一種飼料添加劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種飼料添加劑，屬于飼料添加劑領(lǐng)域,所述一種飼料添加劑，按照重量份數(shù)組成：杜仲粉3-5，茯苓粉2-6，枸杞酶解粉2-5，丁香4-8，山楂5-8，黑曲霉培養(yǎng)物10-15，枯草芽孢桿菌菌劑8-15；黑曲霉菌株為CGMCC?No.7927，本發(fā)明所述飼料添加劑的制備方法將杜仲粉、茯苓粉、枸杞酶解粉、丁香、山楂、黑曲霉培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌菌劑、按配比后混合后制粒即可，本發(fā)明提高了飼料的利用率，有效減少飼養(yǎng)成本和風(fēng)險(xiǎn)，增加飼養(yǎng)效益。
【專利說明】一種飼料添加劑及其制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種飼料添加劑，屬于飼料添加劑領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】:
[0002]目前養(yǎng)殖業(yè)普通存在飼料利用率不高，營養(yǎng)成分消化不完全，保管不善導(dǎo)致飼料吸濕霉變或生蟲等問題，這些問題的存在不僅大大增加了飼養(yǎng)成本，而且也導(dǎo)致了資源浪費(fèi)。
[0003]解決上述問題，控制養(yǎng)殖成本，降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)是養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展的一大瓶頸。使用化學(xué)合成添加劑會(huì)造成動(dòng)物耐用性、殘留等問題，危害人類健康，同時(shí)還有大量的排泄物，如氨氣、硫化氫等有害氣體，污染環(huán)境。中草藥飼料添加劑作為新興研究的熱點(diǎn)，具有天然、營養(yǎng)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。研究表明，許多中草藥本身就具有良好的體外抑菌能力，中草藥飼料抗菌保健劑無殘留、無耐藥性，其作用機(jī)理不僅僅在于對(duì)病原微生物的抑殺作用，更重要的是對(duì)機(jī)體抗病修復(fù)能力的調(diào)整，即提高機(jī)體的抗應(yīng)激能力、提高機(jī)體免疫功能和抗病防御機(jī)能，從而達(dá)到提聞肉制品質(zhì)量和提聞動(dòng)物詞料利用效率的目的。
[0004]中草藥是具有特定功效的一些植物，這些植物各有功效，例如部分植物的效用如下:枸杞子富含枸杞蛋白多糖、維生素C、磷、鐵等多種營養(yǎng)成分，有提高機(jī)體免疫力的作用，可以補(bǔ)氣強(qiáng)精，滋補(bǔ)肝腎、抗衰老、止消渴、暖身體、抗腫瘤的功效。在雛雞飼料添加
0.5—1%枸杞粉，成活率提高11%。同時(shí)，還能改善雞體免疫功能，增強(qiáng)抗病能力，降低雞死亡率，促使雞健康生長。丁香:花蕾含揮發(fā)油，黃酮衍生物等具有生理活性成分，具有抗病原微生物、對(duì)消化系統(tǒng)、健胃、驅(qū)蟲等功能。研究者認(rèn)為在日糧中添加100?200mg/kg 丁香可以改善肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率。山楂:它能開胃消食，助消化，能增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，有防衰老、抗癌的作用，另外山楂中有平喘化痰、抑制細(xì)菌、治療腹痛腹瀉的成分。山楂能增加胃中消化酶的分泌，促進(jìn)消化，并含有脂肪酶，能加強(qiáng)胃脂肪酶、蛋白酶的活性。
[0005]有效利用中草藥成分開發(fā)改飼料添加劑產(chǎn)品可以滿足人們追求高品質(zhì)豬肉和提聞詞料利用率的有效手段。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種飼料添加劑。
[0007]一種飼料添加劑。按照重量份數(shù)組成如下:杜仲粉3-5，茯苓粉2-6，枸杞酶解粉2-5，丁香4-8，山楂5-8，黑曲霉培養(yǎng)物10-15，枯草芽孢桿菌菌劑8_15 ；
[0008]枯草芽孢桿菌菌劑制備方法，將培養(yǎng)獲得發(fā)酵液經(jīng)分離濃縮、冷凍干燥工藝獲得枯草芽孢桿菌菌劑。上述方法采用本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)制備。
[0009]本發(fā)明所述飼料添加劑的制備方法如下:
[0010]將杜仲粉、茯苓粉、枸杞酶解粉、丁香、山楂、黑曲霉培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌菌劑、按配比后混合后制粒即可。在每噸豬飼料中的添加量為IOOO-1SOOg
[0011]有益效果:[0012]以上中草藥的配伍使用，可以制備得到有效改善豬肉品質(zhì)和提高飼料利用率的飼料添加劑，該添加劑由天然中草藥組成，一方面通過改善肉豬的代謝功能，增加豬肉中蛋白質(zhì)的沉積，另一方面通過增強(qiáng)肉豬的機(jī)體免疫機(jī)能，降低抗生素的使用，從而改善豬肉品質(zhì)；同時(shí)該飼料添加劑還能調(diào)節(jié)腸道健康，促進(jìn)豬對(duì)飼料的吸收利用，提高飼料的利用率，有效減少飼養(yǎng)成本和風(fēng)險(xiǎn)，增加飼養(yǎng)效益。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面通過具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明產(chǎn)品組成及工藝。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中分離提取條件進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0014]實(shí)施例1
[0015]枯草芽孢桿菌種子液體制備:采用斜面菌種逐級(jí)擴(kuò)培獲得枯草芽孢桿菌種子液；
[0016](I) 一級(jí)種子培養(yǎng):將枯草芽孢桿菌斜面菌種接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30°C，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；
[0017](2)二級(jí)種子培養(yǎng):將一級(jí)種子按照10%的接種量接入500暈升二級(jí)種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級(jí)種子相同；
[0018](3)三級(jí)種子培養(yǎng):將二級(jí)種子以10%接種量接入5000暈升三級(jí)種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30°C，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；
[0019](4) 一級(jí)種子罐培養(yǎng):將三級(jí)種子以10%接種量接入總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度28°C，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V) 1:0.5,罐壓
0.05Mpa,培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；
[0020]菌種分別采用CICC10081 或 CICC10063。
[0021]CICC10081培養(yǎng)基組成:蛋白胨5克；牛肉膏3克；豆柏10g，氯化鈉5克；蒸餾水1000毫升；ρΗ7.0。CICC10081為產(chǎn)中性蛋白酶菌株。
[0022]CICC10063培養(yǎng)基組成:NaC15.0g，牛肉膏10.0g，豆柏20g，蛋白胨10.0g，蒸餾水
1.0L, pH7.2o CICC10063為產(chǎn)蛋白酶菌株。
[0023]黑曲霉培養(yǎng)物的培養(yǎng)制備:
[0024]將種子液以10% (v/v)接種量接入裝有7.5L發(fā)酵液的IOL發(fā)酵罐中，控制pH值恒定為6.0±0.2，培養(yǎng)溫度30±0.1°C，攪拌速度300rpm，通風(fēng)量(ν/ν)1:0.8-1.2，培養(yǎng)時(shí)間96h，溶解氧20-30%。發(fā)酵結(jié)束后經(jīng)板框過濾、濃縮和干燥工藝獲得含有菌體和酶制劑的混合物即得到黑曲霉培養(yǎng)物。
[0025]取發(fā)酵上清液(粗酶液)進(jìn)行酶活力檢測經(jīng)測定，菌株Aspergillus nigerL1-2013-03的外切β -葡聚糖酶、內(nèi)切β -葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達(dá)到 620U/mL、1289U/mL、456U/mL 和 732U/mL，
[0026]本發(fā)明提供的黑曲霉Aspergillus niger L1-2013-03是由天津工業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室保藏的一株產(chǎn)纖維素酶的黑曲霉Aspergillus niger L1-2010經(jīng)亞硝基胍多輪誘變篩選，然后對(duì)優(yōu)良菌株經(jīng)發(fā)酵性能測試篩選得到產(chǎn)高活力纖維素酶的黑曲霉菌株Aspergillusniger L1-2013_03o
[0027]本發(fā)明提供的產(chǎn)高活力纖維素酶的菌株具體為黑曲霉Aspergillus nigerL1-2013-03。該菌株已于2013年7月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:中國北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，郵編100101)，保藏號(hào)為 CGMCC N0.7927。
[0028]本發(fā)明黑曲霉菌株Aspergillus niger L1-2013-03 (CGMCCN0.7927)具有以下微生物學(xué)特征:
[0029]1、形態(tài)學(xué)特征:
[0030]黑曲霉菌株CGMCC N0.7927，生物學(xué)形態(tài)為包括分生孢子、胞梗、頂囊、產(chǎn)胞結(jié)構(gòu)等幾部分。分生孢子頭球形至輻射形，直徑150-450 μ m，分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì)。胞梗莖1000-3000 (長度)X 12-20 (直徑)μ m，黃色或黃褐色，壁平滑；頂囊球形或近似球形，直徑45-75 μ m,表面全面可育；產(chǎn)胞結(jié)構(gòu)雙層，?；?0-20 (長度)X 4.5-7.0 (直徑)μ m,瓶梗6-10 (長度)X 2.5-3.5 (直徑)μ m，分生孢子球形或近球形，直徑3-4.5 μ m,褐色，壁粗糙。
[0031]2、培養(yǎng)學(xué)特征:
[0032]菌株在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上生長迅速，28 V 4天孢子可鋪滿斜面；質(zhì)地絲絨狀或稍帶絮狀；分生孢子結(jié)構(gòu)大量，褐黑色，無滲出液；菌落反面略帶黃色。
[0033]3、生理生化特征:
[0034]黑曲霉菌株CGMCC N0.7927可在玉米秸桿、稻草、木屑、馬鈴薯、玉米粉、可溶性淀粉、糖蜜等碳源上生長，最適pH范圍5-6，最適生長溫度范圍28-33°C，最適產(chǎn)酶溫度范圍28-30。。。
[0035]本發(fā)明黑曲霉菌株CGMCC N0.7927的篩選技術(shù)路線為:出發(fā)菌株一斜面培養(yǎng)一孢子懸液的制備一誘變處理一平板分離一初篩一復(fù)篩一遺傳穩(wěn)定性測定一擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)(發(fā)酵性能測定)。
[0036]按誘變篩選方案，對(duì)突變株逐級(jí)篩選淘汰，最后對(duì)優(yōu)良菌株經(jīng)發(fā)酵性能測試篩選，得到一株高產(chǎn)酶性能菌株黑曲霉菌AspergiIIus niger L1-2013-03,發(fā)酵96小時(shí)后纖維素酶的外切β -葡聚糖酶、內(nèi)切β -葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達(dá)到620U/mL、1289U/mL、456U/mL 和 732U/mL。
[0037]28°C發(fā)酵4天直徑75mm，發(fā)酵液纖維素酶的的外切β-葡聚糖酶、內(nèi)切β-葡聚糖酶、β -葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達(dá)到620U/mL、1289U/mL、456U/mL和732U/mL，分別比出發(fā)菌株提高了 9.21倍、7.43倍、8.15倍和10.31倍。
[0038]產(chǎn)高活力纖維素酶菌株的篩選方法，包括以下步驟:
[0039]I)斜面培養(yǎng):將原始黑曲霉菌株Aspergillus niger L1-2010劃線接種斜面培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)2?3d，直至菌絲體成熟、產(chǎn)大量黑色孢子。所述斜面培養(yǎng)基組成如下:12°Brix 麥芽汁 IOOOmL, pH 值自然，121°C滅菌 20min ；
[0040]2)孢子懸液制備(以下步驟均在無菌條件下操作):向試管斜面加入15mL無菌水，把孢子刮下，用濾紙過濾，將濾過液倒入已滅菌、并加有5-10粒無菌玻璃珠的150mL三角瓶中，將三角瓶放入搖床振蕩10-15min，使孢子分散。
[0041 ] 3)亞硝基胍(NTG)誘變
[0042]A.用無菌水將孢子懸浮液調(diào)節(jié)為稀釋成IO6-1O7個(gè)/mL。[0043]B.取IOmL菌懸液轉(zhuǎn)移至IOOmL三角瓶中，加入IOmg的NTG，配制成終濃度為IOmg/mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。
[0044]C.在30°C下200rpm振蕩反應(yīng)30min, 5000rpm離心IOmin收集菌體,用無菌生理
鹽水洗滌數(shù)次，中止反應(yīng)。
[0045]D.適當(dāng)稀釋將孢子濃度調(diào)節(jié)為IO3個(gè)/mL，取最后稀釋度的菌液0.2mL，稀釋涂布于纖維素-剛果紅平板篩選培養(yǎng)基上。在30°C培養(yǎng)2~3天后挑取透明圈/菌落直徑較大的菌株200支。(所述纖維素-剛果紅平板篩選培養(yǎng)基組成如下:纖維素粉10g、剛果紅
0.2g、硫酸銨5g、硫酸鎂0.25g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉0.lg、明膠2g、瓊脂20g、自來水定容1000mL, pH 值 5-6，121°C滅菌 20min)。
[0046]E.復(fù)篩:將獲得的200株菌分別用無菌牙簽接種于斜面培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)至孢子鋪滿斜面。分別將孢子以無菌水洗下接種于裝有50mL復(fù)篩培養(yǎng)基的250mL三角瓶中進(jìn)行發(fā)酵，接種量10%( v/v)，30°C、100r/min培養(yǎng)96h，分別測定各菌株的纖維素酶活性。(所述復(fù)篩培養(yǎng)基組成如下:纖維素粉50g、硫酸銨5g、硫酸鎂0.25g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉0.lg、自來水定容1000mL，pH值5-6，121°C滅菌20min)。選取纖維素酶酶活力最高的菌株進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)。
[0047]4)遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0048]將L1-2013-03菌株在斜面上連續(xù)十次傳代，并用搖瓶復(fù)篩的方法檢測每次傳代后的發(fā)酵情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在斜面上連續(xù)十次傳代，該菌種性狀沒有明顯變化，各項(xiàng)性能指標(biāo)都正常，說明該菌種的遺傳穩(wěn)定性較強(qiáng)。
[0049]5)放大試驗(yàn)
[0050]①種子培養(yǎng):將纖維素酶酶活力最高的菌株Aspergillus niger L1-2013-03接入500mL三角瓶中，種子培養(yǎng)基裝量`100毫升，30°C、150rpm搖床培養(yǎng)72_96h。
[0051]③種子罐培養(yǎng):將種子液以10% (v/v)接種量接入裝有7.5L發(fā)酵液的IOL發(fā)酵罐中，控制pH值恒定為6.0±0.2，培養(yǎng)溫度30±0.1°C，攪拌速度300rpm，通風(fēng)量(v/v)1:0.8-1.2，培養(yǎng)時(shí)間96h，溶解氧20-30%。所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:纖維素粉100g、硫酸銨5g、硫酸鎂0.25g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉0.lg、自來水定容lOOOmL，pH值5-6，121°C滅菌20mino
[0052]發(fā)酵結(jié)束后，取發(fā)酵上清液(粗酶液)進(jìn)行酶活力檢測經(jīng)測定，菌株Aspergillusniger L1-2013-03的外切β-葡聚糖酶、內(nèi)切β _葡聚糖酶、β _葡萄糖苷酶和濾紙酶活力分別達(dá)到 620U/mL、1289U/mL、456U/mL 和 732U/mL,分別比出發(fā)菌株 Aspergillus nigerL1-2010 提高了 9.21 倍、7.43 倍、8.15 倍和 10.31 倍。
[0053]實(shí)施例2
[0054]一種飼料添加劑。所述飼料添加劑按照重量份數(shù)組成如下:
[0055]一種飼料添加劑。按照重量份數(shù)組成如下:杜仲粉4，茯苓粉4，枸杞酶解粉4，丁香6，山楂7，黑曲霉培養(yǎng)物12，枯草芽孢桿菌菌劑12 ；
[0056]黑曲霉培養(yǎng)物的培養(yǎng)制備:
[0057]將種子液以10% (v/v)接種量接入裝有7.5L發(fā)酵液的10L發(fā)酵罐中，控制pH值恒定為6.0±0.2，培養(yǎng)溫度30±0.1°C，攪拌速度300印!11，通風(fēng)量(￥八)1:0.8-1.2，培養(yǎng)時(shí)間96h，溶解氧20-30%。發(fā)酵結(jié)束后經(jīng)板框過濾、濃縮和干燥工藝獲得含有菌體和酶制劑的混合物即得到黑曲霉培養(yǎng)物。黑曲霉菌株為CGMCC N0.7927。
[0058]所述枸杞酶解粉的制備方法如下:枸杞?jīng)_洗后迅速冷凍至-10°C至_20°C ;升華干燥，真空度400-500Pa，溫度-10°C至(TC，干燥到水分〈12% ;控制溫度在-10°C至_2°C粉碎至粒徑在1.2mm以下；添加枸杞重量2-5倍的亞硫酸鈉水溶液，控制溶液的pH為3_5，添加混合物重量0.3-0.6%的復(fù)合酶，所述復(fù)合酶由纖維素酶和葡聚糖酶組成，酸性果膠酶、纖維素酶和葡聚糖酶的重量比為1: (1-1.5)，酶解溫度為45-551:，酶解時(shí)間為2-311;之后將PH值調(diào)整為5.0-5.6，溫度升到50-60°C，同時(shí)添加混合物重量0.2-0.6%的果膠酶和
0.2-0.5%的蛋白酶，作用時(shí)間為2.5-3h ;酶解液在5-10°C過濾；濾液噴霧干燥獲得枸杞酶解粉。
[0059]實(shí)施例3基本同例2
[0060]一種飼料添加劑。按照重量份數(shù)組成如下:杜仲粉5，茯苓粉2，枸杞酶解粉5，丁香8，山楂5，黑曲霉培養(yǎng)物15，枯草芽孢桿菌菌劑8 ；
[0061 ] 實(shí)施例4:產(chǎn)品使用效果
[0062]本發(fā)明實(shí)施例2飼料添加劑使用效果試驗(yàn)。
[0063]試驗(yàn)方法:選擇豬場，選擇日齡、體重相近的健康母豬、仔豬和公豬各60頭，均隨機(jī)分成2組(試驗(yàn)組和對(duì)照組)，試驗(yàn)組添加IOOOg實(shí)施例2制得的的發(fā)明產(chǎn)品，對(duì)照組不添加本發(fā)明產(chǎn)品；連續(xù)飼喂60天；對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行日常觀察和檢測。
[0064]與對(duì)照組相比，使用發(fā)明飼料添加劑可獲得如下效果:
[0065](I)母豬產(chǎn)仔數(shù)平均增加0.8頭；
[0066](2)公豬精子數(shù)增加25%，提高受胎率；
[0067](3)分娩前后，母豬便秘次數(shù)減少30% ；
[0068](4)試驗(yàn)組比對(duì)照組的體重平均增加了 10%以上；
[0069](5)對(duì)試驗(yàn)豬的毛色進(jìn)行感官評(píng)分，試驗(yàn)組評(píng)分達(dá)到8.9分，對(duì)照組為6.5分；
[0070](6)試驗(yàn)組料肉比對(duì)照組降低10.5%。
[0071]上述結(jié)果表明本發(fā)明產(chǎn)品可改善母豬、仔豬和公豬機(jī)體免疫能力，促進(jìn)豬對(duì)飼料的吸收利用，提高飼料的利用率，減少抗生素用量，提高養(yǎng)殖質(zhì)量和效益。
【權(quán)利要求】
1.一種飼料添加劑，按照重量份數(shù)組成如下:杜仲粉3-5，茯苓粉2-6，枸杞酶解粉2-5，丁香4-8，山楂5-8，黑曲霉培養(yǎng)物10-15，枯草芽孢桿菌菌劑8_15 ;黑曲霉菌株為CGMCCN0.7927。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種飼料添加劑，其特征在于:按照重量份數(shù)組成如下:杜仲粉4，茯苓粉4，枸杞酶解粉4，丁香6，山楂7，黑曲霉培養(yǎng)物12，枯草芽孢桿菌菌劑12。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種飼料添加劑，按照重量份數(shù)組成如下:杜仲粉5，茯苓粉2，枸杞酶解粉5，丁香8，山楂5，黑曲霉培養(yǎng)物15，枯草芽孢桿菌菌劑8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種飼料添加劑的制備方法，其特征在于:將杜仲粉、茯苓粉、枸杞酶解粉、丁香、山楂、黑曲霉培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌菌劑、按配比混合后制粒即可。
【文檔編號(hào)】A23K1/00GK103734469SQ201310741814
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月28日
【發(fā)明者】邵素英, 孔日祥 申請(qǐng)人:邵素英