一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種繁殖速度快、成本低且能保持波葉鳥巢蕨葉片整齊統(tǒng)一波浪形狀的組培方法。本發(fā)明包括以下步驟：（1）從波葉鳥巢蕨根狀莖上誘導并分化出小顆粒狀的原球莖；（2）取上述原球莖置于MS培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，每個原球莖分化出3～4個新的原球莖，進行無菌苗的增殖培養(yǎng)；（3）將原球莖置于MS培養(yǎng)中培養(yǎng)，每顆原球莖長出1～3棵小苗，再將長出的每棵小苗置于另一種MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即進行移栽馴化，洗凈無菌苗根部的培養(yǎng)液并移栽進泥炭土和珍珠巖組成的基質內(nèi)。本發(fā)明可應用于鳥巢蕨培育領域。
【專利說明】一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物培養(yǎng)方法，尤其涉及一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法。【背景技術】
[0002]鳥巢蕨是一種附生的蕨類植物，原生于亞洲東南部、澳大利亞東部、印度尼西亞、印度和非洲東部，又稱巢蕨、山蘇花、王冠蕨，為鐵角蕨科，屬多年生陰生草本觀葉植物。近年來鳥巢蕨在觀葉植物的應用中深受人們的喜愛。除了自然盆栽作為鮮切葉用于插花中供人們觀賞外，鳥巢蕨還可以人工加工形成各種各樣的形態(tài)，根據(jù)需要配置在不同位置形成不同的景觀效應。這表明人們對鳥巢蕨的觀賞要求越來越高。而波葉鳥巢維多利亞作為鳥巢蕨家族中的一員，其葉邊緣優(yōu)美的波浪形狀，更是深受人們的喜愛。
[0003]在鳥巢蕨培植方面，以前大多是采用分株進行繁殖的方法。一棵鳥巢蕨一年只能繁殖出3~4棵，因其繁殖系數(shù)低，遠不能滿足市場的需要。因此，目前鳥巢蕨的繁殖方法多采用孢子播種法以及組織培養(yǎng)法。而目前鳥巢蕨的組織培養(yǎng)法也是利用孢子為原材料進行快繁，具體工藝是:把經(jīng)過消毒滅菌的孢子囊從孢子葉上切下，破碎取出孢子后接種到培養(yǎng)基上，孢子萌發(fā)較快，萌發(fā)率高。萌發(fā)后的原葉體接種到不添加激素的MS培養(yǎng)基上能得到較大的增殖系數(shù)。無論是孢子播種法還是利用孢子為原材料進行的組織培養(yǎng)法，都能快速的得到大量鳥巢蕨苗。但是對于波葉鳥巢蕨，孢子繁殖和利用孢子為原材料進行的快繁苗都有30%左右無法繼承波葉鳥巢葉片本身的漂亮的波浪紋，剩下的70%波浪紋也不是很統(tǒng)一，有大波浪，小波浪，因此種植過程中需要進行篩選才能得到整齊統(tǒng)一的波葉鳥巢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種繁殖速度快、成本低且能保持波葉鳥巢蕨葉片整齊統(tǒng)一波浪形狀的組培方法。
`[0005]本發(fā)明所采用的技術方案是，該方法包括以下步驟:
(O誘導與分化:取波葉鳥巢蕨根狀莖為外植體并進行無菌處理，取經(jīng)過無菌處理的根狀莖切成若干塊狀并放入MS培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24~26°C，光照1800~20001ux，光照時間為每天12h，培養(yǎng)16~18周時間，可見切口處分化出小顆粒狀的原球莖；
(2)無菌苗的增殖培養(yǎng):取上述原球莖置于MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3~4周，培養(yǎng)溫度為24~26°C，光照2200~26001ux，光照時間為每天12h，每個原球莖分化出3~4個新的原球莖；
(3)無菌苗的移栽馴化:將原球莖置于MS培養(yǎng)基I中培養(yǎng)3~4周，每顆原球莖長出
I~3棵小苗，再將長出的每棵小苗置于MS培養(yǎng)基II中培養(yǎng)3~4周，即進行移栽馴化，洗凈無菌苗根部的培養(yǎng)液并移栽進泥炭土和珍珠巖組成的基質內(nèi)，保持溫度為18~28°C，光照 5000 ~7000Lux。
[0006]進一步地，在所述步驟(1)中，對波葉鳥巢蕨根狀莖進行無菌處理的步驟為:剝干凈根狀莖外面的葉鞘和毛鱗，用75%的酒精處理10秒，再在0.1 %的升汞溶液中浸泡8~10分鐘后取出，最后用無菌水沖洗4~5次。
[0007]進一步地，在所述步驟(1)中的MS培養(yǎng)基中加入有BA和IAA，MS培養(yǎng)基中的BA的濃度為0.5~1.5mg/L, IAA的濃度為I~3mg/L，所述鳥巢蕨根狀莖切成的塊狀長度為
0.3cm0
[0008]進一步地，在所述步驟(2)中，在所述MS培養(yǎng)基中加入有BA、KT和糖，MS培養(yǎng)基中的BA濃度為0.2~1.0mg/L、KT的濃度為0.1~0.5mg/L，糖的濃度為3%。
[0009]進一步地，在所述步驟(3)中，在所述MS培養(yǎng)基I中加入有活性炭和糖，MS培養(yǎng)基I中的活性炭的濃度為2g/L，糖的濃度為3%。
[0010]進一步地，在所述步驟(3)中，在所述MS培養(yǎng)基II中加入有IBA和糖，MS培養(yǎng)基II中的IBA的濃度為lmg/L，糖的濃度為3%。
[0011]進一步地，經(jīng)過所述MS培養(yǎng)基I培養(yǎng)后，每顆原球莖長出的小苗高0.5厘米，在經(jīng)
過所述MS培養(yǎng)基II培養(yǎng)后，每顆小苗長成I~1.5厘米高，并有二至三條黑色小須根。
[0012]更進一步地，該方法還包括以下步驟:在移栽前3~4天打開瓶蓋使無菌苗逐步適應外界條件。
[0013]更進一步地，所述步驟(3)中的`泥炭土和珍珠巖的質量比為4:1。
[0014]更進一步地，該方法還包括以下步驟:移栽后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕度85~95%，保持葉表面水霧不干。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明先采用加入有BA和IAA的MS培養(yǎng)基，可以有效促進波葉鳥巢蕨的根狀莖分化出原球莖；采用BA、KT和糖為的MS作為增殖培養(yǎng)基，原球莖能旺盛增殖；最后原球莖置于無激素，含有糖和活性炭的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)四周即可快速長出小苗，小苗置于含有IBA和糖的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)可快速生根。本發(fā)明通過利用根狀莖直接誘導出原球莖，原球莖又直接快速增殖長出小苗，簡化培養(yǎng)條件和培養(yǎng)工藝，可以降低生產(chǎn)成本，保持苗的整體葉子波浪形狀的統(tǒng)一性，因此本發(fā)明的波葉鳥巢蕨的快繁方法繁殖速度快，成本低，保持形狀統(tǒng)一，減少后期的篩選工作。
【具體實施方式】
[0016]本發(fā)明公開了一種波葉鳥巢蕨的組培快繁方法。以下列出三個試驗過程對本發(fā)明方法作進一步的說明。
[0017]試驗一:
(一)誘導和分化(1)取波葉鳥巢根狀莖作為外植體；
(2)將所述根狀莖剝干凈外面的葉鞘及毛鱗，先用75%的酒精處理10秒，再在0.1%的升汞溶液中浸泡8~10分鐘取出，然后用無菌水沖洗4~5次；
(3)取經(jīng)升汞消毒后的所述根狀莖切成約0.3cm長的小塊，放入加有BA 0.5mg/L和IAA1.0mg/L的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為24~26度，光照1800~20001ux，光照時間每天12小時，培養(yǎng)16~18周后，可見切口處分化出小顆粒的原球莖。
[0018](二)無菌苗的增殖培養(yǎng)
取一顆一顆的原球莖置于BA 0.2mg/L和KT 0.lmg/L，糖為3%的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4周后，每個原球莖可多分化出3~4個新的原球莖；培養(yǎng)溫度要求:24~26度，光照25001UX，每天光照12小時。
[0019](三)無菌苗的移栽馴化
(1)所述原球莖置于無激素，糖3%，活性炭2g/L的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周后，每顆原球莖開始長出I~3棵0.5厘米小苗，再將小苗置于IBA lmg/L,糖3%的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周，每棵苗長成I~1.5厘米的小苗，并有兩三條黑色的小須根，可進行移栽馴化；
(2)栽前3~4天打開瓶蓋使無菌苗逐步適應外界條件；
(3)洗凈所述無菌苗根部的培養(yǎng)基液并移栽入泥炭土和珍珠巖比例為4:1的基質內(nèi)；
(4)保持溫度為18~28度，光照5000~7000Lux，移栽后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕度85~95%，保持葉表面水霧不干。
[0020]試驗二:
(一)誘導和分化
(1)取波葉鳥巢根狀莖作為外植體；
(2)將所述根狀莖剝干凈外面的葉鞘及毛鱗，先用75%的酒精處理10秒，再在0.1%的升汞溶液中浸泡8~10分鐘取出，然后用無菌水沖洗4~5次；
(3)取經(jīng)升汞消毒后的所述根狀莖切成約0.3cm長的小塊，放入加有BA 1.0mg/L和IAA
2.0mg/L的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為24~26度，光照1800~20001ux，光照時間每天12小時，培養(yǎng)16~18周后，可見切口處分化出小顆粒的原球莖。
[0021](二)無菌苗的增殖培養(yǎng)
取一顆一顆的原球莖置于BA 0.6mg/L和KT 0.3mg/L，糖為3%的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4周后，每個原球莖可多分化出3~4個新的原球莖；培養(yǎng)溫度要求:24~26度，光照25001UX，每天光照12小時。
[0022](三)無菌苗的移栽馴化
(1)所述原球莖置于無激素，糖3%，活性炭2g/L的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周后，每顆原球莖開始長出I~3棵0.5厘米小苗，再將小苗置于IBA lmg/L,糖3%的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周，每棵苗長成I~1.5厘米的小苗，并有兩三條黑色的小須根，可進行移栽馴化；
(2)栽前3~4天打開瓶蓋使無菌苗逐步適應外界條件；
(3)洗凈所述無菌苗根部的培養(yǎng)基液并移栽入泥炭土和珍珠巖比例為4:1的基質內(nèi)；
(4)保持溫度為18~28度，光照5000~7000Lux，移栽后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕度85~95%，保持葉表面水霧不干。
[0023]試驗三:(一)誘導和分化
(1)取波葉鳥巢根狀莖作為外植體；
(2)將所述根狀莖剝干凈外面的葉鞘及毛鱗，先用75%的酒精處理10秒，再在0.1%的升汞溶液中浸泡8~10分鐘取出，然后用無菌水沖洗4~5次；
(3)取經(jīng)升汞消毒后的所述根狀莖切成約0.3cm長的小塊，放入加有BA 1.5mg/L和IAA3.0mg/L的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為24~86度，光照1800~20001ux，光照時間每天12小時，培養(yǎng)16~18周后，可見切口處分化出小顆粒的原球莖。
[0024](二)無菌苗的增殖培養(yǎng)
取一顆一顆的原球莖置于BA 1.0mg/L和KT 0.5mg/L，糖為3%的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4周后，每個原球莖可多分化出3~4個新的原球莖；培養(yǎng)溫度要求:24~26度，光照25001UX，每天光照12小時。
[0025](三)無菌苗的移栽馴化
(1)所述原球莖置于無激素，糖3%，活性炭2g/L的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周后，每顆原球莖開始長出I~3棵0.5厘米小苗，再將小苗置于IBA lmg/L,糖3%的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周，每棵苗長成I~1.5厘米的小苗，并有兩三條黑色的小須根，可進行移栽馴化；
(2)栽前3~4天打開瓶蓋使無菌苗逐步適應外界條件；
(3)洗凈所述無菌苗根部的培養(yǎng)基液并移栽入泥炭土和珍珠巖比例為4:1的基質內(nèi)；
(4)保持溫度為18~28度，光照5000~7000Lux，移栽后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕度85~95%，保持葉表面水霧不干。
[0026]對照組:孢子播種
1、選取形狀優(yōu)美，無異形葉片的波葉鳥巢，收集孢子；
2、將所收集的孢子播種在裝有濕潤的泥炭土的穴盤表面，并用玻璃蓋子蓋好或薄膜包好播種了孢子的穴盤，保持整個孢子萌發(fā)期間的濕度；
3、將播種好的孢子穴盤放入冷庫，保持溫度在18~22度之間，光照2000~5000LUX；
4、大約12周后，孢子開始萌發(fā)；
5、16周后，孢子基本萌發(fā)完全。放入溫室，保持溫度18~25度之間，光照5000~7000Lux,保持濕度85~95% ；
6、18~20周左右，萌發(fā)的孢子開始長出小葉，這個時候可以去掉玻璃蓋子或包著的薄
膜；
7、當長出3片左右的小葉時，可以開始分出波葉鳥巢蕨苗，進行移栽；
8、苗期是無法分出哪些苗具有波葉特征，哪些苗沒有的。只能在上盆到更大盆后，才能發(fā)現(xiàn)，然后逐步篩選出來。
[0027]表1列出了上述試驗一至三和對照組中波葉鳥巢蕨生長的情況對照。
[0028]表1
【權利要求】
1.一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)誘導與分化:取波葉鳥巢蕨根狀莖為外植體并進行無菌處理，取經(jīng)過無菌處理的根狀莖切成若干塊狀并放入MS培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24~26°C，光照1800~20001ux，光照時間為每天12h，培養(yǎng)16~18周時間，可見切口處分化出小顆粒狀的原球莖； (2)無菌苗的增殖培養(yǎng):取上述原球莖置于MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3~4周，培養(yǎng)溫度為24~26°C，光照2200~26001ux，光照時間為每天12h，每個原球莖分化出3~4個新的原球莖； (3)無菌苗的移栽馴化:將原球莖置于MS培養(yǎng)基I中培養(yǎng)3~4周，每顆原球莖長出I~3棵小苗，再將長出的每棵小苗置于MS培養(yǎng)基II中培養(yǎng)3~4周，即進行移栽馴化，洗凈無菌苗根部的培養(yǎng)液并移栽進泥炭土和珍珠巖組成的基質內(nèi)，保持溫度為18~28°C，光照 5000 ~7000Lux。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(I)中，對波葉鳥巢蕨根狀莖進行無菌處理的步驟為:剝干凈根狀莖外面的葉鞘和毛鱗，用75%的酒精處理10秒，再在0.1 %的升汞溶液中浸泡8~10分鐘后取出，最后用無菌水沖洗4~5次。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(I)中的MS培養(yǎng)基中加入有BA和IAA，MS培養(yǎng)基中的BA的濃度為0.5~1.5mg/L, IAA的濃度為I~3mg/L，所述鳥巢蕨根狀莖切成的塊狀長度為0.3cm。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(2)中，在所述MS培養(yǎng)基中加入有BA、KT和糖，MS培養(yǎng)基中的BA濃度為0.2~1.0mg/L、KT的濃度為0.1~0.5mg/L，糖的濃度為3%。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(3)中，在所述MS培養(yǎng)基I中加入有活性炭和糖，MS培養(yǎng)基I中的活性炭的濃度為2g/L，糖的濃度為3%。
6.根據(jù)權利要求5所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(3)中，在所述MS培養(yǎng)基II中加入有IBA和糖，MS培養(yǎng)基II中的IBA的濃度為lmg/L，糖的濃度為3%。
7.根據(jù)權利要求6所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，經(jīng)過所述MS培養(yǎng)基I培養(yǎng)后，每顆原球莖長出的小苗高0.5厘米，在經(jīng)過所述MS培養(yǎng)基II培養(yǎng)后，每顆小苗長成I~1.5厘米高，并有二至三條黑色小須根。
8.根據(jù)權利要求7所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，該方法還包括以下步驟:在移栽前3~4天打開瓶蓋使無菌苗逐步適應外界條件。
9.根據(jù)權利要求8所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(3)中的泥炭土和珍珠巖的質量比為4:1。
10.根據(jù)權利要求8所述的一種波葉鳥巢蕨種苗的組培快繁方法，其特征在于，該方法還包括以下步驟:移栽 后的第一周用無紡布覆蓋，控制濕度85~95%，保持葉表面水霧不干。
【文檔編號】A01H4/00GK103548692SQ201310536914
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權日:2013年11月4日
【發(fā)明者】金劍平, 徐紅, 姚慧芬, 文方德 申請人:珠海市園藝研究所