一種酵母菌液體生防菌劑的配方及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酵母菌液體生防菌劑的配方及其制備方法，該配方為：酵母菌、蔗糖、海藻糖、半乳糖、抗壞血酸、0.05mol/L磷酸緩沖液；該方法為：采用NYDB液體培養(yǎng)基，將酵母菌株4-4A活化后，取兩環(huán)接種于50ml種子培養(yǎng)基中；將培養(yǎng)好的酵母發(fā)酵液裝入50ml離心管中，4000r/min離心15min，倒掉上清液，用無菌水清洗兩次，所得的沉淀加入0.05mol/L的磷酸緩沖液制成菌懸液；選用蔗糖，半乳糖，海藻糖作為保護劑，用磷酸緩沖液配制溶液；取溶液各21.6ml，加入109CFU/ml的酵母母液2.4ml，充分混勻，分裝到1.5ml的離心管中；酵母制劑中活菌數(shù)的測定。本發(fā)明可以有效減少芒果采后炭疽病的發(fā)生率，在初花期至采收期施用4次～6次防治芒果炭疽病，發(fā)病率和嚴重度分別下降了64%～67%和89%～90%，提高了對病害的防治效果。
【專利說明】一種酵母菌液體生防菌劑的配方及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生防菌劑制備【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種酵母菌液體生防菌劑的配方及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，炭疽病在采前和采后危害芒果，造成很大的產(chǎn)量和品質(zhì)損失，是芒果生產(chǎn)上的重要病害之一，其病原菌主要為膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides (Penz)Penz.&Sacc.)。長期以來，該病害的田間防治主要依賴化學殺菌劑，隨著苯并咪唑類化學藥劑的長期大量使用，膠孢炭疽菌已經(jīng)對該類殺菌劑產(chǎn)生了抗藥性，使得防效下降。病原菌的潛伏侵染會造成芒果在采后流通過程中的大量損失，采后炭疽病的防治也需要化學藥劑，隨著人們對環(huán)境保護和食品安全越來越重視，研發(fā)更加安全、環(huán)保的芒果炭疽病采前采后防治新技術(shù)，如生物防治，顯得更加迫切。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明實施例的目的在于提供一種酵母菌液體生防菌劑的配方及制備方法，旨在解決現(xiàn)有的芒果炭疽病 防治使用化學殺菌劑提高了病菌的抗藥性，不利于環(huán)境的保護和食品安全性的問題。
[0004]本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種酵母菌液體生防菌劑的配方，該酵母菌液體生防菌劑的配方包括:酵母菌、蔗糖、海藻糖、半乳糖、抗壞血酸、0.05mol/L磷酸緩沖液。
[0005]本發(fā)明實施例的另一目的在于提供一種酵母菌液體生防菌劑的制備方法，該酵母菌液體生防菌劑的制備方法包括以下步驟:
[0006]采用NYDB液體培養(yǎng)基，將酵母菌株4-4A活化后，取兩環(huán)接種于50ml種子培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)24h，取100 ill種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C下，200r/min搖床培養(yǎng)48h ；
[0007]將培養(yǎng)好的酵母發(fā)酵液裝入50ml離心管中，4000r/min離心15min，倒掉上清液，用無菌水清洗兩次，所得的沉淀加入0.05mol/L的磷酸緩沖液制成菌懸液，使酵母的濃度為 lX109CFU/ml，備用；
[0008]選用蔗糖，半乳糖，海藻糖作為保護劑，用磷酸緩沖液配制溶液，其中Vc的濃度為
0.01% ;取溶液各21.6ml，加入IO9CFUM的酵母母液2.4ml，充分混勻，分裝到1.5ml的離心管中，每管1ml，將每種保護劑所分裝的24管分為四組保存到-201:，41:，101:，251:中；
[0009]酵母制劑中活菌數(shù)的測定，制劑中初始的活菌數(shù)通過系列稀釋涂板確定。25°C保存的制劑每IOd取一管測定活菌數(shù)，一 20°C，4°C，10°C每月取樣測定活菌數(shù)，統(tǒng)計制劑中酵母的存活率。
[0010]進一步，該酵母菌液體生防菌劑的制備方法制備的酵母菌液體生防菌劑使用方法為:
[0011]采前寄主對病原菌比較敏感的抽梢期、花期和幼果期時使用生防酵母，先接種生防酵母在葉片和果實傷口處迅速消耗掉營養(yǎng)并占領(lǐng)生存空間；[0012]從開花期開始每月噴施一次，在初花期至采收期施用4次~6次防治芒果炭疽病。
[0013]進一步，酵母菌液體生防菌劑可以與低劑量的農(nóng)藥配合使用。
[0014]本發(fā)明提供的酵母菌液體生防菌劑的配方及制備方法，通過酵母4-4A的富集培養(yǎng)，酵母4-4A液體劑型的制備，酵母制劑中活菌數(shù)的測定制備的酵母菌液體生防菌劑，從開花期開始每月噴施一次可以有效減少芒果采后炭疽病的發(fā)生率，在初花期至采收期施用4次~6次防治芒果炭疽病，發(fā)病率和嚴重度分別下降了 64%~67%和89%~90%，另外，可以將生防酵母與低劑量的農(nóng)藥配合使用，提高對病害的防治效果。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是本發(fā)明實施例提供的酵母菌液體生防菌劑的制備方法流程圖；
[0016]圖2是本發(fā)明實施例提供的海藻糖作為保護劑液體劑型中酵母的存活率示意圖；
[0017]圖3是本發(fā)明實施例提供的半乳糖作保護劑液體劑型中酵母的存活率示意圖；
[0018]圖4是本發(fā)明實施例提供的酵母在緩沖液和水中的存活率示意圖。
【具體實施方式】
[0019]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0020]下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明的應用原理作進一步描述。
[0021]本發(fā)明的酵母菌液·體生防菌劑的配方包括:酵母菌、蔗糖、海藻糖、半乳糖、抗壞血酸、0.05mol/L 磷酸緩沖液(PBS, pH=6.5)。
[0022]如圖1所示，本發(fā)明的酵母菌液體生防菌劑的制備方法包括以下步驟:
[0023]SlOl:采用NYDB液體培養(yǎng)基，將酵母菌株4-4A活化后，取兩環(huán)接種于50ml種子培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)24h，取100 ill種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中(50ml/250ml )，28°C下，200r/min搖床培養(yǎng)48h ；
[0024]S102:將培養(yǎng)好的酵母發(fā)酵液裝入50ml離心管中，4000r/min離心15min,倒掉上清液，用無菌水清洗兩次，所得的沉淀加入0.05mol/L的磷酸緩沖液制成菌懸液，使酵母的濃度為lX109CFU/ml，備用；
[0025]S103:選用蔗糖，半乳糖，海藻糖作為保護劑，用磷酸緩沖液配制溶液，其中Vc的濃度為0.01% ;取上述溶液各21.6ml，加入109CFU/ml的酵母母液2.4ml,充分混勻，分裝到1.5ml的離心管中，每管1ml，將每種保護劑所分裝的24管分為四組保存到_20°C，4°C，
10。。，25。。中；
[0026]S104:酵母制劑中活菌數(shù)的測定，制劑中初始的活菌數(shù)通過系列稀釋涂板確定。25°C保存的制劑每IOd取一管測定活菌數(shù)，-20°C，4°C，10°C每月取樣測定活菌數(shù)，統(tǒng)計制劑中酵母的存活率。
[0027]本發(fā)明的酵母菌液體生防菌劑的制備方法具體包括以下步驟:
[0028]第一步，酵母4-4A的富集培養(yǎng)
[0029]先采用NYDB液體培養(yǎng)基，將酵母菌株4_4A活化后，取兩環(huán)接種于50ml種子培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)24h，取100 ill種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中(50ml/250ml)，28°C下，200r/min搖床培養(yǎng)48h，發(fā)酵培養(yǎng)基按下述比例配制:牛肉膏8g/L，酵母浸膏5g/L，海藻糖10g/L，121 °C，滅菌 2Omin ；
[0030]第二步，酵母4-4A液體劑型的制備
[0031]將培養(yǎng)好的酵母發(fā)酵液裝入50ml離心管中,4000r/min離心15min,倒掉上清液，用無菌水清洗兩次，所得的沉淀加入0.05mol/L的磷酸緩沖液制成菌懸液，使酵母的濃度為 lX109CFU/ml，備用；
[0032]表1酵母液體劑型的保護劑和濃度
【權(quán)利要求】
1.一種酵母菌液體生防菌劑的配方，其特征在于，該酵母菌液體生防菌劑的配方包括:酵母菌、蔗糖、海藻糖、半乳糖、抗壞血酸、0.05mol/L磷酸緩沖液。
2.—種酵母菌液體生防菌劑的制備方法，其特征在于，該酵母菌液體生防菌劑的制備方法包括以下步驟: 采用NYDB液體培養(yǎng)基，將酵母菌株4-4A活化后，取兩環(huán)接種于50ml種子培養(yǎng)基中，28°C培養(yǎng)24h，取100 ill種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C下，200r/min搖床培養(yǎng)48h ； 將培養(yǎng)好的酵母發(fā)酵液裝入50ml離心管中，4000r/min離心15min，倒掉上清液，用無菌水清洗兩次，所得的沉淀加入0.05mol/L的磷酸緩沖液制成菌懸液，使酵母的濃度為lX109CFU/ml，備用； 選用蔗糖，半乳糖，海藻糖作為保護劑，用磷酸緩沖液配制溶液，其中Vc的濃度為0.01% ;取溶液各21.6ml，加入IO9CFUM的酵母母液2.4ml，充分混勻，分裝到1.5ml的離心管中，每管Iml，將每種保護劑所分裝的24管分為四組保存到_20°C，4°C，10°C，25°C中； 酵母制劑中活菌數(shù)的測定，制劑中初始的活菌數(shù)通過系列稀釋涂板確定，25°C保存的制劑每IOd取一管測定活菌數(shù)，一 20°C，4°C，10°C每月取樣測定活菌數(shù)，統(tǒng)計制劑中酵母的存活率。
3.如權(quán)利要求2所述的酵母菌液體生防菌劑的制備方法，其特征在于，該酵母菌液體生防菌劑的制備方法制備的酵母菌液體生防菌劑使用方法為: 采前寄主對病原菌比較敏感的抽梢期、花期和幼果期時使用生防酵母，先接種生防酵母在葉片和果實傷口處消耗掉 營養(yǎng)并占領(lǐng)生存空間； 從開花期開始每月噴施一次，在初花期至采收期施用4次~6次防治芒果炭疽病。
4.如權(quán)利要求3所述的酵母菌液體生防菌劑的制備方法，其特征在于，酵母菌液體生防菌劑可以與低劑量的農(nóng)藥配合使用。
【文檔編號】A01N63/04GK103583576SQ201310547213
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】蒲金基, 喻群芳, 張賀, 張欣, 漆艷香, 陸英, 謝藝賢, 張輝強 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境與植物保護研究所