一種以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法
【專利摘要】一種以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，用原產(chǎn)于青藏高原的野生天然冬蟲夏草菌株制備菌懸液接種到活體黃粉蟲上經(jīng)人工培育而成人工蟲草。包括以下步驟：(1)蟲草菌菌株的篩選；(2)黃粉蟲的準備；(3)菌懸液的制作；(4)接種；(5)子座的培育；(6)蟲草的收集保存。本發(fā)明以黃粉蟲為宿主，人工接種冬蟲夏草菌株菌懸液，培育而成。接種成功率、接種后的僵化率達65％以上，子實體的長出率達70％以上。從接種到子實體的成熟約55-65天。
【專利說明】一種以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明屬于藥用菌栽培【技術(shù)領域】，具體涉及一種以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，尤其涉及一種用原產(chǎn)于青藏高原的野生天然冬蟲夏草菌株制備菌懸液接種到活體黃粉蟲上經(jīng)人工培育而成人工蟲草的培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人們生活水平的提高和對健康的重視，冬蟲夏草及其附屬產(chǎn)品成為一個發(fā)展迅速的產(chǎn)業(yè)。冬蟲夏草列為國家二級保護物種，各地政府也出臺政策禁挖、限挖，但對冬蟲夏草的采挖并未得到遏制。冬蟲夏草是我國的一種名貴中藥，由于它需要特殊的生長條件，生長期較長，因而在自然界中數(shù)量十分稀少，隨著環(huán)境條件的改變，產(chǎn)量呈逐漸下降趨勢，而社會需求越來越大，故十分名貴，價格也不菲，目前市場上達到每千克4萬元左右。[0003]蟲草(Cordyceps militaris)與冬蟲夏草(Cordyceps)比較:蟲草是名貴的中藥材，具有很高的滋補保健價值和藥用價值。在我國蟲草的種類有200多種，其中應用價值最高的是產(chǎn)于西藏的冬蟲夏草和產(chǎn)于長白山的蟲草。二者在生物分類上同屬于子囊菌綱肉座菌目麥角菌科蟲草屬。冬蟲夏草產(chǎn)自天然，是冬蟲夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼蟲而形成。黃粉蟲蟲草是將蟲草菌接種于黃粉蟲體，經(jīng)人工培育而成。目前黃粉蟲蟲草的栽培己經(jīng)形成規(guī)模化。黃粉蟲蟲草和冬蟲夏草藥化成分及藥理功能都非常相近。研究表明，黃粉蟲蟲草和冬蟲夏草中無機元素種類基本一致，二者硒的含量均較高，分別比富硒抗癌中藥黃茂高3.3倍和5.8倍。
[0004]目前，國內(nèi)北華大學的潘麗梅將黃粉蟲幼蟲通過接種蟲草菌，在一定的溫度、濕度、光照等條件下，經(jīng)過數(shù)天的精心培育，成功培育出了黃粉蟲蟲草，但感染率近為30%，達不到大生產(chǎn)的需求。
[0005]安徽農(nóng)業(yè)大學微生物防治省重點實驗室的李春如教授等人利用臺灣蟲草(Cordyceps formosana)對飼喂昆蟲黃粉蟲進行感染試驗,結(jié)果表明:黃粉蟲在菌落接觸感染、剛蛻皮幼蟲的穿刺接種和孢子濃度IXlO5個/ml浸蘸處理下，獲得了相對較高的侵染率，分別達到30%，25%和25%，剛蛻皮幼蟲一般比深色幼蟲組其侵染率較高。
[0006]申請?zhí)枮?00510101348.0，發(fā)明名稱為“以黃粉蟲為寄主的蟲草子實體及其培育方法”的專利，其方法是包括菌種制備、對黃粉蟲接種感染和出草等培養(yǎng)步驟。本發(fā)明以家黃粉蟲為宿主，人工接種蟲草菌，模擬蟲草自然生態(tài)環(huán)境，人工培育而成。而此發(fā)明的菌種是孢子懸濁液，后期的培養(yǎng)是在自然環(huán)境下培養(yǎng)，烘干處理采用高溫處理，這對蟲草的質(zhì)量和有效成分的影響很大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種用原產(chǎn)于青藏高原的野生天然冬蟲夏草菌株孢子接種到活體黃粉蟲上人工培育而成人工蟲草的培育方法。
[0008]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一種人工蟲草的培育方法，其特征在于，包括以下步驟:[0009]I)蟲草菌菌株的篩選
[0010]將原產(chǎn)于青藏高原的野生新鮮冬蟲夏草菌株，先接種于黃粉蟲粉末作為氮源的培養(yǎng)基平板上，待菌絲體長滿平板，反復篩選直至獲得長勢比較快、性狀穩(wěn)定的冬蟲夏草純菌株數(shù)株，以上述菌株作為本發(fā)明的目的菌株；
[0011]2)黃粉蟲的準備
[0012]在無菌操作臺內(nèi)，將10-15齡黃粉蟲幼蟲用75%酒精消毒6-9分鐘左右，用無菌水沖洗5-6次，置于無菌的容易內(nèi)通風晾干，作宿主備用；
[0013]3)菌懸液的制作
[0014]將篩選的蟲草菌株接種于以黃粉蟲粉末作為主要氮源制成的液體培養(yǎng)基中，置20°C下培養(yǎng)，待出現(xiàn)大量菌絲后，挑取一部分接種于上述液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)4-5天，用高速離散器，以10000r/min，勻漿Imin既得菌懸液；
[0015]4)接種
[0016]在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入上述黃粉蟲尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌液；
[0017]5)子座的培育
[0018]將處理后的黃粉蟲放于無菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保護至體僵硬；然后將培養(yǎng)僵硬的體置于15_25°C、空氣相對濕度為85-95%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中`培養(yǎng)；
[0019]6)蟲草的收集保存
[0020]子座成熟后，放在60°C環(huán)境下烘干1-5小時，置陰涼干燥處密封保存，或采用真空冷凍干燥后進行低溫貯存。
[0021]本發(fā)明蟲草以黃粉蟲為宿主，人工接種菌懸液。接種成功率、接種后的僵化率達85%以上，子實體的長出率達100%以上。從接種到子實體的成熟約50-60天。
【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明:
[0023]本發(fā)明中的活體黃粉蟲為本公司實驗室自主提供。
[0024]本發(fā)明黃粉蟲蟲草培育技術(shù)方案:人工培育黃粉蟲蟲草時，將篩選的蟲草菌株接種于以黃粉蟲粉末作為主要氮源有機培養(yǎng)基上，置20°C下培養(yǎng)，待出現(xiàn)大量菌絲后，挑取一部分放在液體培養(yǎng)基內(nèi)制成培養(yǎng)，培養(yǎng)4-5天，用高速離散器打碎菌絲球既得菌懸液，將菌懸液接種于上述黃粉蟲尾部或口器，至體直至僵硬。然后將僵硬的黃粉蟲體放在適合蟲草培養(yǎng)的條件下培養(yǎng)。技術(shù)具體方案如下:
[0025]I)蟲草菌菌株的篩選
[0026]將原產(chǎn)于青藏高原的野生新鮮冬蟲夏草菌株，先接種于黃粉蟲粉末作為氮源平板生長，待菌絲體長滿平板，反復篩選直至獲得長勢比較快、性狀穩(wěn)定的冬蟲夏草純菌株數(shù)株，以上述菌株作為本發(fā)明的目的菌株；
[0027]2)黃粉蟲的準備
[0028]將黃粉蟲幼蟲于室內(nèi)培養(yǎng)得蟲，用于培育蟲草子實體。在無菌操作臺內(nèi)，將活體用75%酒精消毒6-9分鐘左右，用無菌水沖洗5-6次，晾干作宿主；[0029]3)菌懸液的制作
[0030]將篩選的蟲草菌株接種于以黃粉蟲粉末作為主要作為氮源的培養(yǎng)基平板上，置20°C下培養(yǎng)，待出現(xiàn)大量菌絲后，挑取一部分接種于上述液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)4-5天，用高速離散器，以10000r/min，勻漿Imin既得菌懸液；
[0031]4)接種
[0032]在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入上述黃粉蟲尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌液；
[0033]5)子座的培育
[0034]將處理后的黃粉蟲放于無菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保護至體僵硬；然后將培養(yǎng)僵硬的體置于15_25°C、空氣相對濕度為85-95%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中
培養(yǎng)；
[0035]6)蟲草的收集保存
[0036]子座成熟后，放在60°C環(huán)境下烘干1-5小時，置陰涼干燥處密封保存，或采用真空冷凍干燥后進行低溫 貯存。
[0037]實施例一:
[0038]以活體黃粉蟲為培養(yǎng)基的人工蟲草培育方法。
[0039]具體技術(shù)方案如下:
[0040](一 )蟲草菌菌株的篩選
[0041]1、菌種制作
[0042]選取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、早熟、原產(chǎn)于青藏高原的野生新鮮冬蟲夏草子實體，用75%的酒精進行表面消毒，用無菌水清洗數(shù)次(一般5-6次)，將冬蟲夏草中的蟲體去掉，剩余部分放置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)。待菌絲布滿平板后再純化。經(jīng)反復純化后獲得數(shù)株母種。
[0043]將母種擴大培養(yǎng)后，置于以黃粉蟲粉末作為氮源有機培養(yǎng)基上，于18°C -25°C下培養(yǎng)20-30d，觀察生長情況，若見有雜菌污染，應對母種進一步純化；若無雜菌污染，可繼續(xù)培養(yǎng)，一個月后即有橙紅色子實體產(chǎn)生，說明母種可靠。
[0044]將液體培養(yǎng)基分裝于500ml三角瓶中，121 °C，滅菌20分鐘，將母種在無菌條件下用接種環(huán)接到三角瓶中。接種后置于18_22°C條件下，搖種培養(yǎng)6d左右，待形成均勻小球后用高速分散器高速1000Or/min，處理Imin既得菌懸液。
[0045]2、宿主準備
[0046]將黃粉蟲幼蟲于室內(nèi)培養(yǎng)得蟲，用于培育蟲草子實體。在無菌操作臺內(nèi)，將活體用75%酒精消毒6-9分鐘左右，用無菌水沖洗I分鐘，晾干作宿主；
[0047]3、接種
[0048]在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入上述黃粉蟲尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌懸液；
[0049]4、子座的培育
[0050]將處理后的黃粉蟲放于無菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保護至體僵硬；然后將培養(yǎng)僵硬的體置于15_25°C、空氣相對濕度為85-95%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中
培養(yǎng)；
[0051]5、黃粉蟲蟲草的收集保存[0052]子座成熟后，放在60°C環(huán)境下烘干1-5小時，置陰涼干燥處密封保存，或者為了防止高溫破壞蟲草中的部分營養(yǎng)物，可采用真空冷凍`干燥后，低溫貯存。
【權(quán)利要求】
1.一種以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于，包括以下步騾:蟲草菌菌株的篩選，黃粉蟲的準備，菌懸液的制作，接種，子座的培育，蟲草的收集保存等步驟。
2.基于權(quán)利要求1所述的以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于所述的蟲草菌菌株的篩選，是將原產(chǎn)于青藏高原的野生新鮮冬蟲夏草菌株，先接種于黃粉蟲粉末作為主要氮源制成的平板生長，待菌絲體長滿平板，反復篩選直至獲得長勢比較快、性狀穩(wěn)定的冬蟲復草純菌株數(shù)株，以上述菌株作為本發(fā)明的目的菌株。
3.基于權(quán)利要求1所述的以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于所述的黃粉蟲的準備，是在在無菌操作臺內(nèi)，將10-15齡黃粉蟲幼蟲用75%酒精消毒6-9分鐘左右，用無菌水沖洗5-6次，置于無菌的容易內(nèi)通風晾干，作宿主備用。
4.基于權(quán)利要求1所述的以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于所述的菌懸液的制作:是將篩選的蟲草菌株接種于以黃粉蟲粉末作為主要氮源制成的培養(yǎng)基平板上，置20°C下培養(yǎng),待出現(xiàn)大量菌絲后,挑取一部分接種于上述液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng),培養(yǎng)4-5天,用高速離散器，以10000r/min,勻衆(zhòng)Imin既得菌懸液。
5.基于權(quán)利要求1所述的以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于所述的接種:是在無菌操作臺內(nèi)，用無菌注射器吸取菌懸液注入上述黃粉蟲尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌液。
6.基于權(quán)利要求1所述的以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于所述的子座的培育:是將處理后的黃粉蟲放于無菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保護至體僵硬；然后將培養(yǎng)僵硬的體置于15-25°C、空氣相對濕度為85-95%的自然光照的無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
7.基于權(quán)利要求1所述的`以黃粉蟲為載體培養(yǎng)人工蟲草的方法，其特征在于所述的蟲草的收集保存:是將成熟后子座，放在60°C環(huán)境下烘干1-5小時，置陰涼干燥處密封保存，或采用真空冷凍干燥后進行低溫貯存。
【文檔編號】A01G1/04GK103688760SQ201310728839
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】凌中鑫 申請人:凌中鑫