一種山豆根組織培養(yǎng)育苗方法
【專利摘要】本發(fā)明針對山豆根人工繁育難度大，成苗率低的問題，提供一種組織培養(yǎng)育苗方法，具體包括采種、培養(yǎng)無菌苗、誘導(dǎo)培養(yǎng)基、誘導(dǎo)叢生芽、叢生芽繼代增殖、誘導(dǎo)生根、試管苗的移栽等具體步驟，具有取材方便，叢生芽誘導(dǎo)率達(dá)50%～80%，成苗達(dá)85%以上，可以滿足人工大面積栽培對山豆根苗的需要的有益效果，而且經(jīng)過薄層色譜技術(shù)鑒定，培養(yǎng)出的試管苗具有生物合成藥用有效成分苦參堿和氧化苦參堿的能力。
【專利說明】一種山根組織培養(yǎng)育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中草藥材栽培技術(shù)，具體涉及一種山豆根育苗的方法，尤其是山豆根的組織培養(yǎng)育苗方法，屬于中藥材栽培【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]山豆根，拉丁名為:Radix Sophorae Tonkinensis,也叫廣豆根、南豆根，為雙子葉植物綱豆科植物越南槐，屬于野生藥材，藥用部位為根及根莖，秋季采挖，具有清熱解毒，消腫止痛的功能，用于治療咽喉腫痛、齒齦腫痛、喘滿熱咳、肝炎、便秘、黃疸、下痢、疥癬及蚊、蟲叮咬等，植物形態(tài)為灌木，高I~2米，野生山豆根生于石灰?guī)r山地或巖石縫中，主產(chǎn)廣西，云南和貴州也有分布，但產(chǎn)量較小。
[0003]山豆根的藥用部位是根系和根莖，除了作為傳統(tǒng)的中藥材使用外，醫(yī)藥工業(yè)還以山豆根作為原料，大量研制開發(fā)治療肝炎的針劑、咽喉腫痛的片劑以及抗腫的中成藥，因此山豆根的需求量越來越大，但山豆根的地域分布范圍相當(dāng)有限，常零星生長于石山巖縫之中，在自然條件下，山豆根開花結(jié)莢期的病蟲害嚴(yán)重、種子成熟時容易自然脫落，因此自然繁殖系數(shù)極低，且為了滿足市場需求，獲得經(jīng)濟(jì)利益，人們大量采挖野生山豆根資源，致使野生山豆根資源瀕臨滅絕，為滿足需要，人們不得不發(fā)展人工栽培技術(shù)，而開展山豆根人工栽培，首先要解決山豆根育苗問題。而山豆根不僅自然繁殖系數(shù)低，通過采收種子進(jìn)行人工繁殖難度也很大，成苗率不到20%，幾乎失敗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中山豆根人工繁育難度大，成苗率低的問題，提供一種組織培養(yǎng)育苗方法，提高山豆根育苗成苗率，而且能保持山豆根藥用成分，移栽后生長快，可大面積進(jìn)行山豆根人工栽培。
[0005]技術(shù)方案:本發(fā)明所述的一種山豆根組織培養(yǎng)育苗方法，具體包括以下步驟:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節(jié)氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養(yǎng)，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在室內(nèi)自然散射光照下培養(yǎng);
3.誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的植物激素進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為1.0~2.5mg/L，優(yōu)選為2.0mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.1~0.3mg/L,優(yōu)選為0.2mg/L,同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~6.2 ;
4.叢生芽誘導(dǎo)，當(dāng)步驟2培養(yǎng)的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基培養(yǎng)28天后即有叢生芽形成；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導(dǎo)50天后，平均高達(dá)3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉(zhuǎn)至另一誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽；
6.誘導(dǎo)生根，當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發(fā)育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。
[0006]有益效果:本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是:
本發(fā)明的山豆根育苗方法,取材方便,叢生芽誘導(dǎo)率達(dá)50%~80%，成苗達(dá)85%以上，可以滿足人工大量栽培的需要，而且經(jīng)過薄層色譜技術(shù)鑒定，本方法培養(yǎng)出的試管苗具有生物合成藥用有效成分苦參堿和氧化苦參堿的能力。
[0007]【具體實施方式】
下面結(jié)合具體實施事例對本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0008]實施例1:一種山豆根組織培養(yǎng)育苗，其具體步驟如下:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節(jié)氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養(yǎng)，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3 分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在室內(nèi)自然散射光照下培養(yǎng);
3.誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS為基本培養(yǎng)基，加入植物激素進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為1.0/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.lmg/L，同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~6.2 ;
4.叢生芽誘導(dǎo)，當(dāng)步驟2培養(yǎng)的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基培養(yǎng)28天后即有叢生芽形成，叢生芽誘導(dǎo)率為50% ；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導(dǎo)50天后，平均高達(dá)3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉(zhuǎn)至另一誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽；
6.誘導(dǎo)生根，當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發(fā)育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。
[0009]實施例2:—種山豆根組織培養(yǎng)育苗，其具體步驟如下:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節(jié)氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養(yǎng)，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在室內(nèi)自然散射光照下培養(yǎng);
3.誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的植物激素進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為2.0mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.2mg/L,同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~6.2 ；
4.叢生芽誘導(dǎo)，當(dāng)步驟2培養(yǎng)的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基培養(yǎng)28天后即有叢生芽形成，叢生芽誘導(dǎo)率為85% ；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導(dǎo)50天后，平均高達(dá)3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉(zhuǎn)至另一誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽； 6.誘導(dǎo)生根，當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發(fā)育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。
[0010]實施例3:—種山豆根組織培養(yǎng)育苗，其具體步驟如下:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節(jié)氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養(yǎng)，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在室內(nèi)自然散射光照下培養(yǎng);
3.誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的植物激素進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為2.5mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.3mg/L,同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~
6.2 ；
4.叢生芽誘導(dǎo)，當(dāng)步驟2培養(yǎng)的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基培養(yǎng)28天后即有叢生芽形成，叢生芽誘導(dǎo)率為67% ；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導(dǎo)50天后，平均高達(dá)3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉(zhuǎn)至另一誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽；
6.誘導(dǎo)生根，當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發(fā)育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。
【權(quán)利要求】
1.一種山豆根組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于包括以下步驟: (1)采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節(jié)氣過后，種子成熟，即可采種； (2)無菌苗的培養(yǎng)，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒，后在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次,每次浸洗3分鐘,然后將種子播種于培養(yǎng)基,在室內(nèi)自然散射光照下培養(yǎng); (3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS為基本培養(yǎng)基，加入植物激素進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基溫度保持24°C~26°C，PH 值 5.9 ~6.2 ; (4)叢生芽誘導(dǎo)，當(dāng)無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基培養(yǎng)叢生芽； (5)叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導(dǎo)后，平均高達(dá)3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉(zhuǎn)至另一誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖； (6)誘導(dǎo)生根，當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根； (7)試管苗的移栽，將發(fā)育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山豆根組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于所述的步驟(2)山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒的時間為15分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山豆根組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于所述的步驟(3)的植物激素芐基嘌呤(BA)濃度為1.0~2.5mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.1~0.3mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103503776SQ201310475021
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月12日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請人:黃振忠