一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種楤木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括無菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的增殖，懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。本發(fā)明建立了楤木的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，可以在短期內(nèi)獲得大量的楤木愈傷組織和懸浮細(xì)胞，用于藥用成分的提取和制藥工業(yè)。
【專利說明】一種惚木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]惚木，五加科，小喬木或灌木，別名仙人仗、鵲不踏、刺包頭，分布黃河以南至兩廣北部、西南、東南各省區(qū)。生于林內(nèi)、林緣或灌叢中，喜生于溝谷、陰坡、半陰坡海拔25(Tl000m的雜樹林、闊葉林、闊葉混交林或次生林中。耐寒，但在陽光充足、溫暖濕潤的環(huán)境下生長更好。空氣濕度在30%飛0%之間，喜肥沃而略偏酸性的土壤。惚木以根皮和莖入藥，藥材味苦、辛，性平。有補(bǔ)氣安神、強(qiáng)精滋腎、健胃利水、祛風(fēng)除濕、活血止痛的功用。惚木主治神經(jīng)衰弱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝炎、慢性胃炎、胃痙攣、胃及十二指腸潰瘍、腎炎水腫、糖尿病及陽虛氣弱、慢性病氣虛無力、顱外傷后無力綜合癥、腎虛陽痿等癥，還具有降血壓、降血糖及抗放射的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種惚木懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)方法，由該方法可以獲得大量的惚木懸浮細(xì)胞，并規(guī)?；臑樗帍S提供制藥的原料。[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
將惚木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的惚木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA0.5mg/L+IBA 3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件為溫度25 V，暗室培養(yǎng)，濕度30%飛0%，將惚木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0.3 mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度25°C，光照強(qiáng)度1000-20001x，光期10h，暗期14h，濕度30%-60%，增殖后的惚木愈傷組織接種到MS+KT0.3mg/L+TDZ0.lmg/L培養(yǎng)基中，每50ml懸浮細(xì)胞添加IOOml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，獲得大量的惚木懸浮細(xì)胞。
[0005]采用本發(fā)明制備的惚木懸浮細(xì)胞，周期短，產(chǎn)量大，能耗少，利于大生產(chǎn)操作。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
[0007]實(shí)施例1
將惚木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的惚木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件為溫度25 V，暗室培養(yǎng)，濕度30%飛0%，將惚木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0.2 mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度25°C，光照強(qiáng)度1000-20001x，光期10h，暗期14h，濕度30%-60%，增殖后的惚木愈傷組織接種到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.05mg/L培養(yǎng)基中，每50ml懸浮細(xì)胞添加IOOml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，獲得大量的惚木懸浮細(xì)胞。
[0008]實(shí)施例2
將惚木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的惚木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件為溫度25°C，暗室培養(yǎng)，濕度30%飛0%，將惚木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 2mg/L+2,4-D0.5 mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度25 °C，光照強(qiáng)度1000-20001x，光期10h，暗期14h，濕度30%飛0%，增殖后的惚木愈傷組織接種到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.2mg/L培養(yǎng)基中，每50ml懸浮細(xì)胞添加IOOml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，獲得大量的惚木懸浮細(xì)胞。
[0009]實(shí)施例3
將惚木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的惚木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA 0.5mg/L+IBA 3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件為溫度25 V，暗室培養(yǎng)，濕度30%飛0%，將惚木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BA lmg/L+2，4-D 0.3 mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度25°C，光照強(qiáng)度1000-20001x，光期10h，暗期14h，濕度30%飛0%，增殖后的惚木愈傷組織接種到MS+KT0.2mg/L+TDZ0.2培養(yǎng)基中，每50ml懸浮細(xì)胞添加IOOml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，獲得大量的惚木懸浮細(xì)胞。
[0010]實(shí)施例4
將惚木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂`白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min，超凈工作臺(tái)上氯化汞消毒處理8min，無菌水沖洗4-5次，然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分，獲得的惚木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA 0.5mg/L+IBA3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)條件為溫度25°C，暗室培養(yǎng)，濕度30%飛0%，將惚木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 2mg/L+2,4-D0.3 mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度25 °C，光照強(qiáng)度1000-20001x，光期10h，暗期14h，濕度30%飛0%，增殖后的惚木愈傷組織接種到MS+KT0.4mg/L+TDZ0.05mg/L培養(yǎng)基中，每50ml懸浮細(xì)胞添加IOOml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，獲得大量的惚木懸浮細(xì)胞。
【權(quán)利要求】
1.一種惚木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，包括無菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的增殖，懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)和優(yōu)化，其主要步驟如下: (1)按照常規(guī)植物組織培養(yǎng)的消毒方法對惚木葉進(jìn)行消毒處理，獲得無菌的惚木葉片; (2)將步驟(I)所獲得的惚木無菌葉片接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+NAA0.5mg/L+IBA 3mg/L中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)； (3)將步驟(2)誘導(dǎo)出來的惚木愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基MS+6-BAl-2mg/L+2，4-D 0.2-0.5 mg/L中進(jìn)行增殖培養(yǎng)； (4)將步驟(3)增殖過的惚木愈傷組織接種到MS+KT0.2-0.4mg/L+TDZ0.05-0.2mg/L培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)3代，得到惚木懸浮細(xì)胞。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種惚木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于:步驟中所述無菌的惚木葉片按下列消毒方法得到:將惚木葉片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分鐘，流水沖洗25min,超凈工作臺(tái)上氯化萊消毒處理8min,無菌水沖洗4_5次,然后用無菌的濾紙吸去葉片表面的水分。
3.按照權(quán)利要求1所 述的一種惚木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于:步驟中惚木愈傷組織誘導(dǎo)的條件為溫度25°C，暗室培養(yǎng)，濕度30%飛0%。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種惚木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于:步驟中惚木愈傷組織增殖的條件為溫度25°C，光照強(qiáng)度1000-20001x，光期10h，暗期14h，濕度30%-60%。
5.按照權(quán)利要求1所述的一種惚木懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，其特征在于:步驟中愈傷組織懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，每50ml懸浮細(xì)胞添加IOOml培養(yǎng)液，接種于250ml錐形瓶中進(jìn)行懸浮振蕩培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103444547SQ201310423763
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月17日
【發(fā)明者】楊存 申請人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司