馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，使用多層濾紙床液體培養(yǎng)方法，用液體MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗，聚乙二醇做梯度水分脅迫，移苗，培養(yǎng)。本發(fā)明采用液體MS培養(yǎng)基培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗，聚乙二醇做梯度水分脅迫，可以快捷，簡便，穩(wěn)定的鑒定馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性。
【專利說明】馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于一種生物抗旱性的鑒定方法，特別涉及一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]土壤干旱是一個(gè)世界性的問題，已經(jīng)成為危害作物生長、土壤荒漠化和自然生態(tài)環(huán)境惡化的主要原因之一。目前，全世界干旱區(qū)面積占全球面積的24 %，我國干旱區(qū)面積超過250 km2占國土面積的1/4以上。主要分布在我國的西北內(nèi)陸地區(qū)，如甘肅河西走廊、新疆、青海柴達(dá)木盆地、寧夏和內(nèi)蒙古部分地區(qū)。我國水資源總量2.8億萬m3，但人均水源占有量僅2300 m3，不足世界人均水平的1/4，居世界109位，被世界水資源與環(huán)境發(fā)展聯(lián)合會列為13個(gè)貧水國家之一。根據(jù)Boyer (1982)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，1939~1978年間，影響作物產(chǎn)量的各種環(huán)境因素中干旱和鹽堿造成的減產(chǎn)量高達(dá)40 %以上。干旱和鹽堿成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)穩(wěn)步增長的一大障礙。
[0003]目前國內(nèi)外學(xué)者在馬鈴薯的抗旱性評價(jià)、抗旱性生理機(jī)制、抗旱基因工程、抗旱與其他脅迫的關(guān)系、抗旱性已成等方面的研究均取得一定進(jìn)展?？购敌栽u價(jià)主要采用以產(chǎn)量為基礎(chǔ)的抗旱系數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，另外還可以結(jié)合碳同位素分辨率等生理指標(biāo)、形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行抗旱性的綜合評價(jià)。因此，選育抗旱性的馬鈴薯品種就顯得尤為重要。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，提供一種快捷，簡便，穩(wěn)定的馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，使用多層濾紙床液體培養(yǎng)方法，用液體MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗，聚乙二醇(PEG — 6000)做梯度水分脅迫，移苗，培養(yǎng)。
[0006]所述多層濾紙床液體培養(yǎng)方法,將型號為0.5mX0.5m的定性濾紙折成6層,剪成“十”字形，將四邊沿虛線向內(nèi)折疊90° ,做成大小為1.5cmX5.5cmX5.5cm的濾紙床,然后在濾紙床中央打孔9個(gè)，孔徑d=0.3_。并用鑷子將其水平放入150mL左右的培養(yǎng)瓶底部。
[0007]所述液體MS培養(yǎng)基，為液體MS培養(yǎng)基。
[0008]所述聚乙二醇(PEG — 6000)做梯度水分脅迫，配置液體MS培養(yǎng)基，將配制好的液體MS培養(yǎng)基平均分成五組，各組中分別加入聚乙二醇(PEG — 6000)，充分溶解，制成含0%、5%、10%、15%、20%聚乙二醇(PEG — 6000)的五種液體MS培養(yǎng)基，然后將每種不同聚乙二醇(PEG- 6000)含量的液體MS培養(yǎng)基分別倒入到10個(gè)培養(yǎng)瓶中，共50個(gè)培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶中裝液體MS培養(yǎng)基50 ml且面低于濾紙床面0.2cm。
[0009]所述裝好液體MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶高壓滅菌。
[0010]所述移苗將帶測定抗旱性馬鈴薯脫毒試管苗在無菌條件下剪成帶有2個(gè)腋芽的莖段后分別移入不同濃度梯度的聚乙二醇(PEG — 6000)液體MS培養(yǎng)基中。[0011 ] 所述每個(gè)培養(yǎng)瓶中接種5個(gè)莖段，封口。
[0012]所述將移苗成功后的培養(yǎng)瓶放在22°C~28°C，20001x~30001x條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)30天。
[0013]所述培養(yǎng)30天后，選出未污染的培養(yǎng)瓶，測定馬鈴薯脫毒試管生根情況、即根長，試管苗株高測定，試管苗葉片數(shù)。
[0014]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明采用液體MS培養(yǎng)基培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗，聚乙二醇做梯度水分脅迫，可以快捷，簡便，穩(wěn)定的鑒定馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0016]一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于，使用多層濾紙床液體培養(yǎng)方法，用液體MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗，聚乙二醇做梯度水分脅迫，移苗，培養(yǎng)。
[0017]多層濾紙床液體培養(yǎng)方法，將型號為0.5mX 0.5m的定性濾紙折成6層,剪成“十”字形，將四邊沿虛線向內(nèi)折疊90° ,做成大小為1.5cmX5.5cmX5.5cm的濾紙床,然后在濾紙床中央打孔9個(gè)，孔徑d=0.3mm。并用鑷子將其水平放入150mL左右的培養(yǎng)瓶底部。
[0018]液體MS培養(yǎng)基，為液體MS培養(yǎng)基。
[0019]聚乙二醇做梯度水分脅迫，配置液體MS培養(yǎng)基，將配制好的液體MS培養(yǎng)基平均分成五組，各組中分別加入聚乙二醇，充分溶解，制成含0%、5%、10%、15%,20%聚乙二醇的五種液體MS培養(yǎng)基，然后將每種不同聚乙二醇含量的液體MS培養(yǎng)基分別倒入到10個(gè)培養(yǎng)瓶中，共50個(gè)培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶中裝液體MS培養(yǎng)基50 ml且面低于濾紙床面0.2cm。
[0020]裝好液體MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶高壓滅菌。
[0021]移苗將帶測定抗旱性馬鈴薯脫毒試管苗在無菌條件下剪成帶有2個(gè)腋芽的莖段后分別移入不同濃度梯度的聚乙二醇液體MS培養(yǎng)基中。
[0022]每個(gè)培養(yǎng)瓶中接種5個(gè)莖段，封口。
[0023]將移苗成功后的培養(yǎng)瓶放在22°C~28°C，20001x~30001x條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)30天。
[0024]培養(yǎng)30天后，選出未污染的培養(yǎng)瓶，測定馬鈴薯脫毒試管生根情況、即根長，試管苗株高測定，試管苗葉片數(shù)。
[0025]上述雖然結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行了描述，但并非對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性的勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于，使用多層濾紙床液體培養(yǎng)方法，用液體MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)馬鈴薯脫毒試管苗，聚乙二醇做梯度水分脅迫，移苗，培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述多層濾紙床液體培養(yǎng)方法，將型號為0.5mX0.5m的定性濾紙折成6層，剪成“十”字形，將四邊沿虛線向內(nèi)折疊90° ,做成大小為1.5cmX5.5cmX5.5cm的濾紙床,然后在濾紙床中央打孔9個(gè)，孔徑d=0.3mm,并用鑷子將其水平放入150mL左右的培養(yǎng)瓶底部。
3.如權(quán)利要求1所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述液體MS培養(yǎng)基，為液體MS培養(yǎng)基。
4.如權(quán)利要求1所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述聚乙二醇做梯度水分脅迫，配置液體MS培養(yǎng)基，將配制好的液體MS培養(yǎng)基平均分成五組，各組中分別加入聚乙二醇，充分溶解，制成含0%、5%、10%、15%,20%聚乙二醇的五種液體MS培養(yǎng)基，然后將每種不同聚乙二醇含量的液體MS培養(yǎng)基分別倒入到10個(gè)培養(yǎng)瓶中，共50個(gè)培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶中裝液體MS培養(yǎng)基50 ml且面低于濾紙床面0.2cm。
5.如權(quán)利要求3所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述裝好液體MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶高壓滅菌。
6.如權(quán)利要求1所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述移苗將帶測定抗旱性馬鈴薯脫毒試管苗在無菌條件下剪成帶有2個(gè)腋芽的莖段后分別移入不同濃度梯度的聚乙二醇液體MS培養(yǎng)基中。
7.如權(quán)利要求6所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述每個(gè)培養(yǎng)瓶中接種5個(gè)莖段，封口。
8.如權(quán)利要求7所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述將移苗成功后的培養(yǎng)瓶放在22°C~28°C，20001x~30001x條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)30天。
9.如權(quán)利要求8所述的一種馬鈴薯脫毒試管苗抗旱性鑒定方法，其特征在于:所述培養(yǎng)30天后，選出未污染的培養(yǎng)瓶，測定馬鈴薯脫毒試管生根情況、即根長，試管苗株高測定，試管苗葉片數(shù)。
【文檔編號】A01H4/00GK103636494SQ201310592142
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月22日
【發(fā)明者】簡玉君 申請人:簡玉君