生物殺線蟲劑及其制備方法
【專利摘要】生物殺線蟲劑及其制備方法，涉及生物殺線蟲劑制備領(lǐng)域，特別是屬于一種以微藻提取物為主要組分的生物殺線蟲劑及其制備方法。其特征在于，其組分為：1）以能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻干粉，加入極性有機(jī)溶劑后經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥等程序獲得水溶性有效成份；2）以上述步驟中過濾所得濾渣為原料，加入非極性有機(jī)溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥得脂溶性有效成分；3）極性溶劑與非極性溶劑；4）表面活性劑。本發(fā)明用水稀釋100-1000倍后用以灌根，可有效防治由南方根結(jié)線蟲（MeloidogyneincognitaChitwood）、北方根結(jié)線蟲(MeloidogynehaplaChitwood．)和花生根結(jié)線蟲?。∕.arenaria(Neal)Chitwood）等引起的各種植物線蟲病害。
【專利說明】生物殺線蟲劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物殺線蟲劑制備領(lǐng)域，特別是屬于一種以微藻提取物為主要組分的生物殺線蟲劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]海水和淡水微藻因其生物多樣性和代謝產(chǎn)物的復(fù)雜性而受到人們越來越多的關(guān)注。部分微藻在生長過程中會產(chǎn)生并積累毒素，這些毒素既能直接導(dǎo)致魚、蝦、貝類等水生生物死亡，也會對人畜產(chǎn)生毒害作用，但同時也是開發(fā)新型高效藥物的重要來源。由于涉及人畜安全，國內(nèi)外對微藻毒素的生理生化研究較多并取得豐碩成果。CN02139093.2號專利公開了一種微囊藻毒素的提取純化方法，該方法用乙酸溶液和甲醇浸泡微囊藻，經(jīng)除雜質(zhì)、粗毒素的制備、毒素的分離、薄層層析技術(shù)等步驟提取和純化微囊藻毒素。CN01145121.1號專利發(fā)明了一種從藍(lán)藻細(xì)胞中提取并獲得高純度微囊藻毒素(MiciOcystin(MC))的提純方法，其主要特征是:在含微囊藻毒素的藻細(xì)胞粗提取液通過內(nèi)含硅膠顆粒的固相萃取柱并使微囊藻毒素吸附固定在硅膠顆粒上后，先用一定低濃度的甲醇水溶液(30% — 50%,v/v)洗掉小柱中吸附的色素雜質(zhì)，再用一定高濃度的甲醇水溶液(60% — 100%,v/v)洗脫小柱中硅膠顆粒上吸附的藻毒素，通過觀察洗脫液的顏色變化來控制和分段收集洗脫液，并通過多次重復(fù)提純微囊藻毒素的操作步驟，最終獲得高純度微囊藻毒素的方法。
[0003]微藻毒素同時也是生物殺蟲劑的重要來源之一。Tekemoto從紅藻屬樹枝軟骨藻Chodaria armata和海人草Digenae simplex中分離得到的軟骨藻酸和紅藻氨酸具有強(qiáng)烈的殺蟲活性。Russell等人發(fā)現(xiàn)赤潮毒素對于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿的釋放具有促進(jìn)作用。Crews等發(fā)現(xiàn)紅藻海頭紅屬Plocamium telpheriae對煙草天蛾、夜蛾和蚊子幼蟲均有很強(qiáng)的抑殺作用。Keisuke等從海頭紅屬中分離出2種有殺蟲活性的多鹵化的單職telfairine和aplysiaterpinoid A并認(rèn)為此類化合物有可能作用于昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng)。郝赤和李曉軍等研究了銅綠微囊藻藻毒對于棉鈴蟲和菜青蟲的致死作用。
[0004]根結(jié)線蟲屬于地下害蟲中的一類。與地上害蟲不同的是，根結(jié)線蟲不但對作物的根部造成機(jī)械傷害，更重要的是能夠改變作物的生理生化和代謝活動，造成病變，從而影響作物的生長和產(chǎn)量，嚴(yán)重者可造成絕產(chǎn)。與地上害蟲相比，根結(jié)線蟲的防治更困難。因其致病機(jī)理不同，防治效果和防治方法也不同。對于地上害蟲有效的藥物，不一定對根結(jié)線蟲有效，因此防治根結(jié)線蟲的藥劑是一類不同于殺蟲劑的特殊制劑，稱為殺線蟲劑。目前尚未有微藻提取物對于根結(jié)線蟲有防治作用的任何報道、專利或者產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種新型的生物殺線蟲劑及其制備方法，達(dá)到利用海藻提取物制造生物殺線蟲劑的目的。
[0006]本發(fā)明所提供的生物殺線蟲劑，其特征在于，其組分為:1)以能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻干粉，加入極性有機(jī)溶劑后經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥等程序獲得水溶性有效成份。2)以上述步驟中過濾所得濾渣為原料，加入非極性有機(jī)溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥得脂溶性有效成分；3)極性溶劑與非極性溶劑；4)表面活性劑。
[0007]其中，所述的能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻是指雙鞭甲藻屬亞歷山大藻，硅藻中的擬菱形藻、菱形藻屬，金藻中的定鞭金藻屬，淡水中的水華束絲藻、卷曲魚腥藻、Lyngbya wolle1、柱孢藻、藍(lán)球藻、顫藻、念珠藻，其中的任意一種或幾種的組合。
[0008]所述的極性有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、乙酸；非極性有機(jī)溶劑是乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙酰乙酯，表面活性劑是任何能夠增加活性成分穩(wěn)定性和分散度的天然物質(zhì)，例如氨基酸、油脂和軟磷脂、纖維素、木質(zhì)素、甲殼素等，或是上述物質(zhì)的衍生物。
[0009]本發(fā)明所提供的生物殺線蟲劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
步驟一，運(yùn)用能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻，加入極性有機(jī)溶劑，經(jīng)提取、過濾、
離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得水溶性有效成份備用；
步驟二，上述步驟獲得的濾渣加入非極性溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得脂溶性有效成份備用；
步驟三，將上述步驟所得水溶性有效成分溶于極性有機(jī)溶劑中，脂溶性成分溶于非極性溶劑中，所得兩種溶液混合，加入1-10%表面活性劑，調(diào)節(jié)濃度，使有效成分占重量的
1-45%，即為本發(fā)明所公開的生物殺線蟲劑。
[0010]本發(fā)明所公開的生物殺線蟲劑，用水稀釋100-1000倍后用以灌根，可有效防治由南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita Chitwood)、北方根結(jié)線蟲(MeloidogynehaplaChitwood.)和花生根結(jié)線蟲病(M.arenaria (Neal) Chitwood)等引起的各種植物線蟲病害。`
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)例一，微藻毒素活性成分的提取:
選用海水微藻或淡水微藻干料5公斤，研磨成干粉，加入無水乙醇10升在室溫條件下提取4小時，過濾，用無水乙醇3升沖洗，合并濾液并在3000 rpm條件下離心5分鐘，離心液在70度下蒸餾，濃縮液經(jīng)冷凍干燥得水溶性有效成分。所得濾渣用倍量氯仿提取4小時，過濾，用氯仿沖洗三次，合并濾液在3000 rpm條件下離心5分鐘，離心液在50度下蒸餾，濃縮液經(jīng)冷凍干燥得脂溶性有效成分。
[0012]實(shí)例二生物殺蟲劑的配制方法:
用30毫升無水乙醇溶解實(shí)例一獲得的水溶性成份15克，用30毫升氯仿溶解實(shí)例一獲得的脂溶性活性成分15克，混合后加入脂肪酸甘油脂為主體的表面活性劑10克，最后用無水乙醇定容至100毫升。由此獲得活性成分占30%的生物殺線蟲劑。
[0013]實(shí)例三生物殺蟲劑殺蟲效果測定:
1.實(shí)驗(yàn)室殺線蟲效果測定
供試產(chǎn)品為以上獲得的生物殺線蟲劑，供試線蟲為南方根結(jié)線蟲(Meloidogyneincognita Chitwood)、北方根結(jié)線蟲(Meloidogyne haplaChitwood.)和花生根結(jié)線蟲(M.arenaria (Neal) Chitwood)。
[0014]在培養(yǎng)皿中加入100毫升蒸餾水，將供試線蟲幼蟲用水按50條/100毫升水的比例接種到培養(yǎng)皿中，在試驗(yàn)處理培養(yǎng)皿中加入10毫升上述生物殺線蟲劑，以等量不含微藻提取物的有機(jī)溶劑和表面活性劑溶液作對照。培養(yǎng)6小時，然后統(tǒng)計培養(yǎng)皿中存活的線蟲數(shù)量。
[0015]實(shí)驗(yàn)結(jié)果列表如下。
[0016]表一生物殺線蟲劑對南方根結(jié)線蟲的實(shí)驗(yàn)室藥效試驗(yàn)
【權(quán)利要求】
1.一種生物殺線蟲劑，其特征在于，其組分為:1)以能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻干粉，加入極性有機(jī)溶劑后經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥等程序獲得水溶性有效成份；2)以上述步驟中過濾所得濾渣為原料，加入非極性有機(jī)溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥得脂溶性有效成分；3)極性溶劑與非極性溶劑；4)表面活性劑。
2.一種生物殺線蟲劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一，運(yùn)用能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻，加入極性有機(jī)溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得水溶性有效成份備用； 步驟二，上述步驟獲得的濾渣加入非極性溶劑，經(jīng)提取、過濾、離心、蒸餾、冷凍干燥，獲得脂溶性有效成份備用； 步驟三，將上述步驟所得水溶性有效成分溶于極性有機(jī)溶劑中，脂溶性有效成分溶于非極性溶劑中，所得兩種溶液混合，加入1-10%表面活性劑，調(diào)節(jié)濃度，使有效成分占重量的1_45%，即為本發(fā)明所公開的生物殺線蟲劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物殺線蟲劑，其特征還在于，所述的能夠產(chǎn)生毒素的海水微藻或淡水微藻是指雙鞭甲藻屬亞歷山大藻，硅藻中的擬菱形藻、菱形藻屬，金藻中的定鞭金藻屬，淡水中的水華束絲藻、卷曲魚腥藻、Lyngbya wolle1、柱孢藻、藍(lán)球藻、顫藻、念珠藻。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物殺線蟲劑，其特征還在于，所述的極性有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、乙酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物殺線蟲劑，其特征還在于，所述的非極性有機(jī)溶劑是乙醚、丙酮、氯仿、石油醚、乙酰乙酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物殺線蟲劑，其特征還在于，所述的表面活性劑是氨基酸、油脂、軟磷脂、纖維素、木質(zhì)素、甲殼素，或是上述物質(zhì)的衍生物。
【文檔編號】A01P5/00GK103548882SQ201310501772
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月23日
【發(fā)明者】鞠志國, 丁立孝, 李康均, 丁振, 李媛, 張慶娜 申請人:鞠志國