鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法，所述方法包括以下具體步驟：1)、取鐵皮石斛蘭的部分組織為組培苗進(jìn)行組織培養(yǎng)；2)、以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加瓊脂7g、蔗糖30g、椰汁100ml，添加激素后調(diào)整pH至6.2，所述激素為6-BA0-2mg/L和/或NAA0-2mg/L，且6-BA和NAA的添加量不同時(shí)為0；3)、將石斛蘭組培苗的叢生植株分離開來，分別轉(zhuǎn)接到步驟2中所制備的培養(yǎng)基中進(jìn)行組織培養(yǎng)。所述方法能提高鐵皮石斛蘭組培苗的生根能力，促進(jìn)組培苗根的生長，以及增加根的數(shù)量，從而進(jìn)一步提高組培苗的存活和繁殖能力。
【專利說明】鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]石斛蘭(Dendoobium)，又名杜蘭、石斛、石蘭等，屬蘭科石斛蘭屬，石斛蘭屬是蘭科植物中最大的一個(gè)屬，原產(chǎn)地主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶，澳大利亞和太平洋島嶼，全世界約有1000多種[1]。中國約有76種其中大部分分布于西南、華南、臺灣等地。為多年生草本植物,植株由肉莖構(gòu)成,粗如中指,棒狀叢生,葉如竹葉,對生于莖節(jié)兩旁。花葶從葉腋抽出，每葶有花七八朵，多的達(dá)20多朵，呈總狀花序，每花6瓣，四面散開，中間的唇瓣略圓。許多品種的瓣邊均為紫色，瓣心為白色，也有少數(shù)品種為黃色、橙色。石斛蘭是極其珍貴的中藥材千年以來它一直和靈芝，人參，冬蟲夏草等一樣被列為上品中藥。其性味:甘淡微咸。性屬清潤，清中有補(bǔ)，補(bǔ)中有清。對人體有驅(qū)解虛熱，益精強(qiáng)陰等療效。而且其花色鮮艷，花形端正，花期長，深受人們喜愛，隨著花卉產(chǎn)業(yè)的興起，人們發(fā)現(xiàn)它有很高的觀賞價(jià)值，因而歸入洋蘭的范疇，逐漸從草藥圃跨進(jìn)到大花園中去，成為當(dāng)今非常時(shí)興的新花，與卡特蘭、蝴蝶蘭、萬帶蘭并列為觀賞價(jià)值最高的四大觀賞蘭類。被廣泛用于插花、盆栽觀賞、胸花等，并有“父親節(jié)之花”的美譽(yù)，同時(shí)也是國際蘭花市場上最重要的鮮切花之一。
[0003]我國野生石解蘭資源豐富，但由于較長時(shí)期缺乏保護(hù)，野生資源數(shù)量明顯下降。針對這一狀況應(yīng)加快對我國野生石解蘭種質(zhì)資源的評價(jià)與開發(fā)，從而降低人們?yōu)閳D暴利采挖的盲目性[2]。目前，石解蘭的分類比較困難，甚至某些種類只有開花時(shí)才可定種，為此需要建立種質(zhì)資源庫，收集和整理我國野生石解資源，為資源的有效保存、科普教育和科學(xué)研究打下基礎(chǔ)。同時(shí)，要以工廠化、規(guī)?；a(chǎn)為目標(biāo)，著力解決有開發(fā)前景的野生石解蘭的快繁體系研究，并且可以結(jié)合試管苗和人工種子野生放養(yǎng)達(dá)到可持續(xù)發(fā)展的目的。我國石解蘭產(chǎn)業(yè)發(fā)展較晚，從20世紀(jì)90年代才開始規(guī)?；a(chǎn)，雖然發(fā)展速度很快，但是仍存在諸多問題:如生產(chǎn)類型單一，主要以盆花為主，微型花卉和切花都極少生產(chǎn)，且盆花品種匾乏，已不能滿足市場多元化的需求；又如育種工作滯后，生產(chǎn)和銷售的觀賞石解蘭基本上都是馴養(yǎng)的野生石解蘭和進(jìn)口品種[3]。為了能夠讓我國的觀賞石解蘭產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，首先應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對野生石解蘭資源的保護(hù)、開發(fā)與利用，加強(qiáng)和深化對觀賞石解蘭的育種研究，提高育種水平，培育出觀賞價(jià)值高、具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新優(yōu)品種，進(jìn)而促進(jìn)生產(chǎn)和科研有機(jī)結(jié)合，使生產(chǎn)企業(yè)能夠積極栽培我國自我培育的有市場前景的新優(yōu)品種。
[0004]培養(yǎng)基是藥用石斛屬植物組織培養(yǎng)的核心技術(shù)，它提供了藥用石斛離體培養(yǎng)條件下保持良好生長的必要營養(yǎng)。培養(yǎng)基的主要成分有無機(jī)營養(yǎng)元素、碳源、有機(jī)附加物和植物生長調(diào)節(jié)劑。目前，常用的藥用石斛培養(yǎng)基有MS、B5、N6、KC、馬鈴薯培養(yǎng)基等。其中，MS是應(yīng)用最為廣泛的基本培養(yǎng)基。張治國等研究了 6種不同基本培養(yǎng)基對鐵皮石斛原球莖繼代增殖的影響，結(jié)果表明:1/2MS培養(yǎng)基適宜原球莖分化；VW培養(yǎng)基上分化的原球莖平均鮮重最高[4]。王國梅等以野生金釵石斛莖段誘導(dǎo)長出的原球莖為材料，比較了 MS、1/2MS、B5、Miller4種不同基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)金釵石斛原球莖生長增殖的情況，發(fā)現(xiàn)B5培養(yǎng)基中原球莖的凈增殖倍數(shù)明顯高于其他三種培養(yǎng)基[5]。曾宋君等發(fā)現(xiàn)硝態(tài)氨遠(yuǎn)高于胺態(tài)氨的N6培養(yǎng)基對石斛胚的萌發(fā)和生長最好，而以石斛莖尖作為培養(yǎng)材料，N6培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織能力明顯不如MS[6]。Devi等利用Dendronbium moschatum的莖尖在5種培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成擬原球莖，結(jié)果表明Nitch培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果最好。朱艷等以鐵皮石斛莖段誘導(dǎo)叢生芽作為目的，篩選出1/2MS誘導(dǎo)叢生芽的效果好，生成的苗粗壯。王亦非等考察了 MS、N6、B5、KC4種基本培養(yǎng)基及大量元素減半的上述4種培養(yǎng)基對誘導(dǎo)細(xì)胞團(tuán)形成的作用，發(fā)現(xiàn):4種培養(yǎng)基使用全量大量元素的比大量元素減半的誘導(dǎo)效果要好，其中MS培養(yǎng)基是表現(xiàn)最好的，誘導(dǎo)效果可達(dá)38.5% [7]0胡如善等則認(rèn)為MS、KC、N6三種基本培養(yǎng)基在石斛莖段促側(cè)芽萌發(fā)方面基本沒有差異，而在石斛試管叢生芽繼代增殖時(shí)，培養(yǎng)基以MS最好，試管叢生芽繼代增殖系數(shù)最大，其次為N6，KCU/2MS誘導(dǎo)效果最差。韋曉新等研究了 MS、1/2MS、B5、N6和White培養(yǎng)基對鐵皮石斛原球莖的生長和多糖積累的影響，發(fā)現(xiàn):1/2MS和N6培養(yǎng)基適合原球莖生長和多糖積累，White培養(yǎng)基中原球莖的干重最高，而在MS中培養(yǎng)的原球莖干重和多糖含量均處于較低的水平，并有部分原球莖發(fā)生了褐變現(xiàn)象，認(rèn)為MS培養(yǎng)基并不利于鐵皮石斛生產(chǎn)多糖成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法，該方法能提高鐵皮石斛蘭組培苗的生根能力，促進(jìn)組培苗根的生長，以及增加根的數(shù)量，從而進(jìn)一步提高組培苗的存活和繁殖能力。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。
[0007]—種鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法，包括以下具體步驟:
[0008]1、取鐵皮石斛蘭的部分組織為組培苗進(jìn)行組織培養(yǎng)；
`[0009]2、以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加瓊脂7g、蔗糖30g、椰汁100ml，添加激素后調(diào)整pH至6.2，所述激素為6-BA0-2mg/L和/或NAA0_2mg/L，且6-BA和NAA的添加量不同時(shí)為0 ；
[0010]3、將石斛蘭組培苗的叢生植株分離開來，分別轉(zhuǎn)接到步驟2中所制備的培養(yǎng)基中進(jìn)行組織培養(yǎng)。
[0011]較佳的，步驟I中所述組培苗為經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的不定芽再生苗。
[0012]較佳的，步驟2中所述激素為6-BAlmg/L和NAAlmg/L。
[0013]較佳的，步驟3中每瓶培養(yǎng)基中接入3-5株所述叢生植株。
[0014]較佳的，步驟3中組織培養(yǎng)的條件是:25°C恒溫培養(yǎng)，每日光照培養(yǎng)16h，光照強(qiáng)度20001x，暗培養(yǎng) 8h。
[0015]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:解決鐵皮石斛蘭組織培養(yǎng)上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種組織培養(yǎng)方法，提高鐵皮石斛蘭組培苗的生根能力，促進(jìn)組培苗根的生長，并增加根的數(shù)量，從而促進(jìn)組培苗的存活和繁殖能力的進(jìn)一步提高。
【專利附圖】

【附圖說明】:
[0016]圖1是【具體實(shí)施方式】中不同培養(yǎng)基的生根狀況:A至I為分別從培養(yǎng)基A至I中選取的樣品。
【具體實(shí)施方式】:
[0017]分別在相同的石斛蘭基本培養(yǎng)基中添加不同的激素，通過比較它們的生根能力，得出6-BA1.0mg/L、NAA1.0mg/L的激素配比是最適合石斛蘭生根的培養(yǎng)的體系,解決了石斛蘭生根難的難題，提高了石斛蘭組培苗在自然環(huán)境中的成活率。
[0018]實(shí)施例1:
[0019]1、材料與方法
[0020]選取經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的不定芽再生苗為試驗(yàn)材料。
[0021]2主要試劑及儀器
[0022]6-BA、NAA,上海國藥；SW_CJ-2D超凈工作臺，蘇州凈化；全自動高壓滅菌鍋SX-500,日本Tokyo ;高壓滅菌器，德國Hermle公司。
[0023]3 方法
[0024]3.1培養(yǎng)基的配置
[0025]以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加瓊脂7g、蔗糖30g、椰汁100ml，添加激素后，調(diào)整pH至6.2，不同處理激素配比如表1所示。
[0026]表1石斛蘭生根培養(yǎng)基不同激素配比
[0027]
【權(quán)利要求】
1.一種鐵皮石斛蘭的組織培養(yǎng)方法，包括以下具體步驟: 1)、取鐵皮石斛蘭的部分組織為組培苗進(jìn)行組織培養(yǎng)； 2)、以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加瓊脂7g、蔗糖30g、椰汁100ml，添加激素后調(diào)整pH至6.2，所述激素為6-BA0-2mg/L和/或NAA0_2mg/L，且6-BA和NAA的添加量不同時(shí)為0 ; 3)、將石斛蘭組培苗的叢生植株分離開來，分別轉(zhuǎn)接到步驟2中所制備的培養(yǎng)基中進(jìn)行組織培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，I)中所述組培苗為經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的不定芽再生苗。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其中，2)中所述激素為6-BAlmg/L和NAAlmg/L。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，3)中每瓶培養(yǎng)基中接入3-5株所述叢生植株。
5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其中，3)中組織培養(yǎng)的條件是:25°C恒溫培養(yǎng)，每日光照培養(yǎng)16h,光照強(qiáng)度20001x,暗培養(yǎng)8h。
【文檔編號】A01H4/00GK103583359SQ201310504180
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】朱麗娜, 陳己任, 陳仕貴 申請人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)