一種含余甘子植物源抗病毒劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以余甘子根皮（Phyllanthi?Fructus?L.）提取物為有效成分的植物源抗病毒劑及其制備方法。該制備方法是將余甘子根皮粉碎，經(jīng)一定的加工過程，制備成余甘子根皮抗病毒可溶液劑、水劑及微乳劑，用于煙草、辣椒、番茄、西葫蘆、馬鈴薯等作物上防治煙草花葉病毒病（Tobaccomosaic?virus,TMV）、黃瓜花葉病毒病（Cucumber?mosaic?virus，CMV）及馬鈴薯病毒病（Potato?Virus?X，PVX；Potato?Virus?Y，PVY）等多種植物病毒病。制劑中含有余甘子根皮提取物10％～30％，其余為助劑。本發(fā)明的抗植物病毒劑不僅抗病毒效果好，而且對環(huán)境、人、畜、害蟲天敵及其它有益生物安全。該抗植物病毒劑制備工藝簡單，成本低廉，適宜推廣應用。
【專利說明】一種含余甘子植物源抗病毒劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物及其應用領(lǐng)域，具體涉及余甘子抗植物病毒病制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物病毒是一種由核酸和蛋白質(zhì)組成的具有侵染活性的細胞內(nèi)寄生病原物，據(jù)國際病毒分類委員會(ICTV)的第八次報告，目前全世界發(fā)現(xiàn)的植物病毒種類達1122個。植物病毒所引起的植物病素有“植物癌癥”之稱，其對農(nóng)作物的危害程度僅次于真菌病原物，幾乎每種農(nóng)作物都受到2~3種病毒的危害。全世界每年由植物病毒造成的損失約4百億美元，僅煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)造成的危害就超過I億美元。
[0003]由于植物病毒對植物細胞具有絕對寄生性，病毒復制所需要的物質(zhì)和能量場所完全由寄主植物提供，導致病毒和寄主的代謝融為一體；加之植物缺乏完整的免疫系統(tǒng)，病毒一旦侵染植物，就可在植物細胞內(nèi)無限期存活，直至寄主死亡。因此，抑制植物病毒病的藥物很難只選擇性地攻擊病毒而不傷害寄主細胞，導致目前篩選高效、專一、安全的抗病毒制劑研究面臨極大的困難。
[0004]目前除了采取傳統(tǒng)的抗病毒育種、弱毒株系交叉保護、改進栽培技術(shù)、殺蟲劑控制傳毒介體和轉(zhuǎn)基因等方法外，科研人員還研究出了一些植物病毒病的化學防治方法。但到目前為止，只有一小部分抗植物病毒劑得到實際應用，這些制劑大多以預防為主，且藥效多不理想。由于人們對醫(yī)藥或獸藥中抗病毒劑研究較早，一些抗植物病毒劑(如農(nóng)用病毒唑)就是從抗人或動物病毒劑中發(fā)展而來。因此，深入探討抗植物病毒天然物質(zhì)，有利于抗植物病毒劑的研究、開發(fā)及應用。
[0005]余甘子(Phyll anthi Fructus L.)為大戟科葉下珠屬植物，中國野生廣泛分布在云南、廣西、福建、海南、臺灣、海南、四川、貴州等省，江西、湖南、浙江等省部分地區(qū)也有，資源豐富。其果實余甘子為一種常用藏藥，與訶子，毛訶子三者在藏藥中常被稱為“三大果”使用頻率很高，在《藏藥標準》所載的290種藏藥成藥中，含余甘子的有72種，占總數(shù)的25%，衛(wèi)生部藥品標準1995年版藏藥標準所載200種成藥中，有59種含余甘子，占29%，并被載入各版《中國藥典》。
[0006]關(guān)于余甘子在醫(yī)藥的應用有大量報道。中醫(yī)認為，清熱涼血，消食健胃，生津止咳。用于血熱血瘀，消化不良，腹脹，咳嗽，喉痛，口干功效。余甘子果實富含鞣質(zhì)，含量高達45%，主要包括沒食子酸(gallic acid),鞋花酸(ellagic acid),訶子酸(chebulinic acid),原訶子酸(terchebin),訶黎勒酸(chebulagic acid),鞋云實素(corilagin),余甘子酸(phyllemblic acid)等；此外,余甘子果實中還含有黃酮類化合物,生物堿等。有關(guān)余甘子根皮化學成分的研究較少，有報道稱從余甘子根皮中分離出二萜、沒藥烷型倍半萜類成分及苷類。而余甘子在抗植物病毒作用方面的研究至今未見報道，在農(nóng)業(yè)上的應用也有待于進一步開發(fā)。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于，以余甘子(Phyllanthi Fructus L.)為原料,研究出植物源抗病毒劑效果高、無公害、價格低廉的植物源抗植物病毒劑及其制備方法。
[0008]為了實現(xiàn)上述任務，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案:
[0009]一種余甘子植物源抗病毒劑，其特征在于，以余甘子根皮提取物為主成分并加入助劑加工而成，制劑形態(tài)是可溶液劑、水劑或微乳劑。其中:
[0010]所述的微乳劑由以下原料按重量百分比配制:
[0011]余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，乳化劑:5%~30%，余量為水，原料的重量百分比之和為100%;
[0012]所述的可溶液劑由以下原料按重量百分比配制:
[0013]余甘子根皮提取物10%~30%，表面活性劑:5%~30%，余量為有機溶劑，原料的重量百分比之和為100% ；
[0014]水劑:余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，表面活性劑:5%~30%，防凍劑:4%~10%，余量為水，原料的重量百分比之和為100%。
[0015]上述有機溶劑為乙酸乙酯，環(huán)己酮、油酸甲酯、乙醇，甲醇，丙酮，N，N_ 二甲基甲酰胺中的一種或幾種的混合物；
[0016]所述的乳化劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯`乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、斯潘系列、吐溫、農(nóng)用陰離子-磷酸酯中的一種或幾種的混合物；
[0017]所述的表面活性劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、蓖麻油與環(huán)氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物中一種或幾種的混合物；
[0018]所述的防凍劑為乙二醇或丙三醇。
[0019]上述余甘子植物源抗病毒劑的制備方法，其特征在于:
[0020]所述的微乳劑的制備方法是:
[0021]A、將余甘子根皮用植物組織粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。
[0022]B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經(jīng)真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。
[0023]C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑和表面活性劑按比例于混配釜中(混配釜溫度為35-60°C，攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時間為30分鐘)攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒微乳劑。
[0024]所述的可溶液劑的制備方法是:
[0025]A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5_的粗粉碎物。
[0026]B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經(jīng)真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。
[0027]C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑和表面活性劑按比例于混配釜中(混配釜溫度為
35-600C，攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為30分鐘)攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒可溶液劑。
[0028]所述的水劑的制備方法是:[0029]A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。
[0030]B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經(jīng)真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。
[0031]C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑、表面活性劑、防凍劑和水按比例于混配釜中(混配釜溫度為35-60°C，攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時間為30分鐘)攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒水劑。
[0032]本發(fā)明所制成的余甘子植物源抗病毒劑具有以下優(yōu)點:
[0033]1、植物源抗病毒劑活性顯著，可用于煙草、辣椒、番茄、西葫蘆、馬鈴薯等作物上防治煙草花葉病毒病(Tobacco mosaic virus, TMV)、黃瓜花葉病毒病(Cucumber mosaicvirus, CMV)及馬鈴薯病毒病(Potato Virus X, PVX ；Potato Virus Y, PVY)等多種植物病
毒病;
[0034]2、對人、畜、害蟲天敵及其它有益生物安全，環(huán)境兼容性好；
[0035]3、生物源農(nóng)藥，使用后無殘留毒害；
[0036]4、資源豐富、制備方法簡單、成本低廉、適宜推廣使用。 【具體實施方式】
[0037]本發(fā)明的植物源抗病毒劑，以余甘子根皮提取物為活性物質(zhì)，加入一定比例助劑進行劑型加工，可以制得環(huán)保型制劑微乳劑、水劑或可溶液劑。經(jīng)發(fā)明人的試驗證明，30%余甘子微乳劑、10 %余甘子微乳劑、30 %余甘子可溶液劑、10 %余甘子可溶液劑、30%余甘子水劑和10%余甘子水劑對煙草花葉病毒(TMV)具有良好的防治效果。為了更好的理解發(fā)明的實質(zhì)，下面用實施例來詳細說明發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，但發(fā)明并不局限于這些實施例。
[0038]實施例1:30%余甘子微乳劑的配制
[0039]稱取余甘子根皮濃縮物30kg，溶解于20kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸鈣，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40°C左右；高速攪拌下滴加去離子水25kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40°C左右；水滴加完畢，升溫至50°C，攪拌I小時，制得30%余甘子微乳劑100kg。制劑的穩(wěn)定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0040]實施例2:10%余甘子微乳劑的配制
[0041]稱取余甘子根皮濃縮物IOkg,溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸鈣，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速攪拌下混和，加熱至40°C左右；高速攪拌下滴加去離子水40kg，控制水的滴加速度，使溫度保持在40°C左右；水滴加完畢，升溫至50°C，攪拌I小時，制得10%余甘子微乳劑100kg。制劑的穩(wěn)定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0042]實施例3:30%余甘子根皮可溶液劑的配制
[0043]稱取余甘子根皮濃縮物30kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A, 5kg乙二醇，乙醇補齊至100kg,混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得30%余甘子可溶液劑100kg。制劑的穩(wěn)定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0044]實施例4:10%余甘子根皮可溶液劑的配制
[0045]稱取余甘子根皮濃縮物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A, 5kg乙二醇，乙醇補齊至100kg,混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得余甘子可溶液劑100kg。制劑的穩(wěn)定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0046]實施例5:30%余甘子根皮水劑的配制
[0047]稱取余甘子根皮濃縮物30kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A, 5kg乙二醇,水補齊至100kg,混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得余甘子根皮可溶液劑100kg。制劑的穩(wěn)定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0048]實施例6:10%余甘子根皮水劑的配制 [0049]稱取余甘子根皮濃縮物10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入5kg烷基酚聚氧乙烯醚，Ikg烷基多糖苷A，5kg丙三醇，水補齊至100kg，混合均勻后，以攪拌速度800~1000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10~30分鐘，即可制得余甘子根皮可溶液劑100kg。制劑的穩(wěn)定性、外觀等符合商品制劑的要求。
[0050]實施例7:6種余甘子抗病毒劑對TMV的室內(nèi)生物測定[0051 ] (I)對TMV體外鈍化效果
[0052]采用半葉枯斑法測定,選取生長旺盛、長勢一致的5~6葉期心葉煙(Nicotianaglutinosa)為枯斑寄主。以葉脈為界，左半葉接種藥液與病毒等體積混合液，右半葉接種蒸餾水與病毒等體積混合液作對照，病毒接種濃度為10μ g/mL，鈍化時間為5min，接種后立即用清水沖洗接種葉片表面。每處理接種4片葉子，試驗重復3次，3d后統(tǒng)計枯斑數(shù)，計算抑制率。
[0053]抑制率(％)=(對照枯斑數(shù)-處理枯斑數(shù))/對照枯斑數(shù)X 100
[0054]測定結(jié)果見表1。
[0055]表1:6種余甘子抗病毒劑對TMV體外鈍化作用
【權(quán)利要求】
1.一種余甘子植物源抗病毒劑，其特征在于，以余甘子根皮提取物為主成分并加入助劑加工而成，制劑形態(tài)是微乳劑、可溶液劑和水劑；其中: 所述的微乳劑由以下原料按重量百分比配制: 余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，乳化劑:5%~30%，余量為水，原料的重量百分比之和為100% ； 所述的可溶液劑由以下原料按重量百分比配制: 余甘子根皮提取物10%~30%，表面活性劑:5%~30%，余量為有機溶劑，原料的重量百分比之和為100%; 所述的水劑由以下原料按重量百分比配制: 余甘子根皮提取物10%~30%，有機溶劑:20~30%，表面活性劑:5%~30%，防凍劑:.4%~10%，余量為水，原料的重量百分比之和為100%。
2.如權(quán)利要求1所述的余甘子植物源抗病毒劑，其特征在于: 所述的有機溶劑為乙酸乙酯、環(huán)己酮、油酸甲酯、乙醇、甲醇、丙酮、N, N-二甲基甲酰胺中的一種或幾種的混合物； 所述的乳化劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、斯潘系列、吐溫、農(nóng)用陰離子-磷酸酯中的一種或幾種的混合物； 所述的表面活性劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、蓖麻油與環(huán)氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物中一種或幾種的混合物； 所述的防凍劑為乙二醇或丙三醇。
3.權(quán)利要求1所述的余甘子植物源抗病毒劑的制備方法，其特征在于: 所述的微乳劑的制備方法是: A、將余甘子根皮用植物組織粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。 B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經(jīng)真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液。 C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑、乳化劑按比例于混配釜中，混配釜溫度為35-60°C，攪拌時間為30分鐘，攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒微乳劑。 所述的可溶液劑的制備方法是: A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。 B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經(jīng)真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液； C、將步驟B所得的濃縮液、溶劑和表面活性劑按比例于混配釜中，混配釜溫度為35-60°C，攪拌時間為30分鐘，攪拌均勻后即得余甘子植物源抗病毒可溶液劑； 所述的水劑的制備方法是: A、將余甘子根皮用粉碎機粉碎至I~5mm的粗粉碎物。 B、將步驟A所得的粗粉碎物用溶劑浸提，提取溫度為50~80°C，提取時間為6~12小時，浸提物經(jīng)真空濃縮至相當于Ikg干粉/kg濃縮液； C、將步驟B所得的濃縮液、有機溶劑、表面活性劑、防凍劑和水按比例于混配釜中，混配釜溫度為35-60°C，攪拌時間為30分鐘，攪拌均勻后即得余甘子抗植物病毒水劑。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于: 所述的有機溶劑為乙酸乙酯，環(huán)己酮、油酸甲酯、乙醇，甲醇，丙酮，N，N-二甲基甲酰胺中的一種或幾種的混合物； 所述的乳化劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、斯潘系列、吐溫、農(nóng)用陰離子-磷酸酯中的一種或幾種的混合物； 所述的表面活性劑為烷基苯磺酸鹽類、烷基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚類、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚類、蓖麻油與環(huán)氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物中一種或幾種的混合物； 所述的防凍劑為乙二 醇或丙三醇。
【文檔編號】A01P1/00GK103766414SQ201410009553
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月8日
【發(fā)明者】閆合, 韓立榮, 尹紅園, 周勇, 吳華, 馮俊濤, 張興 申請人:楊凌農(nóng)科大無公害農(nóng)藥研究服務中心