一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，摘取長穗火炬花小芽洗凈后利用芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，培養(yǎng)得到的帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)基中分化增殖，再進行不定芽培養(yǎng)及生根培養(yǎng)，最后通過煉苗與移栽技術(shù)獲得長穗火炬花植株。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)，能夠提高結(jié)實率，利用選擇的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基在不同的培養(yǎng)階段提供不同的營養(yǎng)成分，從而最大程度上保持原有的母本性狀，并且在煉苗與移栽步驟時的移栽成活率可以達到90％。
【專利說明】一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組培技術(shù)，尤其是涉及一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]長穗火炬花是百合科火炬花屬多年生草本植物。株高80~120厘米，莖直立。總狀花序著生數(shù)百朵筒狀小花，呈火炬形，花冠橘紅色，花期6~7月。喜溫暖，宜生長于疏松肥沃的沙壤土中。挺發(fā)的花莖高高擎起火炬花般的花序，壯麗可觀，適合布置多年生混合花境和在建筑物前配置，叢植于草坪之中或植于假山石旁，用作配景，也可作切花。長穗火炬花比一般火炬花花序更長，但結(jié)實率很低，分株慢，因此需要開發(fā)組培技術(shù)，提高苗木繁殖速度和苗的整齊度并保持原有的母本性狀，實現(xiàn)育苗工廠化，目前，長穗火炬花的組培報道尚未見。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種移栽成活率可以達到90%的組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法。
[0004]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn): [0005]一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0006](I)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0007]摘取長穗火炬花小芽，洗凈后2h用75v/v%的乙醇浸泡30s、lwt%。升萊浸泡15min、無菌水沖洗5-6次，然后吸干表面水份，取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為24-28°C，光照為70-100ymol/ms，進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0008](2)芽分化增殖
[0009]嫩芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上5周后芽基部開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)中，控制培養(yǎng)溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行增殖培養(yǎng)，不定芽生長迅速并無玻璃化的不良現(xiàn)象；
[0010](3)不定芽壯苗培養(yǎng)
[0011]誘導(dǎo)出的叢生芽每叢有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基，控制培養(yǎng)溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行壯苗培養(yǎng)，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；
[0012]⑷生根培養(yǎng)
[0013]取2_3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24_28 V，光照為70-100 μ mol/ms進行誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長至3_4cm ；
[0014](5)煉苗與移栽
[0015]生根培養(yǎng)20-30天，根系長至l-2cm，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，移栽室外即可。[0016]所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
[0017]所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
[0018]所述的增殖培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，增殖培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
[0019]所述的增殖培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6BAlmg/L+NAA0.lmg/L。
[0020]所述的壯苗培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L，壯苗培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
[0021]所述的壯苗培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
[0022]所述的生根培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20_40g/L，瓊脂3_8g/L，營養(yǎng)成分為MS+NAA0.1-0.5mg/L+IBAl.0-5.0mg/L,生根培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
[0023]所述的生根培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)，能夠提高結(jié)實率，利用選擇的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基在不同的培養(yǎng)階段提供不同的營養(yǎng)成分，從而最大程度上保持原有的母本性狀，并且在煉苗與移栽步驟時的移栽成活率可以達到90%。
【具體實施方式】
[0025]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0026]實施例1
[0027]—種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0028](I)芽誘導(dǎo)培養(yǎng):摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.5，控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms,進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0029](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上5周后芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BAlmg/L-+NAA0.lmg/L, pH值為5.5，控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms，進行增殖培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好;
[0030](3)不定芽壯苗培養(yǎng):誘導(dǎo)出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L,營養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.5，控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0031](4)生根培養(yǎng):取2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20g/L，瓊脂3g/L，營養(yǎng)成分為MS+NAA0.lmg/L+IBAl.0mg/L,控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms進行誘導(dǎo)生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3_4cm ；
[0032](5)煉苗與移栽:生根培養(yǎng)20天左右，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
[0033]實施例2
[0034]一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0035](1)芽誘導(dǎo)培養(yǎng):摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L,營養(yǎng)成分為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L, pH值為5.7，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為90 μ mol/ms,進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng):
[0036](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上5周后芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA2mg/L-+NAA0.2mg/L, pH值為
5.7，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為90 μ mol/ms，進行增殖培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；
[0037](3)不定芽壯苗培養(yǎng):誘導(dǎo)出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L,營養(yǎng)成分為MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.7，控制培養(yǎng)溫度為25 V (，光照為90 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0038](4)生根培養(yǎng):取2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖25g/L，瓊脂4g/L，營養(yǎng)成分為MS+NAA0.2mg/L+IBA2.0mg/L,控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為100 μ mol/ms進行誘導(dǎo)生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3_4cm ；
[0039](5)煉苗與移栽:生根培養(yǎng)25天左右，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
[0040]實施例3
[0041]一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0042](1)芽誘導(dǎo)培養(yǎng):摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, 1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L,營養(yǎng)成分為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L, pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms,進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0043](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上5周后芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA2mg/L-+NAA0.2mg/L, pH值為
5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms，進行增殖培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；[0044](3)不定芽壯苗培養(yǎng):誘導(dǎo)出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L, pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0045](4)生根培養(yǎng):取2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為MS+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L,控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms進行誘導(dǎo)生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3-4cm，并且根系粗壯，須根眾多，生根率為100% ；
[0046](5)煉苗與移栽:生根培養(yǎng)25天左右，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
[0047]實施例4
[0048]一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，采用以下步驟:
[0049](I)芽誘導(dǎo)培養(yǎng):摘取長穗火炬花小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s, I %。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖40g/L，瓊脂8g/L,營養(yǎng)成分為MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L, pH值為6，控制培養(yǎng)溫度為28 V，光照為70 μ mol/ms,進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0050](2)芽分化增殖:嫩芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上5周后芽基部開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織，培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖40g/L，瓊脂8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA3mg/L-+NAA0.3mg/L，pH值為6，控制培養(yǎng)溫度為28°C，光照為70ymol/mS，進行增殖培養(yǎng)，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；
[0051](3)不定芽壯苗培養(yǎng):誘導(dǎo)出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖40g/L，瓊脂Sg/L,營養(yǎng)成分為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L, pH值為5.5，控制培養(yǎng)溫度為28°C，光照為70 μ mol/ms,不定芽迅速伸長,20天后可以長到2_3cm ；
[0052](4)生根培養(yǎng):取2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為40g/L，瓊脂8g/L，營養(yǎng)成分為MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L,控制培養(yǎng)溫度為28 V，光照為70 μ mol/ms進行誘導(dǎo)生根。10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至3_4cm ；
[0053](5)煉苗與移栽:生根培養(yǎng)30天左右，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為90%。
【權(quán)利要求】
1.一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，該方法采用以下步驟: (1)芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 摘取長穗火炬花小芽，洗凈后2h用75v/v%的乙醇浸泡30s、lwt%。升萊浸泡15min、無菌水沖洗5-6次，然后吸干表面水份，取嫩芽基部切成Icm長，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms，進行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)； (2)芽分化增殖 嫩芽接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上5周后芽基部開始膨大并出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見明顯的愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入增殖培養(yǎng)中，控制培養(yǎng)溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行增殖培養(yǎng)，不定芽生長迅速并無玻璃化的不良現(xiàn)象； 3)不定芽壯苗培養(yǎng) 誘導(dǎo)出的叢生芽每叢有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，將其分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基，控制培養(yǎng)溫度為24-28°C，光照為70-100 μ mol/ms進行壯苗培養(yǎng)，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm; 4)生根培養(yǎng) 取2-3cm的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24-28 °C，光照為70-100 μ mol/ms進行誘導(dǎo)生根，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長至3_4cm ； (5)煉苗與移栽 生根培養(yǎng)20-30天，根系長至l-2cm，選擇`根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗5天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，移栽室外即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L,芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.5-6。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，增殖培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6BAlmg/L+NAA0.lmg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L,壯苗培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分為蔗糖20-40g/L，瓊脂3-8g/L，營養(yǎng)成分為MS+NAA0.1-0.5mg/L+IBA1.0-5.0mg/L,生根培養(yǎng)基的 pH 值為 5.5-6。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種組織培養(yǎng)長穗火炬花的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+N`AA0.3mg/L+IBA3.0mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103766219SQ201410024946
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】黃建榮, 申瑞雪, 陳建華, 沈勤 申請人:上海上房園藝有限公司, 上海上房園林植物研究所有限公司