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      一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法

      文檔序號:224313閱讀:259來源:國知局
      一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型,可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型,生產(chǎn)基因型為ii的青脛隱性白羽雞品系,能避免測交選育的繁瑣,縮短世代間隔,加快育種進(jìn)程,從而降低培育成本。采用本發(fā)明方法培育的青脛隱性白羽雞品系其肉質(zhì)細(xì)嫩,肉味鮮美,生產(chǎn)性能高,既可以作為商品雞直接投入生產(chǎn),還可以與青脛黃麻羽雞進(jìn)行配套應(yīng)用。
      【專利說明】—種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明具體涉及一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。
      【背景技術(shù)】
      [0002]隨著生活水平的提高,人們的消費(fèi)觀念從過去的數(shù)量型轉(zhuǎn)變?yōu)橘|(zhì)量型。人們對雞肉肉質(zhì)的要求也越來越高。我國的地方雞具有肉質(zhì)好的特點(diǎn),但是其生長速度較慢,飼料轉(zhuǎn)化率低。而國外的快大型肉雞雖生長速度快、飼料轉(zhuǎn)化率高,其肉質(zhì)較差。為解決這一問題,將國外快大型肉雞與國內(nèi)地方優(yōu)質(zhì)肉雞進(jìn)行雜交,既能夠改善國外快大型肉雞的肉質(zhì)也能加快地方優(yōu)質(zhì)肉雞的生長速度和生產(chǎn)性能。但是,由于我國人民長期的飲食習(xí)慣的影響,中國消費(fèi)者偏愛黃麻羽、黑羽等有色羽的雞,尤其是南方城市不接受快速生長的白羽雞。為了使雜交后雞的表型符合中國消費(fèi)者的需求,就需要純合的隱性白羽雞,隱性白羽雞生產(chǎn)性能高,且與我國有色羽雜交后能保持有色羽的羽色,對于我國優(yōu)質(zhì)雞的育種上具有重大的意義。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0003]本發(fā)明的目的是提供一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法。
      [0004]為了實現(xiàn)以上目的,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
      [0005]一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,包括以下步驟:`[0006](I)利用青脛隱性白羽雞作為父本,白來航雞作為母本進(jìn)行雜交,生產(chǎn)出Fl代;
      [0007](2) Fl代自交得到F2代,選留F2代青脛白羽公母雞;
      [0008](3)利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測定F2代青脛白羽公母雞的基因型,選留顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的個體,淘汰顯性白羽位點(diǎn)為II和Ii基因型的個體,得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞;
      [0009](4)取顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞自交,利用步驟(3)的方法測定自交后代的基因型,重復(fù)上述步驟至穩(wěn)定遺傳,得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系。
      [0010]所述步驟(1)中青脛隱性白羽雞為青脛黃麻羽地方雞突變后的青脛白羽雞,經(jīng)人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測定顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型。
      [0011]所述步驟(3)中利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法,包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測雞全基因組DNA為模板,以引物對P為引物PCR擴(kuò)增PMEL17基因第十外顯子,得到擴(kuò)增片段;對擴(kuò)增片段進(jìn)行Pvu II酶切,對酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型;
      [0012]所述的引物對P為:
      [0013]上游引物P-F:5,-AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3,(如 SEQ ID N0.1 所示),
      [0014]下游引物P-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)。[0015]所述的雞全基因組DNA采用苯酚-氯仿粗提法或蛋白酶K法提取。
      [0016]所述的PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 6.25 μ L, ddH20 4.25 μ L,P-F 0.5 μ L,P-R 0.5 μ L,DNA 模板 1.0 μ L。
      [0017]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化鎂和PCR反應(yīng)緩沖液,為市售商品,可購自上海生工、大連寶生物、北京百泰克、北京康為等公司。
      [0018]所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s,60°C退火30s,72°C延伸20s,30個循環(huán);72°C延伸IOmin ;4°C保存。
      [0019]所述的Pvu II酶切反應(yīng)體系為:擴(kuò)增片段10 μ L,Buffer 1.5 μ L,Pvu II 0.3 μ L,ddH20 3.2 μ L0
      [0020]所述的Pvu II酶切反應(yīng)條件為:37°C,酶切過夜。
      [0021]所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為2%。
      [0022]所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V,電泳時間為60min。
      [0023]所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為160bp條帶;Ii基因型表現(xiàn)為124bp和160bp條帶;ii基因型表現(xiàn)為124bp。
      [0024]優(yōu)選的,將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系與青脛黃麻羽雞品種雜交配套,生產(chǎn)出有色羽肉雞。
      [0025]所述的青胚黃麻羽雞品種為固始雞、邊雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、五華雞、崇仁麻雞、瑯琊雞、盧氏雞、桃源 雞、瑤雞、茶花雞等。
      [0026]本發(fā)明的有益效果:
      [0027]本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型,可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型,生產(chǎn)基因型為ii的青脛隱性白羽雞品系,能避免測交選育的繁瑣,縮短世代間隔,加快育種進(jìn)程,從而降低培育成本。
      [0028]本發(fā)明針對顯性白羽野生純合子個體在PMEL17基因第10外顯子存在的一個9bp插入這一特征,設(shè)計上游引物引入Pvu II酶切位點(diǎn),是否存在插入序列與是否存在酶切位點(diǎn)之間是相互對應(yīng)的關(guān)系。其中,引物對P是針對不含9bp插入的PMEL17基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計的,引入Pvu II酶切位點(diǎn)后,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物能夠被Pvu II切為124bp和27bp(27bp太短電泳時不顯示)的片段(如SEQ ID N0.3所示);含9bp插入的基因序列在擴(kuò)增后不存在Pvu II這一酶切位點(diǎn),因此其PCR產(chǎn)物酶切后片段為160bp (如SEQ ID N0.4所示)。
      [0029]采用本發(fā)明方法培育的青脛隱性白羽雞品系其肉質(zhì)細(xì)嫩,肉味鮮美,生產(chǎn)性能高,既可以作為商品雞直接投入生產(chǎn),還可以與青脛黃麻羽雞進(jìn)行配套應(yīng)用。
      【專利附圖】

      【附圖說明】
      [0030]圖1為本發(fā)明實施例1中各樣本在雞顯性白羽位點(diǎn)的酶切電泳圖,
      [0031]注:編號說明如下:5,8,9為II基因型,3,6,7為Ii基因型;1,2,4為ii基因型,M 為 marker。
      【具體實施方式】
      [0032]下述實施例僅對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明,但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
      [0033]實施例1[0034]本實施例中基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,包括以下步驟:
      [0035](I)利用固始雞群體中青脛隱性白羽雞作父本,白來航雞作母本進(jìn)行雜交,生產(chǎn)出Fl代;
      [0036](2) Fl代自交得到F2代,選留F2代青脛白羽公母雞;
      [0037](3)利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測定F2代青脛白羽公母雞的基因型,具體包括以下步驟:[0038]①樣品的采集
      [0039]對F2代選留的青脛白羽雞翅靜脈采血,加1/3抗凝劑,用蛋白酶K法提取血液DNA,將DNA樣品保存于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> [0040]②引物設(shè)計
      [0041]以PMELl7 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)為模板設(shè)計引物對 P,如下所示:
      [0042]上游引物P-F: 5 ’ -AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3,,
      [0043]下游引物P-R: 5 ’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3 ’ ;
      [0044]③PCR擴(kuò)增
      [0045]以引物對P為引物,建立12.5μ L擴(kuò)增體系:2XTaq PCR MasterMix (購自北京百泰克公司)6.25 μ L, ddH20 4.25 μ L, P-F 0.5 μ L, P-R 0.5 μ L, DNA 模板 1.0 μ L ;
      [0046]反應(yīng)程序為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s,60°C退火30s,72°C延伸20s,30個循環(huán);72°C延伸IOmin ;4°C保存;
      [0047]④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的酶切
      [0048]15 μ L 的 Pvu II 酶切體系:擴(kuò)增片段 10 μ L, Buffer 1.5 μ L,Pvu II 0.3 μ L, ddH20
      3.2 μ L ;酶切反應(yīng)條件:37°C,酶切過夜;
      [0049]⑤PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切后的檢測與結(jié)果判定
      [0050]取8 μ L PCR擴(kuò)增后的酶切產(chǎn)物,2%的瓊脂糖凝膠電泳(電泳電壓:120V ;電泳時間:60min)點(diǎn)樣,電泳結(jié)束后采用凝膠成像系統(tǒng)檢測,電泳圖譜參見圖1 ;
      [0051]根據(jù)電泳圖譜中出現(xiàn)的條帶大小進(jìn)行判定:當(dāng)出現(xiàn)160bp的片段,則為顯性白羽純合子(II基因型,表型為白羽);當(dāng)出現(xiàn)124bp的片段,則為野生型純合子(ii基因型,表型為有色羽或隱性白羽);當(dāng)出現(xiàn)160bp、124bp的片段,則為顯性白羽雜合子(Ii基因型,表型為白羽);
      [0052](4)根據(jù)基因型判定結(jié)果,選留顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的個體,淘汰顯性白羽位點(diǎn)為II和Ii基因型的個體,得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的公母雞;
      [0053](5)取顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞自交,利用步驟(3)的方法測定自交后代的基因型,重復(fù)上述步驟至穩(wěn)定遺傳,得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系;
      [0054](6)將步驟(5)得到的顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系作為父本與青脛黃麻羽雞品種雜交配套,生產(chǎn)出有色羽肉雞。
      【權(quán)利要求】
      1.一種基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:包括以下步驟: (1)利用青脛隱性白羽雞作為父本,白來航雞作為母本進(jìn)行雜交,生產(chǎn)出Fl代; (2)Fl代自交得到F2代,選留F2代青脛白羽公母雞; (3)利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測定F2代青脛白羽公母雞的基因型,選留顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的個體,淘汰顯性白羽位點(diǎn)為II和Ii基因型的個體,得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞; (4)取顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞自交,利用步驟(3)的方法測定自交后代的基因型,重復(fù)上述步驟至穩(wěn)定遺傳,得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述步驟(1)中青脛隱性白羽雞為青脛黃麻羽地方雞突變后的青脛白羽雞。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述步驟(3)中利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法,包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測雞全基因組DNA為模板,以引物對P為引物PCR擴(kuò)增PMEL17基因第十外顯子,得到擴(kuò)增片段;對擴(kuò)增片段進(jìn)行Pvu II酶切,對酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型; 所述的引物對P為:
      上游引物 P-F:5’ -AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3,,
      下游引物 P-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
      4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 6.25 μ L, ddH20 4.25 μ L,P-F0.5 μ L,P-R 0.5 μ L,DNA 模板 1.0 μ L。
      5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序為:95°C預(yù)變性5min ;95°C變性30s,60°C退火30s,72°C延伸20s,30個循環(huán);72°C延伸IOmin ;4°C保存。
      6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述的Pvu II酶切反應(yīng)體系為:擴(kuò)增片段10 μ L,Buffer 1.5 μ L,Pvu II 0.3 μ L,ddH20 3.2 μ L ;Pvu II酶切反應(yīng)條件為:37°C,酶切過夜。
      7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為2% ;瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V,電泳時間為60mino
      8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為160bp條帶;Ii基因型表現(xiàn)為124bp和160bp條帶;ii基因型表現(xiàn)為124bp。
      9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系與青脛黃麻羽雞品種雜交配套,生產(chǎn)出有色羽肉雞。
      10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的 基于分子輔助選擇的青脛隱性白羽雞品系的培育方法,其特征在于:所述的青脛黃麻羽雞品種為固始雞、邊雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、五華雞、崇仁麻雞、瑯琊雞、 盧氏雞、桃源雞、瑤雞或茶花雞。
      【文檔編號】A01K67/027GK103583470SQ201310590937
      【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
      【發(fā)明者】康相濤, 楊朋坤, 孫桂榮, 王彥彬, 韓瑞麗, 田亞東, 李轉(zhuǎn)見, 蔣瑞瑞, 呂世杰, 李國喜, 閆峰賓, 劉小軍 申請人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
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