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      防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:143915閱讀:574來源:國知局
      專利名稱:防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及微生物菌劑,具體地涉及防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用。
      背景技術(shù)
      禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum),又稱禾谷鐮孢,可引起小麥、大麥、水稻、燕麥的穗枯或“穗瘡痂”病和玉米的莖腐病與穗腐爛病,也稱為赤霉病。禾谷鐮刀菌引起的小麥赤霉病是世界性流行病害。小麥?zhǔn)艿胶坦如牭恫【那秩竞?,病穗上往往出現(xiàn)粉紅色或橘紅色的霉?fàn)钗?,因此被稱為赤霉病。赤霉病是溫暖潮濕麥區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害,已在世界上五大洲30多個國家發(fā)生和流行。近年來,隨著全球氣候的變暖,還有蔓延擴(kuò)散的趨勢。在我國,小麥赤霉病造成的損失僅次于小麥條銹病,且分布范圍廣泛。在世界范同內(nèi),赤霉病在美國中北 部、加拿大南部、歐洲和南美地區(qū)都呈蔓延趨勢。赤霉病會造成糧食嚴(yán)重減產(chǎn)和籽粒品質(zhì)下降;同時,感病籽粒帶有真菌毒素,導(dǎo)致小麥不適于磨粉和食用,也不能當(dāng)作飼料麥銷售,從而造成雙重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著化學(xué)農(nóng)藥不斷施用所造成的病原菌抗藥性產(chǎn)生、耐藥性增強(qiáng)和農(nóng)藥殘留等問題的出現(xiàn),赤霉病的生物防治的優(yōu)點逐漸顯現(xiàn),禾谷鐮刀菌拮抗菌株的開發(fā)和抗菌株生物防治的研究已成為熱點。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是提供一種地衣芽孢桿菌及其在防治小麥赤霉病中的應(yīng)用。本發(fā)明從活性污泥中,分離純化得到地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis UTM110菌株。UTMl 10菌株于2013年I月8日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCCJia:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號,中國科學(xué)院微生物研究所,郵編 100101),保藏號=CGMCC N0.7098。所述地衣芽孢桿菌UTM 110菌株的鑒定特征是:菌落形狀不規(guī)則,具有波浪狀邊緣,表面粗糙不透明,有粘液珠,污白色;革蘭氏陽性桿菌,能運(yùn)動;芽孢橢圓或柱狀,位于菌體中央或稍偏。SEQ ID N0.1為地衣芽孢桿菌UTM 110的16S rDNA序列。所述菌株通過R2A培養(yǎng)基(蛋白胨0.5g,淀粉0.5g,葡萄糖0.5g,酵母粉0.5g,干酪素水解物0.5g,磷酸氫二鉀0.3g,丙酮酸鈉0.3g,硫酸鎂0.024g,水1L,瓊脂粉20%)分尚培養(yǎng)。生產(chǎn)菌株采用LB培養(yǎng)基(蛋白胨10g,酵母粉10g,氯化鈉IOg,水1L),28_35°C,培養(yǎng)24小時,發(fā)酵液5000rpm離心5分鐘,得到上清液即可。本發(fā)明還提供一種含有所述地衣芽孢桿菌UTM 110的菌劑。所述菌劑的制備方法包括以下步驟:接種地衣芽孢桿菌UTM 110于LB培養(yǎng)液培養(yǎng)基中,置于28-35°C下培養(yǎng)24小時。其他培養(yǎng)基也可以使用,培養(yǎng)溫度及時間可做適當(dāng)調(diào)整,其他培養(yǎng)如R2A、PDA、KB等。擴(kuò)繁后的菌液可做成水劑或粉劑,向有機(jī)肥中添加。菌劑含有地衣芽孢桿菌UTM 110的活菌數(shù)為108/ml。
      本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明菌株經(jīng)平板對峙實驗證實該地衣芽孢桿菌能夠有效抑制谷鐮刀病菌的生長,環(huán)境安全性好,經(jīng)發(fā)酵后可加入有機(jī)肥中,作為的微生物肥料使用,也可作為好氧堆肥的微生物菌種。


      圖1為地衣芽孢桿菌UTMllO菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹;圖2為地衣芽孢桿菌UTMllO光學(xué)顯微鏡照片;圖3為地衣芽孢桿菌UTMllO對禾谷鐮刀菌絲的抑制作用,A顯示地衣芽孢桿菌UTMllO對禾谷鐮刀菌絲較強(qiáng)的抑制作用,B為陰性對照。
      具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明,但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下,對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換,均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明,實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實施例1菌株的分離和培養(yǎng)取污水處理廠活性污泥l(xiāng)g,溶于IOml無菌蒸餾水中,梯度稀釋后涂布于R2A培養(yǎng)基(蛋白胨0.5g,淀粉0.5g,葡萄 糖0.5g,酵母粉0.5g,干酪素水解物0.5g,磷酸氫二鉀
      0.3g,丙酮酸鈉0.3g,硫酸鎂0.024g,水1L,瓊脂粉20%), 28°C培養(yǎng),分離單菌落。將禾谷鐮刀菌接種在PDA平板上(去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂10g,水1000ml),28°C培養(yǎng)5-7天后備用。挑取活性污泥分離平板上的細(xì)菌單菌落接種到20ml LB培養(yǎng)液中,置于28°C下150rpm/min的搖床上發(fā)酵培養(yǎng)10小時,取100 μ I發(fā)酵液涂布于LB瓊脂平板上,28°C培養(yǎng)10小時。使用直徑4_打孔器取I塊禾谷鐮刀菌菌塊,置于PDA平板中央,用打孔器在平板四周打4個孔,注入待測拮抗菌發(fā)酵液上清液100 μ L,28°C下培養(yǎng),觀察結(jié)果,篩選拮抗效果好的單菌落,進(jìn)行菌種鑒定。實施例2菌株的鑒定1、分離方法UTMllO菌株,分離于活性污泥。2、菌株特征經(jīng)廣州工業(yè)微生物檢測中心鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis),菌株編號UTM110。該菌株的培養(yǎng)特征是菌落形狀不規(guī)則,具有波浪狀邊緣,表面粗糙不透明,有粘液珠,污白色;革蘭氏陽性桿菌,能運(yùn)動;芽孢橢圓或柱狀,位于菌體中央或稍偏。SEQID N0.1地衣芽孢桿菌UTMl 10的16S rDNA序列。圖1為地衣芽孢桿菌UTMllO菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹。圖2為地衣芽孢桿菌UTMllO光學(xué)顯微鏡照片。3、菌株生化檢測指標(biāo)
      權(quán)利要求
      1.地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis) UTM110,其保藏號為=CGMCC N0.7098。
      2.含有權(quán)利要求1所述地衣芽孢桿菌UTMllO的菌劑。
      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑,其特征在于,含有地衣芽孢桿菌UTMllO的活菌數(shù)為108/mlo
      4.權(quán)利要求2或3所述菌劑的制備方法,其特征在于,在LB培養(yǎng)基中發(fā)酵地衣芽孢桿菌UTMllO制得。
      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述發(fā)酵條件為:28-35°C下培養(yǎng)24小時。
      6.權(quán)利要求1所述地衣芽孢桿菌UTMllO或權(quán)利要求2或3所述菌劑在防治小麥赤霉病中的應(yīng)用 。
      全文摘要
      本發(fā)明涉及防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用。所述地衣芽孢桿菌保藏號為CGMCC No.7098。本發(fā)明的地衣芽孢桿菌能夠有效抑制禾谷鐮刀病菌的生長,環(huán)境安全性好,可作為的微生物肥料使用,也可作為好氧堆肥的微生物菌種。
      文檔編號A01N63/00GK103184178SQ201310076629
      公開日2013年7月3日 申請日期2013年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月11日
      發(fā)明者劉永躍, 周順桂, 許宜北, 汪涌 申請人:大地綠源環(huán)??萍?北京)有限公司
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