一株蝗蟲(chóng)綠僵菌及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種蝗蟲(chóng)綠僵菌的制備方法及應(yīng)用，尤其對(duì)防治蝗蟲(chóng)類(lèi)害蟲(chóng)有效。本發(fā)明提供的蝗蟲(chóng)綠僵菌Metarhizium?acridum?TRCC21601，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC?No.7992。該菌株產(chǎn)孢能力強(qiáng)，對(duì)菱蝗3齡跳蝻殺蟲(chóng)活性強(qiáng)，LT50(致死中時(shí))為5.59天。利用該菌株能有效控制菱蝗的種群數(shù)量。另外，蝗蟲(chóng)綠僵菌對(duì)其他害蟲(chóng)松毛蟲(chóng)、玉米螟、蠐螬等也具有很好的防效，值得推廣應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—株蝗蟲(chóng)綠僵菌及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]一株蝗蟲(chóng)綠僵菌的制備方法及應(yīng)用

【背景技術(shù)】
[0002]蝗蟲(chóng)是蝗科，直翅目昆蟲(chóng)。全世界有超過(guò)10，000種。分布于全世界的熱帶、溫帶的草地和沙漠地區(qū)?？谄鲌?jiān)硬，前翅狹窄而堅(jiān)韌，后翅寬大而柔軟，善于飛行，后肢很發(fā)達(dá)，善于跳躍?；认x(chóng)是農(nóng)、林、牧業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，不少有害蝗種對(duì)農(nóng)、林、牧業(yè)可造成不同程度危害。全世界的蝗蟲(chóng)已有I萬(wàn)種以上，其中對(duì)農(nóng)、林、牧業(yè)可造成危害的蝗蟲(chóng)約300種左右，全球除南極洲、歐亞大陸北緯550以北地區(qū)外均可發(fā)生蝗蟲(chóng)。
[0003]多年來(lái)草原蝗蟲(chóng)一直采用化學(xué)農(nóng)藥防治，對(duì)迅速控制蝗害的發(fā)生、擴(kuò)散起到了積極作用。但化學(xué)農(nóng)藥治蝗存在成本高、用量大、安全性差等弊端且大量使用易造成人畜中毒、污染草原同時(shí)殺滅蝗蟲(chóng)天敵危害草原塵態(tài)環(huán)境破壞生態(tài)平衡。因此生物防治技術(shù)是目前草原災(zāi)害綜合治理的積極有效的措施。白僵菌是一種半知菌類(lèi)的蟲(chóng)生真菌，具有營(yíng)養(yǎng)器官一菌絲和繁殖器官一分生孢子，菌絲有橫隔有分枝。白僵菌的分布范圍很廣，從海拔幾米至2000多米的高山均發(fā)現(xiàn)過(guò)白僵菌的存在，白僵菌可以侵入6個(gè)目15科200多種昆蟲(chóng)、螨類(lèi)的蟲(chóng)體內(nèi)大量繁殖，同時(shí)不斷產(chǎn)塵白僵素(大環(huán)脂類(lèi)毒素)和草酸鈣結(jié)晶，這些物質(zhì)可引起昆蟲(chóng)中毒，使體液發(fā)現(xiàn)機(jī)能發(fā)生變化，打亂新陳代謝以致死亡。所謂白僵蟲(chóng)就是白僵菌的分生孢子落在昆蟲(chóng)體上，在合適溫濕條件下，即可發(fā)芽直接侵入昆蟲(chóng)體內(nèi)，以昆蟲(chóng)體內(nèi)的血細(xì)胞及其他組織細(xì)胞作為營(yíng)養(yǎng)，大量增殖，以后菌絲穿出體表，產(chǎn)生白粉狀分生孢子，從而使害蟲(chóng)呈白色僵死狀，稱(chēng)為白僵蟲(chóng)。白僵菌制劑對(duì)人、畜無(wú)毒，對(duì)作物安全，無(wú)殘留、無(wú)污染，但能感染家蠶幼蟲(chóng)，形成僵蠶病。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一株蝗蟲(chóng)綠僵菌。
[0005]本發(fā)明所提供的幢蟲(chóng)綠僵菌Metarhizium acridum TRCC21601,其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC N0.7992。該菌株已于2013年08月13日把藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC)。
[0006]本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種殺蟲(chóng)菌劑。
[0007]本發(fā)明提供的殺蟲(chóng)菌劑,它的活性成分是上述幢蟲(chóng)綠僵菌Metarhizium acridumTRCC21601。
[0008]所述殺蟲(chóng)菌劑用于防治以下害蟲(chóng)的幾種或一種:松毛蟲(chóng)、玉米螟、蠐螬、蝗蟲(chóng)、馬鈴薯甲蟲(chóng)、松褐天牛、白蟻、茶小綠葉蟬、桃小食心蟲(chóng)等。
[0010]本發(fā)明的幢蟲(chóng)綠僵菌Metarhizium acridum TRCC21601對(duì)3齡幢蝻具有高致病力。
[0011]菌種名稱(chēng):球孢白僵菌
[0012]拉丁名:Beauveriabassiana
[0013]菌種編號(hào):TRCC21601.
[0014]保藏機(jī)構(gòu):中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心
[0015]保藏機(jī)構(gòu)簡(jiǎn)稱(chēng):CGMCC
[0016]地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)
[0017]保藏日期:2013年08月13日
[0018]保藏中心登記入冊(cè)編號(hào):CGMCC N0.7992
[0019]以下結(jié)合具體實(shí)施實(shí)例詳細(xì)描述本發(fā)明，這些實(shí)例僅僅是用于理解本發(fā)明而非限制。
實(shí)施實(shí)例I
[0020]球孢白僵菌的菌株鑒定
[0021]分子系統(tǒng)學(xué)鑒定
DNA提取方法:采用石英砂研磨CTAB提取法(Scott et al., 2000)。 遺傳標(biāo)記:選用翻譯延伸因子(t ef Ι-alpha)基因(tef)，擴(kuò)增引物:EF1T，EF2T(Bischoff et al.,2006)。
PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件:先94攝氏度加熱3分鐘使模板DNA變性，然后進(jìn)入下列溫度循環(huán):94攝氏度變性30秒，50攝氏度退火30秒，72攝氏度延伸45秒，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后在72攝氏度延伸5分鐘(Wang, 2012)。
PCR產(chǎn)物檢測(cè)和測(cè)序:PCR產(chǎn)物與10bp DNA ladder (MBI Fermentas)用2.0 %的瓊脂糖凝膠(agarose gel)在0.5XTBE電泳緩沖液中于80V電壓下電泳20分鐘，然后置于
0.5 μ g/ml的溴乙淀(EB, ehidium bromide)溶液中染色15分鐘，在波長(zhǎng)365和254nm的紫外光下檢測(cè)為明顯單一條帶的產(chǎn)物由擎科生物技術(shù)有限公司純化后用ABi3700 (AppliedB1systems)進(jìn)行雙向直通測(cè)序。
數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:原始序列用生物軟件B1edit7.0.9 (Hal I，1999)編輯后得到準(zhǔn)確無(wú)誤的序列，與GenBank下載的模式和權(quán)威菌株序列組成序列數(shù)據(jù)矩陣。對(duì)于序列矩陣，在B1edit7.0.9下做必要的人工編輯和調(diào)整得到的新矩陣。將該矩陣用MEGA5.0 (Tamura et al.,2011)進(jìn)行鄰居連接法(neighbor-joining, NJ)分析,推斷出系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，并用自展法(bootstrap)進(jìn)行1000次重復(fù)評(píng)估各分支的可靠性(Fig.1，見(jiàn)下頁(yè))。菌株 TRCC21601tef 序列:
TRCC21601

【權(quán)利要求】
1.一株幢蟲(chóng)綠僵菌,其拉丁名稱(chēng)為Metarhizium acridum TRCC21601,其特征在于:所述的蝗蟲(chóng)綠僵菌Metarhizium acridum TRCC21601菌株號(hào)為T(mén)RCC16003，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC N0.7992。
2.權(quán)利要求1所述的蝗蟲(chóng)綠僵菌在產(chǎn)生分生孢子或菌絲體中的應(yīng)用。
3.一種殺蟲(chóng)菌劑，它的活性成分是權(quán)利要求1所述的幢蟲(chóng)綠僵菌Metarhiziumacridum TRCC21601，根據(jù)權(quán)利要求3所述的菌劑，其特征在于:所述的蝗蟲(chóng)綠僵菌為生孢子或菌絲體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的菌劑，其特征在于:所述殺蟲(chóng)菌劑用于防治以下害蟲(chóng)的幾種或一種:松毛蟲(chóng)、玉米螟、蠐螬、蝗蟲(chóng)、馬鈴薯甲蟲(chóng)、松褐天牛、白蟻、茶小綠葉蟬、桃小食心蟲(chóng)等。
5.權(quán)利要求1所述的幢蟲(chóng)綠僵菌Metarhiziumacridum TRCC21601在制備殺蟲(chóng)劑中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求3或4所 述的菌劑在制備殺蟲(chóng)劑中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01P7/04GK104073441SQ201310646371
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2013年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月6日
【發(fā)明者】周立峰, 朱湘盛, 梁小文, 王根豪, 陳曉燕, 李源, 劉麗君, 李肖宇, 馬忠?guī)r, 熊建生, 蘆茜 申請(qǐng)人:江西天人生態(tài)股份有限公司