一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途
【專利摘要】一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途，屬于植物源農藥【技術領域】。其特征在于含有0.5-2.3%喜樹堿提取物干粉，1.2-5.3%無機堿，82-97%溶劑，0.7-2.1%增效劑，1-5%穩(wěn)定劑。上述一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途，以喜樹堿提取物與無機堿反應后的物質為有效組分，同時添加了一定的增效成分和穩(wěn)定成分，所得制劑參與抑制生物體內皮細胞的分化的過程，從而抑制害蟲的生長發(fā)育，而且田間作為農藥使用時可以減少有效成分在環(huán)境中的光解和流失，可持久地發(fā)揮生物活性，起到抑制生物體內皮細胞的分化和田間防治病蟲害的作用；且制造方便，成本低、效果平穩(wěn)、制劑穩(wěn)定且用量少。
【專利說明】一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物源農藥【技術領域】，具體為一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途。
【背景技術】
[0002]喜樹(Camptothecia acuminata Decaisne)為一種古老、優(yōu)秀的殺蟲植物,且是我國特有樹種，速生。一般產(chǎn)于江蘇南部、浙江、福建、江西、湖南、湖北、四川、貴州、廣西、廣東、云南等省區(qū)，在四川西部成都平原和江西東南部均較常見。喜樹的根、莖、葉和種子中共發(fā)現(xiàn)了三十多個化合物，其中喜樹堿及其他生物堿十余個，包括喜樹堿、喜樹次堿、羥基喜樹堿、甲基喜樹堿等，其中喜樹堿含量最高，是其中主要的活性物質。這些生物堿具抗癌、殺蟲、抑菌多種功效，現(xiàn)代醫(yī)學研究已充分證實喜樹堿及其部分衍生物具有顯著的抗癌作用并已將其成功開發(fā)為抗癌藥物。從農藥學的角度來看，喜樹堿作為植物體內的一種生物堿，具有可以開發(fā)為殺蟲劑的多種優(yōu)點。
[0003]喜樹堿在結構上屬于一種喹啉類生物堿，其合成來自單萜吲哚生物堿。喜樹堿由五環(huán)駢合而成，分別為喹啉環(huán)，吡咯環(huán)，吡啶酮結構，一個具有S型手性碳的a —羥基內酯。分子式C20H16N204 ;分子量348.34。喜樹堿為淺黃色針狀結晶(甲醇-乙腈)，分解點264-267?。在紫外燈下表現(xiàn)強烈的藍色熒光。和酸不能生成穩(wěn)定的鹽。X-射線研究(碘乙酰)，發(fā)現(xiàn)其唯一的手性C20為S型。喜樹堿不溶于水，除氯仿、甲醇、二甲基亞砜等少數(shù)溶劑外，不溶于一般的有機溶劑，在濃硫酸中溶解呈黃綠色。喜樹堿的化學性質不同于普通生物堿，與一般生物堿試劑無反應，如常用檢測試劑=Dragendoffs reagent (碘化秘鉀試劑)和苯酚-三氯化鐵，呈陰性；吲哚分析，負反應；不能用重氮甲烷和二甲基硫酸酯進行甲基化；室溫下其內酯環(huán)經(jīng)稀堿處理，易開環(huán)成水溶性羧酸鹽；酸化則又重新內酯化成環(huán)。喜樹堿具有開發(fā)為一種高效、低毒、環(huán)境相容性好的農藥品種的潛質，張立欽等已將其開發(fā)成一定的農藥制劑進行推廣，本發(fā)`明研制的一種含喜樹堿提取物能抑制生物體內皮細胞分化的農藥制劑為喜樹堿致毒機理方面工作的開展提供了一定的研究基礎。目前，國內外對喜樹堿的致毒機理方面仍呈現(xiàn)出大片的空白，我們研究發(fā)現(xiàn)，喜樹堿可通過改變細胞氧化還原狀態(tài)來引起昆蟲細胞凋亡，改變生物體內極為重要的中間代謝產(chǎn)物苯二酚，從而抑制細胞分化，導致害蟲生長發(fā)育障礙。因此，研究喜樹堿的血液毒性和對害蟲細胞的分化對探討喜樹堿藥劑的毒性機制具有極其重要的意義。

【發(fā)明內容】

[0004]針對現(xiàn)有技術中存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于設計提供一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途的技術方案，以天然存在的喜樹堿提取物與無機堿反應后的物質為有效組分，同時添加了一定的增效成分和穩(wěn)定成分，所得制劑不僅穩(wěn)定高效，而且可以減少有效成分在環(huán)境中的光解和流失，所得制劑在使用中可以持久地發(fā)揮生物活性，起到抑制生物體內皮細胞的分化作用。[0005]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于含有重量百分含量的以下物質:0.2-2.3%的喜樹堿提取物干粉，1.2-5.3%的無機堿，82-97%的溶劑，
0.7-2.1%的增效劑，1-5%的穩(wěn)定劑；所述的無機堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸氫鈉中的一種以上混合物，所述的溶劑為蒸餾水、自來水、甲醇、乙醇中的一種以上混合物，所述的增效劑為有機硅聚氧乙烯醚、異丙醇、維生素E、丙酮中的一種以上混合物，所述的穩(wěn)定劑為季銨鹽、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨、木質素磺酸鈉、月桂醇硫酸鈉中的一種以上混合物；
所述的喜樹堿提取物干粉采用以下方法制得:
O將等量喜樹葉、喜樹種子、喜樹堿果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至200-400目，然后用自來水浸泡10-15小時，再加熱到50-75°C持續(xù)加熱煎煮25-35min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，備用；
2)將步驟I)中的濾渣回收，再加入適量自來水重復步驟I)，得濾液，稱為B液，備用；
3)合并兩次濾液，超聲處理3-10min，然后在濾液中加入與濾液等體積的甲醇回流提取2-3次，每次40-70 min，然后20_25°C下靜置10-16小時，抽濾除去沉淀，在50_55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度90°C -100°C下，待濃縮液進液流速為300-370 mL.mirT1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的4-6%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在55-70°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過100-200目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。
[0006]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述喜樹堿提取物干粉的重量百分含量為0.5-2.0%，優(yōu)選1.0-1.7%。
[0007]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述無機堿的重量百分含量為1.5-4%，優(yōu)選2-3.5%，更優(yōu)選2.5-3.0%。
[0008]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述溶劑的重量百分含量為85-95%，優(yōu)選89-90%。
[0009]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述增效劑的重量百分含量為0.8-1.9%，優(yōu)選1.0-1.6%。
[0010]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述穩(wěn)定劑的重量百分含量為1.5-4.0%，優(yōu)選2.5-3.0%。
[0011]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于喜樹堿提取物干粉的制備方法步驟I)中:自來水浸泡時間為12-13小時；再加熱到55-70°C，優(yōu)選60-650C ;加熱煎煮時間為28-30min。
[0012]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于喜樹堿提取物干粉的制備方法步驟3)中:超聲處理時間為5-8min，回流提取時間為50_60min，優(yōu)選55-58min ;靜置12-14小時；水浴溫度92-95°C下，進液流速為320-350 mL.min—1。
[0013]所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑在制備抑制秀麗隱桿線蟲、松材線蟲、蚜蟲、二化螟、煙粉虱、小綠葉蟬生物體內皮細胞分化、殺蟲致毒機理研究制劑中的應用。
[0014]上述一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑及用途，以天然存在的喜樹堿提取物與無機堿反應后的物質為有效組分，同時添加了一定的增效成分和穩(wěn)定成分，所得制劑參與抑制生物體內皮細胞的分化的過程，從而抑制害蟲的生長發(fā)育，而且田間作為農藥使用時可以減少有效成分在環(huán)境中的光解和流失，可持久地發(fā)揮生物活性，起到抑制生物體內皮細胞的分化和田間防治病蟲害的作用；且具有制造方便，成本低廉、效果平穩(wěn)、制劑穩(wěn)定且用量少等優(yōu)點。
[0015]本申請文件中涉及的百分含量除另有說明外，均指重量百分含量。
【具體實施方式】
[0016]本發(fā)明所述的一種含喜樹堿提取物能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑通過以下具體技術方案實施。
[0017]實施例1
本發(fā)明制劑的制備方法為:將等量喜樹葉、種子、果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至400目，然后用自來水浸泡13小時，再加熱到50°C持續(xù)加熱煎煮34min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，再將濾渣回收，加入適量自來水重復上述步驟，得濾液B，合并兩次濾液，超聲處理7min，然后在濾液中加入與濾液等量的甲醇回流提取2次，每次65min，然后25°C下靜置10小時，抽濾除去沉淀，在55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度98°C下，待濃縮液進液流速為300 mL.mirT1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的5%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在68°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過100目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。然后向50L攪拌爸內投入20kg蒸懼水和26.85kg乙醇,再加入0.25kg喜樹堿提取物干粉，然后慢慢攪拌并投入1.3kg氫氧化鈉，再加入0.2kg有機硅聚氧乙烯醚和0.3kg丙酮，攪拌均勻，再加入0.6kg季銨鹽、0.4kg脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨和0.1kg木質素磺酸鈉，攪拌至所有物質溶解，即成最終制劑。
[0018]實施例2
本發(fā)明制劑的制備方法為:將等量喜`樹葉、種子、果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至200目，然后用自來水浸泡12小時，再加熱到75°C持續(xù)加熱煎煮32min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，再將濾渣回收，加入適量自來水重復上述步驟，得濾液B，合并兩次濾液，超聲處理6min，然后在濾液中加入與濾液等量的甲醇回流提取3次，每次55 min，然后25°C下靜置16小時，抽濾除去沉淀，在55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度97°C下，待濃縮液進液流速為370 mL ^mirT1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的5%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在65°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過200目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。然后向50L攪拌釜內投入22.6kg蒸餾水和22kg自來水，再加入0.85kg喜樹堿提取物干粉，然后慢慢攪拌并投入0.5kg氫氧化鈉、0.5kg氫氧化鉀、0.4kg氫氧化鈣和0.65kg碳酸氫鈉，再加入0.3kg異丙醇和0.5kg丙酮,攪拌均勻,再加入1.7kg月桂醇硫酸鈉,攪拌至所有物質溶解，即成最終制劑。
[0019]實施例3
本發(fā)明制劑的制備方法為:將等量喜樹葉、種子、果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至250目，然后用自來水浸泡11小時，再加熱到55°C持續(xù)加熱煎煮30min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，再將濾渣回收，加入適量自來水重復上述步驟，得濾液B，合并兩次濾液，超聲處理5min，然后在濾液中加入與濾液等量的甲醇回流提取3次，每次60 min，然后25°C下靜置12小時，抽濾除去沉淀，在55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度95°C下，待濃縮液進液流速為310 mL.min—1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的5%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在62°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過150目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。然后向50L攪拌爸內投入30kg甲醇和16.55kg乙醇,再加入0.3kg喜樹堿提取物干粉，然后慢慢攪拌并投入Ikg氫氧化鉀和0.4kg氫氧化鈣，再加入0.25kg有機硅聚氧乙烯醚和0.3kg異丙醇,攪拌均勻,再加入0.6kg木質素磺酸鈉和0.6kg月桂醇硫酸鈉,攪拌至所有物質溶解，即成最終制劑。
[0020]實施例4
本發(fā)明制劑的制備方法為:將等量喜樹葉、種子、果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至300目，然后用自來水浸泡14小時，再加熱到65°C持續(xù)加熱煎煮28min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，再將濾渣回收，加入適量自來水重復上述步驟，得濾液B，合并兩次濾液，超聲處理8min，然后在濾液中加入與濾液等量的甲醇回流提取2次，每次50 min，然后25°C下靜置14小時，抽濾除去沉淀，在55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度92°C下，待濃縮液進液流速為340 mL.mirT1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的5%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在60°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過200目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。然后向50L攪拌釜內投入46.05kg自來水，再加入0.4kg喜樹堿提取物干粉，然后慢慢攪拌并投入1.55kg氫氧化鉀,再加入0.2kg有機娃聚氧乙烯醚、0.2kg異丙醇和0.2kg維生素E，攪拌均勻，再加入0.4kg脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨、0.5kg木質素磺酸鈉和0.5kg月桂醇硫酸鈉，攪拌至所有物質溶解，即成最終制劑。
[0021]實施例5
本發(fā)明制劑的制備方法為:將等量喜樹葉、種子、果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至350目，然后用自來水浸泡15小時，再加熱到60°C持續(xù)加熱煎煮35min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，再將濾渣回收，加入適量自來水重復上述步驟，得濾液B，合并兩次濾液，超聲處理lOmin，然后在濾液中加入與濾液等量的甲醇回流提取2次，每次70 min，然后25°C下靜置15小時，抽濾除去沉淀，在55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度100°C下，待濃縮液進液流速為350 mL.min-1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的5%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在70°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過100目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。然后向50L攪拌釜內投入45.55kg甲醇，再加入0.6kg喜樹堿提取物干粉，然后慢慢攪拌并投入0.9kg氫氧化韓和0.8kg碳酸氫鈉,再加入0.65kg有機娃聚氧乙烯醚,攪拌均勻，再加入0.9kg季銨鹽和0.6kg月桂醇硫酸鈉，攪拌至所有物質溶解，即成最終制劑。
[0022]實施例6
本發(fā)明制劑的制備方法為:將等量喜樹葉、種子、果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至380目，然后用自來水浸泡10小時，再加熱到70°C持續(xù)加熱煎煮25min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，再將濾渣回收，加入適量自來水重復上述步驟，得濾液B，合并兩次濾液，超聲處理3min，然后在濾液中加入與濾液等量的甲醇回流提取3次，每次40 min，然后25°C下靜置11小時，抽濾除去沉淀，在55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度90°C下，待濃縮液進液流速為360 mL.mirT1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的5%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在55°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過200目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。然后向50L攪拌爸內投入24.97kg自來水和20kg甲醇,再加入0.8kg喜樹堿提取物干粉，然后慢慢攪拌并投入0.9kg氫氧化鈉和1.0kg碳酸氫鈉，再加入0.33kg維生素E和
0.4kg丙酮,攪拌均勻,再加入0.6kg季銨鹽、0.3kg脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨、0.3kg木質素磺酸鈉和0.4kg月桂醇硫酸鈉，攪拌至所有物質溶解，即成最終制劑。
[0023]為進一步說明本發(fā)明的有益試驗結果，下面通過對上述方法制備的喜樹堿提取物干粉及制劑進行效果測定來說明本發(fā)明的有益結果。
[0024]具體試驗:喜樹堿提取物農藥制劑對生物體內皮細胞分化活性的檢測
試驗所用蚜蟲細胞來源于浙江農林大學森林保護研究所,青菜上自行培養(yǎng)的菜蚜,喜樹堿提取物干粉干粉浙江農林大學森林保護研究所按權利要求自行提取，其余試劑均為國產(chǎn)分析純。
[0025]蚜蟲內皮細胞的分離培養(yǎng):在無菌條件下，取蚜蟲研磨液5mL，加入15%的胎牛血清，15 μ g/mL內皮細胞生長補充因子的M199培養(yǎng)基充分混勻制成細胞懸浮液，置于25°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞長至融合狀態(tài)后用0.3%的蛋白酶消化傳代，取生長良好的3-5代內皮細胞用于實驗。通過免疫熒光檢測和鑒定內皮細胞。然后置于離心管，以Ficoll淋巴細胞分離液梯度離心，挑取界面的云霧狀白膜層即為單個內皮細胞。將單個細胞以lX86/mL細胞密度接種于培養(yǎng)瓶，置25°C培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。72 h后去除未貼壁的細胞懸液，每天換液I次，7天后待貼壁細胞達85%以上融合時，用0.1%的蛋白酶消化，2X 103/cm2的細胞密度傳代；每3天傳代I次。顯微鏡觀察細胞形態(tài)。
`[0026]細胞分組及染毒試驗:試驗細胞分為1-8組:實施例1-6組、第7組溶劑對照組，第8組正常清水對照組。分別用藥劑處理1-7天后收集各實驗組的細胞。用臺盼藍試劑檢測細胞的活性，取含有I X 86個活細胞的5μ I細胞懸液，放入37°C培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)10h，離心后丟棄上清液，每個實驗組加入10μ I 二甲基亞砜，震蕩25-30 min，用酶標儀在波長為254 nm處測量吸光光度值。吸光光度值越大表示細胞分化程度越大。同時，按1: 100無血清MDM培養(yǎng)基稀釋，使其終濃度為2 μ mol/L。收集各實驗組的細胞，用無血清MDM培養(yǎng)基清洗，將細胞懸浮于已稀釋的藥劑中，25°C細胞培養(yǎng)箱內反應48 min，每6 min搖動一次，取出后用熒光酶標儀檢測。使用365 nm激發(fā)波長，430 nm發(fā)射波長。采用流式細胞儀檢測細胞中喜樹堿的熒光強度，每個樣本計數(shù)10000個細胞，以CellQuestTM軟件分析平均熒光強度。重復測量采用方差分析。實驗所得數(shù)據(jù)用均數(shù)土標準差(X土s)表示。
[0027]試驗結果如下:
培養(yǎng)3-4天后，顯微鏡下即可見有稀疏分布的單個細胞貼壁生長，細胞以分散，集落方式增殖。培養(yǎng)第6天，見細胞擴大直至鋪滿培養(yǎng)瓶底面。其中傳代培養(yǎng)的細胞經(jīng)過1-2天的適應期，第3天起細胞大量增加，進入對數(shù)生長期，第7天達到頂峰，以后進入穩(wěn)定期。未染毒前可發(fā)現(xiàn)細胞貼壁呈現(xiàn)多邊形，生長匯合后細胞呈典型的鵝卵石狀，符合內皮細胞的形態(tài)特征。細胞染毒后光學顯微鏡下觀察到，第I天，細胞形態(tài)無明顯改變；第2-4天，胞體回縮，增殖受抑制；第5-7天，細胞形態(tài)迅速改變，生長發(fā)育明顯被抑制。熒光檢測顯示培養(yǎng)的胞漿呈紅色熒光，且隨著時間的延長，熒光的亮度有所增加。
[0028]表1實施例1-6對蚜蟲內皮細胞分化、增殖的抑制作用
【權利要求】
1.一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于含有重量百分含量的以下物質:0.2-2.3%的喜樹堿提取物干粉，1.2-5.3%的無機堿，82-97%的溶劑，0.7-2.1%的增效劑，1-5%的穩(wěn)定劑；所述的無機堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、碳酸氫鈉中的一種以上混合物，所述的溶劑為蒸餾水、自來水、甲醇、乙醇中的一種以上混合物，所述的增效劑為有機硅聚氧乙烯醚、異丙醇、維生素E、丙酮中的一種以上混合物，所述的穩(wěn)定劑為季銨鹽、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸銨、木質素磺酸鈉、月桂醇硫酸鈉中的一種以上混合物； 所述的喜樹堿提取物干粉采用以下方法制得: 1)將等量喜樹葉、喜樹種子、喜樹堿果實在通風處陰干，用粉碎機粉碎至200-400目，然后用自來水浸泡10-15小時，再加熱到50-75°C持續(xù)加熱煎煮25-35min，壓濾進行固液分離，分別收集濾液和濾渣，所得濾液稱為A液，備用； 2)將步驟I)中的濾渣回收，再加入適量自來水重復步驟I)，得濾液，稱為B液，備用； 3)合并兩次濾液，超聲處理3-10min，然后在濾液中加入與濾液等體積的甲醇回流提取2-3次，每次40-70 min，然后20_25°C下靜置10-16小時，抽濾除去沉淀，在50_55°C下減壓回收甲醇，將提取液在水浴溫度90°C -100°C下，待濃縮液進液流速為300-370 mL.mirT1的條件下采用真空薄膜濃縮裝置進行閃蒸濃縮至原體積的4-6%，得到喜樹堿的濃縮液，最后將濃縮液在55-70°C條件下繼續(xù)進行旋轉薄膜濃縮、真空干燥成干粉，用研缽研細并通過100-200目篩，即得喜樹堿提取物提取物干粉。
2.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述喜樹堿提取物干粉的重量百分含量為0.5-2.0%，優(yōu)選1.0-1.7%。
3.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述無機堿的重量百分含量為1.5-4%，優(yōu)選2-3.5%，更優(yōu)選2.5-3.0%。
4.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述溶劑的重量百分含量為85-95%，優(yōu)選89-90%。
5.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述增效劑的重量百分含量為0.8-1.9%，優(yōu)選1.0-1.6%。
6.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于所述穩(wěn)定劑的重量百分含量為1.5-4.0%，優(yōu)選2.5-3.0%。
7.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于喜樹堿提取物干粉的制備方法步驟I)中:自來水浸泡時間為12-13小時；再加熱到55-70°C，優(yōu)選60-65°C ;加熱煎煮時間為28-30min。
8.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑，其特征在于喜樹堿提取物干粉的制備方法步驟3)中:超聲處理時間為5-8min，回流提取時間為50-60min,優(yōu)選55_58min ;靜置12-14小時；水浴溫度92-95 °C下，進液流速為320-350mL.mirT1。
9.如權利要求1所述的一種能抑制生物體內皮細胞分化的喜樹堿制劑在制備抑制秀麗隱桿線蟲、松材線蟲、蚜蟲、二化螟、煙粉虱、小綠葉蟬生物體內皮細胞分化、殺蟲致毒機理研究制劑中的應用。
【文檔編號】A01P5/00GK103688957SQ201310725874
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月25日 優(yōu)先權日:2013年12月25日
【發(fā)明者】張立欽, 童森淼, 陳安良, 胡加付, 馬建義, 王勇軍, 毛勝鳳, 劉洪波, 張紹勇 申請人:浙江農林大學