一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物生物【技術領域】，具體地，公開了一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。所述培養(yǎng)基是在MS配方中除了添加15～60g/L蔗糖、3～9g/L瓊脂和0.01～0.2mg/LNAA之外，還根據(jù)不同倍性的再生芽對己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6）的敏感性的不同，特別地添加相應濃度的DA-6。所述培養(yǎng)基可以使再生芽的高度和重量、根的重量、直徑、數(shù)量、一級根的長度、根總長、根冠比及移栽成活率都顯著提升。本發(fā)明的應用將可促進紫錐菊生物技術育種相關科研工作的開展。
【專利說明】一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生物【技術領域】，具體地，涉及一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)
基及培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002]紫錐菊{(diào)Echinacea purpurea L.)為菊科多年生草本植物,具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用，其提取物是近年來在國際上受到普遍重視的一種免疫促進劑和免疫調(diào)節(jié)劑。由于其確切的功效作用，紫錐菊已經(jīng)成為一種世界著名的藥用植物。人們?yōu)榱双@得多品種的紫錐菊，通常采用組織培養(yǎng)技術進行再生或再生克隆。利用組織培養(yǎng)技術對植物進行再生或再生克隆，通常包含兩個步驟。第一步是從外植體誘導產(chǎn)生不定芽。第二步是再生芽生長成完整植株，以備移栽。對于紫錐菊，現(xiàn)有技術中已有很多報道研究其外植體誘導產(chǎn)生不定芽；而至于如何促使這些再生芽生長良好，則很少有人研究。
[0003]本發(fā)明的發(fā)明人在成功獲得單倍體和四倍體紫錐菊以后，開始比較這些單倍體、四倍體和它們的母本二倍體的離體生根后，發(fā)現(xiàn)基因劑量較高的芽需要更高濃度的NAA或IBA來誘導生根。盡管四倍體紫錐菊的再生芽的根誘導率高，但是其移栽成活率通常較低，原因在于傳統(tǒng)方法復原的植株根質(zhì)量差。
[0004]己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，通常用于田間栽培，很少用于組織培養(yǎng)。而且還沒有人嘗試將其用于紫錐菊組織栽培方面。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術中紫錐菊再生芽生長較差的缺陷，提供一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基。
[0006]本發(fā)明的另一個目的是提供一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)方法。
[0007]本發(fā)明通過以下技術方案予以實現(xiàn)上述目的:
一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基，紫錐菊再生芽生長所需的培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基的中除了添加15~60 g/L蔗糖、3~9 g/L瓊脂和0.01~0.2 mg/L NAA之外，還特別地添加己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)。
[0008]所述紫錐菊再生芽為二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽。
[0009]優(yōu)選地，所述二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.08~0.16 mg/L。
[0010]更優(yōu)選地，所述二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.08或0.16 mg/L。
[0011]最優(yōu)選地，所述六倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.08 mg/L ;所述二倍體、三倍體或四倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.16 mg/L ο
[0012]一種提高紫錐菊外植體再生不定芽的培養(yǎng)方法，根據(jù)如上所述二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽接種在適合各自生長的培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為25±4°C，光照強度為1000~2500 lx，光照時間為10~16 h/d的條件下培養(yǎng)10~60 d。
[0013]DA-6是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，通常用于田間栽培，很少用于組培。在本發(fā)明所述的四種不同倍性水平的紫錐菊上，結果呈現(xiàn)出在絕大部分的情況下，DA-6顯然能夠促進紫錐菊再生芽的生長。在含有DA-6的培養(yǎng)基上復原的植株質(zhì)量非常高，而且在移栽時成活率也很聞。[0014]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明解決了通常紫錐菊再生芽生長培養(yǎng)中再生芽質(zhì)量低和再生芽的根質(zhì)量差、移栽成活率低的突出問題，對于紫錐菊的生物技術研究特別是對于不能夠產(chǎn)生種子但具有更高種植價值的三、四、六倍體的種苗克隆具有重要的可直接應用的價值。
[0015]說明書附圖
圖1.不同DA-6濃度對二倍體再生芽生長的影響；1~4分別是用0、0.08,0.16,0.32mg/L的DA-6處理的二倍體再生芽。
[0016]圖2.不同DA-6濃度對三倍體再生芽生長的影響；1~4分別是用0、0.08,0.16、0.32 mg/L的DA-6處理的三倍體再生芽。
[0017]圖3.不同DA-6濃度對四倍體再生芽生長的影響；1~4分別是用0、0.08,0.16、0.32 mg/L的DA-6處理的四倍體再生芽。
[0018]圖4.不同DA-6濃度對六倍體再生芽生長的影響；1~4分別是用0、0.08,0.16、
0.32 mg/L的DA-6處理的六倍體再生芽。
[0019]圖5.移栽煉苗器皿及煉苗過程；1:煉苗器皿為透明旋蓋塑料瓶，標尺為I cm ;2:閉蓋煉苗；3:開蓋煉苗。
【具體實施方式】
[0020]下面結合附圖和具體實施例進一步詳細說明本發(fā)明，實施例將幫助更好地理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實施例。除非特別說明，實施例中采用的試劑和方法為本領域常規(guī)使用的試劑和方法。
[0021]植物材料:本發(fā)明所述二倍體紫錐菊由種子獲得；四倍體紫錐菊的獲得方法可參考Nilanthi D, Chen X L, Zhao F C， et al.1nduction of tetraploids from petioleexplants through colchicine treatments in Echinacea purpurea L[J].BioMedResearch International, 2009, 2009.。三倍體紫維菊是將二倍體和四倍體雜交獲得。六倍體是將三倍體外植體用秋水仙素處理加倍后誘導不定芽獲得(將三倍體外植體用秋水仙素處理加倍后誘導不定芽獲得六倍體紫錐菊的方法可參考本領域常規(guī)技術)。這些植株的倍性均通過根尖染色體計數(shù)技術進行了鑒定。
[0022]實施例1:
S1.再生芽的準備:首先獲得紫錐菊葉柄外植體，葉柄外植體來自組織培養(yǎng)條件下的紫錐菊二倍體無菌苗(外植體的制備可參考本領域常規(guī)技術方法)，然后將葉柄外植體接種在再生培養(yǎng)基上(再生培養(yǎng)基為含有30 g/L蔗糖、0.3 mg/L ΒΑ、0.01 mg/L NAA，以4.5 g/L瓊脂固化，在1.4 kg cm_2下滅菌20 min的MS培養(yǎng)基)。當再生芽長到連葉高約2 cm時，將芽從外植體組織上切下來，就可以作為本發(fā)明所用的材料——再生芽。[0023]S2.再生芽的培養(yǎng):把步驟SI中所述從二倍體紫錐菊葉柄外植體上得到的芽切割出來，接種到添加了不同濃度DA-6 (0,0.08,0.16,0.32 mg/L)的生長培養(yǎng)基上(生長培養(yǎng)基為含有30 g/L蔗糖、0.01 mg/LNAA，以4.5 g/L瓊脂固化，在1.4 kg cm—2下滅菌20 min的MS培養(yǎng)基)，檢查再生芽生長的情況。
[0024]檢查結果見表1和圖1。從表1和圖1可知，DA-6能高效強化再生芽的生長。在所有濃度中，DA-6 0.08 mg/L提升植株高度和重量、根重、根數(shù)和一級根長度、總根長度似乎是最有效的。而如果要根直徑達到最大，根冠比達到最高，則要較高濃度的DA-6 (0.16mg/L)。所有的生長參數(shù)都在表1列出，達到了顯著水平(P〈0.05)。
[0025]表1不同濃度DA-6對二倍體再生芽生長的影響.....0A-
【權利要求】
1.一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，其特征在于，該紫錐菊再生芽生長培養(yǎng)基是在MS配方中除了添加15~60 g/L蔗糖、3~9 g/L瓊脂和0.01~0.2 mg/LNAA之外，還特別地添加了己酸二乙氨基乙醇酯，即DA-6。
2.根據(jù)權利要求1所述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，其特征在于，所述紫錐菊再生芽為二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽。
3.根據(jù)權利要求2所述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，其特征在于，所述二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.08~0.16 mg/L。
4.根據(jù)權利要求3所述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，其特征在于，所述二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.08或0.16 mg/L。
5.根據(jù)權利要求4所述培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，其特征在于，所述六倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.08 mg/L ;所述二倍體、三倍體或四倍體紫錐菊來源的再生芽生長所需的培養(yǎng)基中添加的DA-6的量為0.16 mg/L。
6.一種促進紫錐菊再生芽生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，其特征在于，根據(jù)權利要I或2所述二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊來源的再生芽接種在適合各自生長的培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為25±4 °C，光照強度為1000~2500 lx，光照時間為10~16 h/d的條件下培養(yǎng)10~60 do`
【文檔編號】A01H4/00GK103477984SQ201310406843
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月9日 優(yōu)先權日:2013年9月9日
【發(fā)明者】陳曉鷺, 楊躍生, 吳鴻, 李棟梁 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學