一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法。該方法通過人工接種評價梨樹資源和品種的抗病性，解決梨樹抗病育種中高抗資源材料早期發(fā)現(xiàn)難與快速評價問題，為梨樹抗腐爛病育種奠定基礎。該方法按照如下步驟進行：（1）梨苗培育與準備；（2）菌種培養(yǎng)；（3）梨苗接種；（4）病情調(diào)查與評價。本發(fā)明采用人工接種技術，為病原菌提供了很好的發(fā)病條件，保證了試驗材料感染病菌的機會，使用本發(fā)明的方法能快速準確地進行梨樹腐爛病抗性鑒定及篩選，使用該接種方法較自然發(fā)病調(diào)查鑒定的結果準確性、可靠性提高。
【專利說明】一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物病害抗性鑒定的【技術領域】，具體涉及一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法。
【背景技術】
[0002]梨樹是我國主要果樹樹種之一，我國南北方均可種植，目前發(fā)展面積，產(chǎn)量均具世界第一位。據(jù)統(tǒng)計，我國梨樹面積100萬公頃，產(chǎn)量1300萬噸。
[0003]梨樹在栽培過程中，病蟲害種類繁多，危害嚴重。其中梨樹腐爛病是梨樹生產(chǎn)中第一大毀滅性病害，該病在我國主要梨產(chǎn)區(qū)均有分布，尤其是在易發(fā)生凍害的地區(qū)或年份，造成梨樹死樹死枝普遍，嚴重果園病株率高達70%-80%以上，對梨樹產(chǎn)業(yè)構成嚴重威脅。
[0004]目前我國主栽品種庫爾勒香梨、酥梨、雪花梨等多為高感品種。生產(chǎn)上均需要采取多種措施控制該病害的發(fā)生，目前采用化學防治，一般于萌芽前噴鏟除性殺菌劑，發(fā)病后進行病斑刮治并結合涂抹高濃度化學藥劑處理是主要的防病措施。但長期依靠藥劑防治，難度逐年加大，且效果并不理想。若能推出高抗梨樹腐爛病的優(yōu)質(zhì)品種，替代現(xiàn)有的大批感病品種，減少或不用化學藥劑，將從根本上解決此病的防治問題，且可減少農(nóng)藥的使用，對環(huán)境、生態(tài)帶來安全，并會顯著提高經(jīng)濟和社會效益，有利于梨樹產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)定與發(fā)展，是非常有意義的工作。而抗病育種的關鍵，就是要有抗原材料。而抗原材料的獲得需要從大量梨樹品種、梨樹雜交組合或野生資源中發(fā)現(xiàn)和獲取，再通過常規(guī)或分子育種富集培育，做進一步的篩選與利用。梨樹腐爛病抗病性檢測，目前國內(nèi)采用自然調(diào)查的方法，自然調(diào)查會受到試驗地區(qū)，試驗果園，年份、氣候等影響，一般很難反映特定材料的抗性實際水平，僅能作為抗性育種中的參考。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法，不僅簡便、快速，且準確性和可靠性提高。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術方案如下:
[0007]一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法，該方法按如下步驟進行:
[0008](I)梨苗培育與準備:按照常規(guī)的土肥水管理及病蟲害控制措施培育和管理梨苗。
[0009](2)菌種培養(yǎng):將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，于20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用。
[0010](3)梨苗接種:接種時先對待接種梨苗的枝條表面消毒，再用直徑5_打孔器在枝條上打孔，將步驟(2)得到菌餅接種至枝條的孔中，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用封口膜纏繞保濕培養(yǎng)。
[0011](4)病情調(diào)查與評價:于接種后第30天，調(diào)查每個接種點發(fā)病情況，記錄病斑擴展直徑或長度、枝條死亡狀況，按以下分級標準進行每個接種點的病情級數(shù)調(diào)查，并計算出每株的病情指數(shù):[0012]O級不發(fā)病
[0013]I級病斑長度在Icm以下
[0014]2級病斑直徑在l_2cm之間
[0015]3級病斑直徑在2_4cm之間
[0016]4級病斑直徑在4cm以上或枝條死亡或葉片枯萎。
[0017]病情指數(shù)=[Σ (各級病點數(shù)X相應病級)/調(diào)查總點數(shù)X最高病級]X 100
[0018]免疫(I)0.00
[0019]高抗(HR) 0.00〈病情指數(shù)≤20.00
[0020]抗病(R) 20.00 <病情指數(shù)≤30.00
[0021]感病(S) 30.00 <病情指數(shù)≤40.00
[0022]高感(HS ) 病情指數(shù)>40.00。
[0023]進一步，上述步驟(3)在接種時先對待接種梨苗的枝條表面用70%乙醇溶液或5%次氯酸鈉溶液消毒，再用直徑5mm打孔器在枝條上每間隔7-lOcm打孔，打4個孔，孔深至木質(zhì)部，每孔上各接一個菌餅，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用寬I厘米左右的封口膜纏繞保
濕培養(yǎng)。
[0024]進一步，上述步驟(3)梨苗接種于當年9-10月、第二年4-5月共進行2次。
[0025]進一步，上述步驟(2)菌種準備包括:將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用；其中，PSA培養(yǎng)基配方為:馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂15~20g，蒸餾水1000ml。
[0026]上述打孔器的尺寸為5mm。
[0027]本發(fā)明通過人工接種評價梨樹抗病性，解決梨樹抗病育種中高抗資源材料早期發(fā)現(xiàn)難與快速評價問題，為梨樹抗腐爛病育種奠定基礎。
[0028]本發(fā)明與自然發(fā)病調(diào)查比較，因為自然發(fā)病評價受菌源量、氣候等多種因素影響，不利于抗病品種的篩選，本發(fā)明采用人工接種技術，為病原菌提供了很好的發(fā)病條件，保證了試驗材料感染病菌的機會，使用本發(fā)明的方法能快速準確地進行梨樹腐爛病抗性鑒定及篩選，使用該方法篩選出想要的高抗、抗病品種，因此準確性、可靠性提高。
【具體實施方式】
[0029]為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0030]本發(fā)明實施例的梨樹腐爛病抗性鑒定的方法，該梨樹腐爛病抗性鑒定的方法包括以下步驟:
[0031](I)梨苗培育與準備:按照常規(guī)的土肥水管理及病蟲害控制措施培育和管理梨苗；
[0032](2)菌種培養(yǎng):將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，于20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用；
[0033](3)梨苗接種:接種時先對待接種梨苗的枝條表面消毒，再用直徑5_打孔器在枝條上打孔，將步驟(2)得到菌餅接種至枝條的孔中，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用封口膜纏繞保濕培養(yǎng)。
[0034](4)病情調(diào)查與評價:于接種后第30天，調(diào)查每個接種點發(fā)病情況，記錄病斑擴展直徑或長度、枝條死亡狀況，按以下分級標準進行每個接種點的病情級數(shù)調(diào)查，并計算出每株的病情指數(shù):
[0035]O級不發(fā)病
[0036]I級病斑長度在Icm以下
[0037]2級病斑直徑在l_2cm之間
[0038]3級病斑直徑在2_4cm之間
[0039]4級病斑直徑在4cm以上或枝條死亡或葉片枯萎。
[0040]病情指數(shù)=[Σ (各級病點數(shù)X相應病級)/調(diào)查總點數(shù)X最高病級]X 100
[0041]免疫(I)0.00
[0042]高抗(HR) 0.00 <病情指數(shù)≤20.00
[0043]抗病(R) 20.00 <病情指數(shù)≤30.00
[0044]感病(S) 30.00 <病情指數(shù)≤40.00
[0045]高感(HS ) 病情指數(shù)＞40.00。
[0046]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案，上述步驟(3)在接種時先對待接種梨苗的枝條表面用70%乙醇溶液或5%次氯酸鈉溶液消毒，再用直徑5mm打孔器在枝條上每間隔7-lOcm打孔，打4個孔，孔深至木質(zhì)部，每孔上各接一個菌餅，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用寬I厘米左右的封口膜纏繞保濕培養(yǎng)。
[0047]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案，上述步驟(3)梨苗接種于當年9-10月、第二年4-5月共進行2次。
[0048]作為本發(fā)明實施例的一優(yōu)化方案，上述步驟(2)菌種準備包括:將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用；其中，PSA培養(yǎng)基配方為:馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂15~20g，蒸餾水 1000mlo
[0049]下面結合具體實施例對本發(fā)明的應用原理作進一步描述。
[0050]實施例1 (梨樹腐爛病抗性鑒定及篩選)
[0051]實施例1按如下步驟進行:
[0052]I試驗方法
[0053](I)梨苗培育與準備:選用的梨苗是中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所梨資源課題組提供的4000株實生苗，按照常規(guī)的土肥水管理及病蟲害控制措施培育和管理梨苗。
[0054](2)菌種培養(yǎng):將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用；其中，PSA培養(yǎng)基配方為:馬鈴薯200g,鹿糖20g,瓊脂15~20g,蒸懼水1000ml。
[0055](3)梨苗接種:于當年9-10月共接種4000株實生苗，每棵苗接種一個枝條，接種時先對待接種梨苗的枝條表面用70%乙醇或0.5%次氯酸鈉溶液消毒，再用直徑5_打孔器在枝條上每間隔7-lOcm打孔，打4個孔，每孔上各接一個步驟(2)得到菌餅，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用寬I厘米左右的封口膜纏繞保濕培養(yǎng)。
[0056](4)病情調(diào)查與評價:于接種后第30天調(diào)查，調(diào)查每個接種點發(fā)病情況，記錄病斑擴展直徑或長度、枝條死亡狀況，按以下分級標準進行每個接種點的病情級數(shù)調(diào)查，并計算出每株的病情指數(shù):
[0057]O級不發(fā)病
[0058]I級病斑長度在Icm以下
[0059]2級病斑直徑在l_2cm之間
[0060]3級病斑直徑在2_4cm之間
[0061]4級病斑直徑在4cm以上或枝條死亡或葉片枯萎；
[0062]病情指數(shù)=[Σ (各級病點數(shù)X相應病級)/調(diào)查總點數(shù)X最高病級]X 100
[0063]免疫(I)0.00
[0064]高抗(HR) 0.00 <病情指數(shù)≤20.00
[0065]抗病(R) 20.00 <病情指數(shù)≤30.00
[0066]感病(S) 30.00 <病情指數(shù)≤40.00
[0067]高感(HS ) 病情指數(shù)>40.00。
[0068](5)重復:于第二年4-5月，對第一年接種獲得的高抗和抗病單株進行第二次接種和調(diào)查。方法同上。
[0069]2試驗結果
[0070]實生苗接種結果:于當年9-10月，共接種4000株實生苗。接種后30天調(diào)查數(shù)據(jù)計算所得結果如下:高抗(HR)單株39株，抗病單株(R) 69株，感病或高感單株共3892株，分別占1%、1.7%和97.3%。第二年4-5月對第一年所得的39株高抗單株，69株抗病單株，進行第二次接種。仍有10株聞抗(HR)單株不發(fā)病,抗性穩(wěn)定?？共?R)單株有43株,其它的則是感病或高感單株。調(diào)查結果表明4000株實生苗接種后腐爛病抗性差別明顯，能夠較好的區(qū)分抗、感個體，為抗性個體篩選奠定了基礎。
[0071]實施例2 (對多個梨樹品種腐爛病抗性鑒定)
[0072]I試驗方法
[0073](I)梨樹培育與準備:選用的梨苗是中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所梨資源課題組提供的147個梨樹品種，表1為147個梨樹品種，按照常規(guī)的土肥水管理及病蟲害控制措施培育和管理梨苗。
[0074](2)菌種培養(yǎng):將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用；其中，PSA培養(yǎng)基配方為:馬鈴薯200g,鹿糖20g,瓊脂15~20g,蒸懼水1000ml。
[0075](3)梨樹接種:于當年9-10月共接種147個品種，每個品種接I棵，每個接4個枝條，每個枝條接4個點，接種時先對待接種梨苗的枝條表面用70%乙醇或0.5%次氯酸鈉溶液消毒，再用直徑5mm打孔器在枝條上每間隔7-lOcm打孔，打4個孔，每孔上各接一個步驟
(2)得到菌餅，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用寬I厘米左右的封口膜纏繞保濕培養(yǎng)。
[0076](4)病情調(diào)查與評價:于接種后第30天調(diào)查，調(diào)查每個接種點發(fā)病情況，記錄病斑擴展直徑或長度、枝條死亡狀況，按以下分級標準進行每個接種點的病情級數(shù)調(diào)查，并計算出每株的病情指數(shù):
[0077]O級不發(fā)病
[0078]I級病斑長度在Icm以下[0079]2級病斑直徑在l-2cm之間
[0080]3級病斑直徑在2-4cm之間
[0081]4級病斑直徑在4cm以上或枝條死亡或葉片枯萎；
[0082]病情指數(shù)=[Σ (各級病點數(shù)X相應病級)/調(diào)查總點數(shù)X最高病級]X 100
[0083] 免疫(I)0.00
[0084]高抗(HR) 0.00 <病情指數(shù)≤20.00
[0085]抗病(R) 20.00 <病情指數(shù)≤30.00
[0086]感病(S) 30.00 <病情指數(shù)≤40.00
[0087]高感(HS ) 病情指數(shù)>40.00。
[0088](5)重復:于第二年4-5月，對第一年接種獲得的高抗和抗病品種進行第二次接種和調(diào)查。方法同上。
[0089]2試驗結果
[0090]調(diào)查計算結果:于當年9-10月，共接種147個品種。接種后30天調(diào)查計算結果表明高抗(HR)品種有2個，分別是香水和恩梨；抗病(R)的有10個，分別為冬果梨、冀蜜、甘泉、雪芳、二宮白、中梨三號、早香酥、大頭梨、香麻、彬縣老遺生。高抗、抗病、感病和高感品種分別占接種品種的1.4%、6.8%、13.6%和78.2%，說明在現(xiàn)有的梨樹資源中，主要以感病品種為主，無免疫品種。于第二年4-5月重復鑒定，試驗結果與第一年的結果趨勢類似。
[0091]選用高抗、抗病、感病等不同抗性水平的梨樹品種成齡梨樹進行田問自然發(fā)病調(diào)查，并與早期幼樹接種結果比較，結果看出:人工接種的幼樹與田問自然觀察的成齡果樹發(fā)病趨勢一致，說明利用早期接種鑒定可反映田問成齡梨樹的抗性水平。
[0092]表1147個梨樹品種
【權利要求】
1.一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法，其特征在于:該方法按如下步驟進行: (1)梨苗培育與準備:按照常規(guī)的土肥水管理及病蟲害控制措施培育和管理梨苗； (2)菌種培養(yǎng):將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，于20°C下培養(yǎng)7天，再用直徑5mm打孔器打成菌餅備用； (3)梨苗接種:接種時先對待接種梨苗的枝條表面消毒，再用打孔器在枝條上打孔，將步驟(2)得到菌餅接種至枝條的孔中，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用封口膜纏繞保濕培養(yǎng); (4)病情調(diào)查與評價:于接種后第30天調(diào)查，調(diào)查每個接種點發(fā)病情況，記錄病斑擴展直徑或長度、枝條死亡狀況，按以下分級標準進行每個接種點的病情級數(shù)調(diào)查，并計算出每株的病情指數(shù): O級不發(fā)病 I級病斑長度在Icrn以下 2級病斑直徑在l-2cm之間 3級病斑直徑在2-4cm之間 4級病斑直徑在4cm以上或枝條死亡或葉片枯萎； 病情指數(shù)=[Σ (各級病點數(shù)X相應病級)/調(diào)查總點數(shù)X最高病級]X 100 免疫(I) 0.00 高抗(HR) 0.00 <病情指數(shù)< 20.00 抗病(R) 20.00 <病情指數(shù)< 30.00 感病(S) 30.00 <病情指 數(shù)< 40.00 高感(HS) 病情指數(shù) >40.00。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法，其特征在于:接種時先對待接種梨苗的枝條表面用70%乙醇或0.5%次氯酸鈉溶液消毒，再用直徑5_打孔器在枝條上每間隔7-lOcm打孔，打4個孔，孔深至木質(zhì)部，每孔上各接一個菌餅，再用脫脂棉沾無菌水纏繞，外用寬I厘米的封口膜纏繞保濕培養(yǎng)。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法，其特征在于:梨苗接種于當年9-10月、第二年4-5月共進行2次。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種梨樹腐爛病抗性鑒定的方法,其特征在于:菌種培養(yǎng)包括:將室內(nèi)低溫保存的梨樹腐爛病菌菌種接種在PSA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中20°C下培養(yǎng)7天，再用打孔器打成5_菌餅備用；其中，PSA培養(yǎng)基配方為:馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂15 ~20g,蒸懼水 1000ml。
【文檔編號】A01G17/00GK103503737SQ201310468321
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年10月9日 優(yōu)先權日:2013年10月9日
【發(fā)明者】周增強, 侯琿, 王麗, 李秀根, 楊健 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所