一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，以盤狀體作為外植體，組織搗碎機搗碎后接種于改良VSE培養(yǎng)液的附著基上，1LVSE培養(yǎng)液中添加0.5～2mg的IAA、0.1～0.5mg的ZT和10～15g的蔗糖，于溫度18～20℃、光強1000～1500Lx、光照12h的條件下誘導再生盤狀體形成；本方法不但可以成功的誘導新的盤狀體，還可以有效的抑制絲狀體的形成，盤狀體的再生誘導率可以達到180%，大大增加了蜈蚣藻的繁殖系數(shù)；而本發(fā)明中儲存盤狀體的培養(yǎng)液以及培養(yǎng)基，可以長時間的保存盤狀體，盤狀體保存1年不會發(fā)生變質、死亡以及生長發(fā)育的狀況，而保存的盤狀體恢復到正常的培養(yǎng)條件中，1周即可恢復正常的生長發(fā)育狀態(tài)。
【專利說明】一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，屬于植物組織培養(yǎng)【技術領域】?！颈尘凹夹g】
[0002]帶型蜈蟻藻iGrateloupia turuturu),隸屬于紅藻門(Rhodophyta)、真紅藻綱(Florideae)、杉藻目(Gigartinales)、海膜科(Halymeniaceae Bory)> 蜈蟻藻屬(.Grateloupia C.Agardh);帶型蜈蟻藻含有豐富的卡拉膠,在食品工業(yè)作為增稠劑、穩(wěn)定劑；在紡織工業(yè)作為上漿材料；由于卡拉膠寡糖在免疫領域也具有發(fā)展?jié)摿?，所以也是具有食療價值的經(jīng)濟海藻；因此蜈蚣藻的原料需求量越來越大。但蜈蚣藻的來源非常有限，目前主要采集野生的資源，自然分布的空間少，數(shù)量不穩(wěn)定，質量難保證，人工養(yǎng)殖的瓶頸是種苗來源缺乏穩(wěn)定而充足的供應。
帶型蜈蚣藻的有性繁殖育種周期比較長，不適用于大規(guī)模育種繁育。目前為止，絲狀體用于蜈蚣藻種苗培育的優(yōu)勢比較明顯，絲狀體既可以作為種質保存的材料，又可以作為生產(chǎn)原料投入大規(guī)模的生產(chǎn)，如張澤宇(大連水產(chǎn)學院學報、2007年，第22卷第3期、164-169)成功的將蜈蚣藻切段誘導形成絲狀體，絲狀體可以形成幼苗并可在海上成活；但是，絲狀體育苗具有產(chǎn)苗率低、難以長期保存的缺點，如何克服這些缺點仍是今后需要研究的課題。lima (Cultivationof Grateloupia acuminata (Halymeniaceae, Rhodophyta) byregeneration from cut fragments of basal crusts and upright thall1.J.AppLPhycol.7- 583 - 588)曾經(jīng)進行過頂狀蜈蚣藻盤狀體再生的研究，將盤狀體接種到玻璃、瓷器及尼龍繩等基質上之后，于海上放養(yǎng)3個月，盤狀體便可長成20 cm左右的成熟藻體，大大縮短了育苗所需的時間；但是這種方法的盤狀體誘導率很低(不足50%)，很多盤狀體形成了絲狀體，雖然絲狀體還可以進一步形成盤狀體，但無形中增加了育種時間和精力，難以得到大規(guī)模的推廣。

【發(fā)明內容】

[0003]針對現(xiàn)有技術存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，作為外植體的盤狀體在特定培養(yǎng)基中定向形成盤狀體而不是絲狀體，既可以增加盤狀體的誘導率，又可以減少育種時間。
[0004]為了解決上述技術問題，本發(fā)明的技術方案如下:
一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法:包括如下步驟:
(I)種源盤狀體誘導:以蜈蚣藻果孢子體或四分孢子體作為種藻，除去藻體表面的淤泥、雜藻、壞死組織及其他附著物；用3%次氯酸鈉消毒藻體3~5min，然后用無菌過濾海水清洗干凈，無菌條件下將種藻切成I~2m2的藻塊，將藻塊在黑暗條件下陰干15~30min ；陰干的藻塊放于裝有附著基的培養(yǎng)容器中，加入無菌過濾海水，于18~20°C全黑暗條件靜置培養(yǎng)；靜置培養(yǎng)24h后，將附著基取出放入裝有VSE培養(yǎng)液的培養(yǎng)容器中，于溫度18~20°C、光強1000~1500Lx、光照12h的條件下誘導盤狀體，每2天換一次培養(yǎng)液至盤狀體肉眼可見；
(2)種源盤狀體培育:將步驟I中附有盤狀體的附著基轉移至新的培養(yǎng)容器中，向培養(yǎng)容器中倒入VSE培養(yǎng)液至淹沒附著基，于溫度22~25°C、光強2000~2500Lx、光照12h的條件下培育盤狀體至直徑為0.2-0.5mm ;每2天換一次培養(yǎng)基；
(3)再生盤狀體誘導:將步驟2中獲得的盤狀體從附著基上剝離，無菌過濾海水沖洗干凈后，用組織搗碎機切碎，將切碎的盤狀體灑在鋪有附著基的育苗容器中，添加改良VSE培養(yǎng)液后，于溫度18~20°C、光強1000~1500LX、光照12h的條件下誘導再生盤狀體形成，每2天換一次培養(yǎng)液至盤狀體肉眼可見；
(4)直立枝培育:將步驟3中獲得的盤狀體一部分留作種質資源保存，一部分轉移到過濾滅菌的海水中在溫度22~24°C、光強2500~3000Lx、光照12h的條件下誘導直立枝發(fā)生，直立枝長度為5~8cm后轉移到海上進行人工養(yǎng)殖。
[0005]進一步的，步驟3中所述的改良VSE培養(yǎng)液的配方為，IL VSE培養(yǎng)液中添加0.5~2mg的ΙΑΑ、0.I~0.5mg的ZT和10~15g的鹿糖。
[0006]進一步的，步驟4中所述的盤狀體種質保存方法為，將附有盤狀體的附著基置于裝有改良儲存培養(yǎng)液的器皿中，置于10°c、全黑暗條件下靜置儲存。
[0007]優(yōu)選的，所述的改良儲存培養(yǎng)液的配方為，等同體積的過濾海水和自來水混合均勻，將pH調為7.8-8.0。
[0008]本發(fā)明所述的改良VSE培養(yǎng)基，可以誘導帶型蜈蚣藻的盤狀體切段形成盤狀體而不形成絲狀體，不但提高了種源盤狀體的利用率，還提高了再生盤狀體的誘導率。
[0009]本發(fā)明所述的盤狀體貯存方法，不但可以長時間的抑制盤狀體的生長和分化，為蜈蚣藻的無性繁殖提供充足的種質來源，將長時間儲存的盤狀體放入海水中正常培養(yǎng)，I周即可以恢復正常的生長發(fā)育狀態(tài)。
[0010]本發(fā)明的有益效果在于，盤狀體切段再生的途徑不但可以成功的誘導新的盤狀體，還可以有效的抑制絲狀體的形成；并且，一個種源盤狀體可以被切成多個切段，而每個切段可以形成1-2個新的盤狀體，新形成的盤狀體具有種源盤狀體相同的發(fā)育特性，可以成功的誘導直立枝形成，大大增加了蜈蚣藻的繁殖系數(shù)，盤狀體的再生誘導率可以達到180%;而本發(fā)明中儲存盤狀體的培養(yǎng)液以及培養(yǎng)基，可以長時間的保存盤狀體，盤狀體保存I年不會發(fā)生變質、死亡以及生長發(fā)育的狀況，而保存的盤狀體恢復到正常的培養(yǎng)條件中，I周即可恢復正常的生長發(fā)育狀態(tài)。
【具體實施方式】
[0011]以下通過實施例進一步闡述本發(fā)明的有益效果:
實施例1:
(I)種源盤狀體誘導:以蜈蚣藻果孢子體或四分孢子體作為種藻，除去藻體表面的淤泥、雜藻、壞死組織及其他附著物；用3%次氯酸鈉消毒藻體3~5min，然后用無菌過濾海水清洗干凈，無菌條件下將種藻切成I~2m2的藻塊，將藻塊在黑暗條件下陰干15~30min ；陰干的藻塊放于裝有附·著基的培養(yǎng)容器中，加入無菌過濾海水，于18~20°C全黑暗條件靜置培養(yǎng)；靜置培養(yǎng)24h后，將附著基取出放入裝有VSE培養(yǎng)液的培養(yǎng)容器中，于溫度18~20°C、光強1000~1500Lx、光照12h的條件下誘導盤狀體，每2天換一次培養(yǎng)液至盤狀體肉眼可見；
(2)種源盤狀體培育:將步驟I中附有盤狀體的附著基轉移至新的培養(yǎng)容器中，向培養(yǎng)容器中倒入VSE培養(yǎng)液至淹沒附著基，于溫度22~25°C、光強2000~2500Lx、光照12h的條件下培育盤狀體至直徑為0.2-0.5mm ;每2天換一次培養(yǎng)基；
(3)再生盤狀體誘導:將步驟2中獲得的盤狀體從附著基上剝離，無菌過濾海水沖洗干凈后，50個種源盤狀體用組織搗碎機切碎，將切碎的盤狀體灑在鋪有附著基的育苗容器中，添加改良VSE培養(yǎng)液后，于溫度18~20°C、光強1000~1500Lx、光照12h的條件下誘導再生盤狀體形成，每2天換一次培養(yǎng)液至盤狀體肉眼可見；所述的改良VSE培養(yǎng)液的配方為，IL VSE培養(yǎng)液中添加0.5mg的IAA、0.Img的ZT和IOg的蔗糖；
(4)直立枝培育:將步驟3中獲得的盤狀體一部分留作種質資源保存，一部分轉移到過濾滅菌的海水中在溫度22~24°C、光強2500~3000Lx、光照12h的條件下誘導直立枝發(fā)生，直立枝長度為5~8cm后轉移到海上進行人工養(yǎng)殖；所述的盤狀體種質保存方法為，將附有盤狀體的附著基置于裝有改良儲存培養(yǎng)液的器皿中，置于10°C、全黑暗條件下靜置儲存，改良儲存培養(yǎng)液的配方為，等同體積的過濾海水和自來水混合均勻，將PH調為
7.8—8.0 。
[0012]50個種源盤狀體共形成40個新的盤狀體，盤狀體的誘導率為80%。
[0013]實施例2:
方法步驟與實施例1相同，但是步驟3中，改良VSE培養(yǎng)液的配方為IL VSE培養(yǎng)液中添加2mg的IAA、0.5mg的ZT和IOg的蔗糖，50個種源盤狀體共形成45個新的盤狀體，盤狀體的誘導率為90%。
[0014]實施例3:
方法步驟與實施例1相同，但是步驟3中，改良VSE培養(yǎng)液的配方為IL VSE培養(yǎng)液中添加0.5mg的IAA、0.1mg的ZT和15g的蔗糖，50個種源盤狀體共形成42個新的盤狀體，盤狀體的誘導率為84%。
[0015]實施例4:
方法步驟與實施例1相同，但是步驟3中，改良VSE培養(yǎng)液的配方為IL VSE培養(yǎng)液中添加2mg的IAA、0.5mg的ZT和15g的蔗糖，50個種源盤狀體共形成50個新的盤狀體，盤狀體的誘導率為100%。
[0016]實施例5:
方法步驟與實施例1相同，但是步驟3中，改良VSE培養(yǎng)液的配方為IL VSE培養(yǎng)液中添加Img的IAA、0.3mg的ZT和IOg的蔗糖，50個種源盤狀體共形成70個新的盤狀體，盤狀體的誘導率為140%。
[0017]實施例6:
方法步驟與實施例1相同，但是步驟3中，改良VSE培養(yǎng)液的配方為IL VSE培養(yǎng)液中添加Img的IAA、0.3mg的ZT和15g的鹿糖,50個種源盤狀體共形成80個新的盤狀體,盤狀體的誘導率為160%。
[0018]實施例7:
方法步驟與實施例1相同，但是步驟3中，改良VSE培養(yǎng)液的配方為IL VSE培養(yǎng)液中添加Img的IAA、0.3mg的ZT和12g的蔗糖，50個種源盤狀體共形成90個新的盤狀體，盤狀體的誘導率為180%。
[0019] 上述實例只是為說明本發(fā)明的技術構思以及技術特點，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實質所做的等效變換或修飾，都應該涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)種源盤狀體誘導:以蜈蚣藻果孢子體或四分孢子體作為種藻，除去藻體表面的淤泥、雜藻、壞死組織及其他附著物；用3%次氯酸鈉消毒藻體3~5min，然后用無菌過濾海水清洗干凈，無菌條件下將種藻切成I~2m2的藻塊，將藻塊在黑暗條件下陰干15~30min ；陰干的藻塊放于裝有附著基的培養(yǎng)容器中，加入無菌過濾海水，于18~20°C全黑暗條件靜置培養(yǎng)；靜置培養(yǎng)24h后，將附著基取出放入裝有VSE培養(yǎng)液的培養(yǎng)容器中，于溫度18~20°C、光強1000~1500Lx、光照12h的條件下誘導盤狀體，每2天換一次培養(yǎng)液至盤狀體肉眼可見； (2)種源盤狀體培育:將步驟I中附有盤狀體的附著基轉移至新的培養(yǎng)容器中，向培養(yǎng)容器中倒入VSE培養(yǎng)液至淹沒附著基，于溫度22~25°C、光強2000~2500Lx、光照12h的條件下培育盤狀體至直徑為0.2-0.5mm ;每2天換一次培養(yǎng)基； (3)再生盤狀體誘導:將步驟2中獲得的盤狀體從附著基上剝離，無菌過濾海水沖洗干凈后，用組織搗碎機切碎，將切碎的盤狀體灑在鋪有附著基的育苗容器中，添加改良VSE培養(yǎng)液后，于溫度18~20°C、光強1000~1500LX、光照12h的條件下誘導再生盤狀體形成，每2天換一次培養(yǎng)液至盤狀體肉眼可見； (4)直立枝培育:將步驟3中獲得的盤狀體一部分留作種質資源保存，一部分轉移到過濾滅菌的海水中在溫度22~24°C、光強2500~3000Lx、光照12h的條件下誘導直立枝發(fā)生，直立枝長度為5~8cm后轉移到海上進行人工養(yǎng)殖。
2.根據(jù)權利要求1所述的帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，其特征在于，步驟3中所述的改良VSE培養(yǎng)液的配方為，IL VSE培養(yǎng)液中添加0.5~2mg的ΙΑΑ、0.1~0.5mg的ZT和10~15g的鹿糖。
3.根據(jù)權利要求1所述的帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，其特征在于，步驟4中所述的盤狀體種質保存方法為，將附有盤狀體的附著基置于裝有改良儲存培養(yǎng)液的器皿中，置于10°C、全黑暗條件下靜置儲存。
4.根據(jù)權利要求1或權利要求3所述的帶型蜈蚣藻無性繁殖育苗的方法，所述的改良儲存培養(yǎng)液的配方為，等同體積的過濾海水和自來水混合均勻，將PH調為7.8-8.0。
【文檔編號】A01H4/00GK103651116SQ201310554332
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月11日 優(yōu)先權日:2013年11月11日
【發(fā)明者】張明 申請人:青島佰眾化工技術有限公司