專利名稱：黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于黑斑狗魚養(yǎng)殖領(lǐng)域；具體涉及黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
黑斑狗魚Esox reicherti Dybowski,俗稱狗魚、勾心魚,屬于鮭形目、狗魚亞目、狗魚科、狗魚屬。黑斑狗魚是中國重要的經(jīng)濟冷水性魚類，分布于北緯44度以北的寒冷水域，主要在多瑙河、涅斯特河和歐洲、西伯利亞、咸海水系及北美、庫頁島等地，在中國分布于黑龍江、烏蘇里江、嫩江、松花江等水系支流。該魚肉質(zhì)堅韌少刺、味道鮮美、生長迅速，是人們非常喜愛的優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟魚類，有望成為新的馴化養(yǎng)殖品種。黑斑狗魚以前是松花江重要的經(jīng)濟魚類，但由于近幾年的過度捕撈和水質(zhì)污染，在松花江已很少見到黑斑狗魚了。烏蘇里江上游(虎頭鎮(zhèn)對岸)的大型支流一伊曼河(屬俄羅斯)，是烏蘇里江黑斑狗魚最大的產(chǎn)卵場之一，黑斑狗魚作 為烏蘇里江重要的經(jīng)濟魚類，近年由于人為的過渡捕撈及自然資源的破壞，資源量已經(jīng)急劇下降。因此，開展黑斑狗魚的人工繁育相關(guān)技術(shù)的研究，對于野生資源的恢復保存以及為市場提供新的養(yǎng)殖品種意義十分重大。黑斑狗魚生活于寒冷地區(qū)水域，為冷水性魚類，適溫范圍0°C -30°C，最適生長溫度22°C 26°C。幼苗階段以輪蟲、小型枝角類、橈足類等浮游動物為食，稍大即捕食其他魚類，餌料不足時會自相殘食，為大型兇猛肉食性魚類。在天然水體中，幼魚集群活動，成魚分散覓食，?；顒佑谒輩仓校袆友杆倜艚?，最大個體可達40kg以上。黑斑狗魚產(chǎn)卵期為4月中、下旬，產(chǎn)卵水溫在TC以下，棲息水溫在20°C以下。在自然界黑斑狗魚一般具有產(chǎn)卵時間不集中、持續(xù)時間長(產(chǎn)卵的周期一般在一個半月左右)、雌雄親魚成熟不同步(雄魚性腺成熟比雌魚晚半個月以上)等特點，在加上近年黑斑狗魚產(chǎn)卵場的破壞和水質(zhì)污染等外部因素，因此目前黑斑狗魚出現(xiàn)了受精率、孵化率和魚苗成活率的現(xiàn)象，并嚴重的導致了黑斑狗魚自然種群的急劇減少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決現(xiàn)有野生黑斑狗魚自然產(chǎn)卵過程中出現(xiàn)產(chǎn)卵時間不集中、產(chǎn)卵周期長、雌雄親魚成熟不同步和孵化率低的技術(shù)問題；而提供了黑斑狗魚的人工催產(chǎn)方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法是按下述步驟進行的:步驟一、挑選體型好、活動力強而無傷、體重大于2kg且3齡以上的雌魚作為雌性親本，挑選體型好，活動力強而無傷，體重大于1.5kg且3齡以上的雄魚作為雄性親本；步驟二、4月份，待水溫升高到8°C，捕撈步驟一挑選的雌性親本及雄性親本麻醉后進行第一針藥物注射，在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射2.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和500Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射LOyg鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和300UI絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋；步驟三、水溫8°C在第一針藥物注射后5天注射第二針藥物，或者水溫高于8°C在第一針注射后3 4天注射第二針藥物，雌、雄親本麻醉后在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射15.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、800Π絨毛膜促性腺激素和2mg馬來酸地歐酮的比例注射第二針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射20.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和1000Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第二針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素和馬來酸地歐酮用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋；步驟四、第二針藥物注射完成后的第5至7天，水溫高于8°C條件下取8 12尾雄魚親本采集精液，每尾雄魚精液單獨保存；然后取雌魚親本進行卵采集，每采集一尾雌魚的卵后立即將之前采集好的8 12尾雄魚的精液以每尾0.3ml的量擠于卵子表面，用羽毛攪拌30s，然后加入200毫升清水，再用羽毛均勻、快速攪拌I 2min，隨即將受精卵放入黃泥漿水中攪拌拖粘20min，再換入清水中進行孵化，即完成黑斑狗魚的人工催產(chǎn)；步驟四中雄魚精液采集至受精保存的時間不超過lh。使用藥物量過大會刺激魚體短時間性激素分泌過多，將導致卵巢和精巢充血，甚至血管破裂，直接影響卵子和精子質(zhì)量，甚至導致親魚死亡；使用藥物劑量過小誘導魚體性激素分泌過少，卵巢和精巢發(fā)育時間過長，將起不到縮短繁殖周期和集中繁殖的目的。而本發(fā)明的方法通過誘導繁殖期親魚雌激素和雄激素達到理想分布濃度，進而刺激卵子和精子同時成熟，從而使雌雄親魚成熟同步、產(chǎn)卵時間集中，產(chǎn)卵周期縮短了 15 20天，且受精率高達85% 90%，孵化率高達60% 70% ;人工催產(chǎn)親魚，雄魚的催產(chǎn)成功率達到97%，雌魚的催產(chǎn)成功率達到70% 85%。
具體實施例方式具體實施方式
一:本實施方式中黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法是按下述步驟進行的:步驟一、挑選體型好、活動力強而無傷、體重大于2kg且3齡以上的雌魚作為雌性親本，挑選體型好，活動力強而無傷，體重大于1.5kg且3齡以上的雄魚作為雄性親本；步驟二、4月份，待水溫升高到8°C，捕撈步驟一挑選的雌性親本及雄性親本麻醉后進行第一針藥物注射，在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射2.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和500Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射LOyg鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和300UI絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋；步驟三、水溫8°C在第一針藥物注射后5天注射第二針藥物，或者水溫高于8°C在第一針注射后3 4天注射第二針藥物，雌、雄親本麻醉后在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射15.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、800Π絨毛膜促性腺激素和2mg馬來酸地歐酮的比例注射第二針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射20.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和1000Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第二針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素和馬來酸地歐酮用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋；步驟四、第二針藥物注射完成后的第5至7天，水溫高于8°C條件下取8 12尾雄魚親本采集精液，每尾雄魚精液單獨保存；然后取雌魚親本進行卵采集，每采集一尾雌魚的卵后立即將之前采集好的8 12尾雄魚的精液以每尾0.3ml的量擠于卵子表面，用羽毛攪拌30s，然后加入200毫升清水，再用羽毛均勻、快速攪拌I 2min，隨即將受精卵放入黃泥漿水中攪拌拖粘20min，再換入清水中進行孵化，即完成黑斑狗魚的人工催產(chǎn)；步驟四中雄魚精液采集至受精保存的時間不超過lh。
具體實施方式
二:本實施方式與具體實施方式
一不同的是:步驟二麻醉是將魚放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中，麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三:本實施方式與具體實施方式
二不同的是:步驟三麻醉是將魚放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中，麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
二相同。
具體實施方式
四:本實施方式與具體實施方式
三不同的是:步驟四所述卵采集方法:將雌性親魚依次捕撈，放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中，麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎(一般需要放置Imin 2min)，用干毛巾將腹部和泄殖孔周圍的水擦干，然后將魚卵擠入產(chǎn)卵盆中。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
三相同。
具體實施方式
五:本實施方式與具體實施方式
四不同的是:步驟四所述精液采集方法:雄性親魚放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎(一般需要放置Imin 2min)，用干毛巾將腹部和泄殖孔周圍的水擦干，輕壓腹部將精液擠到小燒杯中，放置于避光處。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
四相同。

具體實施方式
六:本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是:黑斑狗魚親魚是按下述方法培育的:春天在自然水體中捕撈性成熟的黑斑狗魚個體，放置于少人為打擾的土池中，養(yǎng)殖用水為涌泉水、江河或水庫清澈水體，魚池進、排水通暢，水深在1.5m以上，放養(yǎng)密度為3kg/m2，雌雄比例為4: I，用體長在4.5cm 5.5cm的鯽魚活餌料投喂。其它步驟和參數(shù)與具體實施方式
一至五之一相同。土池底部要平坦，平坦池底便于捕撈。而且采用土池而非水泥池是為了防止親魚跳躍和捕食時受傷。水深和水面的要求盡量大，因為黑斑狗魚為大型肉食性兇猛魚類，魚池過小放養(yǎng)密度過大會導致互相爭斗和吞食，增加死亡。親魚采用活餌料投喂，因為親魚野生不喜歡攝食飼料，而且攝食飼料親魚的脂肪含量較高，人工采卵時常常出現(xiàn)脂肪堵塞生殖孔的現(xiàn)象。
具體實施方式
六:本實施方式中黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法是按下述步驟進行的:步驟一、挑選體型好、活動力強而無傷、體重大于2kg且3齡以上的雌魚作為雌性親本，挑選體型好，活動力強而無傷，體重大于1.5kg且3齡以上的雄魚作為雄性親本；步驟二、4月份，待水溫升高到8°C，捕撈步驟一挑選的雌性親本及雄性親本麻醉后進行第一針藥物注射，在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射2.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物(S-GnRH)和500Π絨毛膜促性腺激素(HCG)的比例注射第一針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射1.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和300Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋；步驟三、水溫8°C在第一針藥物注射后5天注射第二針藥物，或者水溫高于8°C在第一針注射后3 4天注射第二針藥物，雌、雄親本麻醉后在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射15.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、800Π絨毛膜促性腺激素和2mg馬來酸地歐酮(DOM)的比例注射第二針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射20.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和1000Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第二針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素和馬來酸地歐酮用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋；步驟四、第二針藥物注射完成后的第5至7天，水溫高于8°C條件下取10尾雄魚親本采集精液，每尾雄魚精液單獨保存；然后取雌魚親本進行卵采集，每采集一尾雌魚的卵后立即將之前采集好的10尾雄魚的精液以每尾0.3ml的量擠于卵子表面，用羽毛攪拌30s，然后加入200毫升清水，再用羽毛均勻、快速攪拌I 2min，隨即將受精卵放入黃泥漿水中攪拌拖粘20min，再換入清水中進行孵化，即完成黑斑狗魚的人工催產(chǎn)；步驟四中雄魚精液采集至受精保存的時間不超過lh。雌、雄親魚挑選和鑒別:在非生殖季節(jié)，雌 魚肛門與生殖孔之間稍隆起，雄魚沒有隆起；生殖季節(jié):雌魚腹柔軟膨大呈圓囊形，體寬較寬，肛門和生殖孔較大，略紅突出較大；雄魚腹部較小，體寬較窄，用手撫摸腹部較硬，背部體色明顯較深，生殖孔不紅腫，突出不明顯，在未注射催產(chǎn)藥物時擠壓腹部也不會發(fā)現(xiàn)精液。黑斑狗魚親魚的培育:可繁殖的黑斑狗魚親魚都是自然水體中捕撈的野生個體，春天在自然水體中捕撈性成熟的黑斑狗魚個體，放置于少人為打擾的土池中，養(yǎng)殖用水為涌泉水、江河或水庫清澈水體，魚池進、排水通暢，水深在1.5m以上，放養(yǎng)密度為3kg/m2，雌雄比例為4: 1，用體長在4.5cm 5.5cm的鯽魚活餌料投喂。土池底部要平坦，平坦池底便于捕撈。而且采用土池而非水泥池是為了防止親魚跳躍和捕食時受傷。水深和水面的要求盡量大，因為黑斑狗魚為大型肉食性兇猛魚類，魚池過小放養(yǎng)密度過大會導致互相爭斗和吞食，增加死亡。親魚采用活餌料投喂，因為親魚野生不喜歡攝食飼料，而且攝食飼料親魚的脂肪含量較高，人工采卵時常常出現(xiàn)脂肪堵塞生殖孔的現(xiàn)象。注意:注射完藥物將親魚放置入水口處，有利于親魚快速清醒，防止缺氧導致死亡。注射藥物提前I個小時配置好。第二針時一定要將雌雄親魚分清，如極個別個體無法分辨雌雄，可認為做雌魚注射藥物即刻，因為雌魚藥物濃度較大，由于雌魚卵價值相對較高于雄魚，一旦判斷錯誤也會將損失降低。擠卵時應從身體前部向生殖孔處擠壓，要快、穩(wěn)、準，一定要在魚體肌肉放松，不亂蹦時，再擠壓腹部，當魚體肌肉緊張時，生殖孔緊閉，不易推擠出卵粒，擠壓不易太用力，防治擠壞魚體內(nèi)臟或體表感染病菌導致死亡。黑斑狗魚產(chǎn)的卵粘性極強，如不用黃泥拖粘，受精卵將粘成一團，孵化過程中極易感染水霉和缺氧，死亡率極高。
注射藥物過深針頭會扎到內(nèi)臟易導致死亡，過淺藥物會隨著針孔流出，達不到理想藥物濃度。每尾親魚每次注射稀釋后的藥劑為2ml，鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素及馬來酸地歐酮用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水按使用比例稀釋。本實施方式方法使產(chǎn)卵周期縮短了 15 20天，且受精率高達85% 90%，孵化率高達60% 70% ;雄魚 的催產(chǎn)成功率達到97%，雌魚的催產(chǎn)成功率達到70% 85%。
權(quán)利要求
1.黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法是按下述步驟進行的: 步驟一、挑選體型好、活動力強而無傷、體重大于2kg且3齡以上的雌魚作為雌性親本， 挑選體型好，活動力強而無傷，體重大于1.5kg且3齡以上的雄魚作為雄性親本； 步驟二、4月份，待水溫升高到8°C，捕撈步驟一挑選的雌性親本及雄性親本麻醉后進行第一針藥物注射，在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射2.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和500Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射1.ο μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和300Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第一針藥物；鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和絨毛膜促性腺激素用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋； 步驟三、水溫8°C在第一針藥物注射后5天注射第二針藥物，或者水溫高于8°C在第一針注射后3 4天注射第二針藥物，雌、雄親本麻醉后在親魚胸鰭基部注射，注射深度為5mm，雌性按雌性本體每公斤體重注射15.Ομ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物、800Π絨毛膜促性腺激素和2mg馬 來酸地歐酮的比例注射第二針藥物；雄性按雄性本體每公斤體重注射20.0 μ g鮭魚促性腺激素釋放激素類似物和1000Π絨毛膜促性腺激素的比例注射第二針藥物；鮭魚促性腺激 素釋放激素類似物、絨毛膜促性腺激素和馬來酸地歐酮用醫(yī)用葡萄糖或者生理鹽水進行稀釋； 步驟四、第二針藥物注射完成后的第5至7天，水溫高于8°C條件下取8 12尾雄魚親本采集精液，每尾雄魚精液單獨保存；然后取雌魚親本進行卵采集，每采集一尾雌魚的卵后立即將之前采集好的8 12尾雄魚的精液以每尾0.3ml的量擠于卵子表面，用羽毛攪拌30s，然后加入200毫升清水，再用羽毛均勻、快速攪拌I 2min，隨即將受精卵放入黃泥漿水中攪拌拖粘20min，再換入清水中進行孵化，即完成黑斑狗魚的人工催產(chǎn)； 其中，步驟四中雄魚精液采集至受精保存的時間不超過Ih。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于步驟二麻醉是將魚放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中，麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于步驟三麻醉是將魚放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中，麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于步驟四所述卵采集的方法:將雌性親魚依次捕撈，放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中，麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎，再用干毛巾將腹部和泄殖孔周圍的水擦干，然后將魚卵擠入產(chǎn)卵盆中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于步驟四所述精液的采集方法:雄性親魚放入濃度為5%苯氧乙醇麻醉液中麻醉到輕輕翻動魚體不再掙扎，用干毛巾將腹部和泄殖孔周圍的水擦干，輕壓腹部將精液擠到小燒杯中，放置于避光處。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項權(quán)利要求所述的黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，其特征在于黑斑狗魚親魚是按下述方法培育的:春天在自然水體中捕撈性成熟的黑斑狗魚個體，放置于少人為打擾的土池中，養(yǎng)殖用水為涌泉水、江河或水庫清澈水體，魚池進、排水通暢，水深在.1.5m以上，放養(yǎng)密度為3kg/m2，雌雄比例為4: 1，用體長在4.5cm 5.5cm的鯽魚活餌料投喂。
全文摘要
黑斑狗魚人工催產(chǎn)方法，本發(fā)明屬于黑斑狗魚養(yǎng)殖領(lǐng)域。本發(fā)明要解決現(xiàn)有野生黑斑狗魚自然產(chǎn)卵過程中出現(xiàn)產(chǎn)卵時間不集中、產(chǎn)卵周期長、雌雄親魚成熟不同步和孵化率低的技術(shù)問題。本發(fā)明的方法是挑選親本，4月份用S-GnRH-A、HCG或DOM進行兩次藥物注射后人工受精，完成黑斑狗魚的人工催產(chǎn)。本發(fā)明的方法使雌雄親魚成熟同步、產(chǎn)卵時間集中，產(chǎn)卵周期縮短了15～20天，且受精率高達85～90％，孵化率高達60％～70％；人工催產(chǎn)親魚，雄魚的催產(chǎn)成功率達到97％，雌魚的催產(chǎn)成功率達到70％～85％。
文檔編號A01K61/00GK103222436SQ201310178480
公開日2013年7月31日 申請日期2013年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月15日
發(fā)明者白慶利, 張永泉, 賈鐘賀, 李小龍, 張玉勇 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所