一種大花萱草的繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大花萱草的繁殖方法，包括如下步驟：（1）選擇外植體并消毒處理；（2）將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；（3）將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到分化苗；（4）將分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)；（5）煉苗、移出培養(yǎng)室進(jìn)行移栽；其中，所述大花萱草為二倍體或多倍體。本發(fā)明在消毒時(shí)間和效果、操作方法和再生效率、生產(chǎn)成本等方面都明顯優(yōu)于其他植物組培快繁，所以建立的規(guī)?；唐飞a(chǎn)體系穩(wěn)定、能夠滿足規(guī)?；旆鄙a(chǎn)。本發(fā)明主要應(yīng)用于大花萱草新品種的快速擴(kuò)繁，使其快速走向市場的一種有效途徑，改變國內(nèi)新品種推出較慢的現(xiàn)狀。
【專利說明】一種大花萱草的繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種大花萱草的繁殖方法，特別是涉及一種使用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖大花萱草的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大花萱草(Hemerocallis hybridus)種質(zhì)資源豐富,功用廣泛,“觀為花、食為菜、用為藥”，市場對其需求不斷增加，尤其是作為觀賞植物。其品種繁多，花型秀美，葉色翠綠，花色豐富，花期較長，是融觀葉與觀花于一體的優(yōu)良園林綠地花卉，受到世界各國人民普遍喜愛。因具有繁殖容易，管理粗放，適應(yīng)性和抗性強(qiáng)等特點(diǎn)，符合我國建設(shè)節(jié)約型園林的要求，在園林種植中，萱草可在花壇、花境、路邊、草坪中叢植、行植或片植，也可作切花，是園林綠化的好材料，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]大花萱草的繁殖方式主要是分株繁殖，花苔上產(chǎn)生側(cè)芽的品種也可扦插繁殖，由于目前市場的大花萱草品種都是雜交種播種繁殖后代會(huì)分離，因此播種繁殖主要應(yīng)用于大花萱草雜交育種中的新品種選育。以上方式可以滿足生產(chǎn)需求，但是對于大花萱草雜交育種中選育出的優(yōu)良新品種，如果要進(jìn)行大面積推廣，分株繁殖的年繁殖系數(shù)為5-10，如僅依靠傳統(tǒng)的繁殖使已選育出的新品種面市至少需要6-8年才可有一定規(guī)模。因此研究大花萱草快速繁殖的技術(shù)和方法，加速大花萱草新品種的推廣，具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種可以快速大量繁殖大花萱草的方法。
[0005]一種大花萱草的繁殖方法，包括如下步驟:
[0006]( I)選擇外植體并消毒處理；
[0007](2)將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0008](3)將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到分化苗；
[0009](4)將分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)；
[0010](5)煉苗、移出培養(yǎng)室進(jìn)行移栽；
[0011]其中，所述大花萱草為二倍體或多倍體。
[0012]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述外植體為幼嫩莖尖或幼嫩花苔。
[0013]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述消毒過程具體為:切取大花萱草幼嫩莖尖或幼嫩花苔，與洗潔精混合在流水下沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒30s，再用無菌水沖洗3-5遍,最后用0.1%升汞消毒幼嫩莖尖12-14min或消毒幼嫩花苔8_10mino
[0014]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.2mg.L'
[0015]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述芽誘導(dǎo)過程具體為:
[0016]當(dāng)外植體為幼嫩莖尖時(shí)，將消毒后的幼嫩莖尖切去頂端的葉子和基部的根，保留基盤，切成I厘米大小莖段后接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；
[0017]當(dāng)外植體為花苔時(shí)，將花苔兩端切去，切成I厘米莖段并保留有側(cè)芽的部位，接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；
[0018]接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的外植體形成愈傷組織并分化成再生苗，在接入的所述外植體分生出2-3個(gè)新芽時(shí)進(jìn)行繼代。
[0019]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述二倍體大花萱草的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.1mg.1 ;所述多倍體大花萱草的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0-4.0mg.'+ΝΑΑΟ.1mg.L—1 ;增值系數(shù)均在3.0以上，有些二倍體萱草增殖系數(shù)高達(dá)5.0。
[0020]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中在繼代過程中，所述二倍體品種25-30天轉(zhuǎn)接一次，所述多倍體品種30-40天轉(zhuǎn)接一次。
[0021]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg.L—1。
[0022]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中步驟(5)具體為:把生根后的組培苗在煉苗室中開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖3:1的基質(zhì)中培養(yǎng)，得到成品。
[0023]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述培養(yǎng)室的溫度為25°C，光照時(shí)間為12h.cf1，光照強(qiáng)度約 25-30 μ mo I.π2.s'
[0024]本發(fā)明所述的大花萱草的繁殖方法，其中所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均添加3%質(zhì)量百分比的蔗糖和0.8%質(zhì)量百分比的瓊脂，PH為5.8。
[0025]本發(fā)明大花萱草的繁殖方法與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于:
[0026]本發(fā)明采用組織培養(yǎng)的方法，通過消毒外植體，得到無菌系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進(jìn)行繼代增殖、生長及生根進(jìn)行篩選、調(diào)控、最后確定最佳外植體與培養(yǎng)基的配比，使其能應(yīng)用于工廠化生產(chǎn)。創(chuàng)新點(diǎn)在于本發(fā)明的組培配方是將兩種不同類型大花萱草品種進(jìn)行大量擴(kuò)繁的最佳組合，可以快速大量的繁殖組培苗，以適應(yīng)花卉種苗市場的需要，尚屬國內(nèi)首例。
[0027]本發(fā)明對兩種不同類型的大花萱草的幼嫩莖尖、幼嫩花苔等外植體進(jìn)行了系列組培快繁研究，取得了較好的結(jié)果，兩種外植體各有優(yōu)缺點(diǎn)，幼嫩莖尖取材不受季節(jié)限制但影響植株生長，幼嫩花苔取材受季節(jié)限制但是不影響植株正常生長。可以根據(jù)材料的多少季節(jié)情況選擇適合的外植體材料。本發(fā)明在消毒時(shí)間和效果、操作方法和再生效率、生產(chǎn)成本等方面都明顯優(yōu)于其他植物組培快繁，所以建立的規(guī)?；唐飞a(chǎn)體系穩(wěn)定、能夠滿足規(guī)?；旆鄙a(chǎn)。本發(fā)明主要應(yīng)用于大花萱草新品種的快速擴(kuò)繁，使其快速走向市場的一種有效途徑，改變國內(nèi)新品種推出較慢的現(xiàn)狀。
[0028]本發(fā)明建立了兩種不同類型大花萱草利用兩種不同外殖體的組培方法，幼嫩花苔和莖尖依次通過洗潔精、75%酒精和0.l%HgCl2溶液浸泡獲得無菌外殖體，滅菌效果較好，后續(xù)培養(yǎng)污染較少，死亡率較低，再用芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)形成愈傷組織，愈傷組織分化形成芽點(diǎn)進(jìn)而分化成小苗，得到 大花萱草組培苗，將小苗轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，小苗基部分生出幼嫩芽點(diǎn)，一個(gè)月可增殖一次。且增殖系數(shù)始終保持在4.5-5.5之間，因此培育周期短，為實(shí)現(xiàn)通過雜交育種手段選育的大花萱草新品種的快速擴(kuò)繁，早日上市奠定了基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】[0029]圖1A為本發(fā)明接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的花苔產(chǎn)生了愈傷組織；
[0030]圖1B為本發(fā)明接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的莖段產(chǎn)生了愈傷組織并形成了新芽；
[0031]圖1C為本發(fā)明接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的花苔產(chǎn)生的愈傷組織形成了新芽；
[0032]圖1D為本發(fā)明誘導(dǎo)出的二倍體品種增殖過程中中的組培苗；
[0033]圖1E為本發(fā)明繼代增殖過程中的組培苗；
[0034]圖1F為本發(fā)明誘導(dǎo)出的多倍體品種增殖過程中的組培苗；
[0035]圖1G為本發(fā)明生根培養(yǎng)后需移栽的小苗；
[0036]圖1H為本發(fā)明移栽后的再生苗。
【具體實(shí)施方式】
[0037]實(shí)施例1
[0038]如圖1所示，一種大花萱草的繁殖方法，采用組織培養(yǎng)技術(shù)，具體包括如下步驟:
[0039](I)切取大花萱草幼嫩莖尖或花苔作為組織培養(yǎng)外植體，所述大花萱草為二倍體或多倍體，將采集到的外植體先混合洗潔精在流水下沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒30s，在用無菌水沖洗3-5遍，之后用0.1%升汞消毒幼嫩莖尖12-14min，幼嫩花苔8_10mino
[0040](2)將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上(見圖1A)，送入培養(yǎng)室進(jìn)行無菌培養(yǎng)，培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為25°C ,光照時(shí)間為12h.d \光照強(qiáng)度約25-30 μ mo I.m 2.s S在這一過程中，根據(jù)不同培養(yǎng)基上各外植體分化的情況的不同篩選出芽誘導(dǎo)得較好的外植體種類和培養(yǎng)基類型。效果最好的外植體為幼嫩莖尖和幼嫩花苔，培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.2mg.L—1。
[0041]其中，所述芽誘導(dǎo)過程具體為:
[0042]當(dāng)外植體為幼嫩莖尖時(shí)，將消毒后的幼嫩莖尖切去頂端的葉子和基部的根，保留基盤，切成I厘米大小莖段后接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；
[0043]當(dāng)外植體為花苔時(shí)，將花苔兩端切去，切成I厘米莖段并保留有側(cè)芽的部位，接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中(見圖1A)；
[0044]接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的外植體形成愈傷組織并分化成再生苗，在接入的所述外植體分生出2-3個(gè)新芽時(shí)進(jìn)行繼代(見圖1B和圖1C)。
[0045](3)將分化后的外植體繼代到繼代增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)(有3個(gè)以上分化較好的芽)，；二倍體大花萱草效果最好的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.'+ΝΑΑΟ.1mg.1 ；多倍體大花萱草效果最好的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0-4.0mg.'+ΝΑΑΟ.1mg.L'在繼代過程中，所述二倍體品種25-30天轉(zhuǎn)接一次，所述多倍體品種30-40天轉(zhuǎn)接一次(見圖1D，圖1E和圖1F)。
[0046](4)將生長健壯的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)基上，進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg.L'
[0047](5)做完生根培養(yǎng)的分化苗下一步要經(jīng)過煉苗，然后移栽，從而真正的成為大花萱草商品種苗。所述煉苗過程為:把生根較好的組培苗在煉苗室中打開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖=3:1的基質(zhì)中，移栽成活率在95%左右(見圖1G和圖1H)。
[0048]所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均添加3% (質(zhì)量百分比)的蔗糖和0.8% (質(zhì)量百分比)的瓊脂，PH為5.8。
[0049]所述培養(yǎng)室的培養(yǎng)溫度為25 °C，光照時(shí)間為12h.cf1，光照強(qiáng)度約25-30 μ mo I.m2.s-1,移栽:泥炭:珍珠巖=3:1。
[0050]其中:
[0051]1、MS培養(yǎng)基配方單:工作液濃度單位mg/L
[0052]大量元素:NH4N031650、KNO31900,CaCl2.2H20440、MgSO4.7H20370、KH2PO4170 ；
[0053]微量元素:ΚΙ0.83、Η3Β036.2、MnSO4.4Η2022.3、ZnS047H208.6、Na2MnO4.2Η200.25、CuSO4.5Η200.025、CoCl2.6Η200.025。
[0054]鐵鹽:FeS047H2027.8、Na2_EDTA2H2037.3。
[0055]有機(jī)物質(zhì):肌醇100、煙酸0.5、鹽酸毗多醇0.5、煙酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。
[0056]2、NAA為萘乙酸
[0057]3、6_BA為6_芐基嘌呤
[0058]試驗(yàn)中，二倍體萱草和多倍體萱草分別作了 4個(gè)品種，二倍體萱草繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg'+ΝΑΑΟ.1mg.1很容易實(shí)現(xiàn)增殖(見圖1D)，多倍體萱草繼代培養(yǎng)基為MS+6-ΒΑ3.0-4.0mg ?L^+NAA0.1mg.?Λ不同的多倍體萱草品種所需6-BA濃度有所不同，可根據(jù)情況在3.0,3.5,4.0間進(jìn)行調(diào)節(jié)，一般植株越粗壯個(gè)體越大的品種需要的6-ΒΑ濃度越高；而且多倍體萱草和二倍體萱草相比其增值系數(shù)要低(見圖1F)，繼代周期也相對長一些。
[0059]試驗(yàn)結(jié)果顯示，二倍體萱草4個(gè)品種中，品種I增殖系數(shù)為5.0,品種2增值系數(shù)為
4.5，品種3 (Stella De Oro)增值系數(shù)為4.6，品種4 (James marsh)增殖系數(shù)為4.8 ;多倍體品種 I (Canadian Border Patrol)增值系數(shù)為 3.6,品種 II (Daring Dilemma)增殖系數(shù)為 3.3,品種 III (Straw Berry Candy)增殖系數(shù)為 3.0,品種 IV (Gentle Shepherd)增殖系數(shù)為3.6。
[0060]以上所述的實(shí)施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi) 。
【權(quán)利要求】
1.一種大花萱草的繁殖方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)選擇外植體并消毒處理； (2)將消毒后的外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，送入培養(yǎng)室進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)； (3)將分化后的外植體轉(zhuǎn)移到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到分化苗； (4)將分化苗接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)； (5)煉苗、移出培養(yǎng)室進(jìn)行移栽； 其中，所述大花萱草為二倍體或多倍體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:所述外植體為幼嫩莖尖或幼嫩花苔。
3.根據(jù)權(quán)利 要求2所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:所述消毒過程具體為:切取大花萱草幼嫩莖尖或幼嫩花苔，與洗潔精混合在流水下沖洗30min，在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒30s，再用無菌水沖洗3-5遍，最后用0.1%升汞消毒幼嫩莖尖12_14min或消毒幼嫩花苔8-10min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg.L_1+NAA0.2mg.L'
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于: 所述芽誘導(dǎo)過程 具體為: 當(dāng)外植體為幼嫩莖尖時(shí)，將消毒后的幼嫩莖尖切去頂端的葉子和基部的根，保留基盤，切成I厘米大小莖段后接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中； 當(dāng)外植體為花苔時(shí)，將花苔兩端切去，切成I厘米莖段并保留有側(cè)芽的部位，接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中； 接入所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的外植體形成愈傷組織并分化成再生苗，在接入的所述外植體分生出2-3個(gè)新芽時(shí)進(jìn)行繼代。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:所述二倍體大花萱草的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg. '+ΝΑΑΟ.1mg. 1 ;所述多倍體大花萱草的繼代培養(yǎng)基為MS+6-ΒΑ3.0-4.0mg.I^+NAA0.1mg.L—1。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:在繼代過程中，所述二倍體品種25-30天轉(zhuǎn)接一次，所述多倍體品種30-40天轉(zhuǎn)接一次。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg.L—1。
9.根據(jù)權(quán)利 要求 1所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:步驟(5)具體為:把生根后的組培苗在煉苗室中開蓋鍛煉3-5d，然后移栽到泥炭:珍珠巖3:1的基質(zhì)中培養(yǎng)，得到成品O
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大花萱草的繁殖方法，其特征在于:所述培養(yǎng)室的溫度為25°C，光照時(shí)間 為12h.cf1，光照強(qiáng)度約25-30 μ mol.π2.s—1 ;所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均添加3%質(zhì)量百分比的蔗糖和0.8%質(zhì)量百分比的瓊脂，PH為5.8。
【文檔編號】A01H4/00GK103461135SQ201310432315
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】趙天榮, 蔡建崗 申請人:寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院