提高小麥幼胚植株再生率的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高小麥幼胚再生率的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明所提供的提高小麥幼胚再生率的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟：1）將待培養(yǎng)的小麥幼胚置于愈傷組織誘導培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，得到胚性愈傷組織；所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中含有體積分數為0.0015-0.003‰的過氧化氫；2）將所述胚性愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，得到再生小麥植株。本發(fā)明通過在SD2愈傷組織誘導培養(yǎng)基中添加H2O2，發(fā)現小麥幼胚再生率明顯提高，對再生容易的小麥品種如揚麥18、京冬18、CB031和再生較難的小麥品種如濟麥22、寧春4號、揚麥20均有效果，這對于利用基因工程途徑和細胞工程途徑改良優(yōu)良小麥品種具有重要意義。
【專利說明】提高小麥幼胚植株再生率的組織培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領域，涉及一種提高小麥幼胚再生率的組織培養(yǎng)方法?！颈尘凹夹g】
[0002]組織培養(yǎng)高頻率植株再生是開展小麥細胞工程育種和轉基因育種的基礎。目前，小麥細胞工程育種和轉基因育種中利用的外植體基本為分化程度比較低的組織和器官，如小麥幼胚、成熟胚、幼穗、花藥、小孢子、頂端分生組織等，以根、葉片、胚芽鞘等分化程度較高的器官為外植體的組織培養(yǎng)研究也有報道。目前積累的研究資料表明，小麥幼胚與其他外植體相比，離體培養(yǎng)愈傷組織誘導率和植株再生率均比較高。為了進一步改進小麥幼胚離體培養(yǎng)再生植株的效率，國內外學者詳細研究了影響小麥幼胚培養(yǎng)的多個因素，包括基因型、植物激素、幼胚大小、培養(yǎng)基組成、碳源、有機添加物、氧氣濃度、干燥處理和培養(yǎng)程序等。同時，發(fā)現溫度、光照、營養(yǎng)、濕度等小麥供體植株生長的環(huán)境條件，通過影響小麥幼胚的生理狀態(tài)影響其再生效果。
[0003]過氧化氫(Hydrogen peroxide, H2O2)是植物細胞發(fā)生氧化反應的產物,也是植物遭受外界脅迫情況下產生活性氧的一種形式，影響細胞正常的新陳代謝及生長發(fā)育，這種影響對植物細胞具有雙重作用:一方面，發(fā)生氧化脅迫時過氧化氫作為一種信號分子，引起植物體內相關的抗氧化酶類的合成，降低逆境條件導致的傷害；另一方面，發(fā)生氧化脅迫的細胞其細胞膜通透性改變，進而引發(fā)細胞功能的紊亂，甚至導致細胞死亡。Tian等發(fā)現，在草莓愈傷組織形成再生芽過程中伴隨H2O2產生，在愈傷組織分化的早期超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, S0D)活性增強，隨著組織的分化變異而逐漸降低,培養(yǎng)的前5天過氧化氫酶(Catalase，CAT)的活性持續(xù)下降，隨后逐漸增強，在低再生能力的愈傷組織中檢測到較高的O2-含量和較低H2O2含量，幾乎沒有檢測到SOD活性，表明H2O2參與了草莓愈傷組織形態(tài)建成過程，可能在芽原基形成過程中起到信號分子的作用。在枸杞葉片組織培養(yǎng)中發(fā)現，在愈傷組織形成初期細胞內的H2O2含量增加，當在培養(yǎng)基中添加200 μ M H2O2培養(yǎng)15天后體細胞胚胎發(fā)生率得到最`大值，高濃度的H2O2 (300 μ Μ)反而抑制胚胎的發(fā)生，認為H2O2影響愈傷組織的分化，當細胞`內有適量H2O2存在時有利于植株再生，H2O2可能是作為信號分子參與了枸杞胚性愈傷組織發(fā)上相關基因的表達，刺激胚性細胞的形成。在冰葉日中花子葉下胚軸的培養(yǎng)過程中發(fā)現，低CAT活性和高濃度的H2O2有利于再生芽的分化，H2O2濃度的增加破壞了原有的氧化平衡，認為H2O2可能促進了與形態(tài)發(fā)生相關基因的表達。以上結果說明，H2O2在植物胚性愈傷組織形成和植株再生過程中具有重要作用。但是，關于H2O2在小麥幼培養(yǎng)中的效果及其適宜濃度的研究還沒有報道。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種提高小麥幼胚再生率的組織培養(yǎng)方法。
[0005]本發(fā)明所提供的提高小麥幼胚再生率的組織培養(yǎng)方法，具體可包括如下步驟:
[0006](I)將待培養(yǎng)的小麥幼胚置于愈傷組織誘導培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，得到胚性愈傷組織；所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中含有終體積分數為0.0015-0.003%。的過氧化氫(H2O2)；
[0007](2)將所述胚性愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，得到再生小麥植株。
[0008]在所述方法中，所述小麥幼胚可為心形期幼胚，具體為開花授粉后13-14天，直徑為1.0-1.2mm的小麥幼胚。
[0009]在本發(fā)明中，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基具體為在SD2培養(yǎng)基中加入終體積分數為0.0015-0.003%。的過氧化氫后得到的培養(yǎng)基。
[0010]在所述方法中，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中的所述過氧化氫是在所述SD2培養(yǎng)基冷卻至65 °C左右時加入的。
[0011]其中，所述SD2培養(yǎng)基組成為:MS大量元素、MS微量元素、MS鐵鹽、VBJ.0mg/L、谷氨酰胺 150mg/L、2, 4-D2.0mg/L、鹿糖 30g/L、植物凝膠(Phytagel)2.4g/L,pH 值 6.0。以上各濃度均為相應物質在所述SD2培養(yǎng)基中的終濃度。
[0012]具體而言，所述SD2培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質及其濃度如下:NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2.2H20440mg/L、MgSO4.7H20370mg/L、KH2P041700mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4.4H2022.3mg/L、ZnSO4.7H208.6mg/L、Na2MoO4.2H200.25mg/L、CuSO4 *5H200.025mg/L,CoCl2 *6H200.025mg/L, FeSO4 *7H2027.8mg/L、Na2-EDTA *2H2037.3mg/L、鹿糖 30g/L、維生素 B1Img/L谷氨酰胺 150mg/L、2, 4-D2.0mg/L、植物凝膠(Phytagel)2.4g/L，pH 值為 6.0ο
[0013]在所述方法中，所述分化培養(yǎng)基可為FHCK培養(yǎng)基。
[0014]其中，所述FHCK培養(yǎng)基的組成為:MS大量元素、MS微量元素、MS鐵鹽、MS維生素、蔗糖20g/L、植物凝膠(Phytagel)2.4g/L，pH值6.0。以上各濃度均為相應物質在所述FHCK培養(yǎng)基中的終濃度。
[0015]具體而言，所述FHCK培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質及其濃度如下:NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2.2H20440mg/L、MgSO4.7H20370mg/L、KH2P041700mg/L、KI0.83mg/L、H3BO36.2mg/L、MnSO4.4H2022.3mg/L、ZnSO4.7H208.6mg/L、Na2MoO4.2H200.25mg/L、CuSO4 *5H200.025mg/L,CoCl2 *6H200.025mg/L, FeSO4 *7H2027.8mg/L、Na2-EDTA *2H2037.3mg/L、維生素 Bilmg/UVujj0.5mg/L、煙酸 0.5mg/L、甘氨酸 2mg/L、肌醇 100mg/L、鹿糖 20g/L、植物凝膠(Phytagel) 2.4g/L, pH 值為 6.0。
[0016]在所述方法的步驟(I)中，將所述待培養(yǎng)的小麥幼胚置于所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基上(盾片朝上)進行培養(yǎng)，其培養(yǎng)條件具體可為:黑暗、溫度24-26°C (如25°C)、時間20-25天(如21天)。
[0017]在所述方法的步驟(2)中，將所述胚性愈傷組織轉移到所述分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，其培養(yǎng)條件具體可為:光照10小時/天、光強3500LX、溫度24-26°C (如25°C)、時間15-25 天(如 21 天)。
[0018]在所述方法中，所述小麥的品種具體可為如下中的至少一種:揚麥18、中國春、濟麥22、京冬18、川農16、寧春4號、揚麥20和CB031。
[0019]更加具體的，當所述小麥為揚麥18、川農16、寧春4號或CB031時，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中所述過氧化氫的終體積分數以0.0015-0.003%。為好；當所述小麥為中國春、濟麥22或揚麥20時,所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中所述過氧化氫的終體積分數以0.0015%。為好。[0020]本發(fā)明的再一個目的是提供一種培養(yǎng)基。
[0021]本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基為在SD2培養(yǎng)基中加入終體積分數為0.0015-0.003%。的
過氧化氫后得到的培養(yǎng)基。
[0022]所述培養(yǎng)基可用于提高所述小麥幼胚組織培養(yǎng)植株再生率。
[0023]在本發(fā)明中，所采用的所述過氧化氫(H2O2)原液為西隴化工股份有限公司產品(AR級，CAS編號:7722-84-1 )，為體積分數30%的過氧化氫水溶液。
[0024]以上所有的所述“在所述SD2培養(yǎng)基中加入終體積分數為0.0015-0.003%。的過氧化氫”，均為:向所述SD2培養(yǎng)基中加入體積分數為0.3%的過氧化氫水溶液(用水對體積分數30%的過氧化氫水溶液進行100倍稀釋所得)(H202儲藏液)，使所述過氧化氫的終體積分數為 0.0015-0.003%ο
[0025]現有的小麥幼胚培 養(yǎng)方法中沒有在愈傷組織誘導培養(yǎng)基中添加H2O2的步驟，本發(fā)明在小麥幼胚培養(yǎng)愈傷組織誘導培養(yǎng)基中添加不同體積百分數的H2O2,在適宜H2O2用量下顯著提高了多個小麥基因型幼胚培養(yǎng)植株再生率，具有很好的實際應用價值。
[0026]實驗證明，利用本發(fā)明方法對小麥品種揚麥18幼胚在添加不同體積百分數的H2O2(0,0.0015%。、0.003%。和0.0045%。)的SD2愈傷組織誘導培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，研究H2O2對小麥幼胚再生的影響。結果發(fā)現，當H2O2體積分數為0.0015%。、0.003%。時再生率分別為365.56%、419.05%，與不添加H2O2的對照(再生率為141.18%)相比有顯著提高，H2O2體積分數為0.0045%。時植株再生率低于對照,表明小麥幼胚愈傷組織誘導培養(yǎng)基中H2O2的適宜用量為0.0015-0.003%。。本發(fā)明的發(fā)明人進一步利用該方法對小麥品種中國春、濟麥22、京冬18、川農16、寧春4號、揚麥20和CB031幼胚在添加適宜用量H2O2 (體積分數0.0015%。和0.003%。)的改良SD2培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，以不添加H2O2的SD2培養(yǎng)基為對照，結果發(fā)現，添加體積分數0.0015%。的H2O2顯著提高了小麥品種中國春、濟麥22、川農16、寧春4號、揚麥20和CB031幼胚培養(yǎng)植株再生率，添加體積分數0.003%。的H2O2顯著提高了小麥品種川農16、寧春4號、CB031幼胚培養(yǎng)植株再生率。表明小麥幼胚愈傷組織誘導培養(yǎng)基中添加適宜濃度適宜用量H2O2 (體積分數0.0015%。和0.003%。)能夠提高多數小麥品種幼胚培養(yǎng)植株再生率，具有普遍效果，不同小麥品種適宜添加的H2O2濃度略有不同。
[0027]本發(fā)明通過在SD2愈傷組織誘導培養(yǎng)基中添加H2O2，發(fā)現小麥幼胚再生率明顯提高，對再生容易的小麥品種如揚麥18、京冬18、CB031和再生較難的小麥品種如濟麥22、寧春4號、揚麥20均有效果，這對于利用基因工程途徑和細胞工程途徑改良優(yōu)良小麥品種具有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0028]圖1為不同用量H2O2對小麥品種揚麥18幼胚再生效果的影響。其中,A表不在含體積分數0%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；B表示在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；c表不在含體積分數0.003%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；D表不在含體積分數0.0045%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果。
[0029]圖2為不同小麥品種在適宜濃度H2O2下的再生效果比較。其中，A表示中國春在對照培養(yǎng)基(體積分數0%。H2O2)上的再生效果；B表示中國春在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；C表示濟麥22在對照培養(yǎng)基(體積分數0%。H2O2)上的再生效果；D表示濟麥22在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；E表示川農16在對照培養(yǎng)基(體積分數0%。H2O2)上的再生效果；F表示川農16在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；G表示寧春4號在對照培養(yǎng)基(體積分數0%。H2O2)上的再生效果；H表示寧春4號在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果；1表不揚麥20在對照培養(yǎng)基(體積分數0%。H2O2)上的再生效果J表示揚麥20在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果。Q表示CB031在對照培養(yǎng)基(體積分數0%。H2O2)上的再生效果；L表示CB031在含體積分數0.0015%。H2O2的培養(yǎng)基上的再生效果。
【具體實施方式】
[0030]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0031]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0032]小麥幼胚的定義:小麥子房授粉后發(fā)育13-14天的小麥幼嫩籽粒上剝取的小麥未成熟胚。
[0033]小麥品種揚 麥18、中國春、濟麥22、京冬18、川農16、寧春4號、揚麥20和CB031:中國農業(yè)科學院作物科學研究所作物種質資源保護與研究中心無償向社會提供。
[0034]小麥品種中國春、寧春4號:記載于“石珍源等.小麥大齡幼胚再生性能改進與農桿菌轉化.中國農業(yè)科學，2011，44 (2):225-232” 一文中；
[0035]小麥品種揚麥18:記載于“李欣等.十二個小麥新品種成熟胚再生性能與農桿菌侵染敏感性評價.中國農業(yè)科技導報,2012，14(2):40-46”一文中；
[0036]小麥品種濟麥22:記載于 “Tao et al.1mprovement of Plant Regenerationfrom Immature Embryos of Wheat Infected Agrobacterium tumefaciens.AgriculturalSciences in China, 2011，10 (3): 317-326” 一文中；
[0037]小麥品種京冬18:記載于“單福華等.國審冬小麥新品種京冬18的選育.北京農業(yè)，2012,6:20-21” 一文中；
[0038]小麥品種川農16:記載于“李偉等.小麥新品種川農16的分子鑒定.麥類作物學報，2004，24(1):6-10” 一文中；
[0039]小麥品種揚麥20:記載于“丁錦峰等.后期追氮時期對揚麥20花后光合物質生產力和產量的影響.揚州大學學報(農業(yè)與生命科學版),2012,33(3):56_62” 一文中；
[0040]小麥品種CB031:記載于“曾祥艷等.小麥多基因聚合體YW243的改良與利用.作物學報，2006年第05期” 一文中；
[0041]其中，小麥品種中國春、濟麥22和寧春4號屬于幼胚再生力較低的小麥基因型，詳見參考文獻“She et al.Efficient Regeneration Porential is Closely Related toAuxin Exposure Time and Catalase Metabolism During the Somatic Embryogenesisof Immature Embryos in Triticum aestivum L.Molecular Biotechnology,2013,54:451-460”。
[0042]SD2培養(yǎng)基:溶劑為水，溶質及其濃度如下:NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2.2H20440mg/L、MgSO4.7H20370mg/L、KH2PO41700mg/L、KI0.83mg/L、H3B036.2mg/L、MnSO4.4H2022.3mg/L、ZnSO4.7H208.6mg/L、Na2MoO4.2H200.25mg/L、CuSO4.5H200.025mg/L、CoCl2.6H200.025mg/L, FeSO4.7H2027.8mg/L、Na2-EDTA.2H2037.3mg/L、蔗糖 30g/L、維生素 B1Img/L谷氨酰胺 150mg/L、2, 4-D2.0mg/L、植物凝膠(Phytagel )2.4g/L,pH 值為 6.0。采用121°C高壓濕熱滅菌15分鐘。
[0043]FHCK培養(yǎng)基:溶劑為水，溶質及其濃度如下:NH4N031650mg/L、KN031900mg/L、CaCl2.2H20440mg/L、MgSO4.7H20370mg/L、KH2PO41700mg/L、KI0.83mg/L、H3B036.2mg/L、MnSO4.4H2022.3mg/L、ZnSO4.7H208.6mg/L、Na2MoO4.2H200.25mg/L、CuSO4.5H200.025mg/UCoCl2.6H200.025mg/L, FeSO4.7H2027.8mg/L、Na2-EDTA.2H2037.3mg/L、維生素 BJmg/L、VB60.5mg/L、煙酸 0.5mg/L、甘氨酸 2mg/L、肌醇 100mg/L、鹿糖 20g/L、植物凝膠(Phytagel)2.4g/L，pH值為6.0。采用121°C高壓濕熱滅菌15分鐘。
[0044]過氧化氫原液:為西隴化工股份有限公司產品(AR級，CAS編號:7722_84_1 )，為體積分數30%的過氧化氫水溶液。用微量移液器準確吸取200 μ I H2O2原液，加入到20ml蒸餾水中，配制得到過氧化氫體積百分數為0.3%的儲藏液，用0.25μπι規(guī)格的微孔濾膜過濾滅菌，4°C冷柜中避光保存。使用時，在SD2培養(yǎng)基高壓濕熱滅菌后在室溫下冷卻至65°C左右，根據處理加入不同用量經過濾滅菌的H2O2儲藏液。
[0045]實施例1、SD2培養(yǎng)基中添加不同用量H2O2對小麥揚麥18幼胚再生效果的影響
[0046]本實施例中，以小麥品種揚麥18為試驗對象，其小麥幼胚的組織培養(yǎng)步驟如下:
[0047]一、小麥幼穗的獲得
[0048]將小麥揚麥18種植在中國農業(yè)科學院作物科學研究所溫室(2011年9月)，開花授粉后13-14天(2012年I月)，收集小麥揚麥18未成熟麥穗，此時幼胚為心形期幼胚，其直徑為 1.0-1.2mmο
[0049]二、小麥未成熟籽粒滅菌
[0050]從小麥揚麥18未成熟麥穗上取其未成熟籽粒,70% (體積分數)酒精表面消毒I分鐘，15% (體積分數)次氯酸鈉滅菌15-20分鐘，無菌水沖洗4-5次。
[0051]三、組織培養(yǎng)
[0052]1、誘導培養(yǎng)產生胚性愈傷組織
[0053]用滅過菌的手術刀片在未成熟籽粒上切去胚尖，然后將小麥幼胚取出，盾片朝上接種至添加不同終體積分數H2O2 (0,0.0015%。、0.003%。和0.0045%。)的SD2培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿接種30-35枚小麥幼胚，以不添加H2O2的SD2培養(yǎng)基為對照，25°C、黑暗條件下培養(yǎng)21天誘導胚性愈傷組織。
[0054]2、分化培養(yǎng)得到小麥再生植株
[0055]將步驟I獲得的胚性愈傷組織轉移到FHCK培養(yǎng)基上培養(yǎng)21天(光照時間為每天10小時，光照強度為3500LX，溫度為25°C)，分化得到小麥再生綠芽。
[0056]其間，記錄接種幼胚數，統(tǒng)計愈傷組織數、胚性愈傷組織數、分化愈傷數、再生芽數、胚性愈傷組織誘導率、分化愈傷率、再生率。實驗設3次重復，結果取平均值。
[0057]胚性愈傷組織誘導率(%)=(胚性愈傷組織數+接種幼胚數)X 100
[0058]分化愈傷率(%)=(分化愈傷數+接種幼胚數)XlOO
[0059]再生率(%)=(再生芽數+接種幼胚數)X 100
[0060]四、不同濃度H2O2對小麥幼胚再生效果的比較
[0061]小麥揚麥18幼胚經在含不同濃度H2O2培養(yǎng)基上培養(yǎng)后的再生結果如表I和圖1所示。從表中可以看出，當培養(yǎng)基中H2O2體積分數為0.0015%。、0.003%。時再生率分別為365.56%、419.05%,不添加H2O2的對照再生率為141.18%，2個處理相比對照有顯著提高，差異達顯著水平(P〈0.05)。但當培養(yǎng)基中H2O2體積分數為0.0045‰時植株再生率為121.9%，略低于對照，沒有顯著差異。表明小麥幼胚愈傷組織誘導培養(yǎng)基中H2O2的適宜用量為 0.0015-0.003‰。[0062]表I不同用量H2O2對小麥品種揚麥18幼胚培養(yǎng)再生效果的影響
[0063]
【權利要求】
1.一種提高小麥幼胚再生率的組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟: (1)將待培養(yǎng)的小麥幼胚置于愈傷組織誘導培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，得到胚性愈傷組織；所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中含有終體積分數為0.0015-0.003%。的過氧化氫； (2)將所述胚性愈傷組織轉移到分化培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，得到再生小麥植株。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述小麥幼胚為心形期幼胚。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為在SD2培養(yǎng)基中加入終體積分數為0.0015-0.003%。的過氧化氫后得到的培養(yǎng)基。
4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于:所述分化培養(yǎng)基為FHCK培養(yǎng)基。
5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于:步驟(I)中，將所述待培養(yǎng)的小麥幼胚置于所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:黑暗、溫度24-26°C、時間20-25 天。
6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，將所述胚性愈傷組織轉移到所述分化 培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:光照10小時/天、光強3500Lx、溫度24-26°C、時間 15-25 天。
7.根據權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于:所述小麥的品種為如下中的至少一種:揚麥18、中國春、濟麥22、京冬18、川農16、寧春4號、揚麥20和CB031。
8.培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基為在SD2培養(yǎng)基中加入終體積分數為0.0015-0.003%。的過氧化氫后得到的培養(yǎng)基。
9.權利要求8所述培養(yǎng)基在提高小麥幼胚組織培養(yǎng)植株再生率中的應用。
【文檔編號】A01H4/00GK103444533SQ201310397587
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月4日 優(yōu)先權日:2013年9月4日
【發(fā)明者】葉興國, 王新敏, 王軻, 杜麗璞, 趙佩, 張偉, 徐惠君 申請人:中國農業(yè)科學院作物科學研究所