專利名稱：防治辣椒疫病的生防菌株htc及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種防治辣椒疫病的生防菌株HTC及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
辣椒疫病是由辣椒疫霉(Phytophthora capsici)引起的一種卵菌病害。疫霉菌隸屬卵菌門、霜霉目、腐霉科、疫霉屬。疫霉菌在土壤中存活不是以一種形態(tài)，而是以不同形態(tài)即菌絲體、孢子囊、厚垣孢子和卵孢子等多種互變方式存活。該病可以通過雨水與灌溉水，農(nóng)用器具進(jìn)行傳播，是一種危害性很強(qiáng)的土傳病害。隨著我國(guó)辣椒大量種植，辣椒疫病在露地、保護(hù)地與大棚也大面積發(fā)生，因?yàn)樵摬『Πl(fā)病周期短，流行速度快，常導(dǎo)致辣椒植株成片死亡，給辣椒產(chǎn)業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。一般病株率為20 - 30%，嚴(yán)重時(shí)達(dá)80%以上，此病害是影響我國(guó)辣椒產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的主要因素之一。辣椒疫霉是一種異宗配合的微生物，它有2種主要的交配型:A1型和A2型。Groves等認(rèn)為，由于近年來殺菌劑的廣泛使用，使辣椒疫霉產(chǎn)生了抗藥性，從而誘導(dǎo)其交配型的變化，給該病害的防治帶來很多困難。苯基酰胺類殺菌劑甲霜靈(metalaxyl)和精甲霜靈(mefenoxam)等專用殺菌劑被廣泛用于防治該病害，是目前國(guó)內(nèi)外廣泛使用的卵菌病害防治藥劑中活性高、使用量大的一類殺菌劑，并取得了良好的防治效果。但由于該類藥劑屬于特異性位點(diǎn)抑制劑，對(duì)病原菌作用位點(diǎn)單一，長(zhǎng)期使用極易產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致防治效果下降。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑是防治辣椒疫病的又一重要的內(nèi)吸性殺菌劑，由于其作用機(jī)制新穎，與苯基酰胺類殺菌劑無交互抗性，目前被廣泛使用。但已有研究表明，某些病原菌靶標(biāo)對(duì)該類藥劑產(chǎn)生抗藥性自發(fā)突變頻率較高，在藥劑的高選擇壓力下病原菌易形成抗藥性群體。綜上所述，開發(fā)新的、有`效和安全的微生物殺菌劑控制辣椒疫病的發(fā)生是提高辣椒生產(chǎn)總量的需求，同時(shí)更是辣椒產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)、辣椒食用安全及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC。本發(fā)明提供的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC,其保藏號(hào)為CGMCCN0.6173。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備防治辣椒疫病HTC生防制劑的方法。本發(fā)明提供的方法,包括如下步驟:發(fā)酵上述的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC，得到發(fā)酵產(chǎn)物，即得到生防制劑。上述方法中，在所述得到發(fā)酵產(chǎn)物后，還包括如下步驟:去除所述發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲體，得到生防制劑。上述方法中，所述發(fā)酵的條件如下:25-28°C，160-180rpm振蕩培養(yǎng)10_12d ;所述發(fā)酵的條件具體如下:25°C、160rpm振蕩培養(yǎng)12d。
由上述方法制備的生防制劑也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。上述生防制劑中干物質(zhì)的濃度為400_600μ g/ml，在本發(fā)明的實(shí)施例中使用時(shí)稀釋至Ij 40 μ g/ml O本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種防治辣椒疫病或促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)或者促進(jìn)辣椒增產(chǎn)或抗菌的產(chǎn)品。本發(fā)明提供的產(chǎn)品，其活性成分為上述的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC或上述的HTC生防制劑。上述產(chǎn)品中，所述辣椒疫病為由辣椒疫霉Phytophthora capsici引起；所述抗菌為抗如下8種病原菌中的至少一種:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、楊樹腐爛病菌Valsa sordida、小麥赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、煙草赤星病菌 Alternaria alternata、楊樹水泡潰瘍病菌Botryosphaeria ribis、玉米紋枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica ；所述促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)體現(xiàn)在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒產(chǎn)量。上述的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC或上述的HTC生防制劑在防治辣椒疫病或促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)或者促進(jìn)辣椒增產(chǎn)或抗菌中的應(yīng)用。上述應(yīng)用中，所述辣椒疫病為由辣椒疫霉Phytophthora capsici引起；所述抗菌為抗如下8種病原菌中的至少一種:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、楊樹腐爛病菌Valsa sordida、小麥赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、煙草赤星病菌 Alternaria alternata、楊樹水泡潰瘍病菌Botryospha eria ribis、玉米紋枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica ；所述促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)體現(xiàn)在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒產(chǎn)量。防治辣椒疫病的菌株HTC，為毛殼屬金色毛殼菌(Chaetomium aureum)，分類命名為金色毛殼(Chaetomium aureum);于2012年5月31日，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱06110:，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，菌種保藏號(hào)為CGMCC N0.6173。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)一株菌株HTC及其生防制劑，生防制劑可以在溫室中使用并對(duì)辣椒疫病有一定程度的防治效果，達(dá)72.19%，而且可以使幼苗期株高增加12.27%，生物量增加32.34% ;使收獲期生物量增加31.11%，辣椒果實(shí)產(chǎn)量增加21.81%。由于本發(fā)明的菌株HTC是專門針對(duì)辣椒疫病篩選開發(fā)的生防菌株，因而在防治辣椒疫病方面與目前其它廣譜生物生防制劑相比，防治效果顯著。由于是生物制劑，完全沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列問題，因而有利于作物的無公害生產(chǎn)，農(nóng)民可以不用或減少其它防治辣椒疫病化學(xué)農(nóng)藥的用量，這不僅可以為農(nóng)民節(jié)省開支，也有利于辣椒產(chǎn)品的出口。同時(shí)該生防制劑還有增產(chǎn)功能，可為農(nóng)民增加經(jīng)濟(jì)收入。


圖1為金色毛殼菌株HTC的菌落生長(zhǎng)特征圖2為金色毛殼菌株HTC的形態(tài)特征
圖3為在接種辣椒疫霉7d后HTC生防制劑對(duì)辣椒疫病的防治效果圖4為HTC生防制劑對(duì)移栽后I個(gè)月辣椒植株的促生效果
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、生防真菌HTC的分離與鑒定1、菌種分離與鑒定(I)菌種的分離將從山東省泰安市徂徠山林場(chǎng)核桃生產(chǎn)基地采集的核桃葉片用自來水沖洗干凈，再用無菌水沖洗2次，無菌濾紙吸干表面水分。無菌條件下，將核桃葉片剪成4X8mm大小組織塊，70%乙醇浸泡30sec,無菌水沖洗3次,轉(zhuǎn)入1%。升萊消毒液(升萊lg，濃鹽酸2.5ml,水1000ml)浸泡3min ，無菌水沖洗3次，無菌濾紙吸干表面水分。將消毒好的核桃葉片組織塊，按5點(diǎn)均勻放置在事先準(zhǔn)備好的PDA培養(yǎng)基平板上，置25°C恒溫培養(yǎng)，3d后逐日觀察，待從葉片組織塊邊緣長(zhǎng)出菌絲時(shí)，及時(shí)挑取菌絲塊轉(zhuǎn)移到新的PDA平板上繼續(xù)培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子時(shí)，進(jìn)行單孢分離純化，將純化好的菌株進(jìn)行編號(hào)，斜面保存?zhèn)溆?。PDA培養(yǎng)基配方:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂17g、自來水1000ml。(2)拮抗菌的篩選將上述(I)單孢分離純化的菌株分別與辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、楊樹腐爛病菌(Valsa sordida)、小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)、核桃炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、煙草赤星病菌(Alternaria alternata)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani Kiihn)、楊樹水泡潰瘍病菌(Botryosphaeria ribis)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、玉米紋枯病菌(Rhizoctonia solani)、玉米彎抱病菌(Curvularia Iunata)和板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)(螺旋毛殼 ND35 抗生素的產(chǎn)生及其在病害生物防治中的作用，植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2007，34 (1):51-56 ;辣椒疫霉拮抗細(xì)菌的篩選，山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，44 (9):90 - 92 ;公眾可從山東農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得)進(jìn)行對(duì)峙試驗(yàn)，采用兩點(diǎn)對(duì)峙同時(shí)接種，以不接HTC菌為對(duì)照，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。抑菌率=(對(duì)照平板菌落直徑一對(duì)峙平板菌落直徑)/對(duì)照平板菌落直徑X 100%。試驗(yàn)結(jié)果見表I。表I為菌株HTC對(duì)不同病原菌的抑菌率
權(quán)利要求
1.金色毛殼Chaetomium aureum 菌株 HTC,其保藏號(hào)為 CGMCC N0.6173。
2.一種制備防治辣椒疫病HTC生防制劑的方法，包括如下步驟:發(fā)酵權(quán)利要求1所述的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC,得到發(fā)酵產(chǎn)物，即得到生防制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:在所述得到發(fā)酵產(chǎn)物后，還包括如下步驟:去除所述發(fā)酵產(chǎn)物中的菌絲體，得到生防制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于:所述發(fā)酵的條件如下:25-28°C，160-180rpm振蕩培養(yǎng)10_12d ;所述發(fā)酵的條件具體如下:25°C、160rpm振蕩培養(yǎng)12d。
5.由權(quán)利要求2-4中任一所述方法制備的生防制劑。
6.一種防治辣椒疫病或促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)或者促進(jìn)辣椒增產(chǎn)或抗菌的產(chǎn)品，其活性成分為權(quán)利要求1所述的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC或權(quán)利要求5所述的生防制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述辣椒疫病為由辣椒疫霉Phytophthora capsici 弓丨起； 所述抗菌為抗如下8種病原菌中的至少一種:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、楊樹腐爛病菌Valsa sordida、小麥赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、煙草赤星病菌 Alternaria alternata、楊樹水泡潰瘍病菌Botryosphaeria ribis、玉米紋枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica ； 所述促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)體現(xiàn)在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒產(chǎn)量。
8.權(quán)利要求1所述的金色毛殼Chaetomiumaureum菌株HTC或權(quán)利要求5所述的生防制劑在防治辣椒疫病或促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)或者促進(jìn)辣椒增產(chǎn)或抗菌中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于:所述辣椒疫病為由辣椒疫霉Phytophthora capsici 弓丨起； 所述抗菌為抗如下8種病原菌中的至少一種:辣椒疫霉Phytophthora capsic1、楊樹腐爛病菌Valsa sordida、小麥赤霉病菌Fusarium graminearum、核桃炭疽病菌 Colletotrichum gloeosporioides、煙草赤星病菌 Alternaria alternata、楊樹水泡潰瘍病菌Botryosphaeria ribis、玉米紋枯病菌Rhizoctonia solan1、板栗疫病菌Cryphonectria parasitica。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或 9所述的應(yīng)用，其特征在于:所述促進(jìn)辣椒生長(zhǎng)體現(xiàn)在提高辣椒株高或增加辣椒生物量或增加辣椒產(chǎn)量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種防治辣椒疫病的生防菌株HTC及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC，其保藏號(hào)為CGMCC No.6173。本發(fā)明還提供了一種制備防治辣椒疫病HTC生防制劑的方法，包括如下步驟發(fā)酵上述的金色毛殼Chaetomium aureum菌株HTC，得到發(fā)酵產(chǎn)物，即得到生防制劑。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，溫室中使用菌株HTC生防制劑對(duì)辣椒疫病有一定程度的防治效果，達(dá)72.19%，幼苗期株高增加12.27%，生物量增加32.28%；收獲期生物量增加31.11%，辣椒果實(shí)產(chǎn)量增加21.81%。
文檔編號(hào)A01N63/04GK103184161SQ20131007839
公開日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2013年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月12日
發(fā)明者高克祥, 劉曉光, 劉永亮, 何邦令, 李超, 張修國(guó) 申請(qǐng)人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)