一種紅翎菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種紅翎菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括外植體消毒、接種和誘導(dǎo)愈傷組織等步驟；以ASP12-NTA固體培養(yǎng)基配培養(yǎng)基質(zhì)，添加IAA、2,4-D和6-BA后，可以有效的促進(jìn)紅翎菜的分生組織形成絲狀愈傷組織，誘導(dǎo)率可以達(dá)到83%，這些絲狀愈傷組織可以進(jìn)一步分化成再生植株，也可以低溫貯藏用作凝花菜的種質(zhì)資源。
【專利說明】一種紅翎菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種紅翎菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法。【背景技術(shù)】
[0002]紅翎菜是紅藻門、杉藻目、紅翎菜科、紅翎菜屬中的一種大型經(jīng)濟(jì)海藻，是獲得卡拉膠的主要藻源?？ɡz廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、化學(xué)工業(yè)及生化、醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域中，卡拉膠具有形成親水膠體、凝膠、增稠、乳化、威膜、穩(wěn)定分散等特性，因而被廣泛應(yīng)用于乳制品、冰淇淋、果汁飲料、面包、水凝膠(水果凍)、肉食品、調(diào)味品、罐頭食品等方面，可調(diào)配成果凍粉、軟糖粉、布丁粉、愛玉粉、西式火腿調(diào)配粉等，其獨(dú)特性能是不能被其它樹脂所代替，使得卡拉膠工業(yè)迅速發(fā)展，現(xiàn)在世界卡拉膠的年總產(chǎn)量已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過瓊脂的產(chǎn)量。
[0003]而紅翎菜主要以野生資源為主，人工栽培技術(shù)即為不成熟，限制人工栽培的主要因素是不能保證充足而穩(wěn)定的種質(zhì)資源。組織培養(yǎng)技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以快速繁殖，周年生產(chǎn)，不受季節(jié)限制；種苗整齊度高，可以進(jìn)行新品種培育，所需材料較少，繁殖系數(shù)大，可以在一年內(nèi)由一個(gè)莖段培養(yǎng)出數(shù)百萬種苗。海洋植物的組織培養(yǎng)技術(shù)比較落后，究其主要原因是對組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分、激素種類及配比以及培養(yǎng)條件缺乏全面的理解。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種紅翎菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，可以短時(shí)間內(nèi)、快速育繁大量的愈傷組織，為紅翎菜的人工育苗提供充足的種質(zhì)資源。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種紅翎菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟:
(1)外植體消毒:以紅翎菜葉狀體作為實(shí)驗(yàn)對象，將紅翎菜葉狀體于添加3-7u g/L環(huán)丙沙星和80-120 u g/L制霉菌素的VS培養(yǎng)液中浸泡48h之后，用體積濃度為75%的乙醇消毒30s，然后用體積濃度為3-8%的次氯酸鈉溶液消毒5-10min，最后用無菌過濾海水沖洗干凈;
(2)接種:將紅翎菜葉狀體放于無菌操作臺中，切取葉狀體尖端l_2cm的頂端分生組織作為原始外植體，將原始外植體切成長度為0.3-0.5cm的接種外植體，并將外植體接種于裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中；
(3)誘導(dǎo)愈傷組織形成:接種外植體的培養(yǎng)瓶于黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20-22 0C，培養(yǎng)3-5周至絲狀愈傷組織形成。
[0006]進(jìn)一步的，步驟I中，所述的環(huán)丙沙星的濃度為g/L、制霉菌素的濃度為IOOil g/L，次氯酸鈉的濃度為5%，次氯酸鈉消毒的消毒時(shí)間為7min。
[0007]進(jìn)一步的，步驟2中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以ASP12-NTA為基本培養(yǎng)基，IL基本培養(yǎng)基中添加IAA 3-8mg、2，4-D 0-3mg、6_BA 0.5_2mg、瓊脂7g、蔗糖30g，將其pH調(diào)為
8.0-8.3后高溫高壓滅菌20min冷卻至室溫待其凝固后用作接種。[0008]本發(fā)明的有益效果是:
以ASP12-NTA固體培養(yǎng)基配培養(yǎng)基質(zhì)，添加IAA、2，4_D和6-BA后，可以有效的促進(jìn)紅翎菜外植體形成絲狀愈傷組織，誘導(dǎo)率可以達(dá)到83%，這些絲狀愈傷組織可以進(jìn)一步分化成再生植株，也可以低溫貯藏用作紅翎菜的種質(zhì)資源。
【具體實(shí)施方式】
[0009]以下通過實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的有益效果:
實(shí)施例1:
(1)外植體消毒:以紅翎菜葉狀體作為實(shí)驗(yàn)對象，將紅翎菜葉狀體于添加5y g/L環(huán)丙沙星和100 u g/L制霉菌素的VS培養(yǎng)液中浸泡48h之后，用體積濃度為75%的乙醇消毒30s，然后用體積濃度為5%的次氯酸鈉溶液消毒7min，最后用無菌過濾海水沖洗干凈； (2)接種:將紅翎菜葉狀體放于無菌操作臺中，切取葉狀體尖端l_2cm的頂端分生組織作為原始外植體，將原始外植體切成長度為0.3-0.5cm的接種外植體；以ASP12-NTA為基本培養(yǎng)基，IL基本培養(yǎng)基中添加IAA 5mg、2，4-D 0mg、6_BA lmg、瓊脂7g、蔗糖30g，將其pH調(diào)為8.0-8.3后高溫高壓滅菌20min冷卻至室溫待其凝固后用作接種；將外植體接種于裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，每瓶接種5塊，共接種100塊；
(3)誘導(dǎo)愈傷組織形成:接種外植體的培養(yǎng)瓶于黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20-220C，培養(yǎng)3周，外植體上開始有絲狀愈傷組織形成，培養(yǎng)6周后不再有外植體形成愈傷組織，100塊外植體中有83塊形成愈傷組織，誘導(dǎo)率為83%，有10塊外植體被污染。
[0010]實(shí)施例2:
操作方法與實(shí)施例1相同，所不同的是，步驟I中，環(huán)丙沙星的濃度為3 y g/L、制霉菌素的濃度為80 u g/L,次氯酸鈉的濃度為3%，次氯酸鈉消毒時(shí)間為5min ；100塊外植體中有50塊形成愈傷組織，誘導(dǎo)率為50%，有35塊外植體被污染。
[0011]實(shí)施例3:
操作方法與實(shí)施例1相同，所不同的是，步驟I中，環(huán)丙沙星的濃度為7 y g/L、制霉菌素的濃度為120ii g/L，次氯酸鈉的濃度為8%，次氯酸鈉消毒時(shí)間為IOmin ；100塊外植體中有66塊形成愈傷組織，誘導(dǎo)率為66%，有7塊外植體被污染，有27塊外植體沒有愈傷組織和菌落形成。
[0012]實(shí)施例4:
操作方法與實(shí)施例1相同，所不同的是步驟2中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以ASP12-NTA為基本培養(yǎng)基，IL基本培養(yǎng)基中添加IAA 3mg、6_BA 0.5mg、瓊脂7g、蔗糖30g ；100塊外植體中有63塊形成愈傷組織，誘導(dǎo)率為63%，有12塊外植體被污染，有25塊外植體沒有愈傷組織和菌落形成。
[0013]實(shí)施例5:
操作方法與實(shí)施例1相同，所不同的是步驟2中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以ASP12-NTA為基本培養(yǎng)基，IL基本培養(yǎng)基中添加IAA 8mg、2，4_D 3mg、6_BA 2mg、瓊脂7g、蔗糖30g ；100塊外植體中有45塊形成愈傷組織，誘導(dǎo)率為45%，有11塊外植體被污染，有44塊外植體沒有愈傷組織和菌落形成。
[0014]實(shí)施例6:操作方法與實(shí)施例1相同，所不同的是步驟2中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以ASP12-NTA為基本培養(yǎng)基，IL基本培養(yǎng)基中添加IAA 5mg、2，4_D lmg、6_BA lmg、瓊脂7g、蔗糖30g ；100塊外植體中有49塊形成愈傷組織，誘導(dǎo)率為49%，有13塊外植體被污染，有38塊外植體沒有愈傷組織和菌落形成。[0015]上述實(shí)例只是為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思以及技術(shù)特點(diǎn)，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)該涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種紅翎菜愈傷組織的有道方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)外植體消毒:以紅翎菜葉狀體作為實(shí)驗(yàn)對象，將紅翎菜葉狀體于添加3-7u g/L環(huán)丙沙星和80-120 u g/L制霉菌素的VS培養(yǎng)液中浸泡48h之后，用體積濃度為75%的乙醇消毒30s，然后用體積濃度為3-8%的次氯酸鈉溶液消毒5-10min，最后用無菌過濾海水沖洗干凈; (2)接種:將紅翎菜葉狀體放于無菌操作臺中，切取葉狀體尖端l_2cm的頂端分生組織作為原始外植體，將原始外植體切成長度為0.3-0.5cm的接種外植體，并將外植體接種于裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中； (3)誘導(dǎo)愈傷組織形成:接種外植體的培養(yǎng)瓶于黑暗條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為20-22 0C，培養(yǎng)3-5周至絲狀愈傷組織形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，步驟I中所述的環(huán)丙沙星的濃度為5 μg/L、制霉菌素的濃度為100μ g/L，次氯酸鈉的濃度為5%，次氯酸鈉的消毒時(shí)間為7min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，步驟2中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為，以ASP12-NTA為基本培養(yǎng)基，IL基本培養(yǎng)基中添加IAA 3_8mg、2，4_D 0-3mg、6_BA.0.5-2mg、瓊脂7g、蔗糖30g，將其pH調(diào)為8.0-8.3后高溫高壓滅菌20min冷卻至室溫待其凝固后用作接種。
【文檔編號】A01H4/00GK103651125SQ201310591686
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月22日
【發(fā)明者】李本明 申請人:李本明