護(hù)通常的動物增重的改進(jìn)?？梢园揪厶敲负?或淀粉酶。提到了來自枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)的α-淀粉酶。雖然也提到了反芻動物，然而所有實例都涉及肉用子雞(broilerchick)。本發(fā)明的目的是提供可替代的、優(yōu)選改進(jìn)的淀粉酶，其可以通過改進(jìn)飼料利用率、乳產(chǎn)量和/或增重而減輕上述問題。此外，或者可選地，本發(fā)明的淀粉酶可以具有改進(jìn)的性質(zhì)，如劑量響應(yīng)曲線(dose-responseprofile)、pH曲線、粒化穩(wěn)定性(pelleting-stability)、溫度穩(wěn)定性、膽汁鹽(bile-salt)穩(wěn)定性、蛋白酶穩(wěn)定性,和/或比活性。此外，或者可選地，本發(fā)明的淀粉酶能夠降解瘤胃(rumen)、大腸和/或小腸中的淀粉。發(fā)明簡述本發(fā)明涉及至少一種細(xì)菌淀粉酶在牛亞科動物(animalofthesubfamilyBovinae)的飼料中的用途，特別是用于改進(jìn)乳產(chǎn)量、增重、飼料消化率和/或飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。本發(fā)明還涉及至少一種細(xì)菌淀粉酶在組合物制備中的用途，所述組合物用于牛亞科動物的飼料中。此外，本發(fā)明涉及飼料添加劑組合物，其包含至少一種細(xì)菌淀粉酶，連同至少一種選自維生素和/或礦物質(zhì)的額外組分。最后，本發(fā)明涉及組合物，其包含至少一種細(xì)菌淀粉酶，連同至少一種選自干草(hay)、草料(forage)、粗飼料(roughage)和/或飼料濃縮物(feedconcentrate)的額外組分。這種組合物的實例是飼料濃縮物和全混合日糧(totalmixedration)(TMR)。具體地，本發(fā)明涉及如下各項:1.細(xì)菌淀粉酶在牛亞科動物的飼料中的用途。2.項I的用途，用于改進(jìn)乳產(chǎn)量、體重增加和/或飼料轉(zhuǎn)化率。3.項I的用途，用于改進(jìn)乳產(chǎn)量、表觀消化率，和/或使用尼龍袋法的飼料干物質(zhì)消失。4.項I的用途,其與纖維素酶組合使用。5.項4的用途，用于改進(jìn)乳產(chǎn)量和/或背脂厚度。6.細(xì)菌淀粉酶在用于牛亞科動物飼料的組合物的制備中的用途。7.制備用于牛亞科動物的飼料中的組合物的方法，所述方法包括向至少一種飼料組分中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。8.項7的方法，所述方法還包括添加纖維素酶。9.增加牛亞科動物乳產(chǎn)量的方法，所述方法包括向動物飼料中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。10.項9的方法，其還包括向動物飼料中添加纖維素酶。11.增加牛亞科動物的背脂厚度的方法，所述方法包括向動物飼料中添加與纖維素酶組合的細(xì)菌淀粉酶的步驟。12.增加牛亞科動物的體重增加和/或飼料轉(zhuǎn)化率的方法，所述方法包括向動物飼料中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。13.改進(jìn)牛亞科動物的飼料干物質(zhì)的消失和/或表觀消化率的方法，所述方法包括向動物飼料中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。14.飼料添加劑組合物，其包含細(xì)菌淀粉酶，連同選自維生素和礦物質(zhì)的至少一種額外組分。15.項14的飼料添加劑，其還包含纖維素酶。16.項15的組合物，其為礦物質(zhì)預(yù)混物、維生素預(yù)混物，或包括維生素和礦物質(zhì)的預(yù)混物。17.組合物，其包含細(xì)菌淀粉酶，以及至少一種選自干草、草料、粗飼料和/或濃縮物的額外的組分。18.項17的組合物，其還包含纖維素酶。19.項17的組合物，其為富含淀粉酶的濃縮物。20.項17的組合物，其為富含淀粉酶的全混合日糧。21.項17-20中任一項的組合物，其包含玉蜀黍和/或高粱。22.項21的組合物，其包含玉蜀黍。發(fā)明詳述在本上下文中，淀粉酶是催化淀粉和其它直鏈和支鏈寡糖和多糖的內(nèi)-水解的酶。在具體的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶具有α-淀粉酶活性，g卩，催化寡糖和多糖中1，4-α_糖苷鍵的內(nèi)水解。α-淀粉酶以隨機(jī)方式作用于，例如淀粉、糖原和相關(guān)的多糖和寡糖，釋放α-構(gòu)型中的還原基團(tuán)。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶是Ct_淀粉酶(系統(tǒng)名稱:1，4_a-D-匍聚糖葡聚糖水解酶)。在其它實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶屬于淀粉酶的EC3.2.1組，如EC3.2.1.1(α-淀粉酶)、EC3.2.1.2(β-淀粉酶)、EC3.2.1.3(葡聚糖1，4-α-葡糖苷酶、淀粉葡糖苷酶或葡糖淀粉酶)、EC3.2.1.20(α-葡糖苷酶)、EC3.2.1.60(葡聚糖I,4-α-麥芽四糖水解酶(glucanl,4_a-maltotetraohydrolase))、EC3.2.1.68(異淀粉酶)、EC3.2.1.98(葡聚糖1，4-α-麥芽己糖酶)或EC3.2.1.133(葡聚糖1，4-α-麥芽糖水解酶)。在優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶可分類為(或者分類為)屬于EC3.2.1.1組。EC號是指來自NC-1UBMB的EnzymeNomenclature(酶命名法)1992，AcademicPress,SanDiego,California,其包括分別在Eur.J.Biochem.1994，223，1-5;Eur.J.Biochem.1995,232,1-6;Eur.J.Biochem.1996,237,1-5;Eur.J.Biochem.1997,250，1-6;andEur.J.Biochem.1999，264，610-650出版的補(bǔ)遺1-5。命名法定期地補(bǔ)充和更新，參見例如在http://www.chem.qmw.ac.uk/iubmb/enzyme/index,html的萬維網(wǎng)。可以用任何合適的試驗確定淀粉酶活性。通常，pH試驗和溫度試驗可以適用于所述的酶。PH值試驗的實例為pH2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll或12。溫度試驗的實例是30、35、37、40、45、50、55、60、65、70、80、90或95°C。優(yōu)選的pH值和溫度在生理范圍內(nèi)，如3、4、5、6、7或8的pH值，和30、35、37或40°C的溫度。優(yōu)選的試驗方法是本文實施例5中的KNU(S)法。另一個優(yōu)選的試驗方法是本文實施例6中的還原糖法。可選地，可以使用下述淀粉酶試驗方法:底物=Phadebas片劑(PharmaciaDiagnostics;交聯(lián)的不溶性藍(lán)色淀粉聚合物,其與牛血清白蛋白和緩沖物質(zhì)混合，并制成片劑)。試驗溫度:37°C。試驗pH:4.3(或7.0，如果期望的話)。反應(yīng)時間:20分鐘。在懸浮于水中后，用α-淀粉酶水解淀粉，得到可溶的藍(lán)色片段。在620nm測定所得的藍(lán)色溶液的吸光度，其是α-淀粉酶活性的函數(shù)。一個真菌α-淀粉酶單位(IFAU)是在標(biāo)準(zhǔn)的試驗條件下每小時分解5.26g淀粉的酶量。優(yōu)選的淀粉是Merck,Amylum可溶的Erg.B.6，批號9947275。對試驗更詳細(xì)的描述，APTSMYQ1-3207，可應(yīng)要求從NovozymesA/S,Krogshoejvej36,DK_2880Bagsvaerd,Denmark獲得。在具體的實施方案中，明確定義了淀粉酶，所述淀粉酶以加入到飼料中的形式存在，或者以包括于飼料添加劑中的形式存在。明確定義指，淀粉酶制備物為蛋白質(zhì)基礎(chǔ)上的至少50%純度。在另外的具體實施方案中，淀粉酶制備物為至少60、70、80、85、88、90、92、94或者至少95%純?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何方法，例如通過SDS-PAGE，或者通過大小排阻色譜(參見W001/58275的實施例12)來確定純度。定義明確的淀粉酶制備物具有優(yōu)勢。例如，要劑量正確地(dosecorrectly)將淀粉酶加入飼料就容易得多，所述淀粉酶基本不含干擾或者污染的其它酶。術(shù)語劑量正確地具體指目的是獲得一致而恒定的結(jié)果，和獲得根據(jù)期望的效果優(yōu)化劑量的能力。具有這種數(shù)量級的純度的淀粉酶制備物可以使用重組的產(chǎn)生方法獲得，但是它們不那么容易獲得，而且當(dāng)用傳統(tǒng)的發(fā)酵方法產(chǎn)生時，各批次之間的差別要高得多。本發(fā)明的淀粉酶的分離、純化和濃縮可以通過常規(guī)方法進(jìn)行。例如，可以通過常規(guī)步驟從發(fā)酵液中回收淀粉酶，所述常規(guī)步驟包括，但不限于離心、過濾、萃取、噴霧干燥、蒸發(fā)或沉淀，并通過本領(lǐng)域已知的各種方法進(jìn)一步純化，所述方法包括，但不限于色譜(例如，離子交換、親和、疏水、層析聚焦和大小排阻)、電泳方法(例如，制備型等電聚焦)、差示溶解度(例如，硫酸銨沉淀)、SDS-PAGE，或提取(參見，例如，ProteinPurification,J.-C.Janson和LarsRyden編，VCHPublishers,NewYork,1989)。可如本領(lǐng)域已知的將純化的淀粉酶配制成適用于動物飼料和/或動物飼料添加劑的液體或固體產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明使用的細(xì)菌淀粉酶以有效量包括于牛飲食或牛飼料添加劑中?，F(xiàn)在期望的是，有效量低于IOOOmg酶蛋白每kg飲食干物質(zhì)(ppm)，優(yōu)選低于800、600、500、400，或低于300ppm。在優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶的劑量低于200mg酶蛋白每kg飲食干物質(zhì)，優(yōu)選低于150、100、90、80、70、60或低于50ppm。在甚至更優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶的劑量低于40、35、30、25或低于20ppm。在最優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶的劑量低于15、12、10、9、8或低于7mg酶蛋白每kg飲食干物質(zhì)。另一方面，有效量可以高于0.0lmg酶蛋白每kg飲食干物質(zhì)，優(yōu)選高于0.05,0.10,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.40,0.45,0.50,0.75、1、2、3或高于4mg酶蛋白每kg飲食干物質(zhì)(ppm)。因此，優(yōu)選劑量范圍的非限定性實例為:0.10-50mg酶蛋白/kg，優(yōu)選0.50-10、1-9、2-8、3-8，或4-711^酶蛋白/kg。優(yōu)選劑量范圍的其它實例(均以PPm表示)為:1-35、1-30、2-25、3-20和4-15。為了確定每kg飼料的淀粉酶蛋白mg數(shù),從飼料組合物純化淀粉酶,使用期望的淀粉酶方法確定純化后的淀粉酶的比活性。也可以使用相同的方法同樣地確定飼料組合物的淀粉酶活性，根據(jù)這兩個確定結(jié)果，計算以mg淀粉酶蛋白每kg飼料表示的劑量。將同樣的規(guī)則應(yīng)用于確定飼料添加劑中的淀粉酶蛋白mg數(shù)。當(dāng)然，如果樣品使用了用于制備添加劑或飼料的淀粉酶，可以由此樣品確定比活性(不需要從飼料組合物或添加劑中純化淀粉酶)。為了對細(xì)菌進(jìn)行分類學(xué)上的分類和鑒定，必須參照Bergey’sManualofSystematicBacteriology(1986),vol2,ISBN0-683-0783o可供選擇地，可以使用為人所熟知的16SrRNA序列分析(參見例如Johansen等，Int.J.Syst.Bacteriol,1999,49，1231-1240，特別是1233頁第二欄的方法部分)；或者可以咨詢分類學(xué)專家，例如，來自DSMZ或其它公認(rèn)的保藏機(jī)構(gòu)的分類學(xué)專家。如在本文中使用的，術(shù)語細(xì)菌指示了淀粉酶源自細(xì)菌。術(shù)語“源自”包括可以獲得或者獲得自野生型的細(xì)菌菌株，以及它們的變體的酶。變體可以具有至少一個氨基酸殘基的至少一個取代、插入和/或缺失。術(shù)語變體還包括重排體(shuffIant)、雜合體(hybrid)、嵌合酶和共有酶(consensusenzyme)。可以用本領(lǐng)域已知的任何方法產(chǎn)生變體，所述方法如定點突變、隨機(jī)突變、共有衍生方法(consensusderivationprocess)(EP897985)和基因重排(W095/22625，W096/00343)等。就本目的而言，當(dāng)使用至少一種細(xì)菌淀粉酶進(jìn)行變體的設(shè)計、衍生或制備時，淀粉酶變體可以稱為(qualifyas)細(xì)菌的。術(shù)語細(xì)菌的指的不是可能的重組產(chǎn)生宿主，而只是指淀粉酶編碼基因的宿主起源。根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶優(yōu)選源自芽孢桿菌屬(Bacillus)的菌株，如解淀粉芽抱桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、環(huán)狀芽抱桿菌(Bacilluscirculans)、Bacillushalmapalus、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽抱桿菌(Bacillusmegaterium)、芽孢桿菌屬的菌種(Bacillussp.)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)和枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis);優(yōu)選來自解淀粉芽抱桿菌、Bacillushalmapalus、地衣芽孢桿菌、芽孢桿菌屬的菌種和嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌株；更優(yōu)選來自解淀粉芽孢桿菌、Bacillushalmapalus、芽孢桿菌屬的菌種和嗜熱脂肪芽孢桿菌；甚至更優(yōu)選來自解淀粉芽孢桿菌、Bacillushalmapalus、芽孢桿菌屬的菌種和嗜熱脂肪芽孢桿菌；最優(yōu)選來自嗜熱脂肪芽孢桿菌。根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶的非限定性實例是源自下述的那些:地衣芽孢桿菌，如Swissprot入口名(entryname)AMY_BACLI,初級登錄號P06278;解淀粉芽孢桿菌，如Swissprot入口名AMY_BACAM，初級登錄號P00692；巨大芽孢桿菌，如Swissprot入口名AMY_BACME，初級登錄號P20845;環(huán)狀芽孢桿菌，如Swissprot入口名AMY_BACCI，初級登錄號P08137;嗜熱脂肪芽孢桿菌，如Swissprot入口名AMY_BACST，初級登錄號P06279。另一個實例源自枯草芽孢桿菌，如Swissprot入口名AMY_BACSU，初級登錄號P00691。就本發(fā)明而言,優(yōu)選的淀粉酶是下述商業(yè)產(chǎn)品中包含的淀粉酶:BAN、Stainzyme、TermamylSC、Natalase和Duramyl(全部來自Novozymes)。根據(jù)本發(fā)明使用的更特定的淀粉酶實例是包含于商業(yè)的ValidaseBAA和ValidaseHT產(chǎn)品中(來自ValleyResearch)的淀粉酶。根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶的更進(jìn)一步的具體實例是包含于下述商業(yè)產(chǎn)品中的淀粉酶:Clarase、DexLo,GC262SP、G-ZymeG990、G-ZymeG995、G-ZymeG997、G-ZymeG998、HTAA>0ptimax7525、PurastarOxAm>PurastarST、SpezymeAA>SpezymeAlpha、SpezymeBBA>SpezymeDeltaAA>SpezymeDBA、SpezymeEthyl>SpezymeFred(GC521)>SpezymeHPA、SpezymeExtra和Ultraphlow(全部來自Genencor)；ValidaseHT340L、ValleyThin340L(全部來自ValleyResearch)；Avizymel500>Dextro300L>Kleistase>Maltazyme>Maxamyl>Thermozyme>Thermatex>StarzymeHT120L、StarzymeSuperCone,和Ultraphlo0本發(fā)明還涉及:淀粉酶在牛亞科動物飼料中的用途，所述淀粉酶具有與SEQIDN0:2的氨基酸1-481具有至少65%同一1丨生的氨基酸序列；這種淀粉酶在制備組合物中的用途，所述組合物用于牛亞科動物的飼料中；飼料添加劑組合物，其包含這種淀粉酶，以及選自維生素和/或礦物質(zhì)的至少一種額外組分(additionalingredient);和組合物(例如飼料組合物)，其包含這種淀粉酶以及選自干草、草料、粗飼料和/或飼料濃縮物的至少一種額外組分。優(yōu)選地，在飼料中的用途是(i)改進(jìn)乳產(chǎn)量、增重和/或飼料轉(zhuǎn)化率(FeedConversionRatio)；(ii)改進(jìn)乳產(chǎn)量、表觀消化率和/或使用尼龍袋法的飼料干物質(zhì)的消失；(iii)與纖維素酶組合。(iii)的用途可以是(iv):改進(jìn)乳產(chǎn)量和/或背脂厚度(backfatthickness)。優(yōu)選地，飼料添加劑包含纖維素酶。更優(yōu)選地，飼料添加劑是預(yù)混物(premix),如礦物質(zhì)預(yù)混物、維生素預(yù)混物，或包括維生素及礦物質(zhì)的預(yù)混物。飼料組合物優(yōu)選還包含纖維素酶。飼料組合物可以是富含淀粉酶的濃縮物(concentrate)、富含淀粉酶的全混合日糧,和/或可以包含玉蜀黍(maize)和/或高粱,優(yōu)選玉蜀黍。本發(fā)明還涉及制備組合物的方法，所述組合物用于牛亞科動物的飼料中，所述方法包括向至少一種飼料成分中加入淀粉酶的步驟，所述淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸^81有至少65%同一性的氨基酸序列。優(yōu)選地，所述方法還包括加入纖維素酶。本發(fā)明還涉及增加牛亞科動物的乳產(chǎn)量的方法，所述方法包括向動物飼料中加入淀粉酶的步驟，所述淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1-481有至少65%同一性的氨基酸序列。優(yōu)選地，所述方法還包括向動物飼料中加入纖維素酶。本發(fā)明還涉及增加牛亞科動物的背脂厚度的方法，所述方法包括向動物飼料中加入淀粉酶與纖維素酶組合的步驟，所述淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1-481有至少65%同一'丨生的氨基酸序列。本發(fā)明還涉及改進(jìn)表觀消化率、使用尼龍袋法的飼料干物質(zhì)的消失，增加增重和/或改進(jìn)牛亞科動物的飼料轉(zhuǎn)化率的方法，所述方法包括向飼料或飼料添加劑中加入淀粉酶的步驟，所述淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1-481有至少65%同一性的氨基酸序列。將本發(fā)明的氨基酸序列(“發(fā)明序列”；例如，SEQIDNO:2的氨基酸1_481)和不同的氨基酸序列(“外源序列”)之間的同一性程度計算為:兩個序列比對中完全匹配的數(shù)目，除以“發(fā)明序列”的長度或“外源序列”的長度中最短的。將結(jié)果用百分比同一性表示。作為實例，下面是SEQIDNO:2的氨基酸1-481(“發(fā)明序列”)與SEQIDN0:4(“外源序列”)的比對的部分:SEQ2,I481IAAPFNGTMMQYFEWYLPDDGTLWTKVANEANNLSSLGITALWLPPAYKG49____11111111111Ij:11..I.::.::1:1I…I1:1:1:1j1:1ISEQ4IHHNGTNGTMMQYFEWYLPNDGNH麗RLRSDASNLKDKGISAVWIPPAWKG50當(dāng)“發(fā)明序列”和“外源序列”在重疊的相同位置具有同樣的氨基酸殘基時，即發(fā)生了完全匹配(在比對實例中，完全匹配的氨基酸殘基下面用“|”表示)。實例中完全匹配的數(shù)目是28。序列的長度是序列中氨基酸殘基的數(shù)目(例如，具有SEQIDNO:2的氨基酸1_481的序列的長度是481)。在實例中，發(fā)明序列的長度是49，而外源序列的長度是50。在實例中，重疊是上面序列的氨基酸序列“AAPFAYKG”;或者下面序列的氨基酸序列“HNGT—AWKG'在這個實例中沒有缺口(缺口用表示)。因此，上述實例中表示的兩個部分序列的同一性為:(28(完全匹配)/49(最短序列的長度))X100%=57.14%。因此，在具體的實施方案中，通過下述方法確定多肽的氨基酸序列與(或?qū)τ?SEQIDNO:2的氨基酸I至481的同一性的百分比:i)使用具有BL0SUM62取代矩陣，缺口開放罰分為10，而缺口延伸罰分為0.5的Needle程序比對兩個氨基酸序列；ii)計數(shù)比對中完全匹配的數(shù)目；iii)將完全匹配的數(shù)目除以兩個氨基酸序列中最短者的長度，和iv)將iii)中除法的結(jié)果轉(zhuǎn)化成百分比。在優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1_481有至少66、67、68或者至少69%同一性的氨基酸序列。在另一個優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1-481有至少70、75、80或者至少85%同一性的氨基酸序列。在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1-481有至少90、92、95、97或者至少99%同一性的氨基酸序列。在可供選擇的實施方案中，淀粉酶具有與SEQIDNO:2的氨基酸1-481有至少60、61、62、63或者至少64%同一性的氨基酸序列。在下文中，與SEQIDNO:2的氨基酸1_481具有特定的％同一性(例如，至少65%同一'I"生)的淀粉酶稱為同源淀粉酶(homologousamylase)。同源淀粉酶的非限定性實例是:源自解淀粉芽孢桿菌的淀粉酶，如Swissprot入口名AMY_BACAM,初級登錄號P00692(SEQIDNO:7)，和以商品名BAN由NovozymesΑ/S銷售的商業(yè)淀粉酶；源自地衣芽孢桿菌的淀粉酶，如Swissprot入口名AMY_BACLI，初級登錄號P06278(SEQIDNO:8)，和以商品名DURAMYL由NovozymesΑ/S銷售的商業(yè)淀粉酶；源自芽孢桿菌屬菌種的淀粉酶，如以商品名STAINZYME由NovozymesA/S銷售的商業(yè)淀粉酶；源自Bacillushalmapalus的淀粉酶，如以商品名NATALASE由NovozymesΑ/S銷售的商業(yè)淀粉酶；和源自嗜熱脂肪芽孢桿菌的淀粉酶，如Swissprot入口名AMY_BACST，初級登錄號P06279(SEQIDNO:9)，和以商品名TERMAMYLSC由NovozymesA/S銷售的商業(yè)淀粉酶。同源淀粉酶的其它非限定性實例是:具有、包含或者由SEQIDNO:2的氨基酸1-481、1-484、1-486或者1-513組成的淀粉酶(其中“I”指成熟多肽的起始氨基酸，Ala，參見序列表)；具有、包含或者由SEQIDNO:4的氨基酸1_483組成的淀粉酶；具有、包含或者由SEQIDNO:5的氨基酸1_483組成的淀粉酶；具有、包含或者由SEQIDNO:6的氨基酸1_481組成的淀粉酶(其中“I”指成熟多肽的起始氨基酸，Val，參見序列表)；具有、包含或者由SEQIDNO:7的氨基酸1_483組成的淀粉酶(其中“I”指成熟多肽的起始氨基酸，Val，參見序列表)；具有、包含或者由SEQIDNO:8的氨基酸1_483組成的淀粉酶(其中“I”指成熟多肽的起始氨基酸，Ala,參見序列表);和具有、包含或者由SEQIDNO:9的氨基酸1_515組成的淀粉酶(其中“I”指成熟多肽的起始氨基酸，Ala,參見序列表)；以及保持淀粉酶活性的任何上述淀粉酶的片段或變體。片段是從氨基和/或羧基末端缺失一個或幾個(more)氨基酸的多肽。優(yōu)選地，片段包含至少450個氨基酸殘基，更優(yōu)選至少460個氨基酸殘基，甚至更優(yōu)選至少470個氨基酸殘基，和最優(yōu)選至少480個氨基酸殘基。其它優(yōu)選的片段包含至少481、483、484或至少513個氨基酸殘基。SEQIDN0:2的淀粉酶具有酶活性的片段的實例是具有其中的氨基酸1_481、1_484和1-486的序列。變體可以是包含保守取代、缺失和/或插入一個或幾個氨基酸的保守型變體，例如不顯著影響蛋白質(zhì)折疊和/或活性的小插入或取代；通常為I至大約30個氨基酸的小缺失；小的氨基或羧基末端延伸，如氨基末端甲硫氨酸殘基；多至大約20-25個殘基的小接頭肽；或通過改變凈電荷或其它功能來促進(jìn)純化的小延伸，如多組氨酸序列(polyhistidinetract)、抗原表位(antigenicepitope)或結(jié)合域。保守取代的實例是在以下組之內(nèi):堿性氨基酸組(精氨酸、賴氨酸和組氨酸)、酸性氨基酸組(谷氨酸和天冬氨酸)、極性氨基酸組(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸組(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)、芳族氨基酸組(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸組(甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和甲硫氨酸)。本發(fā)明的淀粉酶的保守型變體的非限定性實例包括小的氨基末端插入(延伸)，例如I或2個氨基酸殘基，如Ala，或Ala-Ala?？晒┻x擇地，變體可以并入氨基酸改變，所述改變具有這樣的性質(zhì)以使多肽的物理化學(xué)性質(zhì)改變。例如，氨基酸改變可改進(jìn)多肽的熱穩(wěn)定性，改變底物特異性，改變最適PH坐寸ο在任何上述氨基酸序列中氨基酸取代、缺失和/或插入的總數(shù)是最多40、38、36、35、32、30、25、20或15個。優(yōu)選地，取代、缺失和/或插入的總數(shù)是最多10，優(yōu)選9，更優(yōu)選8,更優(yōu)選7,更優(yōu)選最多6,更優(yōu)選最多5,更優(yōu)選4,甚至更優(yōu)選3,最優(yōu)選2,和甚至最優(yōu)選1在具體的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶是制粒穩(wěn)定的(pelletingstable)和/或熱穩(wěn)定的。酶的解鏈溫度(meltingtemprature)(Tm)是其熱穩(wěn)定性的量度。本發(fā)明的淀粉酶可以具有至少75°C、76°C、77°C、78°C、79°C、80°C、81°C、82°C、83°C、84°C、85°C、86°C、87°C、88°C、89°C、90°C、91°C、92°C、93°C、94°C或者至少95°C的Tm，如通過差示掃描量熱法(DSC)所確定的。在IOmM磷酸鈉、50mM氯化鈉緩沖液，PH7.0中進(jìn)行DSC。掃描速率恒定，例如1.5°C/min。掃描間隔可為20至100°C。可以選擇另一種緩沖液用于掃描，例如pH5.0、5.5、6.0或pH6.5的緩沖液。在進(jìn)一步可選的實施方案中，可以使用更高或更低的掃描速率，例如較低的掃描速率1.4°C/min>1.3°C/min>1.2°C/min>1.1°C/min>1.0°C/min或者0.9°C/min。在另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶在pH7.0和37°C具有相對于最適pH和37°C時的活性至少35%的活性。更優(yōu)選地，在pH7.0和37°C的活性是最適pH和37°C時活性的至少40、45、50、55、60、65、70或至少75%(參見實施例6的表6)。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶在pH7.0和37°C和存在5mM膽汁鹽時具有相對于最適PH和37°C、不存在膽汁鹽時的活性至少25%的活性。更優(yōu)選地，在PH7.0和37°C、存在5mM膽汁鹽時的活性是最適pH和37°C、不存在膽汁鹽時活性的至少30、35、40、45、50、55、60或者至少65%(參見實施例6的表7)。在進(jìn)一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶在pH7.0和37°C時的比活性是相對于淀粉酶TERMAMYLSC在pH5.0和37°C時的比活性的至少10%，更優(yōu)選至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65，或者至少70%(參見實施例6的表8)。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶在pH7.0和37°C，存在5mM膽汁鹽時的比活性是相對于淀粉酶TERMAMYLSC在pH5.0和37°C，存在5mM膽汁鹽時的比活性的至少10%，更優(yōu)選至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70，或者至少75%(參見實施例6的表9)?？梢允褂眠€原糖法合適地確定上述優(yōu)選實施方案中提及的活性，例如，如實施例6中所述，使用優(yōu)選的臘質(zhì)玉米(waxycorn)作為底物。實施例6中描述了詳細(xì)的步驟。在另一個具體的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶在存在蛋白酶時是穩(wěn)定的。蛋白酶的實例是消化蛋白酶，和飼料蛋白酶如在例如WOO1/58275、WOO1/58276、W02004/111220,2004/11122UW02004/072221和TO2005/035747中描述的蛋白酶。消化蛋白酶的實例是胰酶(pancreatin)和胃蛋白酶(pepsin)?？梢酝ㄟ^下述方法確定蛋白酶穩(wěn)定性:在期望的pH(例如pH3、4或5)在緩沖液中將0.5mg/ml純化的淀粉酶蛋白質(zhì)在存在蛋白酶(例如胃蛋白酶，70mg/l)時溫育期望的時間(例如30、45、60、90或120分鐘)，然后將PH提高至期望的pH(例如pH4、5、6或7)，并使用例如本文實施例6的還原糖法測定殘余活性。殘余的淀粉酶活性優(yōu)選為相對于對照(未用蛋白酶處理的樣品)的至少20%，優(yōu)選至少30、40、50、60、70、80或至少90%。本發(fā)明的淀粉酶可以與纖維素酶組合使用。術(shù)語“與……組合”具體包括下述情況:兩種酶都有活性，并且同時或者在時間上有重疊地發(fā)揮它們的作用，優(yōu)選同時發(fā)揮作用，但也可包括酶逐個作用。在本上下文中，纖維素酶是催化纖維素、地衣淀粉(Iichenin)和谷類β_D_葡聚糖中l(wèi)，4-13-D-葡糖苷鍵的內(nèi)水解的酶。其它名稱是，例如，內(nèi)切-1，4-β-D-葡聚糖酶、β-1，4-葡聚糖酶；和β_1，4-內(nèi)切葡聚糖水解酶。系統(tǒng)名稱是1，4-(1，3;1，4)-0-0-葡聚糖4-葡聚糖水解酶。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的纖維素酶分類(或可分類)為EC3.2.1.4(酶命名法1992，見上文)?？梢杂萌魏芜m當(dāng)?shù)姆椒ù_定纖維素酶活性。通常地，試驗-pH和試驗-溫度可以適合于所研究的酶。試驗111值的實例是？!12、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。試驗-溫度的實例是30、35、37、40、45、50、55、60、65、70、80、90或95°C。優(yōu)選的pH值和溫度是在生理范圍內(nèi)，如PH值為3、4、5、6、7，或8，和溫度為30、35、37，或40°C。優(yōu)選的纖維素酶源自木霉屬(Trichoderma)的菌株,優(yōu)選里氏木霉(Trichodermareseei),更優(yōu)選CELLUCLAST纖維素酶(或其纖維素酶組分)，其商業(yè)上可從NovozymesA/S獲得。纖維素酶組分的實例是纖維二糖水解酶I和II(CBH1、CBHII)，以及內(nèi)切葡聚糖酶I和II(EG1、EGII)。術(shù)語“源自”的意思如上面(淀粉酶部分)所述，且包括野生型纖維素酶，以及其變體和片段。在本h下f中，牛亞科動物(也稱作牛類(bovines)，或牛類動物(bovineanimals))指動物界(kingdomofAnimalia)、脊索動物門(phylumofChordata)、哺乳動物綱(classofMammalia)、偶蹄動物目(theorderofArtiodactyla)和?？?familyofBovidae)的動物。生物學(xué)的亞科包括約24種中型到大型的有蹄動物(ungulate)，包括家牛(domesticanimal)、野牛(Bison)、水牛(WaterBuffalo)、牦牛(Yak)和四角與螺旋角的玲羊(four-hornedandspiral-hornedantelope)。一般特性包括偶蹄(cloven-hoof)和通常有真正的角的物種的至少一個性征(sex)。優(yōu)選的屬包括四角玲屬(Tetracerus)、藍(lán)牛屬(Boselaphus)、水牛屬(Bubalus)、牛屬(Bos)、中南大羚屬(Pseudoryx)、非洲里予牛屬(Syncerus)、美洲里予牛屬(Bison)、藪玲屬(Tragelaphus)和大玲羊?qū)?Taurotragus)。最優(yōu)選的屬是牛屬，其中包括下述種:歐洲野牛(Bosprimigenius(原牛)，滅絕))、白臀野牛(Banteng)(爪睡野牛(Bosjavanicus))、白肢野牛(Gaur)(大額牛(Bosfrontalis))、耗牛(野耗牛(Bosmutus))、家牛(普通牛(Bostaurus)、瘤牛(Bosindicas)(今天經(jīng)常當(dāng)作原牛)，和林牛(Fouprey)(柬埔寨野牛(Bossauveli))。就本目的而言，家牛是最優(yōu)選的種。就本目的而言，術(shù)語包括所有種類的家牛，和所有生產(chǎn)類型的牛，特別是奶牛和肉用牛。牛類是反芻動物，其特征在于與單胃動物相比具有額外的發(fā)酵能力。例如，牛和羊在皺胃(abomasum)前有三個前胃(fore-stomach)。功能上最重要的是瘤胃，其作為飼料儲存和發(fā)酵室。通過大量而復(fù)雜的厭氧微生物(細(xì)菌、原生動物(protozoa)和真菌)進(jìn)行發(fā)酵過程。這些能夠降解除了蛋白質(zhì)和淀粉之外的細(xì)胞壁物質(zhì)，因此使反芻動物吞咽飼料材料并其中受益，所述飼料材料不會在皺胃或小腸中降解。這包括例如干草、其它草料和富含細(xì)胞壁物質(zhì)的青貯。瘤胃中發(fā)酵的產(chǎn)物是短鏈脂肪酸(SCFA)，其作為反芻動物中的初級能量來源，和氣體，如甲烷和二氧化碳。因此在體外瘤胃系統(tǒng)中，經(jīng)常用產(chǎn)生氣體的體積作為對給定飼料的可發(fā)酵性的量度，將體外產(chǎn)生氣體增加作為改進(jìn)的飼料降解和增加的能源可用性的量度。大多數(shù)體外系統(tǒng)包括使用新鮮采樣的瘤胃流體，通常采自羊(she印)或牛(cow)。最佳的乳生產(chǎn)需要充足的能量攝入，并且因此優(yōu)選奶牛良好的飼料利用。對于獲得肉用牛的最佳增重同樣如此。期望的是，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶改進(jìn)食用淀粉在瘤胃中的降解，特別是降解緩慢的淀粉(如玉蜀黍淀粉，其未進(jìn)行熱處理和/或包含大顆粒，或馬鈴薯淀粉)，由此向瘤胃微生物及反芻動物本身貢獻(xiàn)更多的能量(以短鏈脂肪酸的形式)。還期望的是，根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶促進(jìn)旁路淀粉(即通過瘤胃而到達(dá)小腸的淀粉)在小腸中的降解，和/或增加葡萄糖的吸收，從而通過最小化大腸中的微生物降解和在排泄物中排出淀粉來利用(salvage)能量。期望的是，觀察到的淀粉降解的改進(jìn)將向牛提供更多的能量，從而增加乳產(chǎn)量或增重。在本發(fā)明的細(xì)菌淀粉酶的用途的具體實施方案中，參考本文的實施例2，平均氣體產(chǎn)生量(GP)為至少0.9ml，其使用本文實施例1的修正HFT方法并使用TMR作為底物。無論淀粉酶的劑量如何，優(yōu)選在最優(yōu)劑量，使用同樣的方法確定。在優(yōu)選的實施方案中，平均氣體產(chǎn)生量(如上述所確定)為至少1.0、1.5、2.0、2.5、3.0或至少3.5ml。如可從實施例2中所見的,真菌淀粉酶導(dǎo)致充分低于(wellbelow)0.9ml的氣體產(chǎn)生量。這意味著真菌淀粉酶顯然不會使淀粉在瘤胃中消失。這個觀察結(jié)果得到了Tricarico等(AnimalScience2005,81:365-374)的證實，他們觀察到在泌乳奶牛中同樣有這種情況，并在瘤胃中插入導(dǎo)管引導(dǎo)補(bǔ)加AMAIZE的飼料(andruminalIycannulatedsteersthefeedofwhichwassupplementedwithAMAIZE)(參見摘要)。觀察到的本發(fā)明細(xì)菌淀粉酶引起的氣體產(chǎn)生量增加實際可以理解為淀粉降解的改進(jìn)，可從實施例4中見到。因此，在具體的實施方案中，參照實施例4，使用本文實施例1的修正HFT方法以TMR作為底物并培育4小時，與沒有外源淀粉酶的對照相比較，根據(jù)本發(fā)明使用的細(xì)菌淀粉酶能減少殘余淀粉的量?？梢匀鐚嵤├?中所述確定殘余淀粉。在另一個具體的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明使用的細(xì)菌淀粉酶至少部分地降解已經(jīng)存在于牛類動物瘤胃中的淀粉。上面提及的至少0.9ml平均氣體產(chǎn)生量可以理解為存在于底物中的淀粉至少5%的降解。因此，根據(jù)本發(fā)明使用的細(xì)菌淀粉酶優(yōu)選降解底物(或飲食，或飼料組合物)中至少5%(w/w)的淀粉，更優(yōu)選至少6、7、8、9、10、11、12、13、14或者至少15%的淀粉，后面的百分比對應(yīng)于1.8ml的平均氣體產(chǎn)生量。在其它優(yōu)選的實施方案中，淀粉酶降解至少20、22、24、26、28或者至少30%的淀粉。優(yōu)選的底物是TMR，例如，如實施例1中所述。就本目的而言，改進(jìn)的乳產(chǎn)暈指下述之一:(i)每日乳產(chǎn)生量增加的體積(I/天);(ii)每日乳產(chǎn)生量增加的重量(kg/天)每日產(chǎn)生的kg乳相對于以kg表示的干物質(zhì)攝入的增加的比例(kg乳/gDMI)；(iv)每日產(chǎn)生的乳脂肪的增加的重量(kg/天)；(v)每日產(chǎn)生的乳蛋白質(zhì)的增加的重量(kg/天)；(vi)每日3.5%脂肪修正的乳(佰tcorrectedmilk)的增加的產(chǎn)生量(kg/天)；和/或(vii)每日乳固體增加的產(chǎn)生量,其中術(shù)語“乳固體”包括乳糖、脂肪、蛋白質(zhì)和乳糖的總量。增加的乳產(chǎn)量還可以表示為每日產(chǎn)生的乳糖的增加的重量(kg/天)，或者(ix)每日增加的4%脂肪修正的乳(kg/天)，例如，計算如下:(0.4Xkg乳產(chǎn)量)+(15Xkg乳脂肪)。當(dāng)下述情況時可以獲得增加的乳產(chǎn)量，例如，乳的干物質(zhì)含量增加(例如更多的脂肪或蛋白質(zhì))而無伴隨的體積增加，體積增加而無干物質(zhì)的增加，和體積以及乳的干物質(zhì)含量都增加。在具體的實施方案中，參照本文實施例7，(a)相對于未添加淀粉酶的對照，每日乳產(chǎn)生量(kg/天)增加至少1%，優(yōu)選2、3、4、5、6、7、8或至少9%；(b)相對于未添加淀粉酶的對照，每日乳產(chǎn)生量(kg/天)相對于干物質(zhì)攝入量(DMI)(kg/天)的比例(kg乳/kgDMI)改進(jìn)至少1%,優(yōu)選至少2、3或者至少4%；(C)相對于未加淀粉酶的對照，每日產(chǎn)生的乳脂肪的重量(kg/天)改進(jìn)至少1%，優(yōu)選至少2、3、4、5、6、7或者至少8%；(d)相對于未加淀粉酶的對照，每日產(chǎn)生的乳蛋白質(zhì)的重量(kg/天)改進(jìn)至少1%，優(yōu)選至少2、3、4、5、6、7、8或者至少9%；(e)相對于未加淀粉酶的對照，每日3.5%(或者4%)脂肪修正的乳產(chǎn)生量(kg/天)改進(jìn)至少1%，優(yōu)選至少2、3、4、5、6、7、8或者至少9%;和/或(f)相對于未加淀粉酶的對照，3.5%(或者4%)脂肪修正的乳產(chǎn)生量(kg/天)提高至少1%，優(yōu)選至少2、3、4或者至少5%。實施方案(a)-(f)優(yōu)選指如下面FCR段落中所述的牛試驗(cow-trial)。飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)說明如何有效地利用飼料。FCR越低，飼料利用得越好。可以根據(jù)牛試驗確定FCR，所述試驗包括:第一處理，其中將根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶以期望濃度(例如，6或30mg酶蛋白質(zhì)每kg飼料,優(yōu)選每kg飼料干物質(zhì)(DM))加入動物飼料,和未向動物飼料中加入淀粉酶的第二處理(對照)，每個處理由四頭或七頭牛(優(yōu)選奶牛)組成，牛在畜舍(barn)(優(yōu)選具有散養(yǎng)畜欄(freestall))中圈養(yǎng),配備Calan門(Calangate)用于測定個體的飼料攝入，用TMR飲食飼養(yǎng)牛，其中優(yōu)選包含50%濃縮物(主要由玉米粉(cornmeal)、粗小麥粉(wheatmiddling)、含可溶物的干酒糟(distiller，sdriedgrainwithsolubles)和大豆粉(SBM)組成)、37%玉米青忙、7%苜猜半干青忙(alfalfahaylage)和6%苜蓿干草，將FCR計算為相對于以kg每天每只牛(可選地，對于增重為kg每只牛)表示的乳產(chǎn)量(或者可選地，增重)的以kg/牛(優(yōu)選kgDM/牛)表示的進(jìn)行期望時間的試驗(例如第一、第二、第三或第四個21天時間，或者全部84天時間)的飼料攝入，相對于第二處理的FCR，第一處理的FCR得到改進(jìn)。為了解詳情，參見實施例7。在具體的實施方案中，同對照相比，F(xiàn)CR改進(jìn)(即，減少)至少1.0%，優(yōu)選至少1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%或者至少2.5%。在進(jìn)一步具體的實施方案中，同對照相比，F(xiàn)CR改進(jìn)(即減少)至少2.6%、2.7%、2.8%、2.9%或者至少3.0%。在更進(jìn)一步的具體實施方案中，同對照相比，F(xiàn)CR改進(jìn)(即減少)至少3.1%、3.2%、3.3%、3.4%、3.5%、3.6%、3.7%或者至少3.8%?？晒┻x擇地，改進(jìn)是相對于對照組而言，對照組接受劑量為240DU/kgTMR干物質(zhì)的AMAIZE淀粉酶。改進(jìn)的遭重指相對于未加淀粉酶的對照，改進(jìn)的每日、每周、每兩周或每月的增重(用g或kg每個相對時間段表示)。這優(yōu)選在如上面FCR段落中所述的試驗中確定。在具體的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶改進(jìn)飼料的表觀消化率(例如，與未加淀粉酶的對照相比)。特別地，本發(fā)明的淀粉酶可以改進(jìn)干物質(zhì)消化率、中性洗滌劑纖維消化率和/或有機(jī)物消化率。此外，本發(fā)明的淀粉酶可以改進(jìn)淀粉消化率和/或粗蛋白質(zhì)消化率。例如，本發(fā)明的淀粉酶將(i)干物質(zhì)消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2、3、4、5、6、7、8或者至少9%；(ii)中性洗滌劑纖維消化率改進(jìn)至少2%，更優(yōu)選至少4、5、10或者至少20%，甚至更優(yōu)選至少25、30或者至少35%；(iii)有機(jī)物消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2、3或者至少4%，甚至更優(yōu)選至少5、6或者至少7%；(iv)淀粉消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2%；和/或(V)粗蛋白質(zhì)消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2、3、4、5或者至少6%。可以根據(jù)牛試驗確定如上概述的表觀消化率，所述試驗包括:第一處理，其中將根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶以期望濃度(例如，6或30mg酶蛋白質(zhì)每kg飼料)加入動物飼料，和未向動物飼料中加入淀粉酶的第二處理(對照)，每個處理由六頭牛，例如公牛或母牛，優(yōu)選奶牛組成，牛在畜舍(優(yōu)選具有散養(yǎng)畜欄)中圈養(yǎng)，配備Calan門用于測定個體的飼料攝入，用TMR飲食飼養(yǎng)牛，其中優(yōu)選包含50%濃縮物(主要由玉米粉、粗小麥粉、含可溶物的干酒糟和大豆粉(SBM)組成)、37%玉米青貯、7%苜蓿半干青貯和6%苜蓿干草，用對應(yīng)于階段4(四個21天時間)的最后一周中的平均每天攝入的量再飼養(yǎng)8天，從第5天至第8天通過直腸觸診(rectalpalpation),每8小時(優(yōu)選每天取樣點間隔增加I小時)收集排泄物定時采集樣本(grabsample)(約300g),直至每頭牛收集到總共12個樣本,取TMR的樣本(來自每組)和每天的飼料殘渣(ort)(對每頭牛)，將所有的排泄物、TMR和飼料殘渣樣本匯集到一起(分別針對每頭牛)，在60°C強(qiáng)迫通風(fēng)烘箱中干燥48小時，碾磨樣本通過Ι-mm篩子，分析干物質(zhì)(DM)、酸性洗滌劑纖維(ADF)和中性洗滌劑纖維(NDF)，例如，如Goering,H.K.,VanSoest,P.J.,1970在AgricultureHandbookN0.379中所述，分析樣本的氮(N)(例如，使用ElementorVarioMaxCNAnalyzer),和灰分含量(在馬弗爐(mufflefurnace)中600°C5小時)，使用不可消化的NDF作為標(biāo)記，計算總消化道的表觀消化率。優(yōu)選地，在使用Daisy-1I溫育箱(AnkomTechnology,Macedon,NY,US)體外瘤胃培育120小時后，確定不可消化的NDF(Goering和VanSoest,1970)，瘤胃流體來自用對照飲食飼養(yǎng)的牛。更多細(xì)節(jié)參見實施例8和表11。在另一個具體的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶可以改進(jìn)粗纖維、粗蛋白質(zhì)、有機(jī)物和/或粗脂肪的總消化道表觀消化率(例如，與未加淀粉酶的對照相比較)。例如，本發(fā)明的淀粉酶可以改進(jìn)下述的表觀消化率:(i)將粗纖維的表觀消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2，或者至少3%；(ii)將粗蛋白的表觀消化率改進(jìn)至少1%；(iii)將有機(jī)物的表觀消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2或至少3%;和/或(iv)將粗脂肪的表觀消化率改進(jìn)至少1%，更優(yōu)選至少2、3、4或者至少5%?？梢愿鶕?jù)體內(nèi)牛研究確定總消化道表觀消化率，所述研究使用三頭未泌乳的牛(GermanHolstein),和兩個處理，即加入50mg酶蛋白質(zhì)(EP)每kg干物質(zhì)(DM),和未加酶的對照。向每日日糧(例如，由44%玉米青貯、18%草青貯、9%干草和29%基于玉米的濃縮物組成的TMR)中加入酶。優(yōu)選在連接有空調(diào)的畜舍(20°C)中在橡膠墊上安置牛，單獨飼養(yǎng)，可自由取水。實驗可以持續(xù)2個階段，每階段25天(共50天)；在每個階段中，前14天用于適應(yīng)，而后11天用于采樣。每頭牛優(yōu)選每天在7:OOh和16:OOh喂5.5kg(DM)TMR，并在早晨喂食后2小時喂0.5kg(DM)干草。此外，優(yōu)選施用100g/d礦物質(zhì)預(yù)混物。從第22天至第25天，在8:30通過直腸觸診對每頭牛收集排泄物定時采集樣本(約200g)。可將TiO2用作標(biāo)記以計算總消化道的表觀消化率。如本領(lǐng)域通常的情況，可通過在105°C干燥直至無進(jìn)一步的重量損失(通常為24小時)來確定DM。要了解更多詳細(xì)內(nèi)容，參見實施例9和表16。在進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶改進(jìn)在尼龍袋中培育過程中飼料中干物質(zhì)(DM)的消失,例如從下述詞料中消失,如玉米粒(corngrain)、大麥、玉米青忙和/或TMR0例如，在培育時間2小時后，玉米粒、大麥、玉米青貯和TMR中DM消失分別為至少1%(優(yōu)選至少5、10、15、20、25、30或者至少35%)、至少1%(優(yōu)選至少2、4、6、8或者至少10%)、至少1%(優(yōu)選至少2或者至少3%)，和至少1%(優(yōu)選至少2或者至少3%)。作為另一個實例，在培育時間4小時后，玉米粒、大麥、玉米青貯和TMR中DM消失分別為至少1%(優(yōu)選至少5、10、15,20,25或者至少26%)、至少1%(優(yōu)選至少2、4或者至少6%)、至少1%(優(yōu)選至少2或者至少3%)，和至少1%(優(yōu)選至少2或者至少3%)。作為進(jìn)一步的實例，在培育時間8小時后，玉米粒和大麥中DM消失分別為至少1%(優(yōu)選至少5、10、15、20、25、30或者至少33%)，至少1%(優(yōu)選至少2%)?？梢栽谏鲜鲶w內(nèi)試驗(在總消化道表觀消化率的情況)中，使用為人所熟知的尼龍袋技術(shù)確定飼料干物質(zhì)的消失，所述尼龍袋技術(shù)可以參考實施例9，并在實施例9中詳細(xì)描述。要獲得更進(jìn)一步的詳細(xì)內(nèi)容，參見實施例9和表12-15。在進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明的淀粉酶與纖維素酶組合(i)改進(jìn)乳產(chǎn)量(kg/d),優(yōu)選在泌乳早期(earlylactationstage)(例如,在分娩后第I天至14天)，更優(yōu)選不改變?nèi)榻M成；和/或(ii)改進(jìn)背脂厚度，優(yōu)選在分娩后140天或140天之后?？梢允褂脙山M，在體內(nèi)飼養(yǎng)試驗中在9個月內(nèi)確定乳產(chǎn)量和背脂厚度，其中每組由例如220頭奶牛(GermanHolstein)組成。優(yōu)選將奶牛安置在具有條縫地板(slottedfloor)的小(cubical)畜舍中。實驗階段優(yōu)選包括分娩前的三周和分娩后的20周。用全混合日糧(TMR)飼養(yǎng)牛(優(yōu)選一天八次)，所述TMR未補(bǔ)加酶(對照)，或者補(bǔ)加了合適劑量的酶(例如對應(yīng)于25mg酶蛋白質(zhì)(EP)/kgTMR干物質(zhì)(DM)的淀粉酶，和1.4ml/kgTMR纖維素酶，或者與淀粉酶相似的量(EP/kg))?？梢栽谖故城傲⒓磳⒚竾姙⒃赥MR上。TMR的主要組分是玉米青貯、草青貯和濃縮物(可以在農(nóng)場上混合)，而且干物質(zhì)含量可為約50%。優(yōu)選每天在旋轉(zhuǎn)式擠奶間(milkingparlour)中對牛擠3次奶。定期在試驗中評估個體乳產(chǎn)量和組成，以及背脂厚度。要獲得更詳細(xì)的內(nèi)容，參見實施例10和圖1和2。就本目的而言，認(rèn)為術(shù)語飼養(yǎng)(feed)和喂養(yǎng)(fodder)同義。關(guān)于牛類如牛的想I料組成，以及其組分，牛類飲食通常由易降解的部分(稱作濃縮物)和富含纖維較不容易降解的部分(稱作干草、草料或粗飼料)組成。干草由干燥的草、豆類或全谷類組成。草其中包括梯牧草屬(timothy)、黑麥草屬(ryegrass)、羊茅屬(fescue)。豆類其中包括三葉草(clover)、紫花苜猜(lucerne)或苜猜、豌豆(pea)、豆(bean)和野豌豆屬(vetch)。全谷類其中包括大麥、玉蜀黍、燕麥、高粱。全谷類的其它實例是小麥和黑麥。就本目的而言，認(rèn)為術(shù)語玉蜀黍和玉米同義。其它飼料作物(foragecrop)包括甘鹿(sugarcane)、羽衣甘藍(lán)(kale)、油菜(rape)和甘藍(lán)(cabbage)。塊根作物(rootcrop),如蕪菁(turnip)、蕉青甘藍(lán)(swede)、飼用甜菜(mangel)、飼料甜菜(fodderbeet)和糖用甜菜(sugarbeet)(包括糖用甜菜楽;和甜菜糖蜜)也用來飼養(yǎng)反芻動物。更進(jìn)一步的作物是塊莖，如馬鈴薯、木薯和甘薯。青貯是富含纖維部分(例如來自草、豆類或全谷類，全植物或其部分，例如玉蜀黍)的窖存形式(ensiledversion)，用受控的厭氧發(fā)酵方法(天然發(fā)酵或添加劑處理)處理具有高含水量的物質(zhì)。濃縮物主要由谷類(如包括啤酒麥芽糟(brewer’sgrain)和酒糟的大麥、玉蜀黍、小麥、高粱、燕麥和/或黑麥)，但是也經(jīng)常包含富含蛋白質(zhì)的飼料組分，如大豆(優(yōu)選大豆粉)、油菜籽、棕櫚仁、棉籽和向日葵。還可以用全混合日糧(TMR)飼養(yǎng)牛，其中將所有的飲食組分，例如草料、青貯濃縮物和預(yù)混物(例如礦物質(zhì)、維生素)在提供之前混合。參照實施例3，在具體的實施方案中，本發(fā)明的飼料組合物包括TMR、濃縮物、玉蜀黍、大麥、黑麥、小麥、燕麥和/或馬鈴薯。在優(yōu)選的實施方案中，飼料組合物包含玉蜀黍和高粱中的至少一種(或者包括玉蜀黍和/或高粱)，最優(yōu)選玉蜀黍。術(shù)語如“玉蜀黍”、“大麥”、“馬鈴薯”等，包括全植物或其部分，以及各種源自其中的制備物和物質(zhì)，其中包括葉、花、莖(stalk)、根、果實、核(kernel)、谷粒、粗粉和淀粉。此外，這些植物部分可按原樣(以天然形式)使用，干燥、壓碎、浸泡，或者作為青貯(非限定性列表)。在進(jìn)一步特定的實施方案中，本發(fā)明的飼料組合物是富含淀粉酶的濃縮物或者富含淀粉酶的全混合日糧(TMR)，其中淀粉酶是根據(jù)本發(fā)明使用的細(xì)菌淀粉酶，如上文所述。可將濃縮物制粒，并且在制粒前或制粒后加入淀粉酶。濃縮物還可以是醪濃縮物(mash-concentrate)。此外,可將根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶添加至任何其它飼料組分或組合物，例如混合的，或者作為表面飾料(top-dressing),或者可將其包括在飼料添加劑中，例如通過如下所述的預(yù)混物。除了如上所述根據(jù)本發(fā)明使用的淀粉酶之外，本發(fā)明的飼料添加劑組合物包含選自維生素和礦物質(zhì)的至少一種額外組分。例如，本發(fā)明的飼料添加劑可以包括(i)至少一種維生素，(ii)至少一種礦物質(zhì)，或者(iii)至少一種維生素和至少一種礦物質(zhì)。至少一種維生素可以是脂溶性或者水溶性。脂溶性維生素的實例是維生素A、維生素D3、維生素E和維生素K，例如維生素K3。水溶性維生素的實例是維生素B12、生物素和膽堿(choline)、維生素B1、維生素B2、維生素B6、煙酸、葉酸和泛酸(panthothenate),例如D-泛酸鈣。至少一種礦物質(zhì)可以是常量(macro)礦物質(zhì)和/或痕量礦物質(zhì)。痕量礦物質(zhì)的實例是錳、鋅、鐵、銅、碘、硒和鈷。常量礦物質(zhì)的實例是鈣、磷和鈉。預(yù)混物是本領(lǐng)域中公認(rèn)的術(shù)語用于某些飼料添加劑。它們可以是固體或液體的。礦物質(zhì)預(yù)混物是意欲向動物飼料添加的組合物，且其包含期望種類和量的礦物質(zhì)，特別是痕量礦物質(zhì)。維生素預(yù)混物是意欲向動物飼料添加的組合物，其包含期望種類和量的維生素。一些預(yù)混物包括維生素和礦物質(zhì)。本文實施例12中包括了用于牛的這種組合的預(yù)混物的實例。本發(fā)明還涉及要求保護(hù)的用途、方法和組合物，其中本發(fā)明的細(xì)菌淀粉酶與下述組合使用:(i)用于反芻動物的其它酶，如蛋白酶、肌醇六磷酸酶、細(xì)胞壁降解酶，如木聚糖酶、纖維素酶，和/或內(nèi)切葡聚糖酶；(ii)瘤胃素(Rumensin)(莫能菌酸鈉(monensinsodium));和/或(iii)泰樂菌素(Tylan)(泰樂菌素(tylosin))。本發(fā)明進(jìn)一步通過如下實施例描述，不應(yīng)將所述實施例看作為對本發(fā)明范圍的限制。實施例用作緩沖劑和底物的化學(xué)物質(zhì)是至少試劑級的商業(yè)產(chǎn)品。實施例1:修正的HohenheimForage值測試(HFT)HohenheimForage值測試(HFT)由Menke等(1979)，J.Agric.Sc1.Camb.93,217-222:“當(dāng)在體外用瘤胃液體培育反芻動物飼料時，根據(jù)氣體產(chǎn)生量估計反會動物飼料的消化率和可代謝的能量含量(Theestimationofthedigestibilityandmetabolizableenergycontentofruminantfeedingstuffsfromthegasproductionwhentheyareincubatedwithrumenliquorinvitro)，，，由Steingass，H.(1983):BestimmungdesenergetischenFutterwertesvonwirtschaftseigenenFuttermittelnausderGasbildungbeiderPansensaftfermentationinvitro”，HohenheimUniversitat3Fak.Agrarwiss.Dissertation,和由Steingass等，于TierernahrungI4；pp251-270(1986):”SchatzungdesenergetischenFutterwertesausderinvitromitPansensaftbestimmtenGasbildungundderchemischenAnalyse.1.UntersuchungenzurMethodeGbersn描述。它的目的主要是根據(jù)氣體產(chǎn)生量估計用于乳產(chǎn)生時飼料中用于泌乳的凈能量。這個測試的本修正版本用于測試瘤胃體外系統(tǒng)中外源酶的效果。簡言之，在玻璃注射器中將飼料底物與瘤胃液體和適當(dāng)?shù)木彌_液混合物的組合物一起稱重。用緊密配合但可移動的活塞將玻璃注射器封閉，使產(chǎn)生的氣體的體積增加。將注射器在39°C溫育4小時。測定產(chǎn)生氣體的量并用于轉(zhuǎn)換公式中(參見實施例2中的公式)。試劑大量兀素溶液(masselementsolution):6.2g磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.6g七水合硫酸鎂(MgS04*7H20)9ml濃磷酸(lmol/1)溶于蒸餾水中，加至IL(pH約1.6)緩沖溶液:35.0g碳酸氫鈉(NaHCO3)4.0g碳酸氫銨((NH4)HCO3)溶于蒸餾水中，加至1L。痕量元素溶液:13.2g二水合氯化鈣(CaCl2*2H20)10.0g四水合氯化錳(II)(MnCl2*4H20)1.0g六水合氯化鈷(II)(CoC12*6H20)8.0g氯化鐵(III)(FeCl3*6H20)溶于蒸餾水中，加至100ml鈉鹽溶液:IOOmg鈉鹽溶于蒸餾水中，加至IOOml還原溶液:先將3ml氫氧化鈉(c=lmol/l),然后將427.5mg水合硫化鈉(Na2S*H20)加入71.25mlH2O中。在將溶液加至培養(yǎng)基溶液之前不久(shortlybefore)制備溶液酶緩沖液:10.88g三水合乙酸鈉(CH3C00Na*3H20)5.88g二水合氯化鈣(CaCl2*2H20)0.1gBSA(牛血清白蛋白)溶于蒸餾水中，加至21，用乙酸調(diào)節(jié)至pH=5.8設(shè)備:注射器(玻璃注射器，100ml，1/1用毛細(xì)管基底表示刻度(graduatedwithcapillarybase))硅試管(用于每個注射器，約50mm)，將其拖至(pullover)毛細(xì)管底部并用夾子(clamp)封閉用于65個注射器的帶有能量單元的轉(zhuǎn)子，約I轉(zhuǎn)每分鐘具有通風(fēng)設(shè)備的培養(yǎng)箱(精度+0.5°C，內(nèi)部最小尺寸:70cm*70cm*50cm)精密天平或分析天平抽吸泵(例如手動的、適用于摩托車的氣泵)，用于去除瘤胃中的物質(zhì)，回流閥(returnvalve)、洗漆瓶(washingflask)具有塞子的進(jìn)料瓶(2L)，用于收集瘤胃液體裝有工藝(technical)二氧化碳、具有減壓閥的氣瓶注滿瘤胃液體的設(shè)備，其由:半自動吸液管(50ml)、WoulfT瓶(2L)、磁力攪拌器、具有循環(huán)泵的恒溫器和PVC盆(bowl)(IOL)組成步驟底物:底物(飼料)是全混合日糧，其由44%標(biāo)準(zhǔn)濃縮物(商業(yè)上可從theUniversityofHohenheim,Institutfiir丨iei'ernShrung獲得)、6%標(biāo)準(zhǔn)干草(商業(yè)上可從theUniversityofHohenheim,InstitutfiirTiereiT^ihrung獲得)、37%玉蜀黍青忙和13%草青忙，均在65。C干燥(兩種青忙都來自Village-Neuf,St.LouisCedex,France的農(nóng)場)。用實驗室用壓榨機(jī)將所有組分碾碎通過1.5mm篩子，然后混合形成TMR。樣品稱重:將干物質(zhì)含量為400mg的飼料準(zhǔn)確稱重至36個注射器的每個注射器中。這些注射器中的15個是底物對照，顯示沒有酶作用時的氣體產(chǎn)生量。其余21個注射器用于酶樣品(7個注射器用于I個酶樣品)。然后向注射器插入先用凡士林涂抹的活塞。也對其它28個注射器進(jìn)行這種處理，這28個注射器包含具有瘤胃液體的24ml培養(yǎng)基溶液，但是沒有任何底物樣品。7個注射器的氣體產(chǎn)生量代表僅來自瘤胃液體的氣體產(chǎn)生量的平均值。其余21個注射器是不加任何底物的酶對照。當(dāng)用凡士林涂抹活塞時，注射器的摩擦阻力降低。此外，注射器是防水而且氣密的。在充滿瘤胃液體之前，所有注射器都保留于39°C培養(yǎng)箱中。鈉溶液的制備:以下述順序?qū)⒔M分在Woulff瓶中混合:711ml水0.18ml痕量元素溶液355.5ml緩沖溶液355.5ml大量元素溶液將成品溶液(completedsolution)加溫至39°C(水浴或具有恒溫器的PVC盒)，并通過磁力攪拌器保持均一。首先，加入1.83ml鈉鹽溶液。始終通過浸沒的軟管(submergedhose)向培養(yǎng)基溶液中熏(fumigate)C02。在36°C,加入全部還原溶液。指示劑從藍(lán)色變成紅色，再變成無色。當(dāng)指示劑變成無色時加入瘤胃液體。首先用浸沒的軟管將CO2通氣繼續(xù)15分鐘，在注入注射器的過程中，抬升軟管使液體保持以CO2飽和。瘤胃液體的提取:在早晨飼喂測試動物(主要是安置瘺管的(fistulated)羊，有時是牛)之前，將瘤胃液體提取至預(yù)熱的21進(jìn)料瓶中，將進(jìn)料瓶用作收集容器。使用松散編織的亞麻袋過濾瘤胃流體，輕柔地轉(zhuǎn)移至保溫瓶中，并在運(yùn)送至實驗室過程中小心地阻止進(jìn)入空氣。在持續(xù)攪拌和通入CO2的情況下，向約1400ml培養(yǎng)基溶液加入750ml瘤胃液體。注入注射器:以相對于酶緩沖液的一定比例稀釋待測試的酶。將酶加入相應(yīng)的注射器中準(zhǔn)確的0.4ml溶液中，由此使酶溶液必須完全覆蓋底物。在將培養(yǎng)基溶液和瘤胃液體的混合物均質(zhì)化后，用半自動吸液管將24ml置于每個注射器中，之前在培養(yǎng)箱中將注射器加溫高至39°C。這代表18ml培養(yǎng)基溶液和6ml瘤胃液體的體積。然后，通過小心振蕩去除所有氣泡。同時，用這種方式打碎所有飼料塊。在蓋上夾子后，在活塞的水平面，加入(register)不含任何氣體相的準(zhǔn)確體積的液體。將注射器直接置于預(yù)熱培養(yǎng)箱(39°C)的轉(zhuǎn)子中。溫育和確定氣體體積:在溫育過程中，注射器必須在轉(zhuǎn)子中保持水平位置。應(yīng)將傳遞調(diào)至一轉(zhuǎn)每分鐘。在溫育過程中，培養(yǎng)箱中的溫度應(yīng)該保持在39°C+0.5。C。四個小時后，完成溫育。通過仔細(xì)讀出活塞在校準(zhǔn)標(biāo)度(calibrationscale)的位置來測定氣體形成。此外，通過小心地旋轉(zhuǎn)，檢查活塞未卡住。通過兩個標(biāo)度線之間的插值，可以達(dá)到高達(dá)+0.5ml的讀數(shù)精度。實施例2:體外的淀粉酶測試在實施例1的體外反芻動物模型中，測試了幾種細(xì)菌淀粉酶，并用于與三種真菌淀粉酶比較。每個實驗重復(fù)多次(“η”)。從NovozymesA/S,Krogshoejvej36,2880Bagsvaerd,Denmark獲得下述淀粉酶:BAN240L、STAINZYME12L、TERMAMYLSCL、NATALASE200L、DURAMYL300LDX和FUNGAMYLSOOLoWValleyResearchInc.,3502NorthOliveRoad,SouthBend,IN46628,US獲得VALIDASEBAA和VALIDASEFAA淀粉酶。從Alltech(AlltechInternationalHeadquarters,303ICatnipHillPike,Nicholasville,KY40356,US)獲得AMAIZE淀粉酶。結(jié)果示于下面的表I中，作為平均氣體產(chǎn)生量(GP)。與未加外源酶(ml/%)的對照相比較，以絕對數(shù)值以及以％給出GP。為了修正用于由酶制備物中可用的底物(例如蛋白質(zhì)和配制物質(zhì)，如葡萄糖和蔗糖)產(chǎn)生的氣體，在HFT系統(tǒng)中溫育包含酶和瘤胃流體的酶對照樣品，而不是飼料底物。如下計算酶對飼料底物(Delta-G)的作用，基本上按照Wallace等在J.Anim.Sc1.2001，79:1905-1916中所建議的:Delta_G=(SE-SC)-(RFE-RFC)，其中SE=瘤胃流體、飼料底物和酶，SC=瘤胃流體和飼料底物，RFE=瘤胃流體和酶，和RFC=瘤胃流體。在表I中，每種淀粉酶的劑量表不為以mg每kg底物表不的粗蛋白(CP),和以mg每kg底物表示的酶蛋白(EP)。用燃燒法測量粗蛋白(CP)，其中大體上C02、H2O,NOx和N2通過不同種類的過濾裝置，去除氮之外的所有氣體，然后用熱導(dǎo)池在氦載體中測量氮。為此根據(jù)制造商的說明使用LECOFP-528氮分析儀。將粗蛋白計算為氮(N)乘以因子6.25，即粗蛋白(g/kg)=N(g/kg)X6.25。還可以用凱氏定氣法(Kjeldahlmethod)(A.0.A.C.,1984,OfficialMethodsofAnalysis第14版，AssociationofOfficialAnalyticalChemists,WashingtonDC)確定氮含量。根據(jù)所研究酶的酶活性和比活性確定酶蛋白(EP)，參照實施例5的α-淀粉酶方法。表I權(quán)利要求1.細(xì)菌淀粉酶在牛亞科動物的飼料中的用途。2.權(quán)利要求1的用途，用于改進(jìn)乳產(chǎn)量、體重增加和/或飼料轉(zhuǎn)化率。3.權(quán)利要求1的用途，用于改進(jìn)乳產(chǎn)量、表觀消化率，和/或使用尼龍袋法的飼料干物質(zhì)消失。4.權(quán)利要求1的用途，其與纖維素酶組合使用。5.權(quán)利要求4的用途，用于改進(jìn)乳產(chǎn)量和/或背脂厚度。6.細(xì)菌淀粉酶在用于牛亞科動物飼料的組合物的制備中的用途。7.制備用于牛亞科動物的飼料中的組合物的方法，所述方法包括向至少一種飼料組分中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。8.權(quán)利要求7的方法，所述方法還包括添加纖維素酶。9.增加牛亞科動物乳產(chǎn)量的方法，所述方法包括向動物飼料中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。10.權(quán)利要求9的方法，其還包括向動物飼料中添加纖維素酶。11.增加牛亞科動物的背脂厚度的方法，所述方法包括向動物飼料中添加與纖維素酶組合的細(xì)菌淀粉酶的步驟。12.增加牛亞科動物的體重增加和/或飼料轉(zhuǎn)化率的方法，所述方法包括向動物飼料中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。13.改進(jìn)牛亞科動物的飼料干物質(zhì)的消失和/或表觀消化率的方法，所述方法包括向動物飼料中添加細(xì)菌淀粉酶的步驟。14.飼料添加劑組合物，其包含細(xì)菌淀粉酶，連同選自維生素和礦物質(zhì)的至少一種額外組分。15.權(quán)利要求14的飼料添加劑，其還包含纖維素酶。16.權(quán)利要求15的組合物，其為礦物質(zhì)預(yù)混物、維生素預(yù)混物，或包括維生素和礦物質(zhì)的預(yù)混物。17.組合物，其包含細(xì)菌淀粉酶，以及至少一種選自干草、草料、粗飼料和/或濃縮物的額外的組分。18.權(quán)利要求17的組合物，其還包含纖維素酶。19.權(quán)利要求17的組合物，其為富含淀粉酶的濃縮物。20.權(quán)利要求17的組合物，其為富含淀粉酶的全混合日糧。21.權(quán)利要求17-20中任一項的組合物，其包含玉蜀黍和/或高粱。22.權(quán)利要求21的組合物，其包含玉蜀黍。全文摘要本發(fā)明涉及細(xì)菌淀粉酶在牛類動物的飼料中的用途，具體地涉及至少一種細(xì)菌淀粉酶在牛亞科反芻動物的飼料中的用途，特別是用于改進(jìn)乳產(chǎn)量，所喂飲食的表觀消化率、飼料干物質(zhì)的消失、體重增加，和/或飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)。牛類動物的實例是奶牛和肉用牛。本發(fā)明還涉及這些淀粉酶在飼料和飼料添加劑如預(yù)混物、濃縮物和全混合日糧(TMR)中的用途。淀粉酶可以與纖維素酶組合使用，以改進(jìn)乳產(chǎn)量和/或背脂厚度。優(yōu)選的淀粉酶源自Bacillushalmapalus、地衣芽孢桿菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌，并且優(yōu)選與嗜熱脂肪芽孢桿菌淀粉酶同源。文檔編號A23K1/165GK103120264SQ20131005484公開日2013年5月29日申請日期2007年7月12日優(yōu)先權(quán)日2006年7月13日發(fā)明者沃爾夫?qū)?斯坦伯格,艾爾姆加德.艾米格,威比.格里特索,莫滕.費希爾申請人:諾維信公司,DsmIp資產(chǎn)公司