一種青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型，可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型，克服了傳統(tǒng)常規(guī)育種中測(cè)交繁瑣、世代間隔長(zhǎng)等缺點(diǎn)。采用本發(fā)明的方法生產(chǎn)基因型為II的青脛顯性白羽肉雞品系，不僅避免了測(cè)交選育的繁瑣，縮短了世代間隔，加快了育種進(jìn)程，降低了培育成本；而且該品系肉質(zhì)細(xì)嫩，肉味鮮美，生產(chǎn)性能高，其屠體上不存在有色羽殘跡，從而使屠體更加美觀。此外，該品系用作父本與高產(chǎn)蛋雞品種或快大肉雞品種雜交配套，可分別生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽雞。
【專利說明】—種青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]我國地方雞品種資源豐富，其肉質(zhì)細(xì)嫩、肉味鮮美，但是在外觀上多表現(xiàn)為黃羽、麻羽等有色羽。對(duì)于冷鮮雞市場(chǎng)來說，有色羽肉雞常因屠宰后羽毛不容易脫干凈而影響屠體的美觀。對(duì)于國外的快大型白羽肉雞生長(zhǎng)速度快，屠體性狀好，但是肉質(zhì)遠(yuǎn)不如我國的地方雞。因此，顯性白羽優(yōu)質(zhì)肉雞的培育具有重要意義。
[0003]傳統(tǒng)育種中常常采用測(cè)交的方法，依據(jù)雜交后代雞的表型性狀留種。即通過測(cè)交、繁殖擴(kuò)群來淘汰隱性白羽雞群體里的顯性白純合子個(gè)體和顯性白雜合子個(gè)體。但是測(cè)交過程較為繁瑣，周期長(zhǎng)，且會(huì)受到擴(kuò)群的大小的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種青脛顯性 白羽肉雞品系的選育方法，包括以下步驟:
[0007](I)利用青脛肉雞品種作為父本與快大型白羽肉雞品種作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代，選留Fl代青脛白羽公母雞；
[0008](2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0009](3)利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽雞的基因型，選留顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為Ii和ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的公母雞；
[0010](4)對(duì)得到的II基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高生產(chǎn)速度和雞肉品質(zhì)，同時(shí)提純和固定青脛和白羽兩個(gè)外觀性狀，經(jīng)過3個(gè)世代以上的選育后，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系。
[0011]所述步驟(1)中青脛肉雞品種為固始雞、狼山雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、黃山黑雞、五華雞、德化黑雞、崇仁麻雞、壽光雞、盧氏雞、景陽雞、鄖陽大雞、東安雞、桃源雞、瑤雞、茶花雞、和田黑雞等。
[0012]所述步驟(1)中快大型白羽肉雞品種為羅斯308、科寶、艾維茵、哈巴德、艾拔益加(AA )、海波羅、迪聞等。
[0013]所述步驟(3)中利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽雞基因型的方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測(cè)雞全基因組DNA為模板，以引物對(duì)Pl為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因I等位基因，以引物對(duì)P2為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因i等位基因；對(duì)擴(kuò)增得到的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型；
[0014]所述的引物對(duì)Pl為:[0015]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)，
[0016]下游引物，Pl-R:5’-GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)；
[0017]所述的引物對(duì)P2為:
[0018]上游引物，P2-F:5’-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3’(如 SEQ ID N0.3 所示)，
[0019]下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.4 所示)。
[0020]所述的PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L,Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L, P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
[0021]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化鎂和PCR反應(yīng)緩沖液，為市售商品，可購自上海生工、大連寶生物、北京百泰克、北京康為等公司。
[0022]所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?94°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s, 35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin0
[0023]所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5%。
[0024]所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時(shí)間為40min。
[0025]所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為322bp和224bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為322bp、224bp和144bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為322bp和144bp條帶。
[0026]優(yōu)選的，將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系作為父本與高產(chǎn)蛋雞品種或快大肉 雞品種雜交配套，生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞。
[0027]本發(fā)明的有益效果:
[0028]采用本發(fā)明的方法生產(chǎn)基因型為II的青脛顯性白羽肉雞品系，不僅避免了測(cè)交選育的繁瑣，縮短了世代間隔，加快了育種進(jìn)程，降低了培育成本；而且該品系肉質(zhì)細(xì)嫩，肉味鮮美，生產(chǎn)性能高，其屠體上不存在有色羽殘跡，從而使屠體更加美觀。此外，該品系用作父本與蛋雞品種或肉雞品種雜交配套，可分別生產(chǎn)出高產(chǎn)型和快大型青脛顯性白羽雞。
[0029]本發(fā)明中用于檢測(cè)雞PMEL17基因顯性白羽位點(diǎn)基因型的引物，是針對(duì)PMEL17基因第10外顯子9bp插入(-CTGGGCACC-)設(shè)計(jì)等位基因I特異性引物Pl-R ;針對(duì)PMEL17基因第10外顯子無9bp插入設(shè)計(jì)等位基因i特異性引物P2-F。這樣引物Pl-R與Pl-F只能擴(kuò)增I等位基因，擴(kuò)增的片段大小為224bp ;引物P2-R與P2-F只能擴(kuò)增i等位基因，擴(kuò)增的片段大小為144bp。此外，由于上游引物Pl-F與下游引物P2-R的組合也可以擴(kuò)增，擴(kuò)增的片段大小為322bp，這個(gè)擴(kuò)增不受9bp插入的影響，即每個(gè)個(gè)體均可以擴(kuò)增。
[0030]本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型，可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型，從而縮短育種時(shí)間，加快育種進(jìn)程，克服了傳統(tǒng)常規(guī)育種中測(cè)交繁瑣、世代間隔長(zhǎng)等缺點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中各樣本PMEL17基因顯性白羽位點(diǎn)的PCR電泳圖；
[0032]注:自左至右泳道分別代表DNA Marker I和基因型i1、i1、I1、I1、I1、i1、I1、ii和Ii的電泳帶型。
【具體實(shí)施方式】[0033]下述實(shí)施例僅對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0034]實(shí)施例1
[0035]本實(shí)施例中青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，包括以下步驟:
[0036](I)利用固始雞純系公雞作為父本與艾維茵母雞作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代雞，淘汰雜交出現(xiàn)的少量的有色羽個(gè)體，在Fl白羽群體中選留Fl代青脛白羽公母雞；
[0037](2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0038](3)利用AS-PCR的方法測(cè)定F2代青脛白羽雞的基因型，具體包括以下步驟:
[0039]①樣品的采集
[0040]對(duì)F2代選留的青脛白羽雞翅靜脈采血，加1/3抗凝劑，用蛋白酶K法提取血液DNA,將DNA樣品保存于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> [0041]②引物設(shè)計(jì)
[0042]以PMEL17 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)為模板設(shè)計(jì)引物對(duì) Pl 和P2，如下所示；
[0043]所述的引物對(duì)Pl為:
[0044]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
[0045]下游引物，P1-R: 5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3，；
[0046]所述的引物對(duì)P2為:
[0047]上游引物，P2-F: 5 ’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，，
[0048]下游引物，P2-R: 5，-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3，；
[0049]③PCR擴(kuò)增
[0050]以引物對(duì)Pl和P2為引物建立了 25.0 μ L擴(kuò)增體系:2XTaq PCR MasterMix(購自北京百泰克公司)12.5 μ L，CldH2O 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L, P2-F 0.6 μ L, P2-R0.4μ L, DNA 模板 1.0μ L ；
[0051]反應(yīng)程序?yàn)?94°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ；
[0052]④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與結(jié)果判定
[0053]取10.0μ L PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物，1.5%的瓊脂糖凝膠電泳(電泳電壓:120V ;電泳時(shí)間:40min)點(diǎn)樣，電泳結(jié)束后，用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)瓊脂糖凝膠照相檢測(cè)，電泳圖譜參見圖1 ;根據(jù)電泳圖譜中出現(xiàn)的條帶的大小判定:當(dāng)出現(xiàn)322bp和224bp片段，則為顯性白羽純合子(II基因型);當(dāng)出現(xiàn)322bp和144bp的片段，則為野生型純合子(ii基因型);當(dāng)出現(xiàn)322bp、224bp和144bp的片段，則為顯性白羽雜合子(Ii基因型)；
[0054](4)根據(jù)基因型判定結(jié)果，選留顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為Ii和ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的公母雞；
[0055](5)對(duì)得到的II基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高生產(chǎn)速度和雞肉品質(zhì)，同時(shí)提純和固定青脛和白羽兩個(gè)外觀性狀，經(jīng)過3個(gè)世代以上的選育后，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系；
[0056](6)將步驟(5)得到的顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系作為父本，分別與白來航、固始雞進(jìn)行雜交，得到高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞商品代。
【權(quán)利要求】
1.一種青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)利用青脛肉雞品種作為父本與快大型白羽肉雞品種作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代，選留Fl代青脛白羽公母雞； (2)Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞； (3)利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽雞的基因型，選留顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為Ii和ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的公母雞； (4)對(duì)得到的II基因型個(gè)體進(jìn)行橫交和擴(kuò)繁，按照家系選擇和個(gè)體選擇方法，提高生產(chǎn)速度和雞肉品質(zhì)，同時(shí)提純和固定青脛和白羽兩個(gè)外觀性狀，經(jīng)過3個(gè)世代以上的選育后，得到顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(O中青脛肉雞品種為固始雞、狼山雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、黃山黑雞、五華雞、德化黑雞、崇仁麻雞、壽光雞、盧氏雞、景陽雞、鄖陽大雞、東安雞、桃源雞、瑤雞、茶花雞、和田黑雞中任一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(O中快大型白羽肉雞品種為羅斯308、科寶、艾維茵、哈巴德、艾拔益加、海波羅、迪高中任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(3)中利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽雞基因型的方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測(cè)雞全基因組DNA為模板，以引物對(duì)Pl為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因I等位基因，以引物對(duì)P2為引物PCR擴(kuò)增雞P MEL17基因i等位基因；對(duì)擴(kuò)增得到的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型； 所述的引物對(duì)Pl為: 上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
下游引物，Pl-R:5’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’ ； 所述的引物對(duì)P2為: 上游引物，P2-F:5’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，， 下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述的PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L，Pl-F 0.4μ L，Pl-R0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L，P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?94°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35個(gè)循環(huán)；72°C延伸 lOmin。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時(shí)間為40min。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為322bp和224bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為322bp、224bp和144bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為322bp和144bp條帶。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛顯性白羽肉雞品系的選育方法，其特征在于:將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為II基因型的青脛顯性白羽肉雞品系作為父本與高產(chǎn)蛋雞品種或快大肉雞品種 雜交配套，生產(chǎn)出高產(chǎn)型或快大型青脛顯性白羽肉雞。
【文檔編號(hào)】A01K67/027GK103583469SQ201310590887
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】康相濤, 韓瑞麗, 蔣瑞瑞, 楊朋坤, 劉小軍, 閆峰賓, 李轉(zhuǎn)見, 田亞東, 王彥彬, 王丹丹, 呂世杰, 孫桂榮, 李國喜 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)